Preparación de soluciones y espectrofotometría

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
Gua de Prcticas Anlisis Instrumental

de Productos Agroindustriales
PRACTICA N 1
Tema: PREPARACIN DE SOLUCIONES
I. INTRODUCCIN
La mayor parte de los procesos qumicos se realizan en un laboratorio, no se hacen

con sustancias puras, sino con disoluciones y generalmente acuosas. Adems, es en
la fase liquida y en la gaseosa, en las que las reacciones transcurren a ms
velocidad. Por lo tanto, ser muy importante saber preparar disoluciones, para
despus poder trabajar con ellas.
II. OBJETIVOS
En esta experiencia se trata de hacer operativos y de afianzar los conceptos de

masa, volumen, densidad, concentracin, mol, etc., de tal modo se sea capaz de:
Emplear adecuadamente instrumentos de medida de masa y de volumen.

Utilizar otros instrumentos de laboratorio.
Resolver problemas sencillos sobre la preparacin de disoluciones.
Elaborar un informe sobre la experiencia realizada.
III. FUNDAMENTO TERICO.
Las disoluciones se preparan en recipientes especficos como: matraces, vasos de

precipitados, fiolas, para medidas exactas se utilizan probetas, pipetas, buretas, etc.
IV. MATERIALES Y MTODOS

4.1 Materiales: reactivos asignados en laboratorio: NaOH, KOH, H2SO4, HCL, etc
4.2 Metodologa
1 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

Ing. Roger Romero U. Ing. John Gonzales C.
a) Se realizan los clculos de la cantidad de soluto necesaria.

1. Si el soluto es solid, se pesa la cantidad necesaria, en una balanza, usando
vidrio de reloj.
2. Si es un lquido, se toma el volumen necesario:
Con una pipeta si es un volumen pequeo.
Con una probeta (o tambin con una bureta) si es un volumen grande.
b) Se echa un poco (un volumen bastante inferior al volumen final que queremos
preparar; por ejemplo, la mitad) de agua destilada en un vaso de precipitado y
se le aade el soluto (lavando el vidrio con el frasco lavador, en el caso de un
solid y vacindola directamente, si es un lquido y enjuagando el recipiente
con agua destilada). Se remueve con una varilla de vidrio.
c) Se vaca el vaso en un matraz aforado de volumen igual al que queremos
preparar la disolucin se enjuaga (el vaso) con un poco de agua destilada,
echndola tambin en el matraz.
d) Se agita el matraz, sujetndola por el cuello e imprimindole un suave
movimiento de rotacin.
e) Se aade agua hasta enrazar (llenar hasta el enrase o marca que indica el afora
del matraz)
f) Se guarda el frasco etiquetado.
Aplicacin
Preparar:
1. 250 cm3 de NaOH 0,1M. a partir del producto comercial (96%)

2. 100 cm3 de cido Clorhdrico 0,1 M. a partir de una disolucin 0,25 M.
3. 250 ml. de disolucin 0,1 M de CuSO4, partiendo del comercial: CuSO4
4. 1 L de una disolucin 0,1 M de H2SO4 partiendo de H2SO4, 2M
5. 1 L de una disolucin 1M de hidrxido de sodio (NaOH) a partir del producto
comercial en el que la etiqueta especifica una pureza del 99%. Indica el
procedimiento a seguir, describe el material a utilizar y determina los gramos
del producto comercial que debes tomar.
6. 1L de una disolucin de cido sulfrico 1 M a partir del producto comercial, que
es del 98% en peso y 1,84 g/ml de densidad. Indicando las precauciones que se
deben tomar, describe el procedimiento a seguir y determina el volumen de
cido concentrado que debes tomar.

V. RESULTADOS Y DISCUSIONES
VI. CONCLUSIONES
VII. RECOMENDACIONES
Hay reactivos, como el cido sulfrico, el clorhdrico y el ntrico, que no se
obtienen con una pureza del 100%, sino con purezas inferiores. En realidad
se trata de soluciones acuosas muy concentradas.
Tambin podemos querer preparar una disolucin pero partiendo no del
reactivo comercial, sino de otras disoluciones ms concentradas que
tengamos en el laboratorio.
Los cidos fuertes provocan quemaduras graves, mantnganse fuera del
alcance de los nios. En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y
abundantemente con agua y acdase a un mdico. No echar jams agua al
producto. Se echa el producto sobre el agua, muy poco a poco.
VIII. BIBLIOGRAFA
- Walton y Reyes. 1978. Anlisis Qumico e Instrumental Moderno. Editorial
Revert S.A. Espaa.
- Ewing, E.W. (1978). Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Mc. Graw
Hill. Mexico
- SKOOG, D.; HOLLER, J.; NIEMAN, T. Principios de Anlisis Instrumental. 5
Edicin. Editorial McGraw-Hill. EE.UU. 2000.
IX. CUESTIONARIO
Definir los siguientes trminos:
Diluir
Concentracin
Saturar
Soluto
Solvente
Saturado
Moles
X. CLCULOS PRCTICOS
Para la descripcin del mtodo, ver la prctica. Clculos
a)
M = n/v; n=M.V = 0,1 mol/L.0,200L=2.10-2 mol
2.10-2 mol.56g/mol = 1.12 g.
1,12(g. puros). 100(g. comercial) / 96(g. puros) = 1,167
Hay que pesar 1,167 g. de producto comercial y utilizar un matraz de 200 ml.
b)
n = 0,1 mol/L.0,250 L = 2,5.10-2 mol
P(CuSO4) = 160; P (CuSO4.5H2O) = 250
2,5.10-2 mol CuSO4.160(g CuSO4/ mol CuSO4) . 250 g CuSO4.5H2O/160 g CuSO4

6,25 g CuSO4. 5H2O
Hay que pesar 6,25 g de producto comercial y utilizar un matraz de 250 ml.
c)
Para preparar 1 L. de disolucin 0,1 M, necesitamos 0,1 moles. Qu volumen
de disolucin 2M contiene 0,1 moles?: V = n/M = 0,1 mol / (2 moles/l) = 0,05 L =
50 ml.
Hay que medir 50 ml de la disolucin 2M (con una Probeta) y utilizar un matraz

de 1 L.
3. Se indican los clculos. Para lo dems, ver la prctica.
n = 1 mol/L.1L. = 1 mol
1mol.40 g/mol = 40g.
40.100 / 98 = 40.82
Hay que pesar 40,82 g. de producto comercial y utilizar un matraz de 1 litro.
4. Se necesita un mol de soluto.
1 mol.98 (g. soluto/mol).100 g. disolucin /98 g. de soluto = 100 g. de

disolucin
100 g /1,84(g/ml) = 54,35 ml.
Hay que medir 54,35 ml. Del cido concentrado y utilizar un matraz de un litro.
Para el procedimiento, revisa la prctica

Complete el siguiente cuadro:
Soluto Volumen de Cantidad de soluto

Concentracin
(comercial) solucin comercial (gr.) o ml.
NaOH (96%) 0,2M 100 ml.
KOH 250 ml. 3
H2SO4 (98%) 0,4M 6
HCl 0,3M - 150 ml.
PRACTICA N 2

Tema: ESPECTROFOTOMETRA
I. OBJETIVOS
Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de onda de mxima

absorcin) y los niveles de concentracin tambin adecuados para el anlisis
cuantitativo por espectrofotometra.
II. FUNDAMENTO
La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis que se emplean con ms
frecuencia dentro del campo del anlisis de los alimentos: las regiones del
espectro ms usadas en dicho campo son el ultravioleta y el visible, y en algunos
casos el infrarrojo cercano.
La determinacin cuantitativa por espectrofotometra se basa en la ley combinada
de Beer-Lambert.
A = a.b.c
Dnde:
A = Absorbancia, o extincin o densidad ptica.
a = Absortividad
b = Longitud de paso o recorrido de la luz
c = Concentracin
Esta expresin muestra que existe una relacin lineal entre la absorbancia (A) y la
concentracin (c) de una solucin dada, siendo constante la longitud del trayecto
ptico y la longitud de onda.
Esta relacin se cumple y por lo tanto el anlisis espectrofotomtrico cuantitativo

se puede aplicar cuando:
a) Todos los cuantos de energa tienen la misma posibilidad de ser absorbidos por
la sustancia, es decir, la luz empleada debe de ser monocromtica y a la de
mxima absorcin.
b) Todas las molculas de la sustancia deben tener la misma posibilidad de
absorber los cuantos de energa, es decir, la sustancia debe estar lo
suficientemente diluida para que ninguna molcula quede oculta o a la

sombra de otra. Se estima como promedio una concentracin de 1 x 10 -2

mol/L.
De no cumplirse estos requisitos, se estara produciendo desviaciones de la ley
de Beer obtenindose en consecuencia resultados errneos o inexactos en la
determinacin cuantitativa.
III. MATERIALES Y MTODOS.

III.1. Materiales y Equipos.
- Espectrofotmetro UV VIS Marca Tuner
- Celda de Cuarzo
- Fiolas de 250 ml, 100 ml y 25 ml.
- Pipetas volumtricas de 25 ml, 10 ml y 5 ml.
- Embudo de vidrio
- Papel filtro
- Papel Tissue
- Pizeta con agua destilada
- Azul de metileno.
III.2. Mtodos
III.2.1. Manejo del Espectrofotmetro.

Se siguen las instrucciones del manual del equipo
III.2.2. Procedimiento
a) Determinacin de la longitud de onda de mxima absorcin.

- Pesar 0.1 gramos de azul de metileno.
- Colocar a una fiola de 100 ml. Y aforar con Agua destilada.
- Hacer diluciones de 1.0 ppm, 1.5 ppm, 2.0 ppm, 3.0 ppm
- Preparar Blanco
- Leer la absorbancia vs longitud de onda desde 400 700 nm.
- Graficar la absorbancia vs la longitud de onda para cada una de las
concentraciones realizadas.
b) Determinacin del rango de concentracin adecuado.

- Trabajar con max seleccionada.
- Preparar el rango suficiente de concentraciones (hasta donde se
desvi la ley de Beer).
- Leer Absorbancia vs a max.
- Graficar
- Fijar el rango ptimo o adecuado.
c) Determinar el coeficiente de extincin molar ().
= E / cd

Dnde:
= Coeficiente de extincin molar.
c = concentracin molar
d = espesor de la cubeta
E = Densidad ptica de Extincin.
IV. RESULTADOS DE DISCUSIN

Presentar resultados mediante cuadros y grficos y sus respectivos clculos.
V. CUESTIONARIO
a) Qu tipo de soluciones no cumplen la ley de Lambert- Beer.
b) De acuerdo al color de la sustancia analizada, cul sera la longitud de onda ms
apropiada para realizar la lectura espectrofotomtrica?
c) Consulte aplicaciones industriales de espectrofotometra de absorcin.
VI. BIBLIOGRAFA.
- Borsfort R. y Scholz, M. 1964. Spektroskopische Methoden in der organischen.
Chemie. Berlin.
- Snchez. D. 1995. Instrumentacin en Bioqumica. Concejo Nacional de Ciencia
y Tecnologa (CONCYTEC). Lima.
Revert S.A. Espaa.
PRACTICA N 3
Tema: DETERMINACIN DE VITAMINA C POR ESPECTROFOTOMETRA
I. OBJETIVO

Determinar el efecto de la longitud de onda dominante en el anlisis cuantitativo

por espectrofotometra.
II. FUNDAMENTO
Cada determinacin de anlisis cuantitativo por espectrofotometra debe realizarse
en una longitud de onda especfica a fin de que los datos a obtenerse sean precisos
y exactos.
La determinacin del contenido de cido ascrbico en frutas y vegetales puede
realizarse por diversos mtodos. Siendo uno de ellos el espectrofotomtrico
propuesto por el Dpto. de Agricultura de Canad. Se basa en la reduccin del
colorante 2 6 Diclorofenol por efecto de la solucin estndar de colorante; esta
capacidad es determinada espectrofotomtricamente.
El valor del reactivo 2 6 DFIF se ve limitado por la presencia de sustancias
reductoras como sales ferrosas, sulfitos, compuestos sulfihidricos entre otros. Estas
sustancias podrias estar presentes en ciertos productos que hayan sufrido un
prolongado tratamiento trmico o almacenamiento.
III. EQUIPOS
Espectrofotmetro Spectromon 401
IV. MATERIALES Y METODOS

1. Materiales
- Cubetas del Espectrofotmetro
- Filtros del Espectrofotometro 480, 520 y 540 nm.
- Papel Tissue
- Pipetas 1, 2, 3, 4, 5 y 10 ml
- Fiolas de 100 y 1000 ml.
- Tubos de Prueba.
2. Reactivos

a) Preparar una solucin de cido oxlico al 0.4 % pesar 4gr. De este cido y
llevar a volumen de 1000 ml. Con agua destilada.
b) Soluciones estndar (madre) de cido ascrbico: Preparar una solucin de
0.1 % de cido ascrbico en una solucin cida de 0.4 % de cido oxlico.
Pesar 100 mg. de cido ascrbico y llevar a volumen de 100 ml. con una
solucin de cido Oxlico al 0.4 %.
c) Estndares de trabajo (ET): Tomar 1, 2, 3, 4 y 5 ml. de la solucin madre de
cido ascrbico y llevar a volumen de 100 ml. con una solucin de cido
oxlico al 0.4 %. Esta solucin numeradas del 1 al 5 contendrn 1, 2, 3, 4 y 5
mg. de cido ascrbico por 100 ml. respectivamente.
d) Solucin coloreada (Colorantes): pesar 12 mg. de 2 6 DFIF , disolver y
llevar a 1000 ml. de volumen con agua destilada. Utilizar agua destilada
hirviente. Almacenar en botella de color oscura y en refrigeracin.
3. Preparacin de la Curva Estndar.

a) Tomar 4 tubos de prueba y enumerarlas de I al IV y agregar lo siguiente:
I 10 ml. de agua destilada
II 1 ml. de cido oxlico al 0.4%
III 1 ml. de estndar de trabajo (ET) N 1 + 9 ml. de agua
IV 1 ml. del estndar de trabajo (ET) N 1
b) Ajustar a cero la Absorbancia usando I y el filtro seleccionado.
c) Al tubo II aadir 9 ml. del colorante y exactamente despus de 15 segundos,
leer la absorbancia.
d) Ajustar a cero la absorbancia con la solucin del tubo III
e) Al tubo IV aadir 9 ml. del colorante y exactamente despus de 15
segundos, leer la absorbancia (L2).
Repetir el paso 3
a) Para cada estndar de trabajo (ET) y registrar los correspondientes valores
de L1 y L2. Construir la curva estndar con las concentraciones de cido
ascrbico (mg / 100 ml) en la abscisa y la ordenada la absorbancia, (L 1 - L2)
para cada estndar de trabajo.
4. Mtodo: Preparacin de la Muestra.
a) Marcar 50 gr. De muestra fresca con 350 ml. de una solucin de cido
oxlico al 0.4 % en una licuadora por 3 min. y luego filtrar.
b) Determinar L1 como se describi anteriormente (paso 3)
c) En el tubo III colocar 1 ml. de filtrado (muestra) mas 9 ml de agua ajustar al
cero la absorbancia.
d) Luego en el tubo IV colocar 1 ml. de filtrado (muestra) mas 9 ml de
colorante y registrar la absorbancia L2 despus de 15 segundos.

e) Calcular (L1 - L2) y obtener la concentracin de cido ascrbico a partir de la

curva estndar.
V. RESULTADO Y DISCUSIN
a) Presentar curva Estndar.
b) Presentar curva Experimental.
c) Calcular la concentracin de cido ascrbico presente en la muestra a 480,
520 y 540 nm. Discuta de acuerdo a sus datos encontrados cul de las
longitudes de onda es la ms recomendable para el anlisis cuantitativo de
vitamina C.
VI. CUESTIONARIO
VII. BIBLIOGRAFA
- Pearson D. 1976. The Chemical Analysis of Foods. Seventh edition.
Edinburgh London And New York 1976.
- Jacobs M. 1962. The Chemical Analysis of Foods and Food Products Third
Ediition. D. van Nonstrand Company. INC.
PRACTICA N 4
Tema: DETERMINACIN DE AZUCARES REDUCTORES DE UN ALIMENTO POR

ESPECTROFOTOMETRA (MTODO DNS)

I. FUNDAMENTO
La determinacin cuantitativa de los monosacridos se realiza, frecuentemente

basndose en su oxidacin en solucin alcalina mediante Cu 2+, Ag+, o
ferrocianuro, originndose una mezcla de azucares cidos. En otras palabras los
monosacridos pueden reducir a los compuestos mencionados por lo que reciben
el nombre de azucares reductores.
Se basa en que los azucares reductores reaccionan con el 3,5 acido dinitrosalcilico
en solucin alcalina, formando compuestos nitroaminados coloridos. La prueba
positiva de un color rojo marrn. La coloracin se mide con un
espectrofotmetro para mediciones cuantitativas a 540 nm. Esta prueba funciona
para la glucosa y otros azucares reductores, en este caso nos concentramos en la
glucosa.
Esta tcnica tiene la ventaja de ser un mtodo preciso y rpido en comparacin

con los que utilizan derivados fenlicos. Presenta desventajas por la presencia de
polifenoles que ocasiona la reduccin del reactivo.
II. OBJETIVOS
- El alumno utilizara un mtodo espectrofotomtrico para azucares
- Preparar una curva patrn de glucosa con el 3,5-dinitrosalclico (3,5 - DNS)
III. MATERIALES Y MTODOS

Reactivos
A) Reactivo DNS
Tartrato de Sodio y Potasio
Hidrxido de Sodio
Metabisulfito de Sodio
Reactivo DNS
Preparacin del Reactivo DNS:
Se mezcla y disuelve en 250 ml. de agua destilada 8 gr. De NAOH y 15 gr. de

tartrato de Sodio y Potasio.
Posteriormente se agregan 5 gr. de Acido 3,5 dinotrasalicilico bajo

calentamiento. Se aforan a 500 ml con agua destilada y se almacenan a
temperatura ambiente protegindolo de la luz.

B) Utilizar un estndar de 1.0 mg/ml. de glucosa, realizar las diluciones para

obtener concentraciones de 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 y 1.0, Realizar una curva
patrn de glucosa.
C) Anlisis de Muestra
Diluir 1 ml. de cada muestra en 100ml. de agua destilada en una probeta,

luego extraer 1 ml de esta solucin en un tubo de ensayo adicionando un
1ml. de la solucin DNS, agitar y llevar luego a ebullicin por 10 min.
Enfriar rpidamente y agregar 10 ml. (o 5 ml.) de agua destilada con previa
agitacin.
Llevar la muestra al espectrofotmetro a 540 nm y leer su absorbancia. Con

este dato encontrado insertamos en la curva de calibracin previamente
construida y el resultado se lee como gramo de glucosa.
Clculos
1. Graficar los datos de la curva patrn colocando en el eje de las abscisas

la cantidad de azucares reductores en mg./ml. y en las ordenadas la
absorbancia a 540 nm. Calcular la pendiente ajustando la ordenada a
cero.
2. Con el valor de la pendiente calcular la cantidad de azucares reductores
para cada tiempo en la muestras:
Y = mx + bX = (y - b)/m
Azucares reductores mg./ml. = (Abs de la muestra/pendiente) x dil.
Tomar en cuenta la dilucin para cada muestra.
IV. BIBLIOGRAFA
- Borsfort R. y Scholz, M. 1964. Spektroskopische Methoden in der organischen.
Chemie. Berlin.
- Snchez. D. 1995. Instrumentacin en Bioqumica. Concejo Nacional de
Ciencia y Tecnologa (CONCYTEC). Lima.
Revert S.A. Espaa.
- Jacobs M. 1962. The Chemical Analysis of Foods and Food Products Third
Ediition. D. van Nonstrand Company. INC.
V. CUESTIONARIO
1. Cules son los mtodos que determinan cualitativamente los azucares
reductores? Descrbelos.

2. Explique por que la sacarosa y el almidn no son reductores.

3. Qu funcin cumple el blanco en la medicin de absorbancia?
PRACTICA N 5
Tema: ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN ATMICA (ANLISIS DE MUESTRAS

ORGNICAS)

I. OBJETIVO
Conocer el Espectrofotmetro de Absorcin Atmica y su funcionamiento.
II. FUNDAMENTO
La Espectrofotometra de Absorcin Atmica se funda en el principio de Kirchoff de

absorcin por resonancia, segn el cual los tomos absorben radiaciones de la
misma longitud de onda que pueden emitir.
Las propiedades pticas de los tomos libres pueden observarse solamente en el

estado gaseoso, por lo que la preparacin de la muestra, en la mayora de los
casos, requiere de volatilizacin, seguida de la disociacin de la molcula en
tomos.
Los tomos en este estado libre fcilmente absorben la radiacin electromagntica

de una determinada longitud de onda, correspondiendo una mayor excitacin a
niveles ms altos de energa. El grado de absorcin de energa es medido
fotomtricamente y comparado con muestras estndares que contienen
cantidades conocidas del elemento en estudios. El mtodo es simple, sensitivo y
selectivo.
III. EQUIPO
Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK SCIENTIFIC 210 VGP.
IV. MUESTRAS, MATERIALES Y REACTIVOS

IV.1Muestras.
Brocoli
Apio
Algas (mococho)
Suelo
Pescado
125 gr. de carne de cerdo
125 gr. de carne de res
Leche
Esparrago
Camote

IV.2Materiales
04 fiolas de 100 ml.
Micropipeta de 20 100 microlitros.
Pipetas de 2, 5 y 10 ml.
Vasos de Precipitacin de 250 ml.
Pera de succin
Papel filtro (*)
Agua destilada
Embudo de vidrio
Cuchillo de acero inoxidable (*)
4 capsulas de porcelana
Cocina elctrica
Frasco de polietileno de 200 ml. (*)
(*) materiales proporcionado por cada sub grupo.
IV.3Reactivos
cido Ntrico
Solucin Stock de Cobre
cido Clorhdrico
V. MTODOS
V.1 Mtodo de Calcinacin para muestras orgnicas

1. Lavar muestras con agua destilada.
2. Pesar 50 gr. de la muestra.
3. Colocar la muestra en una capsula de porcelana.
4. Llevar al horno o mufla a 650 C por 2 a 3 horas hasta obtener cenizas.
5. Retirar y enfriar a temperatura ambiente.
6. Llevar la ceniza a una fiola de 100 ml.
7. Adicionar 10 ml. De cido Ntrico.
8. Calentar en la cocina elctrica hasta ebullicin, verificar que toda la
muestra se haya disuelto.
9. Enfriar a temperatura ambiente.
10. Aforar con agua destilada.
11. Filtrar.
12. Guardar el filtrado en los frascos de polietileno.
13. Realizar la lectura en el Espectrofotmetro de Absorcin Atmica.
V.2 Mtodo para Anlisis de Suelo.

1.Secar 10 gr. de muestra en la estufa.

2.Pesar 0.5 gr. de suelo seco.
3.Llevar la muestra en una fiola de 100 ml.
4.Agregar 3 ml de cido Ntrico y 9 ml. De cido Clorhdrico.
5.Calentar en la cocina elctrica hasta la ebullicin.
6.Verifica que la muestra este disuelta de lo contrario agregar otra dosis de
cido.
7. Enfriar a temperatura ambiente.
8. Aforar con agua destilada.
9. Filtrar.
10. Guardar el filtrado en los frascos de polietileno.
11. Realizar la lectura en el Espectrofotmetro de Absorcin Atmica.
V.3 Preparacin de Estndares.
1. A partir de la solucin madre de Cobre (1000 ppm).
2. Preparar 0,5; 1; 1,5 ppm.
3. Elaborar la curva de calibracin en el espectrofotmetro.
VI. RESULTADOS Y DISCUSIN

VII. CUESTIONARIO
1. Qu interferencias se presenta en el mtodo de espectrofotometra de
absorcin atmica?
2. Aplicacin del equipo en la determinacin de cobre en los alimentos
analizados?
3. Diagrame el equipo indicando sus partes y que funcin desempea cada uno
de las partes?
VIII. BIBLIOGRAFA
Ewing, E.W. (1978). Mtodos instrumentales de anlisis qumicos. Mc.
Graw Hill. Mexico
Talavera, V. ; Hidalgo, V.; Vilchez, C. (1984) Espectrofotometra de
Absorcin Atmica. Gua de
Practicas. Curso Nutricin de
Minerales UNA La molina.
Perkin Elmer. Nov. (1966) Analitical Methods for Atomic Absortion
Spectrophometry.

PRACTICA N 6
Tema: REFRACTOMETRA
I. INTRODUCCIN
Un refractmetro mide el grado a el cual la luz es desviada (es decir refractada)
cuando se mueve desde el aire en una muestra y utilizada tpicamente para
determinar ndice de refraccin (ndice de refraccin n) de una muestra lquida.El
ndice de refraccin es de gran importancia en la industria ya que puede ser
empleado en parte para la caracterizacin de muestras lquidas. Tambin se utiliza
comnmente para:
- Identificar o a confirmar la identidad de una muestra comparando su ndice de

refraccin a los valores conocidos.
- Determinar la pureza de una muestra comparando su ndice de refraccin al valor

para la sustancia pura.
- Determinar la concentracin de un soluto en una solucin comparando el ndice

de refraccin de la solucin a una curva estndar (sal, azcar, alcohol, etc.).
El ndice de refraccin es influenciada por la temperatura y es proporcional a la

concentracin en porcentaje de slidos disueltos en soluciones acuosas (Brix) lo
que, en el caso de los alimentos lquidos referidos corresponde principalmente al
azcar que ellos contienen.
La refractometra es, as, una tcnica analtica ampliamente utilizada para prueba y
control en laboratorios y industrias que alimentes y de bebidas. Es rpida, rigurosa
y requerir porciones reducidas de la muestra a analizar.
II. OBJETIVOS
Conocer el fundamento del uso del instrumento y la determinacin del ndice
de refraccin.
Determinar el contenido de slidos solubles en los alimentos.
Establecer relaciones tabulares o graficas entre concentracin y grados brix,
slidos solubles, slidos totales.
III. FUNDAMENTO TEORICO
Se denomina refractometra, al mtodo de calcular el ndice de refraccin (una
propiedad fsica fundamental de cualquier sustancia) de una muestra para, por
ejemplo, conocer su composicin o pureza. Los refractmetros son los
instrumentos empleados para determinar este ndice de refraccin. A pesar de que
los refractmetros son ms eficaces para medir lquidos, tambin se emplean para
medir slidos y gases, como vidrios.
El ndice de refraccin es un nmero, entre 1,3000 y 1,7000 para la mayora de los

compuestos, y se determina normalmente a la precisin de cinco dgitos. Puesto
que ndice de refraccin depende de la temperatura de la muestra y de la longitud
de onda de la luz utilizada, ambos se indican despus del smbolo "n" de ndice de
refraccin:
La n puesta en letra itlica denota el ndice de refraccin, el exponente indica la

temperatura, y el subndice denota la longitud de onda de la luz (en este caso la D
indica la lnea del D del sodio a 589 nm). 20
nNa n D20
Refraccin de la luz: consiste en el cambio de direccin experimentado por el rayo
de luz al pasar de un medio a otro.
N Dnde:
A
i AB: rayo incidente
air
e BC: rayo refractado
B agua
i: ngulo de incidencia, formado entre el rayo

r C
incidente y la normal al diptrico.
N
Figura 13 : cambio de direccin r: ngulo de refraccin: formado entre el rayo

del rayo de luz al pasar de un
medio a otro refractado y la normal.

4.1 MATERIALES:
Refractmetro ABBE de mesa y manual.

Pipetas
Vasos precipitados
Mortero
3 sobrecitos de Gasa
Embudo

Azcar blanca
Termmetro
Cocina.
Muestras: diferentes frutas.
3.2. MTODOS:
1. Uso del instrumento
Chequear el instrumento con agua destilada y el ndice de refraccin debe ser

1.3330 a 20 C y 1.33 a 28 C.
Despus de limpiar cuidadosamente el prisma, colocar una gota de la sustancia
del problema. Debe ser lo suficiente transparente para que se deje pasar la luz.
2. Determinacin del ndice de refraccin de alimentos:
a) Colocar el refractmetro en un lugar iluminado con luz difusa o frente a una

fuente de luz artificial.
b) Ajustar el instrumento colocando unas gotas de agua destilada entre los
prismas. El ndice de refraccin deber ser 1,3330; si no es as corregir
adecuadamente la lectura.
c) Corte la fruta en gajos (en caso de ser slida) e introducirlo en un mortero
para obtener el zumo de la fruta. Si fuera necesario use gasa para filtrar. En
caso de usar ctricos como la naranja, se pueden exprimir por completo.
d) Con auxilio de una pipeta, cucharita o gotero colocar la muestra sobre el
prisma del refractmetro.
e) Medir y registrar la concentracin de azcar de la muestra (Brix) y el ndice
de refraccin, siguiendo las instrucciones de funcionamiento del
refractmetro utilizado (cada marca y modelo tienen instrucciones
especficas).
f) Si se emplea otra temperatura para medir el ndice de refraccin, utilizar la
tabla de correccin para la correccin de temperatura a 20C.
g) Lavar bien el prisma para hacer las dems lecturas.
h) Repetir los pasos c, d, e, f e g para otras muestras.
3. Efecto de la concentracin en el ndice de refraccin:
a) Preparar soluciones de sacarosa de 5, 10, 20, 30, 40%

b) Realizar lectura de ndice de refraccin segn lo descrito en la parte 1.
c) Hacer el grfico n vs C por el mtodo de los mnimos cuadrado y dar
conclusiones acerca de la dependencia de n al variar la concentracin C.
d) Obtenga por interpolacin la concentracin desconocida de una
disolucin de azcar ( Cx ) conociendo su ndice de refraccin nx ( esto es
por mtodo grfico ) y adems obtenga Cx analticamente de la siguiente

forma:
n mC X b
4. Efecto de Temperatura en el ndice de Refraccin.

a) Preparar una solucin de sacarosa al 20% o tomar zumo de algn ctrico y
someter a temperatura de 30, 40, 50, 60, 70 C.
b) Realizar las lecturas del ndice de refraccin y Brix segn lo descrito en la
parte 1 y 2.
Presentar sus resultados mediantes figuras, grficos, cuadros, tablas etc., y
realizar sus discusiones utilizando el fundamento terico o revisin de
literatura.
VI. CONCLUSIONES
VII. BIBLIOGRAFA
Hamilton-Simpson-Ellis. Refractometra y polarimetra 1995. Mc Graw
Hill. 1980. Mxico.
HART. L Y FISHER H. 1991 Anlisis moderno de los alimentos 2da.
Reimpresin Editorial Arlington Zaragoza (Espaa).
AOAC. 1995. Oficial Methods of Anlisis 16 edition. Asociation of Oficial
analytical Chemists Arlington, Va. USA

TABLA DE CORRECCIN
GRADO BRIX
Temp.
0 5 10 15 20 25 30 40 50 60 70
C
10 0,50 0,54 0,58 0,61 0,64 0,66 0,68 0,72 0,74 0,76 0,79
11 0,46 0,49 0,50 0,55 0,58 0,60 0,62 0,65 0,67 0,69 0,17
12 0,42 0,45 0,48 0,50 0,52 0,54 0,56 0,58 0,60 0,61 63,00
13 0,37 0,40 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,55
14 0,33 0,35 0,37 0,39 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,46 0,48
Restar
15 0,27 0,29 0,31 0,33 0,34 0,34 0,35 0,37 0,38 0,39 0,40
16 0,22 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,28 0,30 0,30 0,31 0,32
17 0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,21 0,21 0,23 0,23 0,23 0,24
18 0,12 0,13 0,13 0,14 0,14 0,14 0,14 0,15 0,15 0,16 0,16
19 0,06 0,06 0,06 0,07 0,07 0,07 0,07 0,08 0,08 0,08 0,08
21 0,06 0,07 0,07 0,07 0,07 0,08 0,08 0,08 0,08 0,08 0,08
22 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,15 0,15 0,15 0,16 0,16 0,16
23 0,19 0,20 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24
24 0,26 0,27 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,31 0,31 0,32 0,32
25 0,33 0,35 0,36 0,37 0,37 0,38 0,39 0,40 0,40 0,40 0,40
Sumar
26 0,40 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47 0,48 0,48 0,48 0,48
27 23 0,48 0,50Domnguez
Ing. Jorge 0,52 0,53
C. 0,54 0,55 0,55 0,56 Ing.
0,56 0,56
Daniel 0,56
Sanchez
28 0,56 0,57 0,60
Ing. Roger Romero U. 0,61 0,62 0,63 0,63 0,64 Ing.
0,64 0,64 0,64
John Gonzales C.
29 0,64 0,66 0,68 0,69 0,71 0,72 0,72 0,73 0,73 0,73 0,73
PRACTICA N 7
Tema: POTENCIOMETRA
I. INTRODUCCIN
Los anlisis ponteciomtricas continan teniendo una gran importancia en el
trabajo de los laboratorios de diversa ndole, sirven para conocer propiedades y
comportamientos que sufre la materia frente a la variacin de las condiciones de
acido base en las que se vana a titular. Para ellos es necesario que el alumno se
familiarice con el buen manejo instrumental y con el anlisis e interpretacin de sus
lecturas o resultados. De esta manera estaremos contribuyendo con las
posibilidades de realizar investigaciones y mejorar los procesos de diferentes lneas.
II. OBJETIVOS
Aplicar la tcnica de potenciometra a la medida de pH de disoluciones.

Observar el comportamiento de varias soluciones amortiguadoras ante la
adicin de cidos o bases (electrlitos).
III. FUNDAMENTO TERICO
La potenciometra es una tcnica electroanaltica con la que se puede determinar la

concentracin de una especie electroactiva en una disolucin empleada un
electrodo de referencia (un electrodo con un potencial constante con el tiempo y
conocido)
Y un electrodo de trabajo o indicador (un electrodo conocido a la especie

electroactiva)
Existen varias posibilidades para llevar acabo medidas de pH. Una de ellas es el uso
de indicadores acido base, constituidos por molculas cromforas en disolucin
cuyo color varia en funcin del pH. De la disolucin. Otra posibilidad es emplear
tiras de papel indicador de pH, que adquieren un color cuando se sumerge en la
disolucin de prueba y tras comparar ese color con una escala, proporcionan una
idea aproximada del pH de la disolucin.
Cuando sea preciso llevar acabo medida de pH con mayor precisin y exactitud, se
realiza mediante potenciometra con un electrodo de membrana de vidrio.
Algunos vidrios cuya superficie se encuentra hidratada son capaces de intercambiar

iones Na+ de la estructura del solicato por iones H + de la disolucin en la que estn
en contacto. Si un vidrio de estas caractersticas separa dos disoluciones, una con
una actividad constante de in H+ y otra en la que se quiere medir la actividad de
dicho in, cuando se alcanza el equilibrio se genera a travs de la membrana de
vidrio una diferencia de potencial elctrico entre las dos caras de la membrana de
vidrio una diferencia de potencial elctrico entre las dos caras de la membrana que
puede ser medida frente a una semicelda de referencia y relacionada con la
actividad de H+ en la disolucin muestra.
El potencial de un electrodo no es un valor absoluto sino relativo, esto es, debe

compararse siempre con el valor de un electrodo de referencia. El electrodo de
vidrio suele llevar incorporado un electrodo de referencia de Ag/AgCl.
Los potencimetros que permiten llevar a cabo una calibracin en unidades de pH

se denomina pH-metros.

A. Materiales y Reactivos
8 vasos de precipitado de 250 mL.
4 pipetas
1 potencimetro
Solucin 0.1 M de acido clorhdrico
Solucin 0.1 M de hidrxido de sodio
Solucin 0.1 M de acido actico
Solucin 0.1 M de acetato de sodio.
B. Procedimientos
1. Se numera 3 vasos de precipitados de 250 mL.
2. Se hacen las siguientes mezclas en los vasos.
a) En el vaso marcado 1: 95 mL de Acido Actico de 0.1 M + 5 mL. de
Acetato de Sodio 0.1 M
b) En el vaso marcado 2: 50 mL de Acido Actico 0.1 M + 50 mL. de
Acetato de Sodio 0.1 M
c) En el vaso marcado 3: 5 mL de Acido Actico 0.1 M + 95 mL. de Acetato
de Sodio 0.1 M
3. El liquido de cada vaso se divide en dos porciones de 50 mL cada uno de
manera que queden vasos 1 y 1, 2 y 2 y 3 y 3
4. Calibre el potencimetro siguiendo las instrucciones del manual de
operacin y mida la temperatura de las soluciones que se prepar.
5. Se mide el pH de 50 mL de agua destilada y se repite la medicin despus
de haber agregado 1, 2 y 3 gotas de solucin de HCl 0.1 M.
6. Se aade una cantidad suficiente de solucin de HCl 0.1 M para modificar
el pH en una unidad. Anote el volumen de HCl gastado.
7. Se mide el pH del vaso marcado con 1 y se le agregan 1, 2 y 3 gotas de
solucin de HCl 0.1 M, midiendo el pH despus de cada adicin.
8. Se aade una cantidad suficiente de solucin de HCl 0.1 M para modificar
el pH en una unidad. Anote el volumen de HCl gastado.
9. Se repite la operacin con los vasos marcados 2 y 3.
10. Se vuelve a medir el pH de 50 mL de agua destilada y se repite la medicin
despus de haber agregado 1, 2 y 3 gotas de solucin de NaOH 0.1 M
11. Se aade una cantidad suficiente de solucin de NaOH 0.1 M para
modificar el pH en una unidad. Anote el volumen de NaOH gastado.
12. Se mide el pH del vaso marcado con 1' y se le agregan 1, 2 y 3 gotas de
solucin de NaOH 0.1 M, midiendo el pH despus de cada adicin.
13. Se aade una cantidad suficiente de solucin de NaOH 0.1 M para
modificar el pH en una unidad. Anote el volumen de NaOH gastado.
14. Se repite la operacin con los vasos marcados 2' y 3'.
15. Escriba sus observaciones sobre el comportamiento del agua destilada y
las soluciones amortiguadoras al aadirles soluciones de cido o base.
Efecto del pH con la temperatura.
1. Tomar 200 mL. de un alimento lquido (jugos, nctar, gaseosa), hacer la

lectura de pH con el pHmetro y tambin su temperatura.

2. Someter a calentamiento y hacer la medida de pH a intervalos de 10C,

hasta alcanzar la temperatura de 60C.
3. Graficar Temperatura Vs. pH.
V. RESULTADOS Y DISCUSIN
Presentar resultados segn cuadro N 1 Adjuntado.
CUADRO N 1: MEDICIONES POTENCIOMETRICAS
Mediciones de pH aadiendo HCl Mediciones de pH aadiendo NaOH
pH del agua destilada __________ pH del agua destilada______________
pH agua + 1 gota de HCl 0.1 M _________ pH agua + 1 gota NaOH 0.1 M_______
pH agua + 2 gotas de HCl 0.1 M__________ pH agua + 2 gotas NaOH 0.1 M_______
pH agua + 3 gotas de HCl 0.1 M __________ pH agua + 3 gotas NaOH 0.1 M_______
mL necesarios de HCl 0.1 M Para cambiar mL de NaOH necesarios para Cambiar 1

1 unidad de pH______________ unidad de pH_______
Soluciones Amortiguadoras Soluciones Amortiguadoras
pH del vaso 1 (Amortiguadora) _______________ pH del vaso 1' (Amortiguadora) ______
pH de Vaso 1 + 1 gota HCl _______________ pH de Vaso 1' + 1 gota NaOH_______

pH de Vaso 1 + 2 gotas HCl________________ pH de Vaso 1 + 2 gotas NaOH_______
pH de Vaso 1 + 3 gotas HCl___________________ pH de Vaso 1' + 3 gotas NaOH_______
mL necesarios de HCl 0.1 M Para cambiar mL necesarios de NaOH 0.1 M Para cambiar 1
1 unidad de pH___________________ unidad de pH_______
pH del vaso 2 (Amortiguadora)______________ pH del vaso 2' (Amortiguadora) _______
pH de Vaso 2 + 1 gota HC l_____________ pH de Vaso 2' + 1 gota NaOH _______

pH de Vaso 2 + 2 gotas HC l________________ pH de Vaso 2' + 2 gotas NaOH_______

pH de Vaso 2 + 3 gotas HCl________________ pH de Vaso 2' + 3 gotas NaOH _______
mL necesarios de HCI 0.1 M Para cambiar mL necesarios de NaOH 0.1 M Para cambiar
1 unidad de pH__________________ 1 unidad de pH_______
pH del vaso 3 (Amortiguadora)________________ pH del vaso 3' (Amortiguadora) _______
pH de Vaso 3 + 1 gota HCl _________________ pH de Vaso 3' + 1 gota NaOH_______
pH de Vaso 3 + 2 gotas HCl__________________ pH de Vaso 3' + 2 gotas NaOH_______
pH de Vaso 3 + 3 gotas HCl___________________ pH de Vaso 3' + 3 gotas NaOH _______
mL necesarios de HCl 0.1 M Para cambiar mL necesarios de NaOH 0.1 M Para cambiar
1 unidad de pH______________________ 1 unidad de pH_______
VI. BIBLIOGRAFA
- Introduccin al anlisis instrumental, Lucas Hernndez Hernndez y Claudio
Gonzlez Prez. Ariel Ciencia S.A, Barcelona 2002.
VII. CUESTIONARIO
1. Explique qu es un electrodo indicador y uno de referencia.
2. Explique en forma detallada el funcionamiento del electrodo de vidrio selectivo a
H+.
3. Qu tipos de errores afectan las medidas de pH con un electrodo de vidrio?
4. Cite cinco ejemplos donde a nivel industrial sea necesario controlar el pH, ya sea
en un proceso o en la calidad de algn producto.

PRACTICA N 8
Tema: CROMATOGRAFA DE GASES CIDOS GRASOS
I. INTRODUCCIN
La cromatografa de gases es una tcnica cromatografa en la que la muestra se
volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna cromatografca. La elusin se
produce por el flujo de una fase mvil de gas inerte. A diferencia de los otros tipos
de cromatografa, la fase mvil no interacta con las molculas del analito; su nica
funcin es la de transportar el analito a travs de la columna.
Antes de analizar los componentes de los cidos Grasos de los lpidos en el

cromatgrafo de gases, es necesario convertirlos a bajo peso molecular derivados
no polares, como esteres de metilo.

Los cidos grasos se encuentran en cantidades escasas en forma libre pero en

general se combinan en molculas ms complejas a travs de enlaces amida o
ster.
El aislamiento de los cidos grasos libres a partir de materiales biolgicos es una

tarea compleja y se deben de tomar precauciones en todo momento para evitar o
minimizar los efectos de la hidrlisis de las enzimas.
cidos Grasos:
Un cido graso es una biomolcula orgnica de naturaleza lipdica formada por una
larga cadena hidrocarbonada lineal, de nmero par de tomos de carbono, en cuyo
extremo hay un grupo carboxilo. Cada tomo de carbono se une al siguiente y al
precedente por medio de un enlace covalente sencillo o doble. Al tomo de su
extremo le quedan libres tres enlaces que son ocupados por tomos de hidrgeno
(H3C-). Los dems tomos tienen libres dos enlaces, que son ocupados igualmente
por tomos de hidrgeno (... -CH2-CH2-CH2- ...).
Los cidos grasos forman parte de los fosfolpidos y glucolpidos, molculas que
constituyen la bicapa lipdica de todas las membranas celulares. En los mamferos,
incluido el ser humano, la mayora de los cidos grasos se encuentran en forma de
triglicridos, molculas donde los extremos carboxlico (-COOH) de tres cidos
grasos se esterifican con cada uno de los grupos hidroxilos (-OH) del glicerol
(glicerina, propanotriol); los triglicridos se almacenan en el tejido adiposo (grasa).
Las propiedades qumicas, Los cidos grasos son molculas anfipticas, es decir,
tienen una regin apolar hidrfoba (la cadena hidrocarbonada) que repele el agua y
una regin polar hidrfila (el extremo carboxlico) que interacta con el agua. Los
cidos grasos de cadena corta son ms solubles que los cidos grasos de cadena
larga porque la regin hidrfoba es ms corta.
Si se colocan cidos grasos en agua o en otro disolvente polar forman una capa
superficial debido a su baja densidad; formarn una pelcula con sus colas (la parte
no polar) orientadas hacia arriba, fuera del agua, de manera que no quedan en
contacto con la misma y la cabeza polar dentro del agua. Si se agita, las colas
tienden a relacionarse entre s mediante interacciones hidrofbas creando
ambientes donde no hay agua, como es el caso de una micela ya sea monocapa o
bicapa.
El grupo carboxilo de la molcula convierte el acido graso en un cido dbil con un

pKe en torno a 4,8. Tambin presenta las reacciones qumicas propias del grupo
COOH, Esterificacin con grupos OH alcohlicos, formacin de enlaces amida con
grupos NH2.

Mtodo de Evaluacin
Para anlisis de cidos grasos el mtodo de evaluacin que se utiliza es el de

Normalizacin de reas.
Normalizacin de reas:
Cuando se sabe que el cromatgrafo representa la muestra completa, que todos los
componentes se han separado y que cada pico se ha resuelto completamente; se
puede utilizar la normalizacin de las reas para la evaluacin.
Para utilizar este mtodo se mide el rea bajo cada pico individual. Sumando todas
estas reas de los picos se obtienen el rea total calculada. El porcentaje en el
volumen de los componentes individuales se obtienen multiplicando el rea
calculada individual por 100 y luego dividindola entre el rea total calculada. El
mtodo solo es valido si el factor de respuesta de todos los componentes es el
mismo, es decir iguales cantidades de distintos componentes dan la misma rea. En
otro caso las reas deberan ser corregidas por un factor de respuesta de cada
componente.
II. MATERIALES Y MTODOS
Materiales:
Bao Maria de temperatura constante.
Balanza Analtica.
Fuente de Nitrgeno seco.
Fiola de 100 ml.
Pipetas graduadas de 1,5 y 5 ml.
Pipeta Pasteur
Viales con tapas 2 ml.
Vasos precipitados
BF3 (Solucin al 12% disuelta en metanol)
NaOH (libre de humedad) 0.5 N preparado en metanol (grado
cromatografico)
Isooctano.
NaCL (libre de humedad) solucin saturada 36 gr. en 100ml.
Cromatografo de Gases GC 2010-12-13 Columna capilar RtTM 2560
(Biscyanopropyl polysiloxane) 100 metros, 025 mm ID, 0.2 um df max de
temperatura de 250 C minina temperatura 220 C.
Gas Carrier Helio, Hidrogeno y Aire.
Gas Carrier en la preparacin de nuestras Nitrgeno.

El estndar utilizado: NLEA FAME MIX 30 mg/ml in Methylene Chloride;

HORNO COLUMNA CAPILAR
Temperatura inicial 100 C Columna Restec 07354
Tiempo a Temp. Inicial 4 min. Fase Estacionaria RtTM 2560
Temperatura Final 240 C Dimetro interno 0.25 mmID
Tiempo de Temp. Final 10 min. Dimetro de fase 0.8 m df
estacionaria
Duracin del 63 min. Longitud 100 mts
Cromatograma
Velocidad de 3 C/ Presion de Helio 261.5 Kpa
Calentamiento min
Detector Inyector
Temperatura 200 C Temperatura
Presin del Hidrogeno 40 Split ratio
Presin de Aire 400 Kpa Vol. De inyeccin 1.2 l
lote A054068 contiene 28 cidos grasos.
Mtodo.
De acuerdo a la validacin del mtodo se ha establecido las siguientes
condiciones de trabajo.

DETERMINACIN DE CIDOS GRASOS EN ACEITE COMESTIBLE POR CROMATOGRAFA

DE GASES.
Pesar aproximadamente 0.025 gr. ( 0.0001gr.)de muestra en un vial

Aadir 1.5 ml. de solucin de NaOH 0.5 N cubrir con una capa de N 2 y calentar
5 minutos a 80 90 C, enfriar.
Aadir 2ml. de solucin de BF3, cubrir con una capa de N2 mezclar y calentar
por 30 minutos a 100 C.
Enfriar la mezcla a 30 40 C, luego aadir 1 ml. de isooctano, cubrir con una
capa de N2 y agitar por 30 segundos mientras este caliente.
Inmediatamente aadir 5 ml. de solucin NaCL cubrir con una capa de N 2 y
agitar vigorosamente, enfriar a temperatura ambiente.
Cuando hay separacin de fases (fase acuosa esta abajo), transferir la fase
orgnica (isooctano), a otro vial y cubrir con una capa de N 2
Repetir la extraccin por segunda vez, adicionando un 1 ml. de isooctano,
combinar los extremos y concentrar a 1 ml. aprox. (en vapor o N 2 seco).
Inyectar 1 2 L en el Cromatografo de Gases.
III. RESULTADOS
- Presentar Cromatograma.
- Tiempo de Retencin
- Evaluar la eficiencia de la Cromatografa.
IV. DISCUSIN
V. CONCLUSIN
VI. BIBLIOGRAFA
- HART. L Y FISHER H. 1991 Anlisis moderno de los alimentos 2da. Reimpresin

Editorial Arlington Zaragoza (Espaa).
- AOAC. 1995. Oficial Methods of Anlisis 16 edition. Asociation of Oficial
analytical Chemists Arlington, Va. USA

PRACTICA N 9
Tema: COLORIMETRA
I. INTRODUCCIN
En nuestra vida diaria, estamos rodeados por un nmero infinito de colores. No

damos importancia al color pero ste juega un amplio abanico de papeles en
nuestras vidas: no slo influye en nuestros gustos en alimentos y otros tipos de
compras; el color de la cara de una persona tambin puede indicarnos el estado de
salud de esa persona. Aunque los colores nos afectan mucho y su importancia es
creciente, nuestro conocimiento del color y de su control es a menudo escaso, lo
que conduce a una gran cantidad de problemas a la hora de decidir el color de un
producto o en las transacciones comerciales que incluyen color. Como el juicio se
hace frecuentemente de acuerdo con la impresin o la experiencia personal, es
imposible controlar el color de forma precisa utilizando estndares comunes y
uniformes. Existe un modo en el que podamos expresar un color dado de una
forma precisa, describir dicho color a otra persona y hacer que esa persona
reproduzca correctamente el color que percibimos? Cmo puede llevarse a cabo
una comunicacin fluida del color entre todos los campos de la industria y de la
investigacin? Claramente, necesitamos ms informacin y conocimientos sobre el
color Incluso cuando tan slo miramos a nuestro alrededor, una gran variedad de
colores entra en nuestros ojos. En nuestras vidas diarias, estamos rodeados por
una variedad infinita de colores. Sin embargo, al contrario de lo que ocurre con la
longitud o el peso, no existe una escala fsica para medir el color, lo que hace
improbable que todo el mundo conteste del mismo modo cuando se le pregunta
qu es un color determinado. Por ejemplo, si decimos "azul marino" o "azul cielo",
cada persona imaginar diferentes colores azules porque su sensibilidad al color y
sus experiencias pasadas sern diferentes. ste es el problema con el color. Por
tanto, estudiemos un poco y determinemos qu tipo de informacin del color sera
til.
II. OBJETIVOS
Determinar cuantitativamente el color de diferentes productos
agroindustriales usando un colormetro.
Determinar las diferencias de color, usando un patrn de color, en distintos
productos agroindustriales.
3.1. COLOR
El color es una cuestin de percepcin y de interpretacin subjetiva. Incluso si

varias personas observan un mismo objeto (en este caso, una manzana),
obtendrn referencias y experiencias distintas y expresarn absolutamente el
mismo color con palabras completamente diferentes. La gran variedad de formas

para expresar un color hace que la descripcin de un color concreto a alguien

resulte extraordinariamente difcil y vaga. Si describimos el color de una manzana a
alguien como "rojo fuego", podemos esperar que la persona en cuestin sea
capaz de reproducir ese color de una forma exacta? La expresin verbal del color
es muy complicada y difcil. Sin embargo, si hubiera un mtodo estndar mediante
el cual todos pudiramos expresar y comprender los colores de un modo preciso,
la comunicacin de los colores sera mucho ms sencilla, fcil y exacta. Dicha
comunicacin precisa de los colores eliminara los problemas relacionados con el
color.
Las palabras para expresar los colores han ido cambiando con los tiempos. Si
consideramos el rojo, por ejemplo, estaramos hablando de "bermelln",
"cinabrio", "carmes" "rosa", "fresa" o "escarlata", por mencionar tan slo algunos
trminos. stos se llaman nombres de colores "comunes". El anlisis de la
condicin del color y la adicin de adjetivos, como pueden ser "claro", "apagado" y
"profundo", nos permiten describir el color de una forma un poco ms precisa. Los
trminos como, por ejemplo, "rojo claro" utilizados por el hombre de la portada se
denominan nombres de colores sistemticos. Aunque existe una gran variedad de
modos para describir el color, las diferentes personas que oigan "carmes" o "rojo
claro" seguirn interpretando dichas expresiones de formas diferentes. Por
consiguiente, la expresin verbal de los colores sigue sin ser lo bastante precisa.
Entonces, cmo se deberan expresar los colores para evitar la posibilidad de
malentendidos?
3.2. HISTORIA DE LA EXPRESIN DE COLORES NUMRICAMENTE.
Distintas personas en el pasado han creado mtodos, a menudo utilizando

complejas frmulas, para cuantificar el color y expresarlo numricamente con el
objetivo de que todos pudiramos comunicar los colores de un modo ms sencillo
y preciso. Dichos mtodos intentan proporcionar una forma de expresar los
colores numricamente, de forma muy similar a la que expresamos la longitud o el
peso. Por ejemplo, en 1905 el artista estadounidense A. H. Munsell cre un
mtodo para expresar los colores que empleaba un gran nmero de fichas de
colores de papel clasificadas de acuerdo con su tono (Tono de Munsell),
luminosidad (Valor de Munsell) y saturacin (Croma de Munsell) para la
comparacin visual con un espcimen de color. Posteriormente, tras un gran
nmero de experimentos adicionales, el sistema fue actualizado para crear el
Sistema de reanotacin de Munsell, que es el sistema Munsell que se emplea
actualmente. En este sistema, cualquier color dado se expresa como una

combinacin de letras y nmeros (H V/C) en trminos de su tono (H), valor (V) y

croma (C) segn lo evaluado visualmente mediante los Diagramas de colores de
Munsell. Una organizacin internacional preocupada por la luz y el color, la
Commission Internationale de l'Eclairage (Comisin Internacional de la Iluminacin
- CIE) desarroll otros sistemas para expresar el color numricamente. Los dos
sistemas ms conocidos son el sistema Yxy, creado en 1931 basndose en los
valores triestmulos XYZ definidos por la CIE y el sistema L*a*b*, creado en 1976
para proporcionar diferencias de color ms uniformes en relacin con las
diferencias visuales. Espacios de color como stos se utilizan ahora en todo el
mundo para la comunicacin de los colores.
Espacio de color: mtodo para expresar el color de un objeto o de una fuente de
luz empleando algn tipo de anotacin, como pueden ser nmeros.
3.3. ESPACIO DE COLOR L*a*b.
El espacio de color L*a*b* (tambin llamado CIELAB) es actualmente uno de los

espacios ms populares para medir el color de los objetos y se utiliza ampliamente
en casi todos los campos. Es uno de los espacios de color uniformes definidos por
la CIE en 1976 para reducir uno de los principales problemas del espacio Yxy
original: que iguales distancias en el diagrama de cromaticidad x, y no se
correspondan con iguales diferencias de color percibidas. En este espacio, L * indica
luminosidad y a* y b* son las coordenadas de cromaticidad. En la Figura 5 se
muestra el diagrama de cromaticidad de a *, b*. En este diagrama, a* y b* indican
direcciones de colores: +a* es la direccin del rojo, -a * es la direccin del verde, +b *
es la direccin del amarillo y -b * es la direccin del azul. El centro es acromtico; a
medida que los valores de a* y b* aumentan y el punto se separa del centro, la
saturacin del color se incrementa. La Figura 6 es una representacin del slido de
colores para el espacio L*a*b*; la Figura 5 es una vista de este slido de colores
cortado horizontalmente en un valor constante de L*.
Figura 5: Diagrama de cromaticidad de a*, b*

Figura 6: representacin del slido de colores para el espacio L*a*b*
Para ver qu color representan estos valores, representemos grficamente en primer

lugar los valores de a* y b* (a*=+47,63, b*=+14,12) en el diagrama de a*, b* de la Figura
6 para obtener el punto (A), que muestra la cromaticidad de la manzana. Ahora, si
cortamos el slido de colores de la Figura 6 verticalmente a travs del punto (A) y el
centro, obtenemos una vista de la cromaticidad frente a la luminosidad, parte de la
cual se muestra en la Figura 7
Figura 7: vista de la cromaticidad frente a la luminosidad
3.4. ESPACIO DE COLOR LC*h*.

El espacio de color L*C*h utiliza el mismo diagrama que el espacio de color L *a*b*,
pero utiliza coordenadas cilndricas en lugar de coordenadas rectangulares. En este
espacio de color, L* indica la luminosidad y es lo mismo que la L * del espacio de
color L*a*b*, C* es la croma y h es el ngulo del tono. El valor de la croma C * es 0 en
el centro y aumenta de acuerdo con la distancia respecto al centro. El ngulo del
tono h se define como comenzando en el eje +a* y se expresa en grados: 0 sera
+a* (rojo), 90 sera +b* (amarillo), 180 sera -a* (verde) y 270 sera -b* (azul). Si
medimos la manzana utilizando el espacio de color L *C*h, obtendremos los
resultados que se presentan a continuacin. Si representamos grficamente estos
valores en la Figura 8, obtendremos el punto (A).
Figura 8: Diagrama de Cromacidad L*C*h
Croma:
C* a* b*
2 2
ngulo del tono:
b*
1
h tan
a*
3.5. ESPACIO DE COLOR HUNTER LAB.

El espacio de color de Hunter Lab fue desarrollado por R.S. Hunter y es un espacio
de color ms uniforme visualmente que el espacio de color Yxy de CIE 1931.
Similar al espacio de color CIE L *a*b*, sigue en uso en varios campos, incluyendo la
industria de las pinturas de los EE.UU.
3.6. ESPACIO DE COLOR XYZ.
Los valores triestmulos XYZ y el espacio de color Yxy asociado conforman la base
de los presentes espacios de color de la CIE. El concepto de los valores triestmulos
XYZ se basa en la teora de los tres componentes de la visin en color, que
establece que el ojo posee receptores para tres colores primarios (rojo, verde y
azul) y que todos los dems colores se ven como mezclas de estos tres colores
primarios. Los valores triestmulos XYZ se calculan utilizando estas funciones de
coincidencia de color del Observador estndar.
Si medimos la manzana utilizando el espacio de color Yxy, obtenemos los valores
x=0,4832 e y=0,3045 como coordenadas de cromaticidad, que corresponden al
punto (A) en el diagrama de la Figura 9; el valor de Y de 13,37 indica que la
manzana tiene una reflectancia del 13,37%.
Figura 9: Diagrama de Cromacidad XYZ
Aunque el ojo humano no puede cuantificar los colores de modo preciso, con un
colormetro esto es sencillo. Como hemos visto previamente, al contrario que las
expresiones subjetivas normalmente utilizadas por la gente para describir los
colores verbalmente, los colormetros expresan los colores numricamente de
acuerdo con estndares internacionales. La expresin de los colores de este modo
permite a todo el mundo comprender de qu color se trata. Adicionalmente, la
percepcin de una persona de un color sencillo puede cambiar dependiendo del

fondo o de la fuente de luz que ilumina a ese color. Los colormetros tienen
sensibilidades que se corresponden con las del ojo humano pero, como siempre
realizan mediciones utilizando la misma fuente de luz y el mismo mtodo de
iluminacin, las condiciones de medicin son siempre las mismas,
independientemente de si es de da o de noche o de si la medicin se realiza en
interiores o en exteriores. Esto facilita la obtencin de unas mediciones precisas.
Utilizando los espacios de color descritos previamente, confirme los valores
numricos para su objeto de medicin.
3.7. DIFERENCIA DE COLOR.
Los matices diminutos de color constituyen el mayor quebradero de cabeza en

cualquier lugar donde se utilice el color. Pero, con un colormetro, incluso esas
diminutas diferencias de color pueden expresarse numricamente y comprenderse
fcilmente. Utilicemos los espacios de color L *a*b* y L*C*h para ver la diferencia de
color entre dos manzanas. Empleando el color de la manzana (L*=43,31,
a*=+47,63, b*=+14,12) como estndar, si medimos la diferencia del color de la
manzana (L*=47,34, a*=+44,58, b*=+15,16) respecto al color de la manzana ,
obtendremos los resultados mostrados en las pantallas y que se presentan a
continuacin. La diferencia tambin se muestra en el grfico de la Figura 10. El
diagrama de la Figura 10 debera facilitar la comprensin del espacio de color
L*a*b*.
Figura 10: Diferencia de Color en el espacio de color L*a*b*.
En el espacio de color L*a*b*, la diferencia de color puede expresarse como un

valor numrico sencillo, E*ab, que indica el tamao de la diferencia de color pero
no en qu sentido son diferentes los colores. E *ab se define mediante la siguiente
ecuacin:


E*abL* a* b*
2 2 22
Si introducimos los valores L*=+4,03, a*=-3,05 y b*=+1,04 de la pantalla

1
anterior en esta ecuacin, obtenemos E*ab=5,16, que es el valor mostrado en la

esquina superior izquierda de la pantalla . Si medimos la diferencia de color
entre las dos manzanas utilizando el espacio de color L *C*h, obtenemos los
resultados mostrados en la pantalla anterior. El valor de L* es el mismo que el
valor medido en el espacio de color L*a*b*. C*=-2,59, indica que el color de la
manzana es menos saturado. La diferencia entre las dos manzanas, H * (definida
por la ecuacin

H* E*ab L* C*
de la manzana
2 2 22
1
), es +1,92, lo que, si observamos la Figura 13, significa que el color
est ms prximo al eje +b* y, por tanto, es ms amarillo.
Aunque las palabras no son tan exactas como los nmeros, podemos usar palabras
para describir diferencias de color. En la Figura 11 se muestran algunos de los
trminos utilizados para describir diferencias en luminosidad y croma; los trminos
mostrados en esta figura indican la direccin de la diferencia de color pero, a
menos que se emplee un modificador adicional (ligeramente, muy, etc.), no
indican el grado de diferencia de color. Si observamos los valores representados
grficamente para las dos manzanas, vemos que deberamos decir que el color de
la manzana es "ms plido" que el de la manzana ; como la diferencia
cromtica no es muy grande, podramos aadir asimismo un modificador, diciendo
que la manzana es "ligeramente ms plida" para indicar el grado de diferencia.

Figura 11: Trminos utilizados para describir diferencias en luminosidad y croma

Diferencia de Luminosidad y Croma
IV. MATERIAL Y MTODO
Materiales, Equipos y reactivos

Colormetro Minolta
Frutas y/o diversos Productos Agroindustriales
Cuchillos
Mtodos
Coger el colormetro y borrar todos los datos de medida anteriores
Calibrar el instrumento. Para ello es necesario colocar el cabezal de medida
sobre el plato de calibracin y seleccionar la funcin Calibrate hasta que
el aparato indique que esta preparado
Poner al sistema en modo medida apretando el botn measure
Realizar la medida sobre la superficie de la muestra a medir
Anotar los valores de los parmetros L*, a*, b*
V. RESULTADOS Y DISCUSIN
Se reportaran los resultados de la lectura de color de diferentes frutas e interpretar
los mismos.
Determinar la luminosidad descrita por L*. El color negro presenta una

luminosidad de 0 mientras que el blanco presenta una luminosidad de 100.
Los parmetros a* y b* se utilizan para evaluar la saturacin y el tono. La

saturacin nos da la pureza de un color y el tono es el color propiamente dicho.
Para el clculo se utilizara la siguiente expresin:
1
Saturacin a* b*
2 22
Tono en variedades rojas=arctg b*/a*
Tono en variedades Verdes y Amarillas = a*+b*

VI. CONCLUSIONES
VII. BIBLIOGRAFIA
SKOOG, D.; HOLLER, J.; NIEMAN, T. Principios de Anlisis Instrumental. 5
Edicin. Editorial McGraw-Hill. EE.UU. 2000.
RUBINSON, J.; RUBINSON, N. Anlisis Instrumental. 3 edicin. Editorial
Prentice Hall. EE. UU. 2000.
Oficial methods of anlisis of AOAC internacional. 16 Edition. Volumen 1, 2.
AOAC International. Virginia. 1995
JAMES, C. Analytical chemistry of foods. First Edition. Edit. Chapman & Hall.
EE.UU. 1995.
KIRK R.; SAWYER R.; HAROLD, E. Composicin y Anlisis de Pearson. 2 edicin.
Edit. Compaa editorial Continental, S.A. de C.V. Mxico. 1996.
PEARSON, D. Tcnicas de laboratorio para el anlisis de alimentos. 1 edicin.
Editorial Acribia. Espaa. 1976.

PRACTICA N 10
Tema: DETERMINACIN DE LA DENSIDAD DE ALIMENTOS
I. INTRODUCCIN
Existen anlisis que requieren de una manera muy rpida y eficiente ser
determinados por su uso en diferentes plantas industriales, entre ellos tenemos la
densidad de muchas sustancias, que conociendo esta caracterstica permitir
tomar decisiones durante los procesos especialmente agroindustriales, como en la
elaboracin y obtencin de vinos, cerveza, alcoholes, lcteos, etc. Para esto
basando en principios fsicos se emplea un conjunto de instrumentos
denominados densmetros o aermetros y otros, que facilitan su clculo casi al
instante, de all su importancia de conocer el manejo adecuado as como
interpretas lecturas, siendo est, materia de la presente prctica.
II. OBJETIVOS
Determinar la densidad de algunos lquidos utilizando mtodos diferentes.

Discutir a partir de los resultados experimentales, cul de los mtodos es el

ms exacto para medir la densidad de lquidos.
III. FUNDAMENTO TEORICO

Los hidrmetros son instrumentos que nos permiten determinar de una manera
rpida la densidad de alimentos lquidos y slidos o en solucin. Esta
determinacin se basa en el principio de Arqumedes: Un cuerpo sumergido en
un fluido, total o parcialmente, sufre un empuje de abajo hacia arriba por una
fuerza neta igual al peso del cuerpo menos el peso del fluido desplazado. La
densidad obtenida se relaciona con el grado de pureza del producto analizado,
para el caso de la leche es una forma comnmente usada para determinar la
alteracin por adicin de agua o harinas. A estos instrumentos se leas conoce
como densmetros de inmersin o aermetros que dependiendo de la escala
reciben nombres de alcoholmetros, sacarmetros, brixmetros, lactmetros, etc.
Un densmetro, es un instrumento que sirve para determinar la densidad relativa
de los lquidos sin necesidad de calcular antes su masa y volumen. Normalmente,
est hecho de vidrio y consiste en un cilindro hueco con un bulbo pesado en su
extremo para que pueda flotar en posicin vertical. El densmetro se introduce
gradualmente en el lquido para que flote libremente. A continuacin se observa
en la escala el punto en el que la superficie del lquido toca el cilindro del
hidrmetro. Los hidrmetros generalmente contienen una escala de papel dentro
de ellos para que se pueda leer directamente la densidad especfica, en gramos
por centmetro cbico. En lquidos ligeros, como queroseno, gasolina, y alcohol, el
densmetro se debe hundir ms para disponer el peso del lquido que en lquidos
densos como agua salada, leche, y cidos. De hecho, es usual tener dos
instrumentos distintos: uno para los lquidos en general y otro para los lquidos
poco densos, teniendo como diferencia la posicin de las marcas medidas.

IV. MATERIALES Y METODOS

A). Materiales:
- Vasos de precipitacin de 500 ml y 100 ml
- Probeta de 250 ml
- Lactodensmetro, alcoholmetro, salinmetro, brixmetro, etc.
- Termmetro de 0 a 100C
Cada grupo deber traer:

- Sal comn 250 grs.
- Leche natural: 500 ml
- Leche en tarro: 1 pequeo
- Alcohol comercial y medicinal 250 ml c/u
- Vino y cerveza. 250 ml c/u
B). Procedimiento
Mtodo de hidrmetros
El hidrmetro debe estar limpio antes de ser sumergido. Para limpiar el
hidrmetro puede utilizar un papel que no suelte pelusas y etanol o
acetona. Si el instrumento, en particular el vstago, est sucio no
solamente variar su masa sino tambin el menisco no se formar
correctamente.
Si quiere asegurar una lectura exacta, deje que tanto el instrumento
como lquido cuya densidad va a medir alcancen el equilibrio trmico con
el ambiente, o espere a que la diferencia de temperatura entre el
hidrmetro y el lquido sea la menor posible.
Tome el hidrmetro por el extremo superior del vstago con las manos
limpias de tal forma que quede vertical. No lo tome del bulbo y menos de
de la seccin del vstago en que est la escala.
Introduzca verticalmente el hidrmetro en el lquido y sultelo cuando
la lnea a la altura de la que supuestamente debe flotar quede a unos

pocos milmetros de la superficie del lquido; luego djelo oscilar hasta el

reposo. Existe la costumbre de hacer girar rpidamente el hidrmetro en
el lquido; no lo haga, el hidrmetro no es un trompo, no permitir que el
menisco se forme bien.
Finalmente, una vez que el hidrmetro se quede quieto, presinelo
suavemente hasta que baje unos pocos milmetros y sultelo; con esto
oscilar nuevamente y cuando vuelva a estar esttico tome la lectura, ya
sea a la altura de la superficie horizontal del lquido o en el borde superior
del menisco.
Mtodo de picnmetro
Un picnmetro es un pequeo frasco de vidrio de volumen exacto y
conocido (Vp). Se pesa vaco (wp), luego se llena completamente (incluido
el capilar) con el lquido cuya densidad se desea determinar y finalmente
se pesa (wpl). Con estos datos se puede calcular la densidad del lquido:
Se debe anotar:
Temperatura del lquido (T): __________ C
Peso del picnmetro vaco (wp): __________ g
Volumen del picnmetro (Vp): __________ mL
Realizar las lecturas y reportar resultados con sus respectivas discusiones
comparadas con valores tericos o indicaciones en el producto de fbrica.
VI. CONCLUSIONES
En base a los objetivos y resultados.
VII. BIBLIOGRAFIA
QUIMICA Y AMBIENTE 1 MC GRAW HILL
ENCICLOPEDIA TEMATICA MASTER QUIMICA Y FISICA
HART Y FISHER. 1986. Anlisis de alimentos. Edit. Acribia. Zaragoza. Espaa.
LEES H. 1982. Manual de Anlisis de Alimentos. Edit. Acribia. Zaragoza. Espaa.
VIII. CUESTIONARIO
1. La densidad sirve como criterio para establecer la pureza de un lquido?
2. Se afecta significativamente la densidad de un lquido con los cambios de
temperatura? Con los cambios de presin?
3. Cmo se determina la densidad de un gas? Qu factores afectan la densidad
de los gases?

Practica N 11
Tema: CUALIFICACIN INSTRUMENTAL
I. INTRODUCCIN
Los protocolos y estudios de Calificacin fueron diseados atendiendo las
recomendaciones de diferentes normas y publicaciones nacionales e
internacionales.
El estudio de Calificacin y Validacin tiene como propsito conocer el estado de
funcionamiento en que se encuentra el equipo calificado en el medio ambiente
donde se encuentra trabajando para garantizar su confiabilidad, buen desempeo y
la capacidad de cumplimiento de la prueba de acuerdo a la norma de trabajo o
necesidades de los Clientes externos o internos de la empresa.
II. OBJETIVOS
Describir los pasos a seguir para comprobar que un instrumento funciona
correctamente segn especificacin de fabricante y de un modo adecuad o para
los anlisis a realizar.

Para conocer el desempeo de su equipo, es necesario realizar las siguientes
calificaciones; Calificacin de Instalacin (IQ), Calificacin de Operacin (OQ) y
Calificacin de Desempeo (PQ), la realizacin de stas, depender de las
necesidades del Cliente.
Calificacin de Instalacin (Installation Qualification-IQ).
Cubre todo el proceso relacionado a la instalacin del equipo en el ambiente
seleccionado.
La IQ establece que el equipo es recibido de acuerdo a como se dise y se

especific, que est adecuadamente instalado en el ambiente que se seleccion, y

que es apropiado para la operacin del equipo.
Calificacin de Operacin (Operational Qualification-OQ).
Es el proceso en donde se demuestra que un equipo funcionar de acuerdo a la
especificacin operacional en el ambiente seleccionado. El mantenimiento
preventivo antes del OQ reduce el riesgo de la falla de una prueba.
Calificacin de Desempeo o procedimiento(Performance Qualification-PQ).
El proceso en donde se demuestra que un equipo se desempea de acuerdo a la
especificacin adecuada para su uso rutinario.

A. Desarrollar un protocolo de calificacin Instrumental:
1. Descripcin del Sistema
Descripcin del equipo
Esta descripcin consiste en detallar la marca, modelo, localizacin y uso
del instrumento. Asimismo, describir las diferentes partes principales
que lo conforman
2. Organizacin
Equipo y responsabilidades
Mencionar los nombres de los responsables de realizar la calificacin del
instrumento.
Responsable de la actividad
Detallar las actividades de cada uno de los responsables.
Procedimiento para ejecucin del Protocolo
Para cada ensayo se describir el objetivo, procedimiento experimental
y los criterios de aceptacin.
Si se presentase desvos en los ensayos, este debe ser reportado con la
finalidad de emprender acciones correctivas.
Informe
Se puede dar por finalizada la calificacin cuando todos los ensayos se
terminen, todos los desvos sean debidamente justificados y no sea

necesario corregirlo. Finalmente este informe deber ser aprobado

mediante la firma de cada uno de los responsables.
3. Calificacin de Instalacin (IQ)

Verificacin de la documentacin
Deben estar al menos los siguientes documentos:
Gua de instalacin para todos los componentes del equipo.
Gua operacional para todos los componentes del equipo.
Manual de mantenimiento para todos los componentes del equipo.
Lista de piezas de repuesto pata todos los componentes del equipo.
Verificacin de la instalacin
Demostrar que las condiciones ambientales cumplen las
especificaciones del fabricante.
Verificar la correcta conexin del equipo a la corriente elctrica y que el
equipo se enciende al presionar el botn de encendido
Verificar visualmente de que los componentes principales del equipo
estn correctamente instalados y verificar la conformidad con las
especificaciones del fabricante.
Verificar visualmente si se encuentra correctamente etiquetado con su
nmero de identificacin y que la etiqueta se encuentra en un lugar
visible.
Verificacin de las piezas de repuesto
Identificar y localizar la lista de piezas de repuesto para los componentes
crticos del sistema.
4. Calificacin de operacin (OQ)
Verificacin de documentacin
Verificar la existencia de procedimientos escritos asociados a la
operacin, mantenimiento y calibracin del sistema.
Verificacin operacional del sistema

Verificar el correcto funcionamiento de cada uno de los componentes

del sistema de acuerdo a un criterio previamente establecido por el
fabricante o responsable del equipo.
5. Calificacin de procedimiento (PQ)

Verificacin del procedimiento
Verificar que cada uno de los componentes o parmetros se encuentren
en lo establecido, mediante criterios como: exactitud y precisin de
(Exactitud < 2.00% y Precisin < 2.00%) u otros criterios de
aceptacin..
6. Aprobacin de resultados
Firma de cada uno de los responsables en cada una de las etapas de la
calificacin.
B. Preparacin de informe y presentacin.
V. BIBLIOGRAFA
http://dpto.educacion.navarra.es/cualificaciones/CualificacionesPDF/QUI117_3.pdf
http://www.merck-chemicals.pe/cualificacion-
instrumental/c_c3Kb.s1Ll.4AAAEWWeYfVhTo?CountryName=Peru


Preparación de soluciones y espectrofotometría

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Preparación de soluciones y espectrofotometría

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

Gua de Prcticas Anlisis Instrumental

Tema: PREPARACIN DE SOLUCIONES

La mayor parte de los procesos qumicos se realizan en un laboratorio, no se hacen

En esta experiencia se trata de hacer operativos y de afianzar los conceptos de

Emplear adecuadamente instrumentos de medida de masa y de volumen.

III. FUNDAMENTO TERICO.

Las disoluciones se preparan en recipientes especficos como: matraces, vasos de

IV. MATERIALES Y MTODOS

1 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

a) Se realizan los clculos de la cantidad de soluto necesaria.

1. 250 cm3 de NaOH 0,1M. a partir del producto comercial (96%)

2 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

Para la descripcin del mtodo, ver la prctica. Clculos

2.10-2 mol.56g/mol = 1.12 g.

1,12(g. puros). 100(g. comercial) / 96(g. puros) = 1,167

P(CuSO4) = 160; P (CuSO4.5H2O) = 250

2,5.10-2 mol CuSO4.160(g CuSO4/ mol CuSO4) . 250 g CuSO4.5H2O/160 g CuSO4

Hay que medir 50 ml de la disolucin 2M (con una Probeta) y utilizar un matraz

3. Se indican los clculos. Para lo dems, ver la prctica.

1mol.40 g/mol = 40g.

Hay que pesar 40,82 g. de producto comercial y utilizar un matraz de 1 litro.

4. Se necesita un mol de soluto.

1 mol.98 (g. soluto/mol).100 g. disolucin /98 g. de soluto = 100 g. de

100 g /1,84(g/ml) = 54,35 ml.

Para el procedimiento, revisa la prctica

4 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

Complete el siguiente cuadro:

Soluto Volumen de Cantidad de soluto

5 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de onda de mxima

Esta relacin se cumple y por lo tanto el anlisis espectrofotomtrico cuantitativo

6 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

sombra de otra. Se estima como promedio una concentracin de 1 x 10 -2

III. MATERIALES Y MTODOS.

III.2.1. Manejo del Espectrofotmetro.

a) Determinacin de la longitud de onda de mxima absorcin.

b) Determinacin del rango de concentracin adecuado.

c) Determinar el coeficiente de extincin molar ().

7 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

IV. RESULTADOS DE DISCUSIN

Tema: DETERMINACIN DE VITAMINA C POR ESPECTROFOTOMETRA

8 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

Determinar el efecto de la longitud de onda dominante en el anlisis cuantitativo

IV. MATERIALES Y METODOS

9 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

3. Preparacin de la Curva Estndar.

10 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

e) Calcular (L1 - L2) y obtener la concentracin de cido ascrbico a partir de la

Tema: DETERMINACIN DE AZUCARES REDUCTORES DE UN ALIMENTO POR

11 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

La determinacin cuantitativa de los monosacridos se realiza, frecuentemente

Esta tcnica tiene la ventaja de ser un mtodo preciso y rpido en comparacin

III. MATERIALES Y MTODOS

Preparacin del Reactivo DNS:

Se mezcla y disuelve en 250 ml. de agua destilada 8 gr. De NAOH y 15 gr. de

Posteriormente se agregan 5 gr. de Acido 3,5 dinotrasalicilico bajo

12 Ing. Jorge Domnguez C. Ing. Daniel Sanchez

B) Utilizar un estndar de 1.0 mg/ml. de glucosa, realizar las diluciones para

Diluir 1 ml. de cada muestra en 100ml. de agua destilada en una probeta,

Llevar la muestra al espectrofotmetro a 540 nm y leer su absorbancia. Con

1. Graficar los datos de la curva patrn colocando en el eje de las abscisas

pH del agua destilada pH del agua destilada____

pH de Vaso 1 + 1 gota HCl _________ pH de Vaso 1' + 1 gota NaOH_

pH de Vaso 1 + 3 gotas HCl_____________ pH de Vaso 1' + 3 gotas NaOH_

pH del vaso 2 (Amortiguadora)________ pH del vaso 2' (Amortiguadora) _

pH de Vaso 2 + 1 gota HC l_______ pH de Vaso 2' + 1 gota NaOH _

pH de Vaso 2 + 3 gotas HCl__________ pH de Vaso 2' + 3 gotas NaOH _

pH de Vaso 3 + 1 gota HCl ___________ pH de Vaso 3' + 1 gota NaOH_

pH de Vaso 3 + 2 gotas HCl____________ pH de Vaso 3' + 2 gotas NaOH_

pH de Vaso 3 + 3 gotas HCl_____________ pH de Vaso 3' + 3 gotas NaOH _