You are on page 1of 5

METODE

1. TAHAP PREPARASI
a. Persiapan larutan ophthalmic (1,5% w/v, pH 7,0) dengan pengawet yang berbeda

Voriconazole (150mg) dan HP--cd (2.5gr)

Dilarutkan dengan air destilasi


Ditambahkan NaCl (0,687gr) sambil diaduk dengan
magnetic stirrer
Larutan

Ditambahkan pengawet (digunakan berbagai pengawet


yaitu BAK/benzylalcohol/thiomerosal/phenyl mercury
asetat/ phenyl merkuri nitrat/ disodium edetate/
kombinasi BAK dan EDTA)
Dilakukan pengaturan pH larutan agar = 7 dengan
menambahkan 0,1N HCl atau 0,1N NaOH
Menambahkan sisa aquades sampai volume 10mL
Masukkan kedalam wadah

hasil

b. Persiapan larutan ophthalmic (1,5% w/v, pH 7,0), benzalkonium chloride


(BAK=0,01%) dan edta (0,01%) dengan viscosity agent yang berbeda

Voriconazole (150mg) dan HP--cd (2.5gr)

Dilarutkan dengan air destilasi


Ditambahkan NaCl (0,687gr) dan BAK & EDTA
sambil diaduk dengan magnetic stirrer
Larutan

Ditambahkan viscosity agent yang berbeda-beda


(sodium alginate/chitosan/ polivinylalcohol/ CMC-
Na/xanthan gum/ guar gum/gelrite)
Dilakukan pengaturan pH larutan agar = 7 dengan
menambahkan 0,1N HCl atau 0,1N NaOH
Menambahkan sisa aquades sampai volume 10mL
Masukkan kedalam wadah

hasil

2. EVALUASI
a. Menentukan viskositas
Efek viscosity agent yang berbeda dalam larutan vorikonazol ophthalmic yang
mengandung pengubah viskositas berbeda pula ditentukan oleh viskometer.
Pengubah viskositas dapat mempengaruhi permeasi dengan memodifikasi waktu
kontak kornea.
b. Permeabilitas invitro traskorneal
Penelitian permeasi obat dilakukan dengan menggunakan kornea kambing yang
baru dipotong. Bola mata kambing utuh diangkut dari toko daging lokal ke
laboratorium dengan garam normal yang dingin (4C) dalam waktu 1 jam setelah
pemotongan hewan. Kornea diisapi dengan hati-hati dengan 2 sampai 4mm
jaringan sklera di sekitarnya dan dicuci dengan garam normal yang dingin.
Sampai pencucian bebas dari protein. Kompartemen reseptor sel difusi Franz
yang dimodifikasi seluruhnya diisi dengan larutan garam normal 10mL yang baru
disiapkan (pH 7.0), dan semua gelembung udara dikeluarkan dari kompartemen.
Kornea yang baru dipotong dipadatkan antara kompartemen donor dan reseptor
yang dijepit sedemikian rupa sehingga permukaan epitelnya menghadap
kompartemen donor. Area kornea yang tersedia untuk difusi adalah 0,75 cm2.
Alliquot (1mL) larutan uji ditempatkan pada kornea dan pembukaan sel donor
disegel dengan penutup kaca. Cairan reseptor disimpan pada suhu 37 C dengan
pengadukan konstan menggunakan manik aduk magnetik dilapisi Teflon. Studi
permeasi dilanjutkan selama 120 menit, dan sampel diambil dari reseptor dan
dianalisis untuk kandungan vorikonazol dengan mengukur absorbansi pada 257
nm dalam spektrofotometer (spektrofotometer UV-Vis 2701 A Systronics,
Mumbai, India). Hasil disajikan sebagai jumlah permeat dan permeasi persentase
atau ketersediaan okular in vitro. Koefisien permeabilitas kornea yang nyata dan
permeabilitas persentase (atau ketersediaan okular in vitro) dihitung sebagai
berikut:

Q/t (g/min) adalah Fluks di jaringan kornea, adalah daerah difusi (cm2),
(g / cm3) adalah konsentrasi awal obat di kompartemen donor, dan 60 diambil
sebagai faktor untuk mengkonversi dari menit ke detik:

c. Hidrasi kornea (%).


Pada akhir setiap studi permeasi, kornea (terbebas dari sklera yang menempel)
ditimbang dan direndam dalam 1mLmethanol dan dikeringkan semalam pada
suhu 90 C dan ditimbang ulang.

d. Kekuatan Bioadhesive.
Kekuatan bioadhesif polimer mucin ditentukan dengan metode viskometrik
sederhana yang dijelaskan oleh Hassan dan Gallo [11]. Viskositas 15% (w / v)
dispersi mukus pankreas dalam larutan garam normal ditentukan oleh viskometer
Brookfield dengan tidak adanya () atau kehadiran () dari formulasi berbeda
pada kecepatan 100 rpm pada suhu 37 C. Pengukuran viscometrik dilakukan
setelah tepat 3 menit menerapkan gaya geser agar terdistribusi secara homogen ke
seluruh sampel. Komponen viskositas bioadesi () dihitung dari persamaan, =
+ + , di mana adalah viskositas larutan polimer murni yang sesuai.
Kekuatan bioadhesion () dihitung dari persamaan, = , di mana adalah
laju geser / detik.
e. Studi Stabilitas.
Studi stabilitas dilakukan pada larutan oftalmik vorikonazol sesuai dengan
pedoman ICH. Semua formulasi oftalmik disimpan dalam botol kaca amber
tertutup dan disimpan di ruang kelembaban dengan akselerasi (40 2C, 75 5%
RH) dan kondisi suhu kamar (30C2C,65%RH5%RH). Sampel ditarik pada
interval waktu 0 hari, 3 minggu, 6 minggu, 3 bulan, dan 6 bulan. Sampel diperiksa
untuk kandungan obat dan pH. Konstanta laju degradasi (calc), umur simpan
(90), dan konsentrasi awal memberikan umur simpan dua tahun (Intcalc)
ditentukan
f. Studi Antijamur.
Sabreaud dextrose agar (pepton mikologi 10mg, dekstrosa 10 g) digunakan untuk
menyiapkan medium. Sabreaud dextrose agar digunakan dalam jumlah 65 g dan
dilarutkan dengan pemanasan dalam satu liter air suling dengan agitasi yang
sering dan direbus selama 1 menit untuk benar-benar melarutkan bedak.
Autoclave media pada 121C selama 15 menit. Media dituangkan ke dalam piring
plastik berdiameter 200mm dan dibiarkan memantapkannya selama 15 menit.
Sumur berdiameter 10mm dilempar keluar menggunakan penggerek baja.
Aktivitas antijamur vorikonazol yang mengandung viskositas permeabel yang
berbeda diukur dengan metode mikrobioassay plate (agar cup diffusion). Candida
albicans dan Aspergillus fumigatus diinokulasi ke permukaan agar oleh goresan.
Alliquot dari 50 L sampel uji ditempatkan di sumur 10mm terpisah dalam
rangkap tiga setelah pengenceran yang tepat dengan air suling. Pelat dibiarkan
selama 30 menit dan kemudian diinkubasi pada suhu 25 C selama 24 jam.
Diameter zona penghambatan Candida albicans Dan Aspergillus fumigatus diukur
setelah 24 jam dan 120 jam.
g. Analisis statistik.
Semua nilai yang disajikan dalam penelitian ini adalah rata-rata eksperimen
rangkap tiga untuk titik waktu yang sama. Perbedaan profil permeabilitas in vitro
voriokonazol dalam kondisi yang berbeda diuji secara statistik dengan
menggunakan analisis varians satu arah (ANOVA) yang diikuti oleh uji Dunnett
pada tingkat signifikansi yang berbeda.