TITULO: Brucella

INTRODUCCION

Brucella pertenece a la familia Brucellaceae. Son bacilos cortos o cocobacilos Gram

negativo, con tamao entre 0,5-0,7 x 0,6-1,5 micras, aerobios, inmviles, no formadores
de esporas ni cpsulas y de crecimiento lento.
Se trata de parsitos intracelulares facultativos, pudiendo resistir en las clulas
fagocitarias. Son mayormente conocidas por ser causantes de la enfermedad de
Brucelosis.

Supervivencia ambiental

Brucella puede sobrevivir durante ms de dos meses en agua a 20C, dos meses en el

suelo y pasto fresco en un ambiente h- medo, hasta 8 meses en purines y muchos meses
en sustratos secos (heno, polvo, lana, equipos y tiles de trabajo, etc.). La supervivencia

es ms prolongada cuando la temperatura es baja, principalmente cuando se encuentra

por debajo del punto de congelacin.

Tambin puede sobrevivir durante meses en rganos y carcasas de animales, o en sangre

a 4C. En la carne sobrevive duran- te periodos de tiempo muy cortos, salvo si est
congelada, en cuyo caso puede so- brevivir durante aos.

Clasificacion:

B. abortus: bovinos, equinos.

B. canis: cnidos.
B. melitensis: caprinos, ovinos, camlidos

B. suis: porcinos, lepridos.

OBJETIVOS:

Ensear al estudiante las tcnicas para determiner la presencia de brucela en los

alimentos carnicos .
Indigar medidas preventivas para evitar que nuestros animales contraigan la
brucelosis

REVISIN DE LITERATURA:

Qu es la brucelosis?

La brucelosis es una enfermedad propia de los mamferos, ya que son capaces de alojar

en forma natural a distintas especies de brucela, el microorganismo que la causa; provoca

grandes prdidas econmicas en la ganadera y es una zoonosis de importancia mundial

a la que se conoce como fiebre de Malta o fiebre ondulante. Su impacto en la economa

ganadera se debe a que la manifestacin clnica ms evidente de la brucelosis es el

aborto, el cual, adems de implicar la prdida de la cra y del periodo de produccin de la

leche, merma la salud del animal.

Los animales pueden infectarse porque tienen la costumbre de lamer las membranas
fetales, los fetos abortados, las cras recin nacidas y los rganos genitales de otras

hembras infectadas. Ms de las dos terceras partes de las vacas preadas abortan,

cursando el resto de ellas una gestacin sin incidentes, lo que propicia que, de manera

accidental, el personal a cargo de los rebaos se contagie. As, los animales que en

apariencia estn sanos, mantienen la bacteria dentro de la unidad de produccin,

diseminndola por la leche o durante los partos. La va de infeccin ms importante es la

digestiva u oral. En los seres humanos, el contagio ocurre por la ingestin de leche o de

sus derivados no pasteurizados. Tambin hay contagio por va cutnea si hay lesiones en

la piel que faciliten la penetracin del microorganismo.

Las personas que enferman de brucelosis presentan sntomas que van desde periodos de
aparente mejora hasta periodos en los que sufren fiebres, por lo que su diagnstico es

difcil. Dado que el nmero de muertes producidas por esta enfermedad es baja, el inters

de los mdicos por ella es poco frecuente si se les compara con los mdicos veterinarios,
quienes enfrentan los problemas concernientes a esta infeccin; son ellos, adems de los

trabajadores de zonas rurales, quienes estn expuestos al contagio por las prcticas

rutinarias en el campo. No obstante, el grupo ms vulnerable a la brucelosis humana son

mujeres cuya ocupacin es ser amas de casa o estudiantes y con edades de entre 14 y

45 aos de edad, que en conjunto representan 60% de los casos y que nada tienen que
ver con las actividades agropecuarias.

Mecanismo de propagacin y transmission:

La transmisin se puede producir por el aire mediante la inhalacin de bioaeroso- les, as

como por contacto directo de las mucosas, la piel lesionada y, posiblemen- te, la piel

intacta, con tejidos, sangre, ori- na, secreciones vaginales, fetos abortados y, en especial,

placenta de animales enfer- mos (zoonosis).

Tambin se puede transmitir por inocula- cin accidental de la vacuna viva atenuada para

Brucella.
Adems, se puede transmitir por ingestin de leche cruda, productos lcteos (queso) sin
pasteurizar y carne cruda o poco coci- nada, procedentes de animales infectados.

Por ltimo, se puede producir la transmi- sin vertical de madre a hijo va transpla- centaria

y, rara vez, a travs de la lactancia.

La transmisin de persona a persona es ex- tremadamente rara.

Vas de entrada:

Respiratoria. Mucosas. Drmica. Parente- ral. Digestiva.

Actividades laborales con riesgo:

Agricultura, silvicultura, explotacin forestal y jardinera. Ganadera, caza, cap- tura de

animales y servicios relacionados. Zoolgicos, circos, tiendas de mascotas, protectoras
de animales. Veterinaria. Procesado, conservacin de carne y elaboracin de productos
crnicos; procesado de la leche y fabricacin de productos lcteos. Suministro de agua,
actividades de saneamiento, gestin de residuos y limpieza urbana. Servicios de comidas
y bebidas. Fabricacin de productos farma- cuticos. Actividades sanitarias y
laboratorios.

Infeccin:

Brucelosis (fiebre de Malta, fiebre ondulante, fiebre mediterrnea): se caracteriza por la

aparicin aguda e insidiosa de fiebre elevada (principalmente nocturna), dolor de cabeza,
debilidad, sudor profuso, anorexia, escalofros, artralgias, prdida de peso y malestar
generalizado. En muchos casos, se produce una recuperacin espontnea al cabo de 2
a 4 semanas. En otros, se puede desarrollar la forma subaguda de la enfermedad, que
incluye fiebre intermitente (ondulante) y puede ir acompaada de complicaciones
osteoarticulares, neuromenngeas, genitourinarias, o endocarditis, siendo esta ltima la
principal causa de muerte en individuos no tratados. La forma crnica, menos frecuente,
puede surgir entre 6 meses y un ao tras la aparicin de los sntomas, y puede
presentarse con sntomas generales (astenia fsica e intelectual, sndromenas,
trimetoprim-sulfametoxazol (TMP- SMX), rifampicina y gentamicina

Medidas preventivas generales:

Control sanitario de los animales y sacrificio del ganado infectado, cumpliendo con lo
dispuesto en el Real Decreto 2611/1996, de 20 de diciembre, por el que se regulan los
programas nacionales de erradicacin de enfermedades de los animales.
Mantener los locales en condiciones adecuadas de ventilacin, limpieza y desinfeccin.
Evitar ingerir productos de riesgo, como leche, productos lcteos no pasteuriza- dos o
carne cruda.
Seguir unas correctas prcticas de higiene en el trabajo: aseo personal, prohibicin de
comer en zonas de riesgos, evitar la exposicin de heridas abiertas. Utilizacin de ropa
de trabajo y equipos de proteccin individual adecuados.
En hospitales o centros sanitarios, adop- tar las Precauciones Estndar.
Seguridad en laboratorio:

Nivel de contencin 2/3

Los principales riesgos son la inhalacin de bioaerosoles, el contacto directo de la piel y
las mucosas con cultivos del agente o muestras de animales infectados, y la inoculacin
percutnea accidental.
Las muestras o especmenes ms peligrosos son los cultivos, sangre, tejidos, pla- centas,
fetos, orina, secreciones vaginales, heces y leche.
Se requieren las prcticas y la contencin de un nivel 2 de bioseguridad cuando se
manipulen materiales clnicos de origen animal o humano, y de un nivel 3 de bioseguridad
para la manipulacin de cultivos y estudios experimentales con animales infectados.
Tambin es preferible un nivel 3 cuando se trabaje con grandes cantidades de muestra
o la prctica implique riesgo alto de generacin de bioaerosoles.

examen microscpico:

Una vez observado el crecimiento en el medio difsico o cuando el aparato automtico

de hemocultivo detecta un posible
crecimiento, la simple tincin de Gram permite hacer el diagnstico presuntivo de la
enfermedad. Brucella spp presenta unas
caractersticas tintoriales especiales: aunque no es una bacteria cido-alcohol resistente,
no sufre decoloracin con cidos
dbiles. As mismo, tambin la tincin de Gram es peculiar: si el tiempo de exposicin al
alcohol-acetona es muy breve (simple
arrastre por el porta del decolorante, en vez de tiempos de decoloracin ms
prolongados), presenta una decoloracin irregular,
pudiendo observarse en la misma muestra la coexistencia de pequeos cocobacilos
gramnegativos y grampositivos. No es
extrao, en contra de los que se cree, tener un diagnstico presuntivo de brucelosis por
hemocultivo en dos o tres das.
Subcultivo y aspecto colonial:

El subcultivo del medio difsico o del frasco procedente del aparato automtico, en medio
con agar-sangre o agar-chocolate,
muestra el crecimiento, al cabo de 48 horas, de pequeas colonias brillantes, de diferente
tamao y de color miel claro. Si no se
observan cuidadosamente las placas, en casos con crecimiento de escaso nmero de
colonias, se puede falsear errneamente
algn diagnstico. Tras la tincin de Gram de estas colonias para observar su aspecto
caracterstico, se realizar la reaccin de
la oxidasa (positiva) y aglutinacin con suero especfico frente a Brucella, suficiente para
identificar el aislamiento.

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR):

Dada la extrema sensibilidad que muestra la deteccin de DNA bacteriano madiante PCR
en las distintas muestras estudiadas,
es muy probable que en los prximos aos se aplique la PCR a muestras de enfermos
con sospecha de brucelosis, permitiendo
el diagnstico de la enfermedad con criterios de certeza en aqullos casos en los que
hoy no podemos dar una respuesta
precisa.

DIAGNOSTICO INDIRECTO:

Las pruebas serolgicas indican las titulaciones de anticuerpos especficos presentes en

cada paciente. Las ms utilizadas se
comentan a continuacin.

Aglutinacin.:

En sus diferentes modalidades, es la prueba ms utilizada debido a su rapidez y

sensibilidad. El aumento significativo del ttulo de
anticuerpos es la base diagnstica de la enfermedad.
 Rosa de Bengala:
utiliza como antgeno en una suspensin bacteriana a la que se ha aadido el
colorante rosa de
bengala, enfrentndola al suero sin diluir del enfermo. Proporciona una aproximacin
diagnstica en pocos minutos con
una sensibilidad y especificidad muy altas. Presenta elevado grado de correlacin con la
seroaglutinacin y, por su
simplicidad, es muy til como prueba de despistaje inicial o screening. Sus falsos
negativos se limitan a enfermos con
procesos de pocos das de evolucin y a algunos casos de enfermedad de curso muy
prolongado.

Seroglutinacin en tubo o placa con pocillos:

enfrenta diluciones crecientes del suero problema a una cantidad
constante de B. abortus. Este antgeno reacciona tanto con anticuerpos de esa especie
como frente a los de B. melitensis
y B. suis, que son las tres especies responsables en la practica de la totalidad de
enfermos con brucelosis. El ttulo
positivo de 1/160 se considera, en un pas endmico como Espaa, el punto de corte en
el diagnstico de la enfermedad,
no siendo raros los ttulos de 1/640 o superiores en las fases iniciales de la enfermedad.
Su interpretacin requiere
conocer los antecedentes del enfermo y valorar las caractersticas clnicas presentes
puesto que, al inicio de la
enfermedad o en casos muy avanzados de la misma, la prueba puede ser, como el Rosa
de Bengala, negativa. Debido a
que los anticuerpos responsables de la seroaglutinacin son fundamentalmente de la
clase IgM, lo habitual es que vayan
descendiendo en el transcurso de 3-6 meses, con o sin curacin de la enfermedad.

Prueba de Coombs:
es de gran inters para el diagnstico de la brucelosis crnica. Se utiliza para
demostrar la
presencia de anticuerpos aglutinantes y no aglutinantes, fundamentalmente IgG. El suero
de Coombs (inmunoglobulina humana) se encargara de facilitar la aglutinacin de los
anticuerpos no aglutinantes del suero problema, fijados a la
suspensin antignica de B. abortus. El ttulo obtenido es, por ello, como mnimo el de la
aglutinacin y generalmente es
mucho ms elevado, tanto ms cuanto mayor es el tiempo de evolucin de la
enfermedad. Pueden persistir en ocasiones
de forma prolongada y con titulacin elevada, incluso en pacientes con tratamiento
adecuado y buena evolucin clnica.
Hay que citar como posibles falsos positivos las reacciones cruzadas con Vibrio cholerae,
Francisella tularensis y Yersinia
enterocoltica 09, patgenos raros en nuestro pas.

Seroaglutinacin tras tratamiento del suero con 2-

mercaptoetanol:
es una modificacin de la seroaglutinacin en la
que se usa solucin salina al 0,85% con 0,1M de 2-mercaptoetanol. Este compuesto es
capaz de destruir las molculas
de IgM, perdiendo stas su capacidad aglutinante, sin interferir con las de IgG que son
las que se cuantifican. Aunque se
consideraba la persistencia de anticuerpos resistentes al tratamiento con 2-
mercaptoetanol como indicativa de actividad
de la enfermedad, esta afirmacin clsica es hoy muy cuestionable y en la actualidad
prcticamente no se utiliza.
En general, la prctica de la seroaglutinacin y la prueba de Coombs conjuntamente,
permiten el diagnstico de la
mayora de los casos. La negatividad de ambas pruebas, salvo en los primeros das de
la enfermedad excluye la
brucelosis. La limitacin ms importante de las pruebas de aglutinacin es que no
permiten conocer el estado de
actividad de la brucelosis.

Enzimoinmunoanlisis:

Con estas tcnicas podemos detectar la presencia de los anticuerpos especficos que
seleccionemos (IgG, IgM o IgA),
con unos valores excelentes de sensibilidad y especificidad. El antgeno absorbido sobre
placas de poliestireno es,
fundamentalemente, el lipopolisacrido de brucelas en fase lisa. Los anticuerpos IgM, por
su rpida desaparicin son
valorables, pero no puede olvidarse que los anticuerpos IgG pueden persistir en sujetos
curados. Aunque permiten
conocer con una mayor precisin el perfil de las inmunoglobulinas en el curso de la
enfermedad, tampoco ofrecen la
posibilidad de establecer un criterio para discernir entre curacin y evolucin a cronicidad.
 Inmunofluorescencia indirecta y fijacin de complemento:

Presentan una mayor complejidad tcnica sin aportar nada a los mtodos anteriormente
descritos, por lo que no suelen
utilizarse.