Len, 30 de Septiembre, 2017

Universidad de Occidente
UDO-LEON

Facultad de Ciencias Mdicas

Carrera: Tecnologa Medica

Autor:

Bra. Arlett Tatiana Montalvn solis.

Tutor: Lic. William Tllez

Por la Excelencia Acadmica!

El ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay o ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas)
es una tcnica de laboratorio que identifica pequeas partculas antgenos, y grmenes que causan
enfermedades.
El ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay o ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas)
es una tcnica de laboratorio que identifica pequeas partculas antgenos, y grmenes que causan
enfermedades.
Para poder identificar los antgenos se utilizan molculas con dos componentes acoplados:
un anticuerpo (que se une al antgeno de forma especfica) y una enzima (que se activa y seala la
unin al antgeno). Antes del descubrimiento del ELISA se utilizaban molculas radioactivas en
vez de enzimas, lo que supona un riesgo aadido innecesario en el laboratorio y un mayor coste.
Gracias a esta tcnica se han podido realizar estudios cientficos en campos como la biologa, la
bioqumica y la medicina. En el hospital se utiliza principalmente para identificar grmenes
agresores que se encuentran en la sangre, orina, esputos, etctera. La tcnica pronto se generaliz
con el empleo de equipos simples y muy baratos que se utilizan todava hoy en muchos centros
diagnsticos de todo el mundo

PRUEBA DE ELISAs
 El ELISA se basa en el uso de antgenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma
que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunolgica como enzimtica. Al estar
uno de los componentes (antgeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre
un soporte (inmunoadsorbente) la reaccin antgeno-anticuerpo quedar inmovilizada y, por
tanto, ser fcilmente revelada mediante la adicin de un substrato especifico que al actuar la
enzima producir un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotmetro o un colormetro.
Tipos de Elisa:
1. ELISA directo
Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos. Lavado para
eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin de anticuerpos marcados (conjugados) con una enzima; si los anticuerpos
reaccionan con los antgenos, el complejo quedar solubilizado. Lavado para eliminar
los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se
puede parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

2. ELISA Indirecto.
Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos para los anticuerpos objeto de
estudio. Lavado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin del suero problema, de tal forma que sus anticuerpos reaccionarn
especficamente con los antgenos fijados al soporte. Lavado para eliminar los anticuerpos
marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima, los cuales reaccionan con los
anticuerpos especficos aadidos en el paso anterior y que se encuentran fijados a los
antgenos. Lavado para eliminar los anti-anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

3. ELISA Sndwich DAS (Double Antibody Sandwich).

Consta de las siguientes etapas:

Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos del agente patgeno a detectar.

Lavado para eliminar los anticuerpos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin de la muestra problema (extracto vegetal, sangre, suero, plasma, etc.), de tal
forma que si est presente el agente patgeno de diagnstico (antgeno), reaccionar
especficamente con los anticuerpos fijados al soporte. Lavado para eliminar los antgenos
que no hayan reaccionado y los restos de la muestra no fijados.
Adicin de anticuerpos especficos del antgeno a detectar (deben tener un eptopo
diferente de los anticuerpos con los que se han tapizado el soporte) conjugados con una
enzima, los cuales reaccionan con los antgenos aadidos con la muestra problema y que
se encuentran fijados a los anticuerpos. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados
que no hayan reaccionado.
Adicin de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede
parar la reaccin si se desea.
 Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

Todos los tipos de ELISAs descritos se pueden resumir en dos grandes grupos:
ELISAs para detectar antgenos: ELISAs sndwich.
ELISAs para detectar anticuerpos: ELISAs indirectos.
La fase slida debe ser de un tipo que permita un fcil manejo (especialmente en los procesos
de lavado) y la reproducibilidad de la unin de antgenos o anticuerpos sobre su superficie. Las
microplacas de 96 pocillos y un volumen de 350L son especialmente ventajosas para procesar
un elevado nmero de muestras y un vez tapizadas, el material inmovilizado permanece reactivo
mucho tiempo siempre que se mantenga seco y a baja temperatura. Normalmente se utilizan
microplacas de poliestireno de fondo plano que pueden adquirirse estriles y con o sin tapa.
Las tcnicas de ELISA se realizan mediante la adicin secuencial de todos los reactivos
necesarios separados por etapas de lavado. Cada una de las operaciones puede realizarse
manualmente con micropipetas o con equipamiento para la automatizacin de todas y cada una
de las etapas. Esta completa automatizacin se justifica por la necesidad de procesar y analizar
un gran nmero de muestras y necesitar una elevada repetibilidad de resultados.

Cuando se hace:
Se recomienda realizar un ELISA en todas las situaciones en las que se quieran
detectar antgenos cuya existencia pueda ser determinante para un diagnstico o para establecer
conclusiones en un estudio cientfico. Algunas de las situaciones ms frecuentes donde se usa el
ELISA son:
Diagnstico de VIH: es la primera prueba que se realiza para descartar una infeccin por VIH. Se
trata de una prueba muy sensible, as que prcticamente detecta todos los casos. Sin embargo, puede
dar falsos positivos, por lo que se suele repetir de nuevo un ELISA y se confirma con un Western-
Blot.
Deteccin de anticuerpos contra microorganismos: a veces el antgeno a estudiar puede ser otro
anticuerpo. Esta situacin se da, por ejemplo, en la identificacin de anticuerpos contra el bacilo de
la tuberculosis, entre otros.
Diagnstico de hepatitis B: Al igual que con el VIH, el virus de la hepatitis B puede ser reconocido
fcilmente mediante un ELISA en sangre.
Deteccin de grmenes en heces: ciertos virus pueden detectarse en las heces cuando provocan
diarreas; los ms frecuentes son los rotavirus. A veces no se detecta al propio germen, sino que se
pueden identificar toxinas que produce el mismo, como sucede con el E. coli
Deteccin de antgenos en orina: es una prueba muy til y sencilla para identificar grmenes causantes
de neumonas. En las infecciones respiratorias las bacterias pasan a la sangre y de ah a la orina, por
lo que se pueden identificar antgenos fcilmente con un ELISA, que orienta el tratamiento antibitico
directamente.
 Como se hace
El anlisis por ELISA lo pedir el mdico cuando sea necesario y sea la mejor
arma diagnstica para estudiar tu enfermedad. Para hacerla, te tomarn primero
la muestra sobre la que se realizar el ELISA.

Segn el lugar de recogida de la muestra se recomienda adoptar unas u otras

medidas. Por ejemplo, si es uretral no debes orinar las dos horas previas; si es un
esputo es mejor recogerlo a primera hora de la maana, y si se trata de una muestra
de sangre es mejor que coincida con un pico de fiebre. Pero esos detalles te los
har saber el mdico antes de realizarte la prueba, as que no debes preocuparte.

Una vez que te hayan recogido la muestra a estudiar puedes realizar una vida
normal. Mientras esperas los resultados no debes estar nervioso y debes mantener
tu rutina. Para que sepas cmo se hace un ELISA resumimos los pasos a
continuacin:

Se deposita la muestra recogida en bandejas con pequeos pozos. Al lado habr

pozos para muestras que se sepan que estn contaminadas y libres
de antgenos conocidos.
Una vez depositada la muestra se aaden los anticuerpos que detectan los
antgenos si los hay. En el otro extremo de los anticuerpos hay enzimas acopladas.

Si es un ELISA indirecto se pueden aadir otros anticuerpos que detecten los

anticuerpos previos; as se ampla la seal.

Se realiza un lavado de los pocillos; as se eliminan los anticuerpos que no estn

unidos a antgenos.

Se aade un sustrato, es decir, una sustancia qumica que reacciona con las enzimas
de los anticuerpos que queden. Al reaccionar se forman metabolitos.

Por ltimo, se mide la cantidad de metabolito que hay mediante diferentes tcnicas,
como la espectrofotometra.