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Actinomicetos.

Al inicio de las lluvias el olor a tierra mojada es tpico de los actinomicetos, microorganismos que por su morfologa, a simple vista en
medios de cultivo, suelen ser confundidos con hongos, dado que comparten caractersticas tpicas de este grupo; sin embargo, los
actinomicetos son bacterias. Los actinomicetos son cosmopolitas, estn distribuidos en los ecosistemas naturales en todo el mundo y
juegan un papel importante en el reciclaje de la materia orgnica, dicho grupo microbiano ha recibido considerable atencin de las
industrias farmacutica y alimentaria, en la biorremediacin y ltimamente en la agricultura, debido a que son fuente importante de
sustancias con actividad biolgica de gran utilidad para el hombre. Los actinomicetos han jugado un papel importante en el desarrollo de
la biotecnologa, con impactos positivos en distintos mbitos; desde la medicina, la industria y hasta la agricultura. En este trabajo se
hace una revisin del papel de los actinomicetos en la agricultura y en la medicina. Uno de los retos de la ciencia y la tecnologa es y ha
sido producir alimentos y cada vez con menos empleo de compuestos qumicos potencialmente contaminantes como los pesticidas. Una
alternativa es el empleo de la biotecnologa, y particularmente de los actinomicetos. Tambien en medicina y veterinaria se requiere de
nuevos antibiticos activos contra microorganismos patgenos resistentes. Los grupos microbianos ms prolficos, en cuanto a la
produccin de antibiticos, han sido los actinomicetos y hongos filamentosos; sin embargo, histricamente, los actinomicetos han
producido la mayora de los antibiticos existentes.

Caractersticas de los actinomicetos Los rasgos morfolgicos que presentan las bacterias unicelulares y los hongos filamentosos han
permitido diferenciarlos y separarlos claramente en dos grandes grupos. Sin embargo, un grupo de transicin, los actinomicetos, puede
ser considerado como la excepcin a la regla. Los rasgos distintivos por los cuales durante algn tiempo se les consider como miembros
del grupo de los hongos filamentosos fueron: a) la similitud en su forma de crecer y desarrollarse, b) formacin de un filamento
denominado hifas con extensas ramificaciones (micelio), c) muchos de ellos forman micelio areo y esporas, y d) su crecimiento en cultivo
l- quido raramente presenta la turbidez asociada con las bacterias unicelulares, sino que durante el crecimiento se forman filamentos,
grumos o esferas de micelio. No obstante lo anterior, los filamentos de los actinomicetos son mucho ms delgados que aquellos formados
por los hongos. Cabe mencionar que no todos los actinomicetos comparten estas caractersticas, por ejemplo, algunos gneros como
Mycobacterium y Corynebacterium no producen micelio areo. La forma y ornamentacin de las esporas es diversa, as como la manera
en que se agrupan, siendo este criterio empleado para subdividir e identificar algunos grupos de actinomicetos. Un aspecto relacionado
con el desarrollo de las esporas es la produccin y excrecin de metabolitos secundarios bioactivos que pueden ser de varios colores y
que se observan como pequeas secreciones en forma de gotitas sobre la colonia microbiana (Figura 1). Del filo Actinobacteria, los
actinomicetos son el grupo con ms especies descritas, adems de ser un grupo de importancia para el hombre debido a las aplicaciones
biotecnolgicas que representa (Tabla 1). Histricamente los actinomicetos han sido descritos como microorganismos que habitan en el
suelo, pero actualmente se conoce que estn ampliamente distribuidos en ambientes acuticos como ocanos, ros y lagos, donde
tambin se encuentran asociados a los sedimentos, sobre todo en el material orgnico que est en proceso de descomposicin. En el
suelo, el tamao y nmero de la comunidad de actinomicetos depende de diversos factores, principalmente de las caractersticas fsicas
y qumicas como pueden ser la textura, humedad, pH y contenido de materia orgnica. Cuando se aslan actinomicetos del suelo mediante
medios de cultivo slidos, el gnero predominante suele ser Streptomyces, con el 70 al 90% de las colonias, seguido por Nocardia con 10
a 30%, y el tercero puede ser Micromonospora que constituye del 1 al 15% de actinomicetos. Con relacin a sus hbitos de vida se puede
mencionar que estos microorganismos son generalmente saprfitos y participan activamente en la mineralizacin de la materia orgnica.
Aunque se conocen pocas especies patgenas, existen algunas que afectan plantas, animales y humanos. Por ejemplo, Streptomyces
scabies, que causa la roa de la papa (Alexander, 1980). Diversas especies del gnero Streptomyces son comercialmente muy atractivas
porque producen una amplia gama de productos naturales con actividad biolgica (Tabla 1). Muchos de los antibiticos empleados en la
actualidad provienen de los actinomicetos; el trmino antibitico fue acuado por el microbilogo del suelo Selman Waksman (1888-
1973) quien trabajando con una cepa de Streptomyces griseus descubri la estreptomicina, con actividad antimicrobiana contra el bacilo
de Koch, causante de la tuberculosis. Esto le vali a Waksman el Premio Nobel en Fisiologa o Medicina en 1952. Actualmente la
estreptomicina tambin es empleada para combatir bacterias que afectan diversos cultivos de importancia agrcola, por ejemplo para
tratar el tizn del fuego en el manzano, causado por la bacteria Erwinia amylovora (Manulis y cols., 1998).

Los actinomicetos en la industria farmacutica Un rasgo interesante de estos microorganismos es que durante determinadas etapas de
su ciclo de vida producen metabolitos secundarios y otras molculas bioactivas de utilidad para la industria, tal es el caso de la produccin
de algunos antibiticos producidos por especies del gnero Streptomyces. Estos antibi- ticos inhiben el crecimiento de bacterias,
levaduras y hongos de diversas categoras taxonmicas. Debido a la importancia econmica y mdica de los antibiticos producidos por
los estreptomicetos, estos microorganismos han sido objeto de una variedad de estudios, y en la actualidad se contina la bsqueda de
nuevas molculas bioactivas en otros gneros de actinomicetos. Se ha determinado, por ejemplo, que una sola especie puede producir
ms de un antibitico con estructuras qumicas diferentes. A pesar de contar con muchas molculas con actividad antimicrobiana, solo a
poco ms de cien se les da uso comercialmente y de estas, 60 son antibiticos producidos por estreptomicetos, entre los cuales estn la
estreptomicina, espectinomicina, neomicina, tetraciclina, eritromicina y nistatina, entre otros (Prescott y cols., 2004; Madigan y cols.,
2009). Con la prevalencia de cepas patgenas cada vez ms resistentes a mltiples frmacos, incluso a agentes antimicrobianos de ltima
lnea como la vancomicina (antibitico sintetizado por un actinomiceto del gnero Nocardia), la bsqueda de nuevas molculas con
actividad antimicrobiana es muy relevante. Los microorganismos que habitan ambientes extremos, nichos ecolgicos inexplorados,
ambientes marinos, aquellos que son endfitos, entre otros, estn entre las prioridades de la exploracin biotecnolgica. Diversos
informes cientficos en salud pblica muestran que una gran variedad de bacterias patgenas de humanos como Staphylococcus,
Mycobacterium, Streptococcus, Enterococcus han desarrollado resistencia a frmacos, fenmeno que ha promovido la bsqueda de ms
y mejores antibiticos, especialmente porque estas bacterias son una clara amenaza a la salud mundial. Adems, los hongos y levaduras
se han convertido en una amenaza, puesto que algunos de ellos provocan infecciones en pacientes inmunocomprometidos,
principalmente aquellas personas afectadas por VIH, o bien, pacientes con transplante de rganos que deben consumir frmacos
inmunosupresores. Los actinomicetos en la solucin de problemas de contaminacin y su empleo como fertilizantes biolgicos para las
plantas Arthrobacter es un gnero de importancia ambiental debido a que sus especies son empleadas en la biorremediacin. Las especies
de este gnero son resistentes a la desecacin y a la deficiencia de nutrimentos, por lo que se considera un gnero de inusitada
flexibilidad, adems de su capacidad para degradar herbicidas, pesticidas y molculas orgnicas de excesiva complejidad. Rhodococcus
es otro gnero ampliamente distribuido en suelos y aguas; algunos de sus miembros tambin son capaces de degradar diversas molculas
como son varios tipos de hidrocarburos del petrleo, detergentes, benceno, bifeniles policlorados (PBC), etctera. Algunas especies del
gnero Streptomyces son importantes en la ecologa del suelo, ya que desempean un papel importante en la mineralizacin de diversos
materiales orgnicos e incluso pueden degradar sustancias resistentes como la pectina, lignina, queratina, ltex y compuestos aromticos.
Un gnero de actinomicetos de importancia en microbiologa agrcola es Frankia, debido a que se asocia de manera simbitica con varias
especies de plantas superiores proporcionndoles diversos beneficios al capturar el nitrgeno (N) del aire y fijarlo para el uso de la planta.
Las races de plantas colonizadas por Frankia desarrollan ndulos que fijan N de forma tan eficiente que un rbol puede crecer sin
fertilizacin nitrogenada. Frankia coloniza diversas plantas y tambin tiene la capacidad de fijar N en vida libre. Algunas de las especies
susceptibles de ser colonizadas por Frankia son utilizadas para la restauracin de suelos contaminados por compuestos inorgnicos, como
metales pesados o elementos potencialmente txicos. Este gnero de actinomiceto se ha encontrado colonizando suelos en proceso de
formacin y es tolerante a altas concentraciones de sales y niveles de pH, por lo que es apto para ser empleado en sitios con problemas
de contaminacin (Prescott y cols., 2004; Madigan y cols., 2009). Otro gnero relevante es Micromonospora, cuyas especies, adems de
ser una fuente de diversos antibiticos, participan en el control biolgico de enfermedades de plantas por medio de diversos mecanismos,
como produccin de enzimas hidrolticas y activacin en la planta de genes de defensa contra enfermedades (resistencia sistmica); su
actividad como promotores de crecimiento tambin est documentada. Algunas especies producen fitohormonas (cido indol actico y
cido giberlico) y otras se asocian a la bacteria simbitica Rhizobium en el interior de peque- as protuberancias en las races, por lo que
Rhizobium y Micromonospora pudieran estar interaccionando positivamente para la planta en la fijacin de N y, por lo tanto, mejorando
su nutricin (Valds y cols., 2005; Trujillo y cols., 2010).

Los actinomicetos como agentes de control biolgico en enfermedades de plantas En el rea agrcola es importante contar con estrategias
para enfrentar enfermedades de las plantas causadas por agentes fitopatgenos, como bacterias y hongos. Una de estas estrategias
consiste en el empleo de molculas de origen microbiano. La segunda estrategia est enfocada en buscar microorganismos que, adems
de antibiosis, puedan antagonizar el crecimienE to de fitopatgenos. Estas dos estrategias podran ser utilizadas solas o en combinacin.
Los microorganismos seleccionados por su actividad antimicrobiana pueden utilizarse para la elaboracin de formulaciones que se
apliquen directamente al suelo y que puedan multiplicarse en l, siendo lo suficientemente selectivas para afectar solamente a los
patgenos, pero no as a las poblaciones nativas de la zona. Estas formulaciones a base de microorganismos antagonistas tambin pueden
desarrollarse para ser aplicadas directamente al follaje de los cultivos. En la actualidad existen en el mercado pocos productos a base de
actinomicetos antagonistas, como el Actinovate, por lo que la bsqueda de cepas con mayor potencial siempre ser necesaria debido a
los cambios que los fitopatgenos pueden desarrollar de un ciclo de cultivo a otro. Inclusive, en algunos pases se busca que los
microorganismos antagonistas que se apliquen en sus campos sean aquellos productos que contengan microorganismos nativos de la
regin del cultivo que se pretende proteger. Diversos ensayos se han realizado sobre el efecto antagnico de actinomicetos, algunos han
sido probados con xito in vitro y otros in planta. Entre los gneros de microorganismos fitopatgenos que los actinomicetos pueden
antagonizar y controlar estn los Fusarium, Phytophthora, Pythium, Alternaria, Botrytis, Plasmodiophora, Gibberella, Mucor, Fusicoccum,
Ustilaginoidea, Colletotrichum, Aspergillus, Penicillium, Pectobacterium, Rhizoctonia, Sclerotium, Ralstonia, Clavibacter, Sclerotinia,
etctera. Por ejemplo, en el Centro de Investigacin y Asistencia en Tecnologa y Diseo del Estado de Jalisco (CIATEJ), en Guadalajara y
en Mrida, experimentos de antagonismo entre cepas de actinomicetos aisladas de suelos agrcolas contra Fusarium sp y Phytophthora
sp, han sido exitosos en la inhibicin in vitro del crecimiento de algunos de esos fitopatgenos (Figura 2); igualmente se encontraron
resultados positivos contra las bacterias fitopatgenas Dickeya sp y Pseudomonas sp (Rincn y cols., 2014). Diversas especies de
actinomicetos muestran actividad como promotores de crecimiento vegetal, lo que los hace candidatos para la elaboracin de
biofertilizantes que, adems, protejan a las plantas contra enfermedades. Algunos representantes del grupo tambin pueden hacer frente
a insectos plaga que afectan a las plantas, siendo importantes los que presentan elevada actividad quitinoltica.

http://www.elementos.buap.mx/num101/pdf/59.pdf

CONDICIONES AMBIENTALES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS.

1. Temperatura Cada microorganismo tiene una temperatura ptima en la cual su crecimiento es ms rpido; una temperatura mnima
por debajo de la cual no crece y una temperatura mxima por encima de la cual el crecimiento no es posible, estas tres temperaturas se
denominan temperaturas cardinales y son caractersticas de cada microorganismo. El rango de temperaturas entre las que un
microorganismo puede crecer es variable, hay microorganismos con un rango estrecho llamados ESTENOTERMALES y se encuentran en
hbitat de temperatura relativamente constante. Los microorganismos de rangos ms amplios se encuentran en medios ambientales
donde la temperatura vara considerablemente y stos son llamados EURITERMALES.

Psicrfilos: Microorganismos capaces de crecer a bajas temperaturas. Existen varias definiciones de psicrfilos, en un inicio se defina
como Psicrfilo a cualquier microorganismo que poda crecer a 0 C. Sin embargo, parecen haber dos grupos diferentes que pueden
crecer a esa temperatura. El primer grupo est constituido por los psicr- filos estrictos o aquellos microorganismos que pueden crecer
a 0 C pero cuya temperatura ptima es de 15 C. El otro grupo los constituyen aquellos microorganismos que pueden proliferar a 0 C
pero que tienen temperaturas ptimas ms elevadas 20 - 30 C llamados psicrfilos facultativos. Ej. Pseudomonas.

Mesfilos: Microorganismos cuya temperatura ptima de crecimiento se encuentra dentro de un rango de 25 40 C. Dentro de este
grupo se encuentran la mayora de los microorganismos contaminantes de los productos farmacuticos, alimentos y cosmticos y los
microorganismos patgenos para el hombre. Ej. Neisseria gonorrhoeae.

Termfilos: Microorganismos cuya temperaturas ptima es de 50 - 60 C, hay algunos con temperaturas ptimas an ms altas 80 - 121
C, a estos se les denomina hipertermfilos o termfilos extremos. Ej. Thermus aquaticus (temperatura ptima 72 C; crece entre 50 -
80 C)

Actividad del agua (aw) Como los microorganismos dependen del agua para la sntesis de sus componentes celulares, es necesario que
sta se encuentre disponible en el medio de cultivo para que los microorganismos la puedan utilizar para su crecimiento. La cantidad
disponible de agua para los microorganismos en un medio de cultivo, no depende slo de la cantidad que se ha aadido, ya que en
estos medios se pueden encontrar sustancias slidas disueltas que disminuyen su disponibilidad. La actividad del agua (aw) es una
expresin para la cantidad de agua disponible en un sustrato dado y se define como la centsima parte de la humedad relativa del aire
que est en equilibrio con ese sustrato. Este valor nos indica la cantidad de agua disponible para ser utilizada por los microorganismos.

El aw mnimo en que las bacterias crecen vara ampliamente pero los valores ptimos para la mayora de las especies son mayores de
0,99. Existen ciertos microorganismos que pueden crecer en medios con elevadas concentraciones de solutos y se conocen como
osmotolerantes. Otros microorganismos necesitan para crecer elevadas concentraciones de solutos, a stos se les denomina
osmoflicos. Hay otros microorganismos que se han llamado haloflicos o halfilos estrictos, stos requieren iones Na+ para crecer y lo
hacen ptimamente en medios a los que se les ha aadido NaCl para obtener valores de aw menores de 0,80 y los halfilos facultativos
que crecen a concentraciones de sales capaces de inhibir a la mayora de las bacterias.

Oxgeno Segn sus requerimientos de oxgeno los microorganismos pueden ser: 4.1 Aerobios estrictos: requieren oxgeno para crecer.
Ej. Mycobacterium tuberculosis. 4.2 Anaerobios facultativos: pueden crecer en presencia o en ausencia de oxgeno. Ej. Levaduras,
enterobacterias. 4.3 Anaerobios estrictos: crecen en ausencia de oxgeno. En presencia de oxgeno su crecimiento cesa, algunos
mueren rpidamente. Ej. Especies del gnero Clostridium. 4.4 Anaerobios aerotolerantes: crecen en ausencia de oxgeno, pero la
presencia de oxgeno no perjudica su crecimiento. Ej.: Especies del gnero Lactobacillus. 4.5 Microaeroflicos: requieren pequeas
concentraciones de oxgeno para crecer. Ej.: Especies del gnero Spirillum.

Para cultivar a las bacterias aerbicas o a las anaerobias facultativas en tubos y fiolas pequeas, se incuba el medio en condiciones
atmosfricas normales. Cuando se requieren bacterias aerobias en grandes cantidades, es preferible aumentar la aireacin del cultivo
por agitacin.

MTODOS Y TCNICAS ESPECIALES DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS Las bacterias anaerbicas estrictas slo pueden crecer si se les
excluye el oxgeno del medio, lo cual puede hacerse de varias maneras: a) Utilizando agentes reductores en el medio para disminuir el
contenido de oxgeno. Ej. el tioglicolato de sodio; b) Por remocin mecnica de oxgeno y reemplazndolo por otro gas (nitrgeno); c)
Mediante reaccin qumica, el oxgeno disponible se convierte en CO2, esto ocurre si se enciende una vela dentro de un recipiente
cerrado o utilizando jarras Gaspak, en esta ltima la reaccin del bicarbonato de sodio y el borohidruro de sodio en presencia de agua,
produce la liberacin de hidrgeno y CO2, ese hidrgeno liberado se combina con el oxgeno atmosfrico para formar agua en
presencia de un catalizador de paladio. Cuando se utiliza la jarra Gaspak es usual colocar un indicador de anaerobiosis.

Las reglas para seleccionar las cajas para los clculos son las siguientes:

1. Se consideran representativas las cajas que tienen un nmero de colonias dentro del rango de sensibilidad del mtodo,
en este caso, entre 25 y 250 UFC.

2. Una vez seleccionadas las cajas y hechos los promedios correspondientes, se aplica el factor de dilucin, que es el
inverso y se redondea el nmero a 2 cifras significativas (o dgitos) y potencias de 10. Cuando el tercer dgito del promedio
es 4 o menor, se omite dejando el nmero de 2 cifras significativas . Por ejemplo, si en una caja se cuentan 312 UFC, se
debe reportar como 31 X 101 , porque el tercer dgito es 2 y se redondea al segundo dgito. Cuando el tercer dgito es 5 o
superior, el segundo dgito se redondea al siguiente, por ejemplo si en una caja se cuantifican 199 UFC se reportar como
20 x 101 UFC, porque el tercer dgito es superior a 5. En el ejemplo 5 del cuadro 2, el promedio es de 237.5 en la dilucin
10-3, por lo que se reportar como 24 x 104 UFC. 3. Cuando las 2 placas de una dilucin contienen un nmero de colonias
caractersticas dentro del rango de sensibilidad del mtodo, se promedian los nmeros y se multiplica por el inverso de la
dilucin.

4. Cuando hay una placa con crecimiento extendido, no se consideran sta ni su duplicado.

5. Cuando una de las 2 placas de una dilucin es representativa y la otra no, se consideran ambas y se promedian.

6. Cuando hay placas representativas en 2 diluciones subsecuentes, se promedian cada una con su duplicado (aunque el
duplicado no lo sea), se aplica el factor de dilucin a cada una y luego se promedia nuevamente.

7. Si en las placas no hay colonias (o no son caractersticas del grupo en estudio), reportar el resultado como: menos de un
(grupo) en 10-x (la ms baja utilizada), por ejemplo < 100 / g si la dilucin ms baja fue 10-2 < 1 / mL si la muestra se
sembr directamente, sin diluciones. Se agrega la leyenda: valor estimado.

8. Si no hay placas representativas pero hay alguna con un nmero menor de UFC., se consideran las de la menor dilucin
y se agrega valor estimado.

9. Cuando el nmero de colonias por placa exceda de 250, contar las colonias en aquellas porciones de la placa que sean
representativas de la distribucin de colonias. Contar por ejemplo, una cuarta parte o una mitad del rea de la caja y
multiplicar el valor obtenido por 4 2, respectivamente. Si solamente pueden contarse algunos cuadros, considerar que el
fondo de una caja Petri de 100 mm de dimetro contiene 65 cuadros de la cuadrcula del contador. Agregar la leyenda
"valor estimado".

10. Se cuentan como una sola colonia: Cadenas o pequeos grupos no separadas claramente entre s, que parecen ser
causadas por la desintegracin de un cmulo de bacterias y que estn separadas de otras colonias o cadenas.

Colonias extendidas como pelcula entre el fondo de la caja y el agar y que se diferencian claramente de otras. Colonias como pelcula
en las orillas de la caja, sobre la superficie del agar. 11. Se considera crecimiento extendido el que se presenta cuando las colonias
abarcan ms del 50 % de la superficie de la caja, con o sin inhibicin de crecimiento; en ese caso, y/o cuando la inhibicin exceda el 25
% de la superficie de la caja, se considera que las placas no son representativas y por lo tanto no se toman en cuenta.