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Universidad Nacional Abierta y a Distancia

Vicerrectora Acadmica y de Investigacin


Gua para el desarrollo del componente prctico

1. Descripcin general del curso

Escuela o Unidad Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio


Acadmica Ambiente ECAPMA
Nivel de formacin Profesional y tecnolgico
Campo de Formacin Formacin disciplinar especfica
Nombre del curso Toxicologa Ambiental
Cdigo del curso 358027
Tipo de curso Terico Habilitable Si No
Nmero de crditos 3

2. Descripcin de la actividad

Laboratorio Laboratorio remoto Simulador


fsico
Tipo de Experiencias
Trabajos de Software
prctica profesionales
campo especializado
dirigidas
Otro Cul: Prctica autnoma.
Nmero de
Tipo de actividad: Individual Colaborativa 6
semanas
Momento de la Intermedia,
Inicial Final
evaluacin: unidad: 3
Entorno donde se realiza:
Peso evaluativo de la actividad Entorno de aprendizaje colaborativo
(si lo tiene): 150 puntos. Entorno de aprendizaje prctico
Entorno de evaluacin y seguimiento
Fecha de inicio de la actividad: Fecha de cierre de la actividad:
20/10/2017 28/11/2017
Temticas que aborda componente prctico:

Unidad 3. Protocolos para el monitoreo y seguimiento de txicos ambientales.


1. Evaluacin de la exposicin, riesgo toxicolgico, rutas de exposicin y monitoreo.
2. Tipos de pruebas de ecotoxicidad y desarrollo de un bioensayo.
3. Nociones bsicas de restauracin ambiental
Actividades a desarrollar

El bioensayo a realizar es el Ensayo de Toxicidad aguda con semillas de lechuga


(Lactuca sativa L.), cuyo protocolo se encuentra en el recurso relacionado en el
syllabus:
Castillo Morales, G (ed.) (2004). Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de
calidad de aguas: estandarizacin, intercalibracin, resultados y aplicaciones.
Mxico: Instituto Mexicano de Tecnologa del Agua. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2048/login?user=proveedor&pass=danue0a0&ur
l=http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=nlebk&AN=1
35927&lang=es&site=eds-live

El protocolo se encuentra en el Captulo 4. Protocolos de ensayo, 4.4 Ensayo de


toxicidad aguda con semillas de lechuga, p. 71-79., se recomienda a los estudiantes
que lean completamente el protocolo y los siguientes segmentos del libro, con el
fin de que tengan mayores elementos para el anlisis de los resultados: Captulo 1.
Conceptos generales, p. 17-22. Captulo 2. Monitoreo ambiental, p. 23-30. Captulo
6, Aseguramiento y control de calidad de bioensayos, 6.3.2 Lactuca sativa, p. 131-
132.

La prctica se podr elaborar individualmente o en grupos de mximo 5 personas


del mismo CEAD, as si desean trabajar en grupo debern ponerse en contacto
entre ustedes para que alisten materiales, recojan la muestra en grupo y
desarrollen el bioensayo en el lugar que ustedes dispongan, puede ser su casa o el
mismo CEAD si se lo permiten, pero no es prctica con acompaamiento de
tutor prctico, por tal motivo no la encontrarn programada en los CEAD. Si
deciden realizar el trabajo en grupo, se debe publicar en el foro la conformacin
de los grupos para el desarrollo de la prctica (no es necesario que el grupo de la
prctica sea el mismo grupo del campus). Es indispensable tomar registro
fotogrfico de todos los pasos de la prctica, pues se requiere para la elaboracin
del informe. Los integrantes del grupo deben aparecer en el registro fotogrfico
tomado.

A continuacin se explican algunas variaciones al protocolo original, para poder


ajustarlo a las condiciones en casa. Por favor siga los pasos al pie de la letra, esto le
evitar confusiones.

1. Leer la finalidad de la prueba


Leer segmento del protocolo: 4.4.1 Principio (p. 71-73)
2. Preparar los reactivos y materiales

- Material biolgico: 1 sobre de semillas de lechuga (Lactuca sativa L.), de


mximo un ao de antigedad (ver fecha de lote).
- 1 Litro de muestra de agua a evaluar, mnimo 500mL.
- 1 L de agua destilada o potable (agua purificada, no de la llave)
- 21 cajas de Petri (de vidrio o plstico, de 100 mm de dimetro, leer ms
adelante otras opciones de recipientes)
- Papel de filtro Whatman No. 3 de 90mm de dimetro, deben ajustar bien en
las cajas de Petri (puede reemplazarse por papel absorbente de cocina)
- 3 Goteros o jeringas de 5mL que permitan medir 4mL.
- 1 Probeta de 250mL o un recipiente que este graduado cada 100mL o 50mL
(ver pgina 9 del presente documento con indicaciones de cmo crearlo
usted mismo).
- Pinzas o algo similar para coger las semillas.
- Sal de cocina.
- 1 recipiente o botella de 1,5 L limpia.
- Papel aluminio (el suficiente para envolver sus 5 cajas de Petri).
- Cinta de enmascarar.
- Libreta de apuntes, formato para la toma de datos diseado por usted
mismo.
- Regla.
- Guantes de ltex.
- Bolsas Ziploc tamao Sandwich.
- Materiales para la toma de muestra de agua: pg. 7 de la presente gua.

Caractersticas de las semillas: La obtencin de semillas se realiza en tiendas


agrcolas locales, procurando que stas sean semillas sin curar (sin fungicidas o
plaguicidas), de mximo un ao de antigedad. Es importante realizar la prueba de
germinacin de las semillas (se explica ms adelante), para asegurar el xito del
ensayo. Las semillas mal almacenadas reducen su vitalidad y envejecen,
disminuyendo su poder germinativo y aumentando la variabilidad de las medidas de
elongacin de radcula e hipoctilo en el control negativo (Castillo Morales, 2004).
Por tanto, es importante probar las semillas adquiridas antes de realizar el ensayo,
pues normalmente no se sabe si su almacenamiento ha sido el ptimo.

Caractersticas del papel absorbente utilizado: Leer protocolo, pg. 73. El papel de
filtro (o de cocina) que se seleccione como sustrato de germinacin debe tener las
siguientes caractersticas:
Trama amplia y porosa que asegure una buena capacidad de retencin de
lquido. Resistencia de la fibra del papel para que las radculas crezcan por su
superficie sin atravesarlo, situacin que dificultara la remocin de las plntulas
sin daarlas. Ausencia de residuos txicos (ej. blanqueadores). Que no
promueva el desarrollo de hongos (no asociados a las semillas). (Castillo
Morales, 2004, p.73).

Caractersticas del recipiente para el bioensayo: En caso de no conseguir las cajas de


Petri, se recomienda al estudiante utilizar alguna de las siguientes opciones, siempre
tratando de mantener las condiciones de inocuidad del medio, con el fin de evitar
que las semillas se contaminen con microorganismos por efectos del recipiente
utilizado. Los recipientes deben tener forma circular, un dimetro similar al de las
cajas de Petri, tener el fondo plano y poder taparse y cubrirse con papel aluminio.
Entre las posibilidades, se dan algunas ideas que han tenido otros estudiantes, como
platos desechables o recipientes para postres (Figuras 1 y 2).

Figura 1. Recipiente para postres. Figura 2. Platos desechables.


Foto: Manuel Cepeda (2016) Foto: Jairo Porras (2016)

3. Revisin de porcentaje de germinacin de las semillas


compradas

Previamente al montaje del experimento, es importante hacer una prueba de


germinacin inicial, para comprobar que las semillas estn en buen estado y que
tienen un porcentaje de germinacin cercano al que dice el empaque en el que
vienen, usualmente del 90%, el mnimo permitido ser del 80%.

Para esta prueba se montar una caja de Petri con agua potable (no de la llave) y se
seguir el procedimiento que se describe ms adelante para clculo del porcentaje
de germinacin. Si el porcentaje de germinacin est por debajo del 80% entonces
se debern cambiar las semillas.
Una vez que la prueba arroje el porcentaje de germinacin deseado, se podr utilizar
ese sobre de semillas para el montaje del bioensayo.

4. Obtencin de la muestra

La muestra a trabajar ser idealmente del entorno contaminado que estn


investigando en el proyecto del curso, pero si no es posible (porque usted no vive
cerca al lugar elegido), simplemente deber escoger un sitio diferente donde se
presuma contaminacin industrial, no solo domstica, ya que sta contiene
contaminantes que al contrario favorecen el crecimiento de las plantas. Recuerde
que alguno de los miembros del grupo en el campus virtual debe desarrollar el
bioensayo con una muestra tomada en el sitio elegido para el proyecto del grupo.

La recoleccin de la muestra depender del tema elegido. En todo caso, se deber


tener en cuenta para el anlisis las condiciones climticas del da de recoleccin de
la muestra, ya que la lluvia o un alto caudal (en el caso de cuerpos de agua) puede
disminuir la concentracin de los contaminantes de la muestra tomada. Tenga muy
en cuenta el diagrama de rutas del txico elaborado en la Etapa 2, pues le ayudar a
tener clara la forma en que se presenta el txico en la muestra a tomar.

Atmsfera.
Existen variados mtodos para el monitoreo de contaminantes atmosfricos de
forma precisa y continua. Para efectos del presente curso se tomar una muestra
superficial (el primer centmetro) de suelo de un lugar en donde sea observable la
acumulacin de contaminantes atmosfricos en plantas y suelo. Tome la muestra en
suelo desnudo, que no tenga cobertura vegetal. Guarde la muestra en una bolsa
Ziploc (tamao sandwich), una cantidad que llene media bolsa (aproximadamente
250g). Utilice guantes de ltex y tapabocas al momento de recolectar la muestra.

La bolsa Ziploc debe estar adecuadamente rotulada con el nombre de quien toma la
muestra, tipo de cobertura vegetal que hubiera tenido (en este caso suelo desnudo),
hora y fecha de muestreo.

Suelo.
Si su tema de proyecto es contaminacin de suelos con sustancias txicas, el
procedimiento para toma de muestra es el siguiente:
Remover entre 2-3 cm de la superficie del terreno (capa vegetal superficial) en el
punto escogido con el fin de limpiar y eliminar los residuos frescos de materia
orgnica, polvo de la carretera u otros contaminantes. Utilizar guantes de ltex y
tapabocas.

La muestra debe ser tomada a una profundidad de 0-15 cm. Una vez tomada la
muestra debe homogenizarse, destruir terrones y remover material orgnico como:
hojas, races y animales. Una vez realizado esto, incorporar la muestra de
aproximadamente 250g en la bolsa ziploc (alrededor del media bolsa), asegurndose
que quede bien sellada.

La bolsa ziploc debe estar adecuadamente rotulada con el nombre de quien toma la
muestra, tipo de sistema agrcola o cobertura vegetal que hubiera tenido, hora y
fecha de muestreo.

Agua.
Si su tema de proyecto es la contaminacin de algn cuerpo de agua con txicos
deber recolectar una muestra de esta agua para utilizarla en el bioensayo.

Los materiales requeridos para el muestreo dependern del lugar donde se planee
recolectar la muestra. Se recomienda seguir el protocolo establecido por el IDEAM
en la Gua de monitoreo de vertimientos, aguas superficiales y subterrneas,
disponible en el link
http://www.corponor.gov.co/control_calidad/2014/Guia_monitoreo_IDEAM.pdf

El muestreo que se realizar es puntual, pero deber seguir las indicaciones para
preparacin del recipiente, llenado de la botella, marcacin, preservacin y
transporte de la muestra hasta el sitio donde har el montaje de su bioensayo. Sin
embargo, como materiales generales se recomienda llevar para el muestreo (Figura
3): balde, soga, un recipiente limpio para recolectar 1 Litro de muestra (pueden ser
botellas de agua lavadas y desocupadas), toalla para secar, cinta de enmascarar
para marcar el recipiente donde se pondr la muestra, marcador indeleble, nevera
de icopor con hielo, guantes de caucho, formato de campo para recolectar
informacin del sitio como nombre del lugar, del cuerpo de agua, hora, fecha, etc.
(En la gua del IDEAM encontrarn ejemplos de estos formatos), importante tambin
tomar fotos del sitio de muestreo y no ir solos a tomar la muestra.

La gua del IDEAM habla de medir algunos parmetros in situ a las muestras, pero
estos datos no se tomarn.

IMPORTANTE: la muestra no debe tener ms de 24 horas de recogida para el


montaje del bioensayo.

Figura 3. Toma de muestra de agua con un balde. Fuente: Aquatox (2010)

5. Ejecucin del ensayo

a) Preparacin de las soluciones

(1) Solucin de control positivo:

Las soluciones de control positivo estn diseadas para obtener resultados similares
de los que se obtendran con agua contaminada. Esta solucin le permitir observar
cmo reaccionan las semillas al agua contaminada.

Se preparar una solucin salina de 5g/L, se requerir 200mL de agua potable (no
de la llave), y adicionar 1 gramo de sal. Si se cuenta con una balanza o una gramera
se podr pesar el gramo de sal, si no, se tendr que calcular dicha cantidad a ojo
con una cucharita de cocina, llenndola hasta . Se debe mezclar bien y luego
marcar el recipiente que diga "Control (+)".

(2) Solucin de control negativo

Ser una muestra de agua potable (no de la llave), sin gas y sin saborizante, alistar
mnimo 200mL para el bioensayo. Marcar con Control (-).
(3) Soluciones de muestra contaminada

Leer preparacin de las diluciones en la pg. 74 del protocolo. Para el ensayo a


realizar en el curso, se realizarn 5 diluciones: 100, 30, 10, 3 y 1%.

Para preparar las diluciones, se recomienda que cuente con una probeta (Figura 4) o
un recipiente para medir volumen, en caso de no tenerlo, puede fabricarlo usted
mismo, tome un recipiente cilndrico (uniforme, que no sea cnico), y mida la altura
del recipiente hasta 10 cm, realizando una marcacin cada centmetro. La base del
recipiente ser el centmetro 0, y aumenta hacia arriba, hasta el centmetro 10. Este
recipiente no le permitir medir ml, pero s le permitir tener proporciones
adecuadas.

Figura 4. Probeta.

El agua con que se preparan las diluciones es agua potable (no de la llave).

Para guardar las diluciones preparadas, marque cinco recipientes con cinta de
enmascarar con la etiqueta: 100%, 30%, 10%, 3% y 1%.

Para preparar las diluciones, siga las siguientes instrucciones:

Dilucin 100%: Corresponde a usar la muestra de agua tal y como se muestre.


Para el caso de suelos, se toma un recipiente en donde se pueda agregar toda la
muestra tomada, y se satura el suelo hasta su capacidad de carga (agregar agua
hasta llegar al lmite superior del suelo), y mezclar. Agregue en el recipiente
marcado con 100%.

Dilucin 30%: Corresponde a usar 3 partes de la muestra al 100% y 7 partes de


agua. Sea agua o suelo, se agregan 3 ml de la dilucin al 100%, y se completa
hasta 10 ml con agua potable. En el caso de haber usado un recipiente cilndrico con
marcas, construido por usted, agregue hasta el cm 3, y complete con agua hasta el
cm 10. Agregue en el recipiente marcado con 30%.

Dilucin 10%: Corresponde a usar 1 parte de la muestra al 100% y 9 partes de


agua. Sea agua o suelo, se agrega 1 ml de la dilucin al 100%, y se completa hasta
10 ml con agua potable. En el caso de haber usado un recipiente cilndrico con
marcas, construido por usted, agregue hasta el cm 1, y complete con agua hasta el
cm 10. Agregue en el recipiente marcado con 10%.

Dilucin 3%: Corresponde a usar 1 parte de la muestra al 30% y 9 partes de agua.


Sea agua o suelo, se agrega 1 ml de la dilucin al 30%, y se completa hasta 10 ml
con agua potable. En el caso de haber usado un recipiente cilndrico con marcas,
construido por usted, agregue hasta el cm 1, y complete con agua hasta el cm 10.
Agregue en el recipiente marcado con 3%.

Dilucin 1%: Corresponde a usar 1 parte de la muestra al 10% y 9 partes de agua.


Sea agua o suelo, se agrega 1 ml de la dilucin al 10%, y se completa hasta 10 ml
con agua potable. En el caso de haber usado un recipiente cilndrico con marcas,
construido por usted, agregue hasta el cm 1, y complete con agua hasta el cm 10.
Agregue en el recipiente marcado con 1%.

b) Montaje del bioensayo:

Colocar en cada caja de Petri un disco de papel filtro o un recorte de papel


absorbente con la forma de la circunferencia de la caja de Petri.

Marcar correctamente cada caja de Petri con la dilucin correspondiente y la solucin


que se aplicar, as como la fecha y hora de inicio del bioensayo. Cada dilucin
tendr tres rplicas, es decir, tres repeticiones. Cada estudiante o grupo de 3
personas deber tener 21 cajas de Petri (o recipientes) y marcarlas de la siguiente
manera (Tabla 1):
Tabla 1. Diluciones y rplicas.
Dilucin Rplica 1 Rplica 2 Rplica 3
Control (+) C(+) R1 C(+) R2 C(+) R3
Control (-) C(-) R1 C(-) R2 C(-) R3
D100% D100% R1 D100% R2 D100% R3
D30% D30% R1 D30% R2 D30% R3
D10% D10% R1 D10% R2 D10% R3
D3% D3% R1 D3% R2 D3% R3
D1% D1% R1 D1% R2 D1% R3

Las rplicas son repeticiones que se realizan del mismo tipo de dilucin para eliminar
errores experimentales en el bioensayo.

Agregar 4ml de cada solucin en la caja de Petri correspondiente, saturar el papel


filtro o absorbente dispersando homogneamente la solucin sobre ste evitando
que se formen burbujas de aire. Para evitar la contaminacin cruzada, se utilizar el
gotero o jeringa primero con el agua potable (control negativo) en sus tres rplicas,
luego con la solucin de 1%, despus con la solucin del 3%, 10%, 30%, 100% y
finalmente el control positivo.

Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas (cinco hileras de


cuatro semillas, o cuatro hileras de cinco semillas), dejando espacio suficiente entre
las semillas para permitir la elongacin de las races. Seleccione semillas de tamao,
forma y color similar.

Tapar las cajas de Petri y envolverlas con papel aluminio, con el fin de proteger las
semillas de la luz, dado que algunas variedades de semillas de lechuga requieren de
oscuridad para que se produzca la germinacin (semillas fotoblsticas negativas).

Marcar con cinta de enmascarar cada caja de Petri envuelta con papel aluminio.
Asegrese de no dar vuelta a las cajas de Petri boca abajo, etiquetando "Parte de
arriba" en cada placa para que no se confunda.

Colocar las cajas de Petri envueltas en papel aluminio dentro de una bolsa plstica
(ziploc) para prevenir que se escape la humedad.

Colocar las cajas en un lugar seguro, a temperatura ambiente por cinco das (120
h), a resguardo de la luz solar directa, preferiblemente a una temperatura de 222
C.
c) Ejecucin de las observaciones y mediciones

Despus de cinco das (120h) se realizan las mediciones para evaluar el efecto del
txico sobre la germinacin de semillas y sobre la elongacin (crecimiento) del
hipoctilo y de la radcula (Figura 5).

Figura 5. Hipoctilo y radcula. Estados por los que atraviesa la semilla durante el
ensayo de germinacin y elongacin (Castillo Morales, 2004).

El efecto del txico se evala comparando la germinacin de las semillas y


crecimiento de las plntulas de lechuga en las diluciones realizadas (muestra
contaminada), respecto a su germinacin y crecimiento en agua pura (control
negativo).

Para comenzar, desenvuelva cuidadosamente cada caja de Petri y siga las siguientes
instrucciones. Tenga especial cuidado en la forma en que registra los datos, con el
fin de evitar confusiones. Se recomienda utilizar un formato diseado por usted, un
cuaderno en donde especifique la caja que est revisando o directamente el
computador. Una vez termine con la primera caja, prosiga con la siguiente, hasta
finalizar las 21 cajas del experimento.

Revise el estado general de las semillas y plntulas (sin manipularlas),


informando cualquier indicador de fitotoxicidad o de crecimiento anormal (pices
radiculares con necrosis, pelos absorbentes poco desarrollados, radculas con
crecimiento ensortijado, necrosis en los cotiledones, etc.). La necrosis (presencia
de tejido muerto) se evidencia como manchas localizadas de coloracin parda,
blanca o marrn. Al evaluar el efecto en la germinacin, consigne adems
aquellas semillas con germinacin anormal (emergencia de cotiledones o
cotiledones e hipoctilo solamente, pero sin emergencia de la radcula) o con
desarrollo de hongos.

Cuente el nmero de semillas germinadas (con aparicin visible de la


radcula) y regstrelo en su libreta de apuntes o formato de toma de datos.

Mida la longitud del hipoctilo y de la radcula de cada plntula, utilizando una


regla o papel milimetrado. Manipule las plntulas con cuidado, para evitar
daarlas. La medida de elongacin de la radcula se considera desde el nudo
(regin ms engrosada de transicin entre la radcula y el hipoctilo) hasta el
pice radicular. La medida de elongacin del hipoctilo se considera desde el
nudo hasta el sitio de interseccin de los cotiledones. Para medir el largo de la
raz, puede ser ms sencillo colocando las races contra un fondo oscuro. Pegue la
regla con cinta adhesiva a ese fondo oscuro y luego, cuidadosamente, "estire" las
races a su longitud mxima, apunte la medida obtenida para cada semilla de
cada tratamiento.

d) Expresin de resultados

Para obtener los clculos necesarios, utilice el Simulador de clculos en Excel que
se provee en el entorno de aprendizaje prctico, en la carpeta identificada con el
mismo nombre. En el simulador encontrar unos datos de ejemplo, con el fin de que
se familiarice con el uso del mismo.

(1) Clculo del porcentaje de germinacin y porcentaje de


inhibicin de germinacin.

Primero ingrese el nmero de semillas germinadas en cada caja de Petri, en la


seccin resaltada en color verde en la hoja GERMINACIN del Simulador de
clculos, segn lo indicado en la figura 6. Una vez haya ingresado los datos, la hoja
calcular los porcentajes de germinacin e inhibicin de germinacin necesarios para
el anlisis.
Figura 6. Nmero de semillas germinadas, hoja GERMINACIN. Ingrese sus datos en
la columna # semillas germinadas resaltada en color verde, en el simulador.

El promedio de cada dilucin utilizada se obtiene sumando el nmero de semillas


germinadas en cada caja y dividiendo entre tres (que es el nmero de rplicas que
tiene cada dilucin).

El porcentaje de germinacin se obtiene comparando el promedio de semillas


germinadas en cada dilucin, con el promedio de semillas germinadas en el control
negativo. Por eso, el porcentaje en el control negativo es 100%. Entre mayor sea el
efecto de los txicos sobre las semillas, menor ser su porcentaje de germinacin.

Se calcula de la siguiente forma (la hoja lo calcula una vez haya ingresado los
datos):
% de germinacin = Promedio D / Promedio C (-) *100

El porcentaje se inhibicin de germinacin es el inverso del porcentaje de


germinacin, por tanto, la suma de ambos porcentajes debe dar 100%. Por ejemplo,
si el porcentaje de germinacin es del 63,2% (ver D100% en la Figura 6), el
porcentaje de inhibicin de la germinacin debe ser del 36,8%. Entre mayor sea el
efecto de los txicos sobre las semillas, mayor es su porcentaje de inhibicin de la
germinacin.

Se calcula de la siguiente forma (la hoja lo calcula una vez haya ingresado los
datos):
% Inhibicin de germinacin = (Promedio C (-) - Promedio D) * 100
Promedio C (-)

El Simulador de clculos tambin calcular los siguientes datos, los cuales se


explican en el siguiente punto.
1. NOEC, LOEC y MATC.
2. Grfica Dosis-Respuesta para obtencin de CI50/CE50

(2) Medida de elongacin de hipoctilo (EH) en cada caja


de Petri.

Primero ingrese la longitud (tomada en milmetros) del hipoctilo de cada plntula


en la seccin resaltada en color verde en la hoja HIPOCTILO del Simulador de
clculos, segn lo indicado en la figura 7. Una vez haya ingresado los datos, la hoja
calcular los datos necesarios para el anlisis.

Figura 7. Ingresar la longitud del hipoctilo (tomada en milmetros) en la seccin


resaltada en color verde de la hoja HIPOCTILO del Simulador de clculos.
La hoja calcular los siguientes datos:

3. Nmero de semillas germinadas (Funcin CONTAR). Debe ser el mismo


nmero de semillas que se obtuvo en la tabla 2.
4. Promedio de la longitud en cada caja (Funcin PROMEDIO)
5. Desviacin estndar en cada caja (Funcin DESVEST.M)
6. Coeficiente de variacin (CV)=Desviacin estndar/promedio*100
7. Promedio de los promedios del control negativo, control positivo, y cada
dilucin.
8. Porcentaje (%) de inhibicin del hipoctilo.
9. NOEC, LOEC y MATC.
10. Grfica Dosis-Respuesta para obtencin de CI50/CE50

Es importante revisar el CV de cada caja, si el valor da por encima del 30%, puede
eliminar (borrar) hasta dos datos extremos (dato mayor y/o dato menor), para
disminuir la variacin (Figura 8). Si una vez realizado este procedimiento, el CV
sigue siendo alto, entonces no deber tenerse en cuenta la rplica para la obtencin
del promedio general (deber borrar los datos de toda la fila). Si todas las rplicas
en una misma dilucin dan por encima del 30%, los datos no son confiables, y
deber tener en cuenta esta informacin durante el anlisis.

Figura 8. Eliminacin de datos extremos. El CV de las cajas C(+) R1 y C(+) R 3 da


mayor al 30%. Para corregirlo, se eliminan los datos extremos en las celdas
sealadas en amarillo (haga el ejercicio en el Simulador de clculos, para
observar la disminucin del CV).
El porcentaje de inhibicin del hipoctilo se calcula de la siguiente forma (la hoja lo
calcula una vez haya ingresado los datos):

% Inhibicin Hipoctilo = (Promedio EH C(-) Promedio EH D) x 100


Promedio EH C(-)

Entre mayor sea la inhibicin del crecimiento del hipoctilo, mayor ser el efecto del
txico sobre las semillas. Si el % es negativo, significa que la dilucin, en lugar de
inhibir el crecimiento del hipoctilo, caus una exaltacin del mismo (ver seccin
4.4.5 Interpretacin de los resultados en el protocolo, p.79)

Para la obtencin del NOEC, LOEC y MATC, siga las siguientes instrucciones:

En la Tabla LOEC, NOEC, MATC en la hoja clculo, revise si en la fila Todos


existen efectos txicos sobre las semillas, revisando que el F experimental sea
mayor que F terica (0,05) (ver figura 8). Si los hay, contine con los
siguientes puntos. Si no los hay, significa que la muestra tomada no tiene efectos
txicos sobre las semillas.

Encuentre la concentracin en donde empiezan a existir efectos txicos sobre las


semillas. Para esto, encuentre el valor de F experimental que sea mayor que F
terica (0,05) (ver figura 8). sta concentracin ser LOEC, y la concentracin
inmediatamente anterior ser NOEC.

Calcule el MATC, incluyendo los datos de NOEC y LOEC en la tabla inferior, en las
celdas amarillas (ver figura 8).
Figura 8. Existen efectos txicos sobre las semillas, pues el F experimental es de
6.329,47, mucho mayor a F terica (0,05), que es de 3,11. LOEC es 10%, pues es
la menor concentracin en donde se observan efectos txicos sobre las semillas, por
tanto NOEC es de 3% y MATC se calcula en 6,31%.

Para entender un poco mejor el clculo de estos indicadores, lea el recurso


relacionado en el syllabus y en el contenido de la Unidad 3 (entorno de
conocimiento):

Jaramillo Jurez, F., Rincn Snchez, A. R., Rico Martnez, R. (2009). Toxicologa
ambiental. Mxico: Universidad Autnoma de Aguas Calientes. Universidad de
Guadalajara. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2048/login?user=proveedor&pass=danue0a0&ur
l=http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=edselb&AN=
edselb.10889809&lang=es&site=eds-live
Nota: Leer p.195-196

La grfica Dosis-Respuesta se presenta en escala logartmica (mtodo Probit). Debe


identificar el % de concentracin que genera el 50% de la inhibicin del crecimiento
del hipoctilo CI50/CE50 (Figura 9).
Figura 9. A travs de la lnea de tendencia resultante, identifique el porcentaje de
concentracin que genera el 50% de inhibicin de crecimiento del hipoctilo. En este
caso, el 50% de inhibicin resulta a una concentracin del 60%. Es importante
revisar el R2 de la lnea de tendencia, si ste es mayor de 0.9, significa que la lnea
de tendencia representa con un 90% de probabilidad el comportamiento del txico
sobre las semillas de lechuga. Puede obtener el porcentaje, multiplicando por 100 el
valor de R2.

Para entender un poco mejor el mtodo Probit, lea el recurso relacionado en el


syllabus y en el contenido de la Unidad 3 (entorno de conocimiento):
Sierra Ramrez, C. A. (2011). Calidad del agua: evaluacion y diagnostico. Medellin,
Colombia: Ediciones de la U. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2048/login?user=proveedor&pass=danue0a0&ur
l=http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=edsebk&AN
=843650&lang=es&site=eds-live
Nota: Leer p. 101-103.
(3) Medida de elongacin de radcula (ER) en cada caja de
Petri

Primero ingrese la longitud (tomada en milmetros) de la radcula de cada plntula


en la seccin resaltada en color verde en la hoja RADCULA del Simulador de
clculos, repitiendo lo indicado en el punto anterior. Una vez haya ingresado los
datos, la hoja calcular los datos necesarios para el anlisis. Los clculos son iguales
a los realizados en el hipoctilo, por favor siga las mismas recomendaciones.

El porcentaje de inhibicin de la radcula se calcula de la siguiente forma (la hoja lo


calcula una vez haya ingresado los datos):

% Inhibicin Radcula = (Promedio ER C(-) Promedio ER D) x 100


Promedio ER C(-)

e) Anlisis de resultados

Analice los resultados obtenidos en los tres parmetros analizados: germinacin,


elongacin del hipoctilo y elongacin de la radcula. Tenga muy en cuenta los
indicadores obtenidos: NOEC, LOEC, MATC y CI50/CE50.

Deber concluirse si la muestra es txica o no, y cules son sus niveles de toxicidad.
segn el ensayo realizado.

En el informe deben contestar las siguientes preguntas:

1. Qu significa cada indicador obtenido?


2. En qu parte de la planta tuvo ms efecto la posible presencia de txicos en
la muestra?
3. Hubo inhibicin o exaltacin? A qu se le puede atribuir este resultado?
4. Hay riesgo de toxicidad en la muestra tomada? Argumente su respuesta
utilizando trminos de la toxicologa ambiental.

6. Alternativas de restauracin ambiental


Una vez analizada la toxicidad de la muestra, proponga por lo menos una
alternativa de restauracin ambiental que se pueda ejecutar en el lugar del caso.
Para esto, lea las referencias relacionadas en el syllabus del curso y en el contenido
de la Unidad 3, en el entorno de conocimiento.

7. Ficha de monitoreo ambiental


Una vez tenga lista la propuesta de restauracin, elabore una ficha de monitoreo
ambiental. Para ello, debe leer el siguiente recurso:

Borderas Uribeondo, M. P., Muguruza Caas, C. (2014). Evaluacin ambiental.


Madrid: Universidad Nacional de Educacin a Distancia. Recuperado de
http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2048/login?user=proveedor&pass=danue0a0&ur
l=http://bibliotecavirtual.unad.edu.co:2051/login.aspx?direct=true&db=edselb&AN=
edselb.11013791&lang=es&site=eds-live
Nota: Leer Tema 3, seccin 5. Programa de vigilancia ambiental, pg. 6-7.

La ficha debe tener, como mnimo, los datos incluidos en la ficha de ejemplo que se
encuentra en el Cuadro 3.11 del recurso relacionado.

Entorno de aprendizaje colaborativo


Entorno para su
Entorno de aprendizaje prctico
desarrollo:
Entorno de evaluacin y seguimiento
Productos a Informe en MS Word (entorno de evaluacin y seguimiento)
entregar por el Resumen en ingls de la prctica desarrollada (entorno de
estudiante: aprendizaje colaborativo: Foro Etapa 3)
Tipo de No se entrega ningn
Individual Colaborativo
producto: producto
Individual:
Informe en MS Word
Informe de mximo de 12 pginas tamaa carta, con fotografas del experimento
(Anexos).
Editor de texto MS Word
Fuente: Verdana
Tamao fuente: 11
Espacio entre lneas: 1,15
Prrafo: justificado
Mrgenes: izquierda, derecha, superior e inferior de 2 cm.
Ttulos en la fuente, tamao 14, negrilla y centrado.
Subttulos en cursiva, tamao 12, negrilla, espacio 1,15 alineado al margen
izquierdo.
Registre todas las referencias de las fuentes bibliogrficas, que le darn
soporte terico, conceptual y metodolgico a su informe.
Las partes del informe sern:
- Portada: indicar nombre completo, cdula y grupo en campus de cada
integrante.
- Introduccin.
- Diagrama de flujo de la prctica elaborada.
- Descripcin de la muestra llevada al bioensayo.
- Resultados.
- Anlisis de resultados.
- Alternativas de restauracin ambiental.
- Ficha de monitoreo ambiental.
- Conclusiones.
- Recomendaciones.
- Bibliografa.
- Anexo fotogrfico. Debe incluir por lo menos una fotografa de cada paso, y
deben estar todos los integrantes del grupo en las fotos.

Los estudiantes deben subir individualmente el informe en el entorno de


Evaluacin y seguimiento. Si la prctica se desarroll en grupo, cada integrante
del grupo debe subir al entorno de evaluacin y seguimiento el informe
desarrollado de forma grupal.

Resumen en ingls de la prctica desarrollada.


Cada estudiante debe redactar un texto en ingls con el resumen de la practica
realizada, que contenga:
Informacion del lugar de donde se extrajo la muestra
Tipo de contaminacion a la que esta siendo sometido el lugar
Resultados obtenidos
Conclusiones

El texto lo debe publicar en el foro de la Etapa 3, con el ttulo: Resumen prctica


autnoma de (su nombre).

Colaborativo

N/A
Los recursos consultados sern citados y referenciados siempre
bajo las Normas APA, versin 3 en espaol (Traduccin de la
versin 6 en ingls).

Las Normas APA es el estilo de organizacin y presentacin de


informacin ms usado en el rea de las ciencias sociales. Estas se
Uso de encuentran publicadas bajo un Manual que permite tener al alcance
referencias las formas en que se debe presentar un artculo cientfico. Aqu
podrs encontrar los aspectos ms relevantes de la sexta edicin
del Manual de las Normas APA, como referencias, citas, elaboracin
y presentacin de tablas y figuras, encabezados y seriacin, entre
otros. Puede consultar como implementarlas ingresando a la pgina
http://normasapa.com/

Qu es el plagio para la UNAD? El plagio est definido por el


diccionario de la Real Academia como la accin de "copiar en lo
sustancial obras ajenas, dndolas como propias". Por tanto el plagio
es una falta grave: es el equivalente en el mbito acadmico, al
robo. Un estudiante que plagia no se toma su educacin en serio, y
no respeta el trabajo intelectual ajeno.

No existe plagio pequeo. Si un estudiante hace uso de cualquier


porcin del trabajo de otra persona, y no documenta su fuente,
est cometiendo un acto de plagio. Ahora, es evidente que todos
contamos con las ideas de otros a la hora de presentar las nuestras,
y que nuestro conocimiento se basa en el conocimiento de los
Polticas de dems. Pero cuando nos apoyamos en el trabajo de otros, la
plagio honestidad acadmica requiere que anunciemos explcitamente el
hecho que estamos usando una fuente externa, ya sea por medio
de una cita o por medio de una parfrasis. Cuando hacemos una
cita o una parfrasis, identificamos claramente nuestra fuente, no
slo para dar reconocimiento a su autor, sino para que el lector
pueda referirse al original si as lo desea.

En el acuerdo 029 del 13 de diciembre de 2013, artculo 99, se


considera como faltas que atentan contra el orden acadmico, entre
otras, las siguientes: literal e) El plagiar, es decir, presentar como
de su propia autora la totalidad o parte de una obra, trabajo,
documento o invencin realizado por otra persona. Implica tambin
el uso de citas o referencias faltas, o proponer citad donde no haya
coincidencia entre ella y la referencia y liberal f) El reproducir, o
copiar con fines de lucro, materiales educativos o resultados de
productos de investigacin, que cuentan con derechos intelectuales
reservados para la Universidad.

Las sanciones acadmicas a las que se enfrentar el estudiante son


las siguientes:
a) En los casos de fraude acadmico demostrado en el trabajo
acadmico o evaluacin respectiva, la calificacin que se
impondr ser de cero punto cero (0.0) sin perjuicio de la
sancin disciplinaria correspondiente.
b) En los casos relacionados con plagio demostrado en el trabajo
acadmico cualquiera sea su naturaleza, la calificacin que se
impondr ser de cero punto cero (0.0), sin perjuicio de la
sancin disciplinaria correspondiente

4. Formato de Rubrica de evaluacin

Formato rbrica de evaluacin


Tipo de Actividad Actividad

actividad: individual colaborativa
Momento
Intermedia,
de la Inicial Final
unidad: 3
evaluacin
Aspectos Niveles de desempeo de la actividad individual
Puntaje
evaluados Valoracin alta Valoracin media Valoracin baja
El estudiante
publica en el foro
un texto en ingls El estudiante public
con el resumen de los resultados de su El estudiante no
Participacin
la prctica bioensayo, pero el hizo sus aportes en
en el foro 20
realizada, que texto est el foro en ingls.
de la Etapa
incluye todo lo incompleto.
3
solicitado en la
gua.
(Hasta 20 puntos) (Hasta 18 puntos) (Hasta 2 puntos)
El estudiante
Los clculos presenta sus
El estudiante no
presentados son resultados, pero hay
Resultados realiz el bioensayo
correctos y cuenta errores en los
del o se evidencia 20
con registro clculos o no cuenta
bioensayo copy-paste.
fotogrfico. con registro
fotogrfico
(Hasta 20 puntos) (Hasta 18 puntos) (Hasta 2 puntos)
El estudiante El estudiante
interpreta los datos interpreta los datos
obtenidos, los obtenidos, pero no El estudiante no
analiza, los relaciona los relaciona con la realiza el anlisis
Anlisis del con la muestra muestra tomada o de los resultados 30
bioensayo tomada y responde contesta de forma obtenidos.
el cuestionario regular el
adecuadamente. cuestionario.
(Hasta 30 puntos) (Hasta 27 puntos) (Hasta 3 puntos)
El estudiante
propone una El estudiante No presenta
alternativa de propone una propuesta de
restauracin alternativa de restauracin o no
Alternativa
coherente con el restauracin, pero es coherente (se
de 20
problema estudiado est incompleta o no evidencia copy-
restauracin
y los resultados es coherente con el paste)
obtenidos en el problema estudiado
bioensayo
(Hasta 20 puntos) (Hasta 18 puntos) (Hasta 2 puntos)
El estudiante elabora
una ficha de
monitoreo con todos El estudiante elabora
los tems solicitados, la ficha de No presenta ficha
y es coherente con monitoreo, pero est de monitoreo o no
Ficha de los resultados incompleta o no es es coherente (se
20
monitoreo obtenidos en el coherente con el evidencia copy-
bioensayo y la documento paste)
alternativa de elaborado
restauracin
propuesta
(Hasta 20 puntos) (Hasta 18 puntos) (Hasta 2 puntos)
El informe contiene
Realizacin El informe es los tems solicitados,
del Informe preciso, pertinente y pero no son
No presenta
final de la coherente, y coherentes ni
informe individual 20
prctica con describe lo solicitado pertinentes para dar
los tems en la gua respuesta a lo
solicitados solicitado en la gua
(Hasta 20 puntos) (Hasta 18 puntos) (Hasta 2 puntos)
El informe no es
El informe tiene claro, ni presenta
buena redaccin, El informe presenta coherencia interna,
coherencia interna y coherencia pero no tiene buen uso
Redaccin,
excelente ortografa. tiene fallas en de ortografa, ni da
ortografa y 20
La citacin se realiza redaccin y las citas
citacin
siguiendo normas ortografa o citacin correspondientes
APA. cuando se
requieren.
(Hasta 20 puntos) (Hasta 18 puntos) (Hasta 2 puntos)
Calificacin final 150