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INDICE
AGRADECIMIENTO ........................................................................................................... 3
INTRODUCCION ................................................................................................................. 4
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CUL ES EL PROPSITO DEL PROCESO DE EIA? ... Error! Bookmark not defined.
AGRADECIMIENTO
La Gua para Evaluar EIAs de Proyectos Mineros refleja la investigacin hecha en textos y
web para la realizacin de este humilde trabajo de Evaluaciones de Impacto Ambiental (EIAs)
para propuestas de proyectos mineros alrededor del mundo. Esta gua de estudio impacto
arocutipa por transmitir todo su conocimiento y experiencia alo largo de su carrera como
docente.
INTRODUCCION
La mayora de pases exigen una Evaluacin de Impacto Ambiental (EIA) antes de dar luz
verde a un proyecto minero. Los procesos de EIA ofrecen una valiosa oportunidad para que
los ciudadanos participen en las decisiones sobre las minas. El problema es que los
de EIA que resultan incomprensibles para el ciudadano comn. La Gua para Evaluar EIA de
Proyectos Mineros ayudar tanto a abogados como defensores del inters pblico, a las
explorar las maneras como las compaas mineras pueden reducir los riesgos a la salud
En los aos setenta se desarrollaron los mtodos que permitieron de manera simple
y relativamente rpida para determinar la secuencia nucleotdica de cualquier
fragmento de DNA. Estos primeros intentos de secuenciar los cidos nucleicos
siguieron los pasos empleados en la secuenciacin de protenas: romper las
molculas en pequeos fragmentos, determinar su composicin de bases y deducir
la secuencia a partir de fragmentos solapantes. Este mtodo resulta mas o menos
sencillo para protenas que resultan de la combinacin de hasta veinte aminocidos
distintos, pero constituye un problema en el caso de los cidos nucleicos donde la
secuencia resulta de la combinacin de nicamente cuatro nucletidos diferentes.
REACCION EN CADENA DE POLIMERO
Para abordar de lleno el tema de la tcnica de la Reaccin en Cadena de la
Polimerasa (PCR) debemos hablar primero de Biologa Molecular, esta es
una ciencia cuyo objetivo fundamental es la comprensin de todos
aquellos procesos celulares que contribuyen a que la informacin gentica se
transmita eficientemente de uno seres a otros y se exprese en los nuevos individuos,
este conocimiento nos permite cruzar las barreras naturales que existen entre las
especies y "colocar" genes de un organismo otro llamado hospedero,
empleando tcnicas de ingeniera gentica. Gracias a este avance, se pueden
producir fragmentos de cidos nucleicos a gran escala, abriendo as las puertas a la
secuenciacin de los cidos nucleicos y por ende a nuevas disciplinas como
el diagnstico molecular, la terapia gnica o la obtencin de organismos superiores
recombinantes..
Si pudisemos regresar en el tiempo, nos encontraramos con hechos que
contribuyeron en forma decisiva en el desarrollo de la biologa molecular, por
ejemplo:
En 1866 Mendel publica sus experimentos conducentes a los principios de
segregacin y clasificacin independiente de los genes.
En 1869 Frederick Miescher, cientfico suizo descubre en el ncleo de
las clulas una sustancia de carcter cido a la que llam nuclena.
En los aos veinte el qumico alemn Robert Feulgen, utilizando una tincin
especfica descubri que el DNA estaba situado en los cromosomas.
En 1944 Avery McCleod y Mc Carty comprueban que el DNA es el portador de la
informacin gentica.
En 1953 Watson y Crick deducen la estructura del DNA Este ltimo hecho dio la
pauta para nuevos descubrimientos que conduciran a lo que se llama tecnologa
del DNA Recombinante Hablando especficamente de DNA segn el modelo de
Watson y Crick, la molcula est constituida por dos largas cadenas de nucletidos
con polaridad opuesta, unidas entre s formando una doble hlice. Cada nucletido
est formado por :
1.- Molcula de azcar (desoxirribosa) 2.- Base orgnica nitrogenada: bases
pirimdicas (Citosina, timina), bases pricas (Adenina, Guanina).
3.- Grupos fosfato.
Los nucletidos se enlazan entre s a travs del grupo fosfato formando cadenas
muy largas, quedando las bases nitrogenadas en la parte central unidas cada una
al carbono 1 del azcar formando un ngulo recto con su eje.
Las cadenas de poli nucletido que constituyen una molcula de ADN se mantienen
unidas entre s gracias a la formacin de puentes de hidrgeno entre las bases
nitrogenadas complementarias de ambas cadenas que quedan enfrentadas.
Estructura primaria del DNA
El DNA es una doble hlice antiparalela ya que el enfrentamiento entre las bases
nitrogenadas es constante; la Adenina siempre se enfrenta con la timina formando
dos puentes de hidrgeno y la Guanina siempre se enfrenta con la Citosina
formando tres puentes de hidrgeno. Esta caracterstica provoca que las dos
cadenas sean complementarias. Las dos cadenas de la doble hlice tienen sentidos
opuestos, mientras una va en sentido 5 3 y la otra lo hace en sentido 3 5.
Estructura terciaria y cuaternaria del DNA
Recordemos que la longitud de una hebra de DNA humano es de varios metros, por
necesidad debe adoptar otras estructuras para poder estar en el interior de las
clulas. Estas estructuras, terciaria y cuarternaria, permiten el empaquetamiento del
DNA formando los cromosomas. En las clulas eucariotas existen varios
cromosomas y en los procariotas, existe un DNA empaquetado denominado
pseudocromosoma.
Es una tcnica que permite duplicar un nmero ilimitado de veces un fragmento de adn en un tubo de ensayo.
Mediante esta tcnica pueden generarse millones de molculas idnticas, a partir de una molcula de adn. Esto
se puede conseguir en unas horas.
La reaccin es muy sencilla, necesita cantidades de adn muy pequeas y slo se precisa un tubo de ensayo,
algunos reactivos, una fuente de calor y unas pequeas cadena de nucletidos que actan como cebadores.
La reaccin es un proceso cclico:
La molcula de adn que va a copiarse se calienta para que se desnaturalice y se separe las dos hebras.
Cada una de las hebras es copiada por la adn-polimerasa. (se utiliza la adn-polimerasa de una bacteria que vive
en aguas termales, thermus aquaticus, as la enzima puede trabajar a altas temperaturas).
Las cadenas recin formadas son separadas de nuevo por el calor y comienza otro nuevo ciclo de copias. Estos
ciclos se repiten hasta que se obtiene el nmero de copias deseado.
capilar[editar]
La secuenciacin de ADN por electroforesis capilar incluye las siguiente aplicaciones: deteccin
de SNPs ("single nucleotide polymorphisms"), anlisis de polimorfismos de conformacin de
cadena simble (SSCP) y anlisis de las repeticiones cortas en tndem (STR).
Pasos de la secuenciacin[editar]
Amplificacin
Amplificacin por PCR de los fragmentos de ADN en un termociclador, aadiendo dNTPs
marcados con fluorforos al mix estndar.
Purificacin
Para eliminar los componentes del mix de PCR, dejando nuestro ADN amplificado puro. Puede
ser llevado a cabo por kits de purificacin comerciales.
Electroforesis capilar
Los fragmentos de ADN se inyectan en el capilar de electroforesis, y los picos de fluorescencia
correspondientes a cada nucletido, llegarn a un detector en tiempo real, y cuyos datos se
pueden transformar informticamente en un cromatograma que nos dar los datos de la
secuencia de nuestra muestra de ADN
ELECTROFORESIS DEL ADR Y ARN
tamao, visualizarlos mediante una sencilla tincin, y de esta forma determinar el contenido
entereza. Podemos adems extraer del gel los fragmentos de ADN que sean de inters, para
siendo, una herramienta de importancia primordial en el desarrollo de las tcnicas del ADN
una matriz para analizar muestras de ADN corresponde a Vin Thorne, un bioqumico del
Instituto de Virologa de Glasgow, quien a mediados de los aos 60 del pasado siglo estaba
electroforesis de cidos nucleicos. Sometidos a un campo elctrico, la carga neta negativa del
ADN y el ARN har que estos se muevan en direccin al nodo (Figura 1A). Si se fuerza a los
cidos nucleicos a moverse a travs de un gel formado por una malla tridimensional de un
polmero como la agarosa, la friccin har que las molculas de mayor tamao migren con
ms lentitud, mientras las de menor tamao avanzan ms en el gel, permitiendo que las
de forma diferente ante la friccin con la malla del polmero, permitiendo su separacin.
Mediante la electroforesis en gel de agarosa, Thorne logr separar y visualizar tres formas
topolgicas diferentes del ADN del polyomavirus: superenrrollada, relajada y lineal, tras
haber marcado el ADN con [3H] timidina (Thorne 1966, 1967). El trabajo de Thorne recibi
poca atencin hasta principios de los aos 70, cuando el empleo de enzimas de restriccin
permiti el anlisis de molculas de ADN mucho ms grandes que los genomas virales.
ADN con suficiente sensibilidad para detectar cantidades de ADN del orden de nanogramos e
desarroll independientemente por dos grupos (Aaij y Borst 1972, Sharp et al. 1973), cuyos
mtodos siguen utilizndose hasta hoy sin apenas variaciones. La electroforesis de ADN
diferentes en cuanto a sus propiedades y modo de preparacin, por lo que se utilizar uno u
poliacrilamida, aunque tiene una mayor limitacin en cuanto al tamao de los fragmentos que
podemos separar (5-600 pb), posee un poder de resolucin mucho mayor, permitiendo la
separacin de molculas que difieren en un slo par de bases. Los geles de poliacrilamida se
mucho menor que los de poliacrilamida, porque no permiten separar molculas de ADN que
difieren en tamao menos de unas 50 pb. Sin embargo, el rango de tamaos que pueden
separarse es mucho mayor en un gel de agarosa (molculas desde 50 pb hasta unas 40 kb)
viceversa. Este rango de tamaos hace a los geles de agarosa ideales para analizar el producto
de digestiones con enzimas de restriccin, lo que puede combinarse con otras tcnicas como
el Southern blot, as como para analizar los productos de una reaccin de PCR. Los geles de
unas 40-50 kb en el tamao de las molculas de ADN que puede separar. Por lo tanto, no es
como NotI o SfiI, y menos an separar cromosomas enteros (los cromosomas de eucariotas
inferiores tienen tamaos de entre 0.2 y 12 Mb). Reducir la concentracin de agarosa hasta un
0.1 o 0.2% puede incrementar el lmite de separacin hasta los 750 pb, sin embargo estos
geles son extremadamente frgiles y muy difciles de manipular. Esta limitacin de tamaos
se super con el desarrollo de una tcnica denominada electroforesis en gel de campo pulsado
Esta tcnica fue descrita inicialmente por Schwartz y Cantor (1984), quienes construyeron un
aparato de electroforesis ortogonal en el cual dos campos elctricos en ngulo sobre el gel
las molculas de ADN de gran tamao quedan atrapadas en la malla que forma la agarosa
en su avance a travs del gel, pero la aplicacin de dos campos elctricos alternantes en
ngulo permite una reorientacin de las molculas que de esta forma avanzarn un tramo ms,
antes de quedar de nuevo atrapadas. Cuanto ms grandes son las molculas mayor debe ser la
duracin de los campos elctricos alternos para permitir la reorientacin y en ltima instancia
f) Teido del gel* Etapas de la tcnica * Slo en caso de no utilizarse bromuro de etidio en el
gel