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Facultad de Qumica

Lic. en Qumica Farmacutica Biolgica

Materia:
Bioqumica bsica

Nombre del catedrtico:


Q.F.B. Cynthia Elena Enrquez Garca

INFORME DE LABORATORIO
Practica 6 Aislamiento de una protena a partir de suero
sanguneo.

Equipo 10
Yareli Flores Mendoza
Lilibeth Hernndez Villa
Josu Mariano Estrada

3er Semestre Grupo 33


5 de octubre de 2017
Objetivo

Aislar una protena (la fraccin gamma-globulina) a partir de suero sanguneo.

Hiptesis

o La prueba de Ninhidrina dar positiva, ya que se identificaran grupos amino


y grupos carboxilo contenidos en las protenas del precipitado obtenido
(resuspendido con solucin isotnica NaCl 0.15 N).

Marco terico
Procedimiento

Colocar 4 ml de
suero no
1. 4 ml
hemolizado en un
tubo de ensaye.

Adicionar lentamente y
gota a gota, 2 ml de
2. solucin saturada de
sulfato de amonio. 2 ml.

Agitar suavemente
3. por 10 minutos con
agitador magntico.

Centrifugar por 15
4. min a 2500 rpm.

Eliminar el
5. sobrenadante
con pipeta Eliminar sobrenadante
Pasteur.
Si el sobrenadante Repetir los pasos 2-5 hasta obtener
eliminado es turbio y/o un sobrenadante claro, siempre
6. amarillento conservando el precipitado.

Repetir
Pasos 2 al 5

Re suspender el precipitado en 4 ml de
solucin isotnica de NaCl (0.15 N)
7.

Resuspender

Realizar la prueba de Ninhidrina a tres


gotas de la solucin de protena.
8.

1 gota 1 gotas

3 gotas.

Guardar la
9. solucin en
refrigeracin.
Observaciones

El suero no hemolizado como ya sabemos es el lquido que queda despus de


eliminar los elementos formes de la sangre. Es de un color amarillo y transparente
y se obtiene de la centrifugacin de una pequea muestra de sangunea. La
diferencia entre el plasma y el suero es que el primero contiene albminas, las
globulinas y el fibringeno (por eso se le agrega anticoagulante) y el segundo solo
contiene como protenas a las albminas y globulinas. Al colocar 1.5 ml de suero
no hemolizado en un tubo de ensaye y agregarle en seguida 1 ml de sulfato de
amonio gota a gota para en seguida mezclarlo durante diez minutos, la coloracin
de la muestra cambio gradualmente hasta verse una solucin de coloracin blanca
gris.

La primera vez que se centrifugo la muestra, se percibi un precipitado muy


pequeo y se notaba muy turbia, as que se volvi a meter a la centrifugadora. Al
salir por segunda ocasin se haba precipitado por completo, quedando as, el
precipitado blanco grisceo en el fondo del tubo de ensaye y el sobrenadante
transparente.

Cuando al precipitado se le agreg la solucin isotnica de cloruro de sodio se


solubilizo, quedando as una solucin liquida color blanco gris.

A la solucin anterior se le quito tres gotas y la dems se guard en refrigeracin.


A las tres gotas le aadimos una de ninhidrina y una de piridina y al ponerla a
bao Mara casi inmediatamente se volvi color azul violeta intenso.
Resultados

Al realizar la prueba de Ninhidrina a tres gotas de la solucin de protena, el


resultado fue positivo, se observ un color azul - violeta intenso.

Prueba de Ninhidrina en 3 Solucin de protena.

gotas de la solucin de
protena.
Anlisis de resultados

En un tubo de ensaye se colocaron 1.5 mL del suero no hemolizado con 1 mL de


la solucin saturada (NH4)2SO4 , se agit y despus se centrifug.

La centrifugacin sirve para separar sustancias que tienen diferente peso


molecular cuando se someten a una fuerza centrifuga, en el caso del suero no
hemolizado se sedimentaron sus componentes en una fase solida y en una
liquida, dividiendo el plasma sanguneo y el suero sanguneo.

Despus se elimino el sobrante (suero sanguneo) y se re suspendi el precipitado


(plasma sanguneo) en 1.5 mL de solucin isotnica NaCl 0.15 N.

Posteriormente al realizar la prueba de Ninhidirna a tres gotas de la solucin de


protena, esta dio positiva, presentando un color azul.

Se aplico la prueba de la Ninhidrina ya que todas aquellas sustancias que


presentan al menos un grupo amino y un grupo carboxilo libre, reaccionan con la
Ninhidrina cuando son calentados con un exceso de la misma y forman dixido de
carbono, amoniaco y un aldehdo que contiene un tomo de carbono menos que el
compuesto original. La positividad se manifiesta dando lugar a la formacin de un
producto color azul o purpura. Debido a que las protenas y los aminocidos
poseen esta caracterstica, la reaccin sirve para identificarlos.

Con el resultado positivo de la protena se puede comprobar que el precipitado


(plasma sanguneo), contiene a la protena gama-globulina.
Conclusin

Experimentalmente obtuvimos una muestra con protena del suero sanguneo que
se comprob con la reaccin de Ninhidrina, es decir, quedaron seroalbuminas y
seroglobulinas en la solucin final.

Mediante el procedimiento pudimos comprobar tambin que las sales divalentes,


como el sulfato de amonio, pueden hacer precipitar por salinizacin, con mayor
eficiencia a las protenas ya que hacen ms importantes las interacciones
protena-protena.

En cambio, las sales monovalentes como el NaCl, estabilizan las protenas, y no


la hacen precipitar, si no que lo disuelven, como observamos en la muestra, una
disminucin en la turbidez de la solucin puesto que solubilizo en cierto grado
la protena.

Cuestionario

Ejercicios de integracin

Bibliografa