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UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA ALIMENTARIA

FACULTAD DE OCEONOGRAFA, PESQUERA, CIENCIAS


ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA
ESCUELA DE INGENIERIA ALIMENTARIA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA
DOCENTE: Dra. NILDA QUISPE ALVARADO
TEMA: INFORME DE PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
AO: 3 B
INTEGRANTES:
POCLIN DELGADO,KATIA
QUEVEDO MEZA,CRISTIAN
VENTURA FLORES,MARJORIET
VELIZ MIRANDA,ANNABELLA
VERASTEGUI,MARJORIE
VERDI HUAMANI,DANIXSA

LIMA, MIRAFLORES 24 DE MAYO 2017

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PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO


FUNDAMENTO
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la especie
que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. MERK(2002)
OBJETIVOS
Aprender a preparar los medios de cultivo mas comunes que se utilizan para el cultivo
de los microorganismos
Diferenciar los diversos tipos de medios y su aplicacin adecuada de acuerdo al tipo
de microorgaanismo a cultivar

MARCO TEORICO:
MEDIOS DE CULTIVO:
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. (Lpez T. & Torres C.,
2006)

Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir en


condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms importantes
para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido de carbono e
hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento especficos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
(Ramn P. & Jurez A., 2002)

Fig. 1 Microorganismo

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El desarrollo de un microorganismo en un medio de cultivo depende de diversos


factores, entre los cuales los ms importantes son:
- Disponibilidad de los elementos nutritivos necesarios
- Existencia del oxgeno requerido
- Grado de humedad apropiado
- Valores de pH adecuados: Usualmente neutro o ligeramente alcalino (7.2
7.4), salvo excepciones.
- Temperatura de incubacin precisa: 35 37C para las bacterias patgenas.
- Condiciones de esterilidad del medio y proteccin de posibles
contaminaciones.
(Garca M., Fernndez T. & Paredes S., 2005)
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
Segn su origen:
Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.
Sintticos: Son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
Semisintticos: Son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como
por ejemplo extracto de levadura.
(Lpez T. & Torres C., 2006)

Segn su consistencia:
Lquidos: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin
acuosa. Favorecen mucho el desarrollo y la multiplicacin de las
bacterias porque al difundirse estas por todo el medio encuentran con
facilidad las sustancias que necesitan para nutrirse.
Slidos: Se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo). El
agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias
no constituye ningn elemento nutritivo, en ellos las bacterias crecen
con mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan con rapidez en el
punto donde se desarrollan.
Semislidos: Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en
estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.
(Garca M., Fernndez T. & Paredes S., 2005)

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Fig. 2 Cultivos slidos y lquidos

Segn su composicin:
Comunes o universales: Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte
de los microorganismos poco existentes. Es el medio ms
frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por
ejemplo: agar comn o caldo comn.
Selectivos: Son slidos en los que la selectividad se consigue alterando
las condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo
componentes qumicos especficos con el fin de inhibir el crecimiento de
especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio slo
permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el
de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman
(permite el crecimiento de ciertos estafilococos).
(Lpez T. & Torres C., 2006)

Segn su aplicacin:
Generales: Tambin llamados comunes, son apropiados para el cultivo
de la mayora de los microorganismos por la facilidad con que se
desarrollen en ellos.
Especiales: Conocidos tambin como especficos, van dirigidos al cultivo
de determinadas especies bacterianas o son utilizadas con fines de
diferenciacin.
Enriquecidos: Van aadidos de nutrientes muy ricos que permiten el
crecimiento de ciertas bacterias difciles de cultivar.
COMPONENTES USUSALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Extractos: Para su preparacin, ciertos rganos o tejidos animales o vegetales


(por ejemplo carne, hgado, semillas, etc.) son extrados con agua y calor, y
posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confeccin de
medios de cultivo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc. En

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el caso del extracto de carne en polvo o pasta, provee sustancias


nitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto de
levaduras provee vitaminas del grupo B, nitrgeno y carbono.
Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgnicos nitrogenados y
sales minerales que carecen de identidad qumica definida; se obtienen por
digestin enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (soja, carne,
gelatina, casena, etc.). Las peptonas son muy ricas en pptidos y aminocidos,
pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales.
Fluidos Corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguneo son frecuentemente aadidos a los medios empleados para el
cultivo de algunos patgenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe, por
tanto, ser obtenida en condiciones aspticas directamente de un animal sano.
Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento,
sino tambin con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de
algunas bacterias.
Sistemas amortiguadores: Algunos componentes son incorporados al medio de
cultivo para mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento
bacteriano. Los microorganismos ms comunes son neutrfilos (el pH ptimo
para su crecimiento est prximo a la neutralidad), y sales como fosfatos
bisdicos o bipotsicos, o sustancias como las peptonas, previenen una
desviacin del pH.
Indicadores de pH: Indicadores cido- base se aaden a menudo a los medios
de cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.
Agentes reductores: Cistena, tioglicolato y otros son agentes reductores que
se aaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el
desarrollo de los grmenes microaerfilos o anaerobios.
Agentes selectivos: La adicin de determinadas sustancias al medio de cultivo
puede convertirlo en selectivo (ver ms adelante, clasificacin de los medios de
cultivo). Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, cida sdica, telurito
potsico, antibiticos, etc., a la concentracin adecuada, actan como agentes
selectivos frente a determinados microorganismos.
(Rodrguez C., Gamboa C. & Hernndez Ch., 2005)

MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN LABORATORIO:

AGAR NUTRITIVO:
Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de
bacteria. Es muy til porque permanece solido incluso a relativas altas
temperaturas. Adems, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeas. En un caldo de
nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una sustancia
espesa, con colonias difcilmente observables.
(Uberoa F, 1981)

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Fig. 3 Agar nutritivo

CALDO BRILA:
Medio selectivo recomendado para la prueba confirmatoria en la deteccin del
grupo coliforme en aguas, leche, derivados lcteos y otros productos de
importancia sanitaria, mediante la determinacin del NMP.
Lpez T. & Torres C. (2006)

Fig. 4 Caldo brila

AGAR NUTRITIVO:
El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulacin
suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne
proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrgeno y vitaminas. El
empleo de este medio es de acuerdo al tipo de estudio por realizar.
(Garca M., Fernndez T. & Paredes S., 2005)

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Fig. 5 Agar nutritivo

PARTE EXPERIMENTAL DE AGAR NUTRITIVO


Materiales:
Esptula
Balanza mecnica
Papel kraft
Baln de base plana
Probetas
Autoclave
Extracto de carne
Peptona
Agar
Agua destilada
Agar tripticasa soya
Agar TSI( agar con hierro y tres azucares)
Tubos de ensayo
Tubos con campanas Durham
Lpiz marcador

Procedimiento:
1. Preparacin de medio de cultivo de Agar nutritivo:

Se midi en una probeta de 500 ml, 300ml de agua destilada.

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Fig.1: Probeta con 300 ml de agua destilada

Se pes 8.4 g de agar nutritivo en un papel kraft.

Fig.2: Agar nutritivo Fig.3: Pesado de los 8.4 g de agar


nutritivo

Se pas el agar nutritivo del papel kraft a un baln de base plana y se


agreg los 300ml de agua destilada.

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Fig.4: Agar nutritivo siendo pasado a


un baln Fig.5: Agar nutritivo
siendo mezclado con
agua destilada

Se homogenizo y se coloc un tapn de


algodn en el pico del baln.

Fig.6: Medio de cultivo final de


agar nutritivo

Se calent a la llama del mechero el baln hasta que este hierva.

Finalmente se cubri con papel kraft el baln y con un lpiz marcador se le


puso fecha y hora de entrada al autoclave.

Luego agregamos los tubos a una lata, se envolvi con papel y se rotulo.

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Fig.7: Lata envuelta rotulada

Finalmente se coloc las latas donde el autoclave.

Fig.8: Latas en el autoclave Fig.9: Autoclave

DISCUSION:
Segn Delgado A., Polanco A. & Prieto S. (2001) Las tcnicas de esterilizacin han de
destruir todos los tipos de vida microbiana. El vapor de la presin (autoclave) es el
mtodo ms eficaz y prctico para esterilizar con calor. La exposicin al vapor en una
autoclave, a 15 libras de presin (121 C) y durante 20 minutos, matara todas las
formas de vida.
En la prctica desarrollada en laboratorio, esterilizamos en autoclave tal como dice el
autor, con la diferencia que lo sometimos a 121 C por 15 minutos.

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PARTE EXPERIMENTAL DEL CALDO NUTRITIVO


MATERIALES
Esptula
Balanza de torsin
Papel Kraft
Balones
Probetas
Encendedor
Caldo nutritivo
Agua destilada
EQUIPO
Autoclave
Mechero Bunsen

PASOS QUE SE SIGUI PARA LA PREPARACIN DE MEDIO DE


CULTIVO: CALDO NUTRITIVO
Se observ las indicaciones para preparar el medio de cultivo.

Ilustracin 1. Caldo nutritivo Ilustracin 2. Indicaciones de la


preparacin del medio de cultivo

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Se pes 2 g del caldo nutritivo que estaba en estado slido (polvo).

Ilustracin 3. Dos gramos de caldo nutritivo

Se midi 100 ml de agua destilada en una probeta y se aadi una cierta


cantidad de agua al baln para evitar que cuando se agregue el caldo,
ste se pegue al frasco.

Ilustracin 4. 100 ml de agua destilada Ilustracin 5. Baln con un poco de


agua destilada

Se agreg el caldo nutritivo al baln y luego de disolver se aadi el


resto de agua destilada.

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Ilustracin 4.

Se calent agitando constantemente para que termine de disolverse y no


se queme.

Ilustracin 5. Preparacin del medio de cultivo

Se distribuy el medio de cultivo en tubos de ensayo, luego se tapon los


tubos con algodn no absorbente, dndole el ajuste necesario para que
impida la contaminacin despus del proceso de esterilizacin.

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Ilustracin 8. Distribucin de medio de cultivo en Ilustracin 9.


tubos de ensayo.

Se colocaron los tubos en un envase de hojalata forrado con papel y se


rotul.

Ilustracin 10. Ilustracin 11.

Se esteriliz en autoclave a 121C durante 15 minutos y se retir


inmediatamente.

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Ilustracin 12. Medios de cultivo listos para ser Ilustracin 13. Autoclave
esterilizados

Medios de cultivo ya esterilizados

Ilustracin 6. Medios de cultivo esterilzados

Se acondicion los tubos en una estufa despus de esterilizados.

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RESULTADOS
Se obtuvo un medio de cultivo en buenas condiciones.

Ilustracin 7

DISCUSIN
Para poder identificar los microorganismos es necesario observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales. La mayora de las bacterias
patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los
lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por ello, la base de muchos medios de
cultivo es una infusin de extractos de carne y peptona a la que se aaden
otros ingredientes. Estos materiales sirven al medio de cultivo como fuente de
carbono, nitrgeno, fsforo y azufre. Con el extracto de carne y otros materiales
se puede preparar un caldo nutritivo utilizado para el mantenimiento de cultivos
de bacterias (Pinto & Martn, 2012).
El uso de extracto de carne para preparar medios de cultivo como caldo
nutritivo es muy importante para poder observar el crecimiento de
microorganismos, estamos de acuerdo con el autor.

PARTE EXPERIMENTAL DEL CALDO BRILA


1. Materiales
Probeta de 250 ml
Baln de 1000 ml
Pipeta de 5 ml
Tubos de ensayo
Gradilla
Esptula

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Papel kraft
Algodn

2. Equipos de laboratorio
Balanza mecnica
Mechero Bunsen
Autoclave

3. Muestra
Extracto de carne (caldo brila)

Figura 1. Extracto de carne

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4.Procedimiento experimental

Con un papel kraft doblado en 4 se pes 8 g del extracto de carne (caldo brila) en
la balanza mecnica.

Figura 2. Peso de la muestra

Se midi 200 ml de agua destilada en la probeta.

Figura 3. Medida de 200 ml de agua destilada

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Se disolvi el polvo ya pesado aadiendo una pequea cantidad de agua para


evitar que el polvo se adhiera al baln, luego se agreg el agua restante hasta
el volumen deseado y se agito el baln con el contenido.

Figura 4. Adicin de la muestra y agua destilada

En una bureta se distribuy el medio de cultivo en tubos de ensayo previamente


esterilizados y en cantidades constantes (9ml).

Figura 5. Agregando el medio de cultivo a la bureta

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Figura 6. Distribucin del medio de cultivo en tubos

Se coloc tapones de algodn a los tubos de ensayo para evitar una contaminacin
despus de la esterilizacin.

Figura 7. Cerrando con tapones de algodn

Se distribuy los tubos de ensayo en un recipiente y se llev posteriormente a la


autoclave para la esterilizacin a 1210C por 15 minutos.

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Figura 8. Distribucin de los Figura 9. Esterilizacin en la


tubos en un recipiente autoclave

RESULTADOS

Figura 10. Cultivo de caldo brila

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DISCUSIONES
Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde
brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos
capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante.
En nuestra practica elaboramos el cultivo brila (caldo verde), ste nos determinar las
probabilidades de microorganismos coliformes

CONCLUSIONES.

Se aprendi a preparar los medios de cultivo como el caldo nutritivo, caldo brila
y agar nutritivo
Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos.

Nuestro cuerpo tambin es un excelente portador de microorganismos
Se diferenci los tipos de medios de cultivo y su aplicacin adecuada
BIBLIOGRAFIA:
Delgado A., Polanco A. & Prieto S. (2001) Manual de laboratorio clnico
bsico Microbiologa. Espaa: Mc Graw
Garca M., Fernndez T. & Paredes S. (2005) Microbiologa clnica prctica.
Espaa: Repeto
Lpez T. & Torres C. (2006) Microbiologa General. Argentina
Ramn P. & Jurez A. (2002) Bioqumica de los microorganismos. Espaa:
Editorial Revert
Rodrguez C., Gamboa C. & Hernndez Ch. (2005) Bacteriologa General:
Principios y prcticas de laboratorio. Costa Rica
Uberoa F. (1981) Medios de cultivo para microbiologa. Barcelona: ADSA
MICRO
Camacho A., Giles M., Ortegn A., Palao M., Serrano B. y Velzquez O. 2009.
Tcnicas para el Anlisis Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de
Qumica, UNAM. Mxico
o G. Prats Microbiologa Clnica. Editorial panamericana.2007.
Pinto, G., & Martn, M. (2012). Enseanza y Divulgacin de la Qumica y la
Fsica. Madrid: Garceta.
Merck. 2002. Microbiology Manual

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