BIOLOGIA GENERAL

INFORME DE LABORATORIO N7
ACTIVIDAD ENZIMATICA

GENERAL BIOLOGY
LABORATORY REPORT N7
ENZYMATIC ACTIVITY

Sharith Cantillo, Nancy Fierro, Elizabeth Pardo.

Estudiantes de Medicina de la Universidad Del Magdalena.

RESUMEN:
En este laboratorio se someti a la enzima (peroxidasa) y a su respectivo sustrato
(perxido de hidrogeno) a una serie de condiciones como cambios en la temperatura, la
concentracin del sustrato, concentracin de la enzima y cambios en el pH y se pudo
observar el cambio en la velocidad de reaccin por esas variaciones, todo el
procedimiento se dio bajo la tutela de nuestra docente a cargo Tania De La Hoz, la cual
superviso la actividad y nos hizo constancia de las normas de seguridad que se deben
llevar en el laboratorio.
PALABRAS CLAVES: enzimas, sustrato, temperatura, pH, peroxidasa y perxido de
hidrogeno.

SUMMARY:
In this laboratory, the enzyme (peroxidase) and its respective substrate (hydrogen
peroxide) were subjected to a series of conditions such as changes in temperature,
substrate concentration, enzyme concentration and changes in pH, Change in the speed
of reaction for these variations, the entire procedure was given under the tutelage of our
teacher in charge Tania De La Hoz, which supervised the activity and made us record
the safety standards to be carried in the laboratory.
KEYWORDS: enzymes, substrate, temperature, pH, peroxidase and hydrogen peroxide
 INTRODUCCION
Las clulas poseen compuestos qumicos
que controlan las reacciones que ocurren
en su interior. La sustancia que controla
la velocidad a la que ocurre una reaccin
qumica sin que la clula sufra dao
alguno ni se destruya se conoce como
catalizador. Las enzimas son sustancias
(protenas) que actan como
catalizadores en las clulas y hacen
posibles las, reacciones que ocurren en
las clulas disminuyendo la cantidad de
energa de activacin que se necesita.
Las enzimas tambin controlan la
velocidad a la que ocurre la reaccin
para que la energa se libere a una
temperatura que no haga dao al
organismo. Las miles de reacciones que
constituyen el metabolismo de los seres
vivos estn bajo control de miles de
enzimas.
Diferentes enzimas controlan diferentes
reacciones. La sustancia sobre la cual
acta una enzima se llama Sustrato: Al
ocurrir una reaccin el sustrato se
convierte en uno o ms productos
nuevos
Las enzimas no se consumen en las
reacciones y se pueden volver a utilizar.
Sin embargo una enzima particular acta
solo sobre un sustrato especfico, as que
una enzima solo puede controlar un tipo
de reaccin especfica.
Una enzima recibe el nombre del sustrato
sobre el cual acta, a una parte del
nombre del sustrato sobre el cual acta
la enzima se le aade el sufijo asa.
Corno las enzimas son protenas; los
factores que afectan la estructura de la
protena, tambin afectan la funcin o
actividad de las enzimas. La
temperatura, el pH y la concentracin
son algunos de los factores que influyen
en la actividad de las enzimas.
MATERIALES Y REACTIVOS
Laboratorio
Beakers, tubos de ensayo pequeo, bao
Mara, gradilla, vidrio de reloj, pinzas
para tubos de ensayo cuchilla o bistur,
papel absorbente, estufa, termmetro,
probetas, pipetas, cinta para rotular.
Reactivos y Soluciones:
100 ml de solucin de perxido de
hidrogeno al 6%, agua destilada, agua en
bolsa, hielo, cido actico, hidrxido de
sodio, solucin salina (suero fisiolgico),
solucin de almidn y saliva.
Biolgico:
200 gramos de hgado fresco licuado en
poco agua (este procedimiento deben
realizarlo en casa)
PROCEDIMIENTO
Utilice tubos de ensayos grandes. Las
muestras de la solucin de perxido de
hidrogeno se deben tener por separado
en tubos de ensayos antes de agregar la
muestra del extracto de hgado en los
respectivos tubos de ensayos. Esto con
el fin de que las soluciones de perxido
sean agregadas al mismo tiempo en
cada uno de los tubos que contengan la
muestra.
 a) Rotule y prepare cuatro tubos de
ensayos de la siguiente forma
N del Mililitros de extracto de hgado
tubo
1 0
2 1
3 2
4 4
Una vez realizado el procedimiento, agite
bien los tubos, luego agregue al mismo
tiempo, 2 ml de perxido de hidrogeno en
cada uno de los tubos.
b) Rotule y prepare cinco tubos de
ensayos de la siguiente forma
N del Mililitros de extracto de hgado
tubo
1 1
2 1
3 1
4 1
5 1
Agite cada uno de los tubos, agregue al
mismo tiempo las siguientes cantidades de
perxido de hidrogeno
N del Mililitros de Perxido de
tubo hidrogeno
1 0 ml
2 1 ml
3 2 ml
4 4 ml
5 6 ml
c) Rotule y prepare tres tubos de
ensayos de la siguiente forma
N del Ml de extracto de Temperatura C
tubo hgado
1 2 Baos con hielo
2 2 Temperatura
ambiente
3 2 Agua hirviendo
Espere que el material que este dentro de
los tubos tenga la misma temperatura que la
de los respectivos baos; luego agite y
proceda agregar al mismo tiempo 2 ml de
perxido de hidrogeno a cada uno de los
tubos.
d) Rotule y prepare tres tubos de
ensayos de la siguiente forma
N del ml de extracto pH
tubo de hgado
1 2 cido actico 5 gotas
2 2 Solucin salina (suero
fisiolgico)
3 2 Hidrxido de sodio 5 gotas
Agite cada uno de los tubos y agregue al
mismo instante 2 ml de perxido de
hidrogeno en cada uno de ellos.
e) Rotule y prepare cuatro tubos de
ensayos de la siguiente forma
N del tubo Material
1 1 ml de Extracto de hgado
2 1 ml de saliva
3 1 ml de Extracto de hgado
4 1 ml de saliva
Agite cada uno de los tubos; a los dos
primeros agregue 2 ml de perxido de
hidrogeno, Describa todo lo que observa y
su explicacin. A los tubos 3 y 4 agregue 2
ml de solucin de almidn agtelos durante
3 minutos y luego agregue 3 gotas de lugol
en cada uno de ellos.

DISCUSION
En la parte a se observ al agregarse el
perxido de hidrogeno en todos los
tubos se observ que se produjo un
burbujeo en todos los tubos de ensayo
menos en el primero, la reaccin fue
mayor en el tubo nmero 4 que en el
tubo numero 2 por lo tanto, entre ms
extracto de hgado haba la actividad
enzimtica era ms fuerte, si se hubiese
seguido aumentando la concentracin
enzimtica se hubiese llegado a un
punto donde la actividad enzimtica no
hubiera aumentado, porque existe una
relacin lineal entre la cantidad de
enzima y el grado de actividad.
En la parte b se observ que entre ms
perxido de hidrogeno se agreg ms
fuerte era la reaccin, si se hubiese
seguido agregando sustrato se hubiera
llegado a un punto en donde la actividad
enzimtica no hubiera aumentado por
que el ndice de actividad enzimtica se
vuelve independiente a la concentracin
del sustrato.
En la parte c en el tubo numero 1 el cual
se someti a bajas temperaturas se vio
una actividad enzimtica reducida, en el
tubo numero 2 el cual se mantuvo a
temperatura ambiente tubo una
actividad enzimtica normal y el tubo
numero 3 el cual se someti a altas
temperaturas en un bao mara hubo
una reaccin bastante dbil, esto se
debe a que las enzimas manejan una
temperatura ideal y cuando se calienta y
se lleva a cierta temperatura la protena
se desnaturalizo y cuando se llev a una
temperatura baja se obtuvo una
reaccin leve debido a que la
temperaturas bajas detienen la actividad
enzimtica pero no las destruyen.
En la parte d en el tubo nmero 1 se
form un coagulo de color gris, en el
tubo nmero 2 se form una reaccin
efervescente como en las reacciones
anteriores y en el tubo numero 3 el
hgado tomo un color oscuro y se volvi
una especie de masa y tuvo una
reaccin efervescente bastante espesa,
estos cambios se deben a que los
niveles de pH que tienen el cido
actico y el hidrxido de sodio son muy
diferentes a los niveles ptimos de esta
enzima lo cual conduce a una reduccin
en la actividad enzimtica.
En la parte e en el tubo nmero 1 hubo
una reaccin efervescente bastante
rpida y fuerte lo que indica que hay
bastante enzimas que pueden
reaccionar con el sustrato, en el tubo
nmero 2 la reaccion se vio bastante
diferente, dejando una capa espesa
arriba y una capa trasparente abajo, en
el tubo nmero 3 no hubo ninguna
reaccin, quedo completamente igual,
esto seala que no haba ninguna
enzima que reaccionara con el sustrato,
en el tubo nmero 4 se volvi de un
color morado claro con el lugol.
CONCLUSION
Se concluye que en diferentes
condiciones a la que fueron sometidas
las enzimas, las mismas sufren una
variacin en su actividad enzimtica eso
se debe a que la enzima maneja una
temperatura y un pH ideal, y al alterarse
alguno de los dos el resultado de la
reaccin sufre un cambio, aunque el pH
optimo en las enzimas no es el mismo
para todas ya que en unas varan, como
es el caso de la pepsina la cual no se
desnaturaliza con el pH del estomago
4. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Para los procedimientos realizados
identifique la enzima y los respectivos
sustratos.
R- La enzima utilizada en este laboratorio
fue la peroxidasa, las cuales son un tipo
de enzimas muy extendidas en todo el rbol
filogentico de la vida. Pertenecen a la
categora de las oxidorreductasas y segn
el Comit de Nomenclatura de la Unin
Internacional de Bioqumica y Biologa
Molecular se clasifican con los nmeros EC
1.11, y el sustrato que se utilizo fue el
perxido de hidrogeno el cual tambin es
conocido como agua oxigenada
dioxogen o dioxidiano, es un compuesto
qumico con caractersticas de un lquido
altamente polar, fuertemente enlazado con
el hidrgeno tal como el agua, pero que en
general se presenta como un lquido
ligeramente ms viscoso que sta. Es
conocido por ser un poderoso oxidante.
2. Cmo explicara usted el burbujeo
que se produce al aplicar perxido de
hidrogeno (H2O2) a una herida; Cul es
el propsito de este procedimiento?
R-El agua oxigenada se usa como
desinfectante cuando se echa sobre una
herida. La sangre contiene una enzima que
acta como un catalizador (peroxidasa),
acelerando la reaccin de descomposicin
del agua oxigenada. Como muchas de las
bacterias patgenas son anaerobias (no
pueden vivir con oxgeno), mueren en la
espuma blanca rica en oxgeno que se
produce cuando la sangre de la herida
acta sobre el agua oxigenada.
3. Realice una breve descripcin de la
forma en que se puede inhibir la
actividad de una enzima.
R- La actividad de una enzima se puede
inhibir utilizando agentes qumicos que
alteren de forma drstica el pH del medio en
que encuentre la enzima, lo cual lleva a una
reduccin en la actividad enzimtica y en
caso de que los niveles de pH sean muy
extremos llevara a la desnaturalizacin de
la misma.
4. Est usted de acuerdo con la
interaccin enzima - sustrato es anloga
a lo de una cerradura y su llave. Explique
su respuesta
R- estoy de acuerdo con esta analoga
debido a que los sitios activos de una
enzima especfica solo reacciona con un
sustrato especfico, esta reaccin tambin
llamada activacin se produce debido a la
gran afinidad qumica (electrnica) por
ciertas reas de la enzima, sitios activos.
5. Desde el punto de vista enzimtico
cmo una fiebre alta puede afectar su
actividad? Explique.
R- Las enzimas son susceptible a los
cambios de temperatura, las enzimas tienen
una temperatura ptima. Cuando la enzima
est en su temperatura ptima la actividad
, enzimtica est en su punto ms alto,
cualquier cambio en la temperatura a partir
ah va a generar una disminucin en su
actividad enzimtica, no todas las enzimas
tienen la misma temperatura optima, por lo
tanto la actividad enzimtica de algunas
enzimas en caso de fiebre se reducen
mientras que en otras aumentan porque
tienen una temperatura optima mayor.
6. A qu se debe que una enzima actu
mejor a un determinado pH y sea inactiva
a otro explique?
R- Se debe a que las enzimas adems de
tener una temperatura ptima tambin
cuentan con un PH ptimo en la cual la
actividad enzimtica alcanza su punto ms
alto, y cualquier desviacin en los niveles de
PH van a causar que la actividad enzimtica
disminuya. Entre ms alejado estn estos
niveles del PH optimo, menor ser la
actividad enzimtica, los PH extremos
(niveles muy alejados del optimo) pueden
ocasionar la desnaturalizacin de las
enzimas, debido a que la estructura con
estos cambios es posible modificar las
interacciones inicas que intervienen en la
estabilidad de la enzima en su estado
nativo.
BIBIOGRAFIAS.
Pelczar Michael. 1982. Micro Biologa. 4
Edicin. Editorial libros McGraw-Hill DE
MEXICO, S.A. de C.V.
Larner, J.: Interediary Metabolism and its
Reguation , Prentice-Hall, Englewood Cliffs,
N.J., 1971.
Jean, C. 2011. Biologa Celular y Molecular.
5o Edicin. Editorial Panamericana S.A.C.F.