You are on page 1of 5

Revista Eubacteria

Los cuatro mosqueteros de la cintica enzimtica


Jos Manuel Lpez Nicols y Francisco Garca Carmona
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular A, Universidad de Murcia.
josemln@um.es, gcarmona@um.es

INTRODUCCIN francs pero poca gente en clase sabe que en realidad


Michaelis-Menten no era una persona sino dos: Leonor
Sin duda alguna una de las partes ms importantes de la Michaelis y Maud Leonora Menten.
bioqumica es la enzimologa, un rea centrada en el estudio y
caracterizacin de las enzimas, biomolculas de naturaleza En las siguientes lneas les vamos a hablar de los padres
proteica o ribonucleica que catalizan reacciones qumicas en de la cintica enzimtica pero antes debes tener ustedes claro
los sistemas biolgicos. Por su naturaleza la enzimologa que la poca en la que se desarrolla esta historia, finales del
abarca un amplio espectro de estudio que va desde la siglo XIX y principios del siglo XX, no era nada propicia para
implicacin de las enzimas en el metabolismo hasta su que una mujer y un hombre de raza negra deslumbrasen al
estructura pasando por su cintica, su posible aplicacin en la mundo con un modelo cientfico validado y usado
biotecnologa, su variabilidad en la filogenia, los adyuvantes actualmente por todos los bioqumicos.
enzimticos, los cofactores y las coenzimas, etc. Pero la
cintica enzimtica tambin est llena de curiosidades
histricas que deben ser conocidas por todos los amantes de
la bioqumica en particular y de la biologa en general. En este
artculo les contamos algunas de ellas que seguro que les
sorprender.

MICHAELIS-MENTEN?

Dentro de las ecuaciones ms recordadas por todos los


alumnos que han cursado la asignatura de bioqumica se
encuentra la de Michaelis-Menten, eje fundamental sobre el
que gira la cintica enzimtica y que describe la velocidad de
reaccin de muchas reacciones enzimticas. Pero a pesar de
que la ecuacin de Michaelis-Menten de la que Figura 2. Leonor Michaelis (izquierda) y Maud Leonora Menten (derecha).
posteriormente les hablaremos es de sobra conocida para los
alumnos que realizan la carrera de Biologa, no lo es tanto el Maud Leonora Menten naci en Ontario (Canad) en
origen de su nombre. 1879. Se gradu en Artes en la Universidad de Toronto en
1904, y en Medicina en 1907. Cuatro aos despus, en 1911,
se convirti en una de las primeras mujeres de la historia, y la
primera canadiense, en obtener un ttulo de Doctorado. A
pesar de estos brillantes comienzos, la investigacin de
aquella poca era coto privado del gnero masculino y las
mujeres no lo tenan nada fcil. Por esta razn, y para poder
progresar en su carrera cientfica, Maud Menten se vio
Figura 1. Ecuacin de Michaelis-Menten. obligada a emigrar a EEUU como investigadora asociada en el
Instituto Rockefeller y en la Western Reserve University.
Posteriormente el espritu investigador de Maud Menten la
Todos los aos, justo antes de empezar la asignatura de llev a cruzar el charco desplazndose a la Universidad de
enzimologa, hacemos una pregunta trampa en clase: Quin Berln donde prosigui sus investigaciones sobre la accin
era Michaelis-Menten? Las respuestas suelen ser de todo cataltica de las enzimas. Y fue en la capital alemana, y en su
tipo. A lo largo de los ltimos cursos hemos escuchado que el famosa universidad, donde en 1912 Maud Menten conoci a
responsable de la famosa ecuacin enzimtica es un Premio uno de los ms brillantes profesores de la Universidad de
Nobel de Qumica, un microbilogo alemn, un bioqumico Berln, Leonor Michaelis.
Revista Eubacteria. Cien aos de avances en ciencias de la vida. N 34. 2015. ISSN 1697-0071 39
Revista Eubacteria

momento en el que se alcanza la velocidad mxima de


Michaelis no era ni mucho menos un principiante. De reaccin (Vmax).
hecho, cuando conoci a Menten ya haba ejercido como
director del Laboratorio Bacteriolgico del Hospital Berlins En la siguiente imagen observamos como la velocidad V
Charit. Leonor Michaelis, nacido en Berln en 1875, se educ que indica el nmero de molculas del sustrato que se
en Alemania y realiz sus primeras investigaciones en la convierten en producto por segundo, responde a la variacin
Universidades de Berln y de Friburgo. Trabaj en el Hospital de sustrato. Con concentraciones crecientes de sustrato [S], la
Municipal de Berln desde 1906 hasta 1922, fecha esta ltima enzima va acercndose asintticamente a su velocidad
en la que decidi marchar a Japn para trabajar como mxima Vmax, pero nunca la alcanza. Por esta razn, no hay
profesor de Bioqumica en la Escuela Mdica de Nagoya. un valor de [S] determinado para la Vmax. De todas formas,
Cuatro aos despus se traslad a Estados Unidos, primero a se puede definir un parmetro caracterstico de la enzima
la Universidad John Hopkins y ms tarde al Rockefeller empleando la concentracin de sustrato a la cual se alcanza la
Institute (precisamente uno de los primeros centros en los mitad de la velocidad mxima (Vmax/2), en este punto la [S]
que desarroll su investigacin Maud Menten), donde es igual a la Km. Valores bajos de Km indican que el complejo
permaneci hasta su jubilacin en 1941. ES est unido muy fuertemente y raramente se disocia sin
que el sustrato reaccione para dar producto.
Pues bien, de aquel encuentro en 1912 entre Leonor
Michaelis y Maud Menten, y de su estrecha colaboracin
investigadora, naci la ecuacin de Michaelis-Menten, una
expresin matemtica tan bsica y fundamental en
bioqumica que les proporcion a ambos un reconocimiento
internacional y que vamos a resumir en los siguientes
prrafos.

La ecuacin de Michaelis-Menten es capaz de describir


el cambio sufrido por la velocidad de una reaccin catalizada
por una enzima al variar la concentracin del sustrato. La
reaccin que se establece entre la enzima y su sustrato va
precedida de la formacin de un complejo, hiptesis que no
pudo comprobarse experimentalmente hasta cincuenta aos
despus del establecimiento de la ecuacin gracias a la
aplicacin de las tcnicas espectroscpicas.

Pero la trayectoria cientfica de Maud Menten no acab


en la ecuacin de Michaelis-Mentenni mucho menos. Ella
no era una investigadora al uso. Su afn por investigar no le
impeda cambiar de centro de trabajo, ni de pas, ni lo que es
aun ms difcil, de lnea de investigacinalgo difcil de ver
hoy en da donde estamos acostumbrados a no movernos de
nuestra rea de trabajo arriesgando lo menos posible nuestro
currculum investigador. A pesar de que sus ms conocidos
Figura 3. Interaccin enzimasustrato. estudios versan sobre la relacin existente en los sistemas
biolgicos entre el sustrato y la enzima correspondiente que
Michaelis determin la denominada constante de dieron origen al desarrollo de la famosa ecuacin y a la
Michaelis (Km) que establece la afinidad entre una enzima y determinacin de mtodos estndares que permitieron aislar
su sustrato. Predijo y explic la velocidad de reaccin, es decir y describir el comportamiento de las protenas, esta
la cantidad de sustrato que reacciona con la enzima por investigadora canadiense no se amilan a la hora de
unidad de tiempo, as como los factores que estimulan o adentrarse en otros campos de la ciencia.
inhiben dicha velocidad de reaccin. Demostr que las
sucesivas adiciones de sustrato al medio de la reaccin Menten continu su brillante carrera como patloga en
provocan un abrupto incremento de la velocidad de reaccin la Universidad de Pittsburgh a partir de 1918, publicando
hasta un cierto punto en el que la enzima se satura y la prolficamente en temas mdicos y bioqumicos. Sus muchos
adicin posterior de sustrato ya no afecta a la velocidad; es el logros incluyeron co-descubrimientos importantes referentes
el azcar de la sangre, la hemoglobina y a las funciones del
Revista Eubacteria. Cien aos de avances en ciencias de la vida. N 34. 2015. ISSN 1697-0071 40
Revista Eubacteria

rin. Incluso se atrevi con la microbiologa alimentaria y en otras investigadoras como Marie Curie, Rosalind Franklin,
1924, con Hellen Manning, descubri los efectos Jocelyn Bell Burnell, Lise Meitner, Dorothy Crowfoot Hodgkin,
hiperglucmicos de las toxinas de Salmonella. Adems, o muchas otraspero a nuestro entender, y en contra de la
public en 1944 el qu puede ser el primer uso de la mayora de las listas que podemos encontrar en la red, se
electroforesis en la separacin de las protenas. Junto a encuentra entre las 10 mejores cientficas de la historia.
Andersch y Wilson determin los coeficientes de sedimenta-
cin y las movilidades electroforticas de la hemoglobina Maud Menten nos ense a lo largo de su carrera
adulta y fetal, adelantndose al trabajo de Linus Pauling a cientfica que la investigacin no entiende de sexos, ni de
quien se ha considerado pionero en ese campo. Otros pases, ni de miedos por cambiar de tema de trabajo ni de
estudios importantes realizados por Menten fueron la lneas de investigacin que sean propiedad de unos cuantos
distribucin que segua el cloro y los cloruros en relacin con cientficospero tambin mostr, al igual que otras
las fibras y clulas nerviosas. investigadoras, que aunque a
veces nos obcequemos en
Sin embargo, y a pesar de ellos y creamos que son
todos sus logros cientficos, insalvables, el afn por
Maud Menten no logr que se investigar puede con los
le concediese la plaza definitiva obstculos ms
de profesora titular (antes era infranqueables. En nuestra
profesora numeraria) hasta modesta opinin creemos
1949, cuando tena la friolera que seguir el ejemplo de
de69 aos!! Este hecho Maud Menten en su forma
demuestra dos cosas: el poco de abordar la investigacin
reconocimiento acadmico a las nos debe servir de ejemplo a
mujeres investigadoras de la muchos, entre los cuales nos
poca y, sobre todo, la incluimos.
tenacidad de esta cientfica
canadiense por conseguir uno Pero el hecho de que
de sus objetivos prioritarios en Leonor Maud Menten fuese
la vida: ser profesora un ejemplo a seguir no le
universitaria. quita un pice de importancia
a la labor de Leonor
A pesar de que nuestra Michaelis, un cientfico de
protagonista se jubil como profesora en 1950, sigui gran fama brillantemente reconocido en todo el mundo y
investigando hasta que su salud se lo permiti. Durante un cuyo discurrir por el mundo de la investigacin y la docencia
corto periodo de tiempo, entre 1951 y 1954, Maud Menten fue todo un xito desde el inicio hasta el final de su carrera.
form parte del Medical Institute of British Columbia donde Tenemos la mana de desmitificar a todos aquellos que, a
condujo la investigacin sobre el cncer. Seis aos antes de su pesar de haber obtenido resultados que han quedado para la
muerte en 1960 se traslad nuevamente a Ontario. historia, no han tenido las dificultades de otros. Y eso no es
justo.
Pero por si todo lo relatado acerca de la intensa vida de
Maud Menten les pareciese poco, no debemos olvidar que LINEWEAVER -BURK?
esta mujer desarroll una gran capacidad y aficin por los
idiomas, la msica, y las bellas artes, hasta el punto de Leonor Michaelis y Maud Menten, ambos grandes
realizar un significativo nmero de exposiciones de pintura cientficos, fueron los padres de la cintica enzimtica que
con otros artistas de Pittsburgh. tantos quebraderos de cabeza ha dado a los bioqumicos pero
tambin enormes satisfacciones. Quieren saber una de ellas?
Estamos seguros de que ustedes se han dado cuenta de Ah va: la famosa ecuacin de Michaelis-Menten que es
que en esta historia hemos hecho mucha ms incidencia en empleada a diario por miles de bioqumicos para el clculo de
Maud Leonora Menten que en Leonor Michaelis. Por qu? constantes cinticas de todo tipo dio lugar, de forma
Porque estamos hablando de una mujer cuya carrera indirecta, a una joya literaria: uno de los artculos ms
investigadora y docente no fue precisamente un paseo de referenciados de la historia de la ciencia. Veamos.
rosas pero que, durante toda su vida nos dej un legado
mucho ms all de la cintica enzimtica que le encumbr a A la hora de llevar a la prctica la cintica de Michaelis-
la fama. Es posible que Maud Menten no tenga la fama de Menten la mayora de los bioqumicos recurrimos al famoso
Revista Eubacteria. Cien aos de avances en ciencias de la vida. N 34. 2015. ISSN 1697-0071 41
Revista Eubacteria

diagrama de Lineweaver-Burk que se emplea como haya ocupado uno de los primeros puestos dentro de los
herramienta grfica para calcular los parmetros cinticos de artculos ms referenciados de toda la historia de la ciencia.
una enzima. Su utilidad se basa en que el recproco de la
cintica de Michaelis-Menten ya que es fcilmente
representable y de dicho diagrama emana mucha Y dnde podemos encontrar este famoso artculo?
informacin de inters en el campo de la bioqumica. Pues en contra de lo que puedan pensar no se public en
Nature, ni en Science, ni en Cell, ni en ninguna de las Top
Ten de las revistas cientficas. Adems, y como hemos
comentado, el objeto del estudio no fue el cncer, ni el SIDA,
ni el Alzheimer, ni nada por el estilo. La revista donde est
publicado uno de los trabajos ms referenciado de la historia
Figura 6. Expresin de Lineweaver-Burk. es de sobra conocida en el mbito cientfico, Journal of the
American Chemical Society, perteneciente a la American
Chemical Society, y el tema de estudio nuestra querida
La representacin grfica de Lineweaver-Burk permite cintica enzimtica. La referencia completa es: The
identificar la Km (constante de Michaelis-Menten) y Vmax Determination of Enzyme Dissociation Constants. Journal of
(velocidad mxima); el punto de corte con el eje de the American Chemical Society 56: pp.658-666. 1934.
ordenadas es el equivalente a la inversa de Vmax, y el de
abscisas es el valor de 1/ Km as de fcil. Es cierto que la Y quin fue Lineweaver-Burk? Pues volvemos al caso de
representacin de Lineweaver-Burk presenta algunos Michaelis-Menten. Lineweaver-Burk, de la misma forma que
inconvenientes ya que, al requerir de dobles inversos, ocurra con Michaelis-Menten, son dos personas y no una.
pequeos errores experimentales pueden conducir a grandes Hans Lineweaver y Dean Burk y al igual que nos decantamos
errores. Adems, el hecho de que a altas concentraciones los por Maud Menten anteriormente ahora lo vamos a hacer por
puntos se aglutinen al principio de la grfica puede dar lugar Hans Lineweaver. Por qu? Porque este qumico-fsico
a clculos errneos. Sin embargo, si los experimentos se norteamericano lleg a publicar el famoso artculo sobre el
plantean correctamente desde el punto de vista que hoy versa esta entrada siendo todava un estudiante y
metodolgico, los resultados son totalmente fiables. porque este seor vivi ni ms ni menos que 101 aos!

Hans Lineweaver naci en Pickens (Virginia Oeste) el da


de Navidad de 1907. Se licenci en Qumicas en la
Universidad George Washington en 1930 doctorndose en
Qumica Fsica en la Universidad Johns Hopkins seis aos ms
tarde. Pero aunque le dedic gran tiempo de su carrera
cientfica a la bioqumica en general y a la enzimologa en
particular, Hans Lineweaver destac en muchos otros
campos como la Ciencia y Tecnologa de los Alimentos. De
hecho no solo fue el responsable del primer mtodo de
pasteurizacin de la clara de huevo aprobado por el gobierno
americano sino que patent un proceso para convertir las
plumas de algunos animales en productos para alimentacin.
Figura 7. Representacin grfica de Lineweaver-Burk.
Durante su carrera, Lineweaver fue el autor o co-autor
Y este planteamiento tan sencillo tuvo tanta de cerca de 100 publicaciones tcnicas y seis patentes lo que
repercusin en la comunidad bioqumica? S. Lo lgico sera le llev a recibir decenas de premios y menciones, entre ellos
pensar que lo que acabamos de contarles es tremendamente el Premio Nicols Appert, del Instituto de Tecnlogos de
simple y realmente lo es, pero a pesar de que la Alimentos (IFT) en 1973.
representacin del doble recproco de una hiprbola
cuadrangular era conocida por los matemticos antes de que
se publicara el trabajo de Lineweaver-Burk, su aplicacin en el
campo de la bioqumica era indito. Sin embargo, desde la
publicacin del mismo, la doble inversa de Lineweaver-Burk
se ha empleado continuamente en miles de trabajos
bioqumicos lo que ha provocado que durante mucho tiempo

Revista Eubacteria. Cien aos de avances en ciencias de la vida. N 34. 2015. ISSN 1697-0071 42
Revista Eubacteria

importantes como Km y Vmax de la ecuacin de Michaelis-


Menten pero que est menos afectado por el margen de
error que el diagrama de Lineweaver-Burk ya que asigna el
mismo peso a todos los puntos para cualquier concentracin
del sustrato o velocidad de reaccin.

Figura 8. Hans Lineweaver (izquierda) y Dean Burk (derecha).

Aunque seamos fieles seguidores de Hans no le


quitamos mrito a Dean Burk, el bioqumico americano co-
descubridor de la biotina que dirigi el trabajo que les dio la
fama a esta pareja que ha quedado unida para la
eternidad.y decimos dirigi porque Burk fue el mentor de
Lineweaver, el que lo acogi en el Departamento de
Agricultura estadounidense cuando Hans era un simple
alumno y lo catapult a la fama.

Burk naci en Oakland (California) en 1904 e ingres en


Figura 9. Los cuatro mosqueteros sobre la enzima 15- lipoxigenasa humana
la Universidad de California en Davis cuando solo tena 15 de reticulocito.
aos. Un ao ms tarde se traslad a la Universidad de
Berkeley donde se gradu en entomologa en 1923 y, cuatro
aos despus, se doctor en bioqumica. Dean Burk, al igual Sin embargo, y a pesar de que cmo ya se imaginarn
que Maud Menten, se adentr con xito en varias disciplinas G.S. Eadie y B.H.J. Hofstee eran dos personas y no una,
cientficas. En 1929 se uni al Departamento de Agricultura preferimos quedarnos con los 4 mosqueteros y que de los dos
estadounidense donde trabaj en la lnea de fijacin del seores responsables del Diagrama de Eadie-Hofstee
nitrgeno y en 1939 ingres en el Instituto de Cncer alguien escriba en el siguiente centenario de la Universidad
llegando dirigir el laboratorio citoqumica hasta que se retir de Murcia no sea que ustedes se inhiban por exceso de
en 1974 y fue uno de los ms prestigiosos investigadores en la producto, se agoten por acumulacin de sustrato o se
lucha contra el cncer. Adems, esta fuerza de la naturaleza inactiven por suicidio enzimtico
como le denominaban algunos, tambin desarroll el primer
prototipo de las actuales resonancias magnticas y por su
trabajo en la fotosntesis recibi el Premio Hillebrand en
REFERENCIAS
1952. Un genio que falleci en Washington en 1988.
Leonor Michaelis. 1875-1949 (PDF; 2,4MB). A Biographical Memoir by L.
Michaelis, D. A. MacInnes, S. Granick J., National Academy of Sciences.
Estimados lectores, si han llegado hasta aqu habrn
descubierto quienes son para nosotros los 4 mosqueteros de "Dr. Maud Menten". The Canadian Medical Hall of Fame. Retrieved 14
la cintica enzimtica: Leonor Michaelis, Maud Leonora October 2014.
Menten, Hans Lineweaver y Dean Burk. Gracias a su trabajo
Associated Press. (1988). Dean Burk, 84, Chemist for Cancer Institute. New
de hace muchos aos los bioqumicos de hoy en da York Times.
disponemos de herramientas de gran valor para conocer
cmo funcionan muchas enzimas. Lineweaver, H y Burk, D. (1934). The Determination of Enzyme Dissociation
Constants". Journal of the American Chemical Society, 56 (3): 658-666.
Habamos pensado convertir los 4 mosqueteros en el Haldane, J.B.S (1957). "Graphical methods in enzyme chemistry". Nature,
tridente mgico. Cmo? Incluyendo en este artculo a los 179: 832. http://www.mcnbiografias.com/
responsables del Diagrama de Eadie-Hofstee. Este diagrama
permite visualizar rpidamente los parmetros cinticos
Revista Eubacteria. Cien aos de avances en ciencias de la vida. N 34. 2015. ISSN 1697-0071 43