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ACADMICOS
CULTURA DE TECIDOS
Renato Paiva
Patrcia Duarte de Oliveira Paiva
CURSO DE PS-GRADUAO
LATO S E N S U " (ESPECIALIZAO) A DISTNCIA
BIOTECNOLOGIA: FUNDAMENTOS TCNICOS,
APLICAES E PERSPECTIVAS
CULTURA DE TECIDOS
Renato Paiva
Patrcia Duarte de Oliveira Paiva
2.1. INTRODUO 9
2.2. ESTRUTURA FSICA 10
2.2.1. Sala de limpeza 11
2.2.2. Sala de preparo 12
2.2.3. Sala de transferncia 12
2.2.4. Sala de cultura ou sala de crescimento 12
2.2.5. Instalaes de apoio 12
2.3. EQUIPAMENTOS NECESSRIOS 12
2.4. VIDRARIAS UTILIZADAS 18
3. MEIOS DE CULTURA 22
3.1. INTRODUO 22
3.2. COMPOSIO DOS MEIOS DE CULTURA 22
3.2.1. gua 23
3.2.2. Nutrio mineral 23
3.2.3. Nutrio orgnica 25
3.2.4. Materiais de suporte 30
3.2.5. Qualidades fsicas do meio de cultura 31
3.2.6. pH 31
3.2.7. Quantidade de meio 31
3.2.8. Condies de incubao 32
3.2.9. Esterilizao do meio de cultura 34
4.1. INTRODUO 36
4 2. CALOGNESE 36
4.2.1. Aplicao da cultura de calos 38
4.2.2. Tcnicas para estabelecimento de calos 38
4.2.3. Tipos de calos 38
4.2.4. Tamanho, tempo de repicagem e manuteno de calos na subcultura 38
4.3. SUSPENSO CELULAR 39
4.3.1. Aplicaes da suspenso celular: 39
4.3.2. Mtodos mais utilizados para medir o crescimento celular: 39
4.3.3. Importncia da curva de crescimento 41
4.4. CULTURA DE ANTERAS 41
4.4.1. Protocolo para a obteno de haploides 42
4.4.2. Fatores que influenciam a andrognese 42
4.4.3. Identificao de haploides 43
4.4.4. Problemas 43
4.4.5. Utilizao de plantas haplides 43
4.5.; CULTURA DE ESTRUTURAS ORGANIZADAS 44
4.5.1.,Cultura de Meristemas 44
4.5.2. Cultura de Embries 46
5. MULTIPLICAO 50
5.1. INTRODUO 50
5.2. FASES DA MICROPROPAGAO 51
5.2.1. Fase preparativa (Estdio 0) 51
5.2.2. Incio do cultivo (Estgio 1) 52
5.2.3. Multiplicao (Estgio 2) 53
5.2.4. Alongamento de brotaes e induo de raiz (Estgio 3): 54
5.2.5. Transferncia para as condies de casa de vegetao (Estgio 4): 55
5.3. PRODUO DE MUDAS LIVRES DE ENFERMIDADES 55
5.3.1. Termoterapia 55
5.3.2. Cultura de meristema 55
5.3.3. Termoterapia seguida de cultura de meristema 56
5.3.4. Microenxertia 5 6
6. ENRAIZAMENTO 58
6.1. INTRODUO 5 8
7. ACLIMATIZAO 64
7.1. INTRODUO 6 4
8. FOTOMORFOGNESE IN VITRO 68
8.1. INTRODUO 68
8.2. LUZ E LMPADAS 68
8.3. RESPOSTAS DA PLANTA LUZ 69
8.4. FOTOMORFOGNESE E CULTURA DE TECIDOS 69
8.4.1. Comprimento de onda 70
8.4.2. Intensidade de luz (irradincia) 70
8.4.3. Comprimento do dia (fotoperodo) 71
9.1. INTRODUO 72
9.2. OXIDAO 72
9.3. DECLNIO NO VIGOR 74
9.3.1. Declnio na taxa de proliferao 74
9.3.2. Habituao 75
9.4. NECROSES 75
9.4.1. Necrose apical em brotaes 75
9.4.2. Como evitar a necrose 76
9.5. VITRIFICAO (HIPERHIDRICIDADE) 76
9.5.1. Ocorrncia 77
9.5.2. Fatores que influenciam a vitrificao 77
9.5.3. Preveno da vitrificao 78
10.1. INTRODUO 80
10.2. APLICAES DA CULTURA DE TECIDOS NA PROPAGAO ASSEXUADA 80
10.3. APLICAES EM FITOPATOLOGIA 81
10.4. APLICAES NO MELHORAMENTO GENTICO 81
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 92
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1
CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS
Renato Paiva 1
Renato Paiva 2
2.1. INTRODUO
...
10 EDITORA - UFLA/FAEPE - Cultura de Tecidos
Sala de Transferencia
3 i ~<\<XJJ$LQJJ>** cj
n Sala de Preparo
fede rciOJ<Aj.GX.
Figura 9: Aspecto visual de um tubo de ensaio (A) e um frasco de vidro (B) para
cultivo in vitro.
w
Para o preparo das solues, so utilizados beckers, erlenmeyers, provetas,
buretas, pipetas, placas de Petri e bastes de vidro. aconselhvel que se tenha
beckers e erlenmeyers com capacidade variando entre 25 a 2000 mL e provetas de
10 a 1000 mL (Figura 10).
w
Laboratrio de Cultura de Tecidos 19
Renato Paiva 2
3.1. INTRODUO
3.2.1. gua
A qualidade da gua muito importante em cultura de tecidos vegetais, uma
vez que este o componente que entra em maior proporo na preparao do meio.
Para melhor controle deve-se usar gua destilada, bidestilada e deionizada. A
utilizao de gua de torneira pode comprometer o desenvolvimento da cultura.
oxidada um prton.
h) Carbono forma o esqueleto de todos os compostos orgnicos.
i) Oxignio similar ao carbono, tambm um dos componentes de todos os
compostos orgnicos do organismo vivo: carboidratos, lipdios, cidos nuclicos,
produtos naturais. O papel do oxignio livre receptor de eltrons na respirao.
j) Ferro adicionado na forma de Fe-EDTA. Envolvido nas reaes de oxi-
reduo nos organismos vivos. H muitos matablitos contendo ferro. Essencial para
a sntese da clorofila, integrante do grupo proteico (heme) das porfirinas.
k) Boro usado na forma de cido brico. Envolvido no metabolismo de
carboidratos e cidos nuclicos. Importante na germinao de gros de plen e
crescimento do tubo polnico. s -
c) Vitaminas
Vitaminas so compostos orgnicos que, em baixas concentraes,
desempenham funes reguladoras catalticas no metabolismo celular. A maioria das
plantas superiores so capazes de sintetizar a totalidade das vitaminas necessrias
para seu crescimento normal, embora os animais no apresentem esta propriedade.
A vitamina mais comumente usada em cultura de tecidos a tiamina (Bi). A
tiamina solvel em gua. Outras vitaminas utilizadas incluem cido nicotnico (B ) e
3
28 EDITORA - UFLA/FAEPE - Cultura de Tecidos
d) Aminocidos e amidas
Os amonocidos e amidas tm importncia na amplificao das respostas ._
morfogenticas, proporcionando maior crescimento e facilitando a diferenciao no
sentido da regenerao. A necessidade de sua suplementao pode ser determinada
pela incluso de uma protena hidrolisada ao meio. Qualquer efeito benfico pode
ser avaliado pela substituio desta protena por uma mistura de aminocidos e
amidas. As formas "L" dos aminocidos so de ocorrncia natural.
ir* A L-trosina apresenta influencia na iniciao de parte area em cultura de
calos, L-arginina no enraizamento e L-serina na obteno de embries haploides
mediante o cultivo de micrsporo.
Meios de Cultura 29
- cidos orgnicos:
A adio de cidos de compostos intermedirios do ciclo de Krebs, tais como
malato ou citrato, comum em meio destinado cultura de protoplasto. Estes
compostos parecem estar envolvidos na minimizao do efeito inibitor da amnia. A
concentrao de at 10 mM de sais de potssio recomendada.
Ojicido ascrbico e o cido ctrico so usados para prevenir o escurecimento
de tecidos excisados de plantas. As solues antioxidantes so preparadas usando
uma mistura de 100 mg de cido ascrbico e 150 mg de cido ctrico, dissolvido em 1
litro de gua. Esta soluo no deve ser autoclavada e sua esterilizao feita em
filtro bacteriolgico de 0,22 ou 0,45 micras.
A incluso de 2000 mg/L de cido ascrbico estimula o crescimento de calo.!
- Extratos naturais:
So preparaes obtidas de produtos naturais, de composio indefinida, que
servem para enriquecer o meio de cultivo. So fontes de fatores, at ento
desconhecidos, que estimulam o crescimento in vitro. A incluso destes extratos em
meio de cultura s feita, em ltimo caso, quando as tentativas de adequao no
forem suficientes para promover determinado processo morfogentico. Em trabalhos
de rotina, estas preparaes podem ser usadas caso estimulem respostas
desejadas.
Leite de coco: o endosperma de Cocus nucifera na fase gelatinosa. um
suplemento bastante usado. Recomenda-se que seja esterilizado a frio.
Suco de laranja, tomate e outros: O suco de laranja contm cido ctrico e
' outras substncias de crescimento no identificadas. Pode-se usar suco de
i laranja fresco ou congelado.
Polpa de Banana: Tem sido usada na suplementao do meio de cultura de
orqudeas. O seu efeito depende da cultivar e da quantidade, bem como, se
originar de frutos verdes ou maduros.
Extrato de leveduras: extrado com lcool, contendo em sua composio
produtos solveis neste solvente. fonte de aminocidos e vitaminas.
Protenas hidrolisadas: Tambm so fontes de aminocidos. Dentre estas,
incluem: casena hidrolisada; lacto-albumina hidrolisada, triptona, peptona,
etc. Protena de digesto enzimtica tais como a K-Z-amina Tipo A
recomendada, em virtude dos aminocidos se manterem intactos. A hidrlise
cida destri os aminocidos.
b) Carvo ativado
um p bastante fino e de cor escura. utilizado para eliminar substncias
txicas produzidas pelo explante in vitro. A concentrao em torno de 0,3%.
usado quando ocorre o escurecimento do tecido in vitro, descolorao de meio de
cultura, formao de calo na fase de enraizamento de propgulos, ou quando o
crescimento do tecido inibido. O carvo adsorve produtos provenientes do
metabolismo, bem como substncias hormonais e vitaminas. Sugere-se, em alguns a
casos, aumento da concentrao de auxina, quando na presena de carvo ativado. ,
A pureza deste produto varivel.
3.2.8.1. Luminosidade
No acorre diferenciao de parte area em culturas mantidas no escuro. As
caractersticas intensidade luminosa, perodo de exposio e qualidade da luz, so
fundamentais.
a) Intensidade Luminosa
A fase inicial Ide desenvolvimento do explante in vitro (estgio I) requer baixa
intensidade luminosa (at 1000 lux). Na fase de multiplicao de parte area (estgio
II) as exigncias so de 1000 a 3000 lux, e no estgio III (pr-transplante,
aclimatizao), recomenda-se de 3000 a 10.000 lux, Nesta fase o propgulo se
prepara para a fotossntese.
b) Qualidade da luz
_
A qualidade do espectro da lmpada utilizada de suma importncia na
iniciao de parte area e raiz em cultura in vitro. As lmpadas recomendadas so
fluorescentes brancas fria, Gro-lux ou outros tipos de lmpadas com emisso nas
regies do vermelho (430 nm) e azul (660 nm). Estas regies do espectro influenciam
os processos morfogenticos. As lmpadas incandescentes no so recomendadas,
pois emitem faixas do vermelho e vermelho distante e, este ltimo no adequado.
A regio do azul critica para induo de parte area e a iniciao de razes
adventcias estimulada por luz vermelha. Em Heliantus tuberosus, a iniciao de
razes adventcias em sees de tubrculos, efetiva quando as culturas foram
expostas a luz emitida prximo a 600 nm.
A luz vermelha tambm pode inibir a iniciao de razes laterais, enquanto que
a infra-vermelha pode reverter este efeito. A diferenciao de razes laterais e
adventcias parecem ter exigncias diferentes. Assim, em cultura de tecidos, quando
se objetiva a multiplicao de plantas, as lmpadas devem conter emisses
adequadas nas regies do luz azul e vermelho, pois ambas esto envolvidas na
iniciao de parte area e raiz.
Muitas das lmpadas disponveis foram desenhadas para serem utilizadas em
casa de vegetao, onde a fotossntese importante, mas em cultura de tecidos a
fotossntese no to limitante. As lmpadas fluorescentes devem ser trocadas a
cada seis meses.
Meios de Cultura 33
3.2.8.2. Temperatura
Devem ser considerados os aspectos de flutuao diurna. As plantas em seu
habitat natural no desenvolvem sob temperatura constante. Em cultura de tecidos o
uso de temperatura constante deve-se a manuteno se diferentes espcies
cultivadas numa mesma cmara de crescimento. Entretanto, alguns processos
morfolgicos exigem flutuaes diurnas de temperaturas. o caso de cultura de
ovrio de tomate, onde o nmero mximo de sementes formadas in vitro, ocorre em
culturas submetidas a um regime diurno/noturno de 22/17C. Menor nmero de
sementes foi observado em cultura mantida sob temperatura constante de 27C.
As exigncias de temperatura para o desenvolvimento da planta em condies
naturais devem ser consideradas como ponto de partida para estabelecer cultivo in
vitro da espcie em questo. Espcies oriundas de habitat tropical, temperado e
desrtico tm diferentes temperaturas timas para o crescimento e desenvolvimento.
Outro aspecto importante que, algumas vezes, obtm-se um bom
desenvolvimento de plantas in vitro, mas quando transplantadas para o solo morrem
porque esto dormentes, ou seja, ser necessrio uma boa aclimatizao para que
sejam quebradas as dormncias antes de serem transplantas ao solo.
UnA ^ ^ ^ ^ ^ A ^ O ^ T O
4
TCNICAS DE ESTABELECIMENTO
IN VITRO
Renato Paiva 2
4.1. INTRODUO
a) Induo
Nesta fase, a seleo do explante bem como meio adequado e condies
ambientais favorveis (baixa luminosidade, temperatura normal) so decisivas para a
induo. Tem-se nesta etapa um metabolismo ativo com clulas de tamanho
constante e ocorrendo sntese de protenas e DNA e a preparao da clula para
diviso.
b) Diviso Celular
As clulas revertem para um estdio meristemtico (desdiferenciao). uma
fase de sntese onde ocorre decrscimo do tamanho da clula.
c) Diferenciao
Nesta fase h a expresso de certas rotas metablicas. O explante utilizado
pode no requer regulador de crescimento, pode requer somente auxina ou
citocinina ou ambos.
Fase
Fase de estacio-
desacele- nria
rao do
N 2 cresci-
clulas mento
Fase de
crescimento Fase
exponencial de
declnio
Fase
lag Fase
de
cresci-
Incuo mento
inicial linear
Tempo -+
Figura 14: Curva de crescimento de uma suspenso celular.
Tcnicas de Estabelecimento In Vitro 41
4.3.3. Importncia da curva de crescimento
A curva de crescimento de calos calculada com o objetivo de se obter a poca
de repicagem (subcultura), para determinar onde h a maior produo de metablitos
(quando o estudo objetiva o metabolismo secundrio). Esta fase de desacelerao,
pois os metablitos secundrios no constituem prioridade no metabolismo celular.
-
uninucleado (por ocasio da primeira mitose) se constituindo no material mais
promissor para induo de andrognese e botes florais fechados.
4.4.4. Problemas
Alguns problemas relacionados cultura de anteras podem ocorrer quando so
usadas tcnicas inadequadas para se produzir plantas dipides a partir de haploides
regenerados de cultura de anteras; uso de tcnicas inadequadas de regenerao;
ocorrncia de elevada taxa de mutao (anormalidades); desdiferenciao de calo a
partir de clulas dos tecidos somticos da antera e; alta incidncia de plantas albinas
(principalmente em gramneas).
O termo cultura de rgos usado para todas os tipos de cultura nos quais uma
forma organizada de crescimento pode ser continuamente mantida. Inclui o
isolamento assptico de estruturas definidas como primrdio foliar, flores imaturas e
frutos, e seu crescimento in vitro. Para a propagao vegetal, os mais importantes
tipos de culturas de rgos so:
a) Cultura de meristema
Consiste no estabelecimento do domo meristemtico apical sem os primrdios
foliares. A brotao apical tipicamente cresce, originando um nico broto.
d) Cultura de embries
iniciada a partir de embries zigticos extrados de sementes. Os embries
germinam originando brotos.
A cultura de* meristema e a cultura de embries so descritos com mais
detalhes a seguir.
g) Propagao vegetativa
Devido a sua natureza juvenil com alto potencial regenerativo, embries so
excelentes explantes para propagao clonal in vitro. Especialmente para conferas e
gramneas.
5
MULTIPLICAO
Renato Paiva 2
5.1. INTRODUO
_
Nos ltimos anos, a cultura de tecido tornou-se importante tcnica na tentativa
de estabelecimento de metodologias de propagao de vrias espcies. Por ser uma
tcnica que possibilita resultados bastante prticos, a cultura de tecido ainda
necessita de informaes bsicas para seu perfeito entendimento. _
Os mtodos mais econmicos e disponveis para propagao de plantas de
uma determinada espcie podem mudar com o tempo. Maiores avanos podem vir de
um melhor conhecimento dos fatores que controlam a morfogenese e a estabilidade
gentica in vitro.
Os laboratrios de micropropagao comercial utilizam quatro mtodos bsicos
para multiplicar plantas in vitro: aumento de brotaes axilares; segmentos nodais;
brotaes adventcias e embriognese somtica.
A reduo nos custos de produo e a identificao de produtos, os quais so
diferenciados pelo seu valor econmico, so estgios crticos para que a
micropropagao possa ser expandida comercialmente.
A totipotncia celular (capacidade da clula em formar um indivduo idntico ao
indivduo de onde esta foi extrada), associada aos efeitos do balano hormonal, tem
tornado possvel o estudo da morfogenese in vitro e sua aplicao mais prtica, a
a) Luz
Os segmentos foliares provenientes de plantas estoques (matrizes) tratadas
com luz vermelha produzem mais brotaes por explante do que plantas no-
tratadas.
b) Temperatura
plantas" lgflhOa podem Ser induzidas a surtos de novos crescimenus
quando colocadas em temperaturas de 4 a 5C por um perodo de tempo equivalente
quele necessrio para a quebra natural de dormncia.
52 EDITORA - UFLA/FAEPE - Cultura de Tecidos
b) Reaes de hipersensibilidade
Quando os tecidos so expostos a condies de estresse, tais como dano _
mecnico, que ocorre ao se isolar o explante da planta estoque, o metabolismo de
compostos fenlicos estimulado. Isto leva a reaes de hipersensibilidade, tais
como a liberao do contedo nas clulas danificadas, as reaes nas clulas
vizinhas, mas, sem mostrar sintomas de danos, e/ou a morte prematura de clulas
especficas no lugar do ferimento ou o lugar de infeco.
De um modo geral, existem trs tipos possveis de resposta ao estresse ou
dano mecnico: -
1) oxidao de compostos fenlicos pr-formados, ocorrendo a formao de
quinonas e material polimerizado;
2) sntese de monofenis e;
3) sntese de derivados de polifenis.
INICIAO
DO CULTIVO
ENRAIZAMENTO
_JN VITRO
(OPCIONAL PARA
ALGUMAS CULTURAS)
5.3.1. Termoterapia
As plantas matrizes ou estoques so colocadas em ambiente com temperatura
elevada, geralmente acima de 30C; nesta temperatura, que varivel de acordo
com a espcie e variedade, as plantas devem permanecer por um perodo de tempo
mnimo de 20 dias, mas, preferivelmente, acima de 40 dias. Este tempo necessrio
para inativar o vrus ou micoplasma presente na planta. Concomitantemente, ocorre
crescimento das brotaes da planta estoque, que provavelmente no acusaro a
presena do vrus. Estas brotaes so ento retiradas e podero, aps o
enraizamento, servir de fonte de material vegetativo livre de vrus.
EXTRAGAQ
SEGMENTOS DO PICE
NODAIS MERISTEMTICO
CULTURA
DE MERISTEMA
MULTIPLICAO
IN VITRO DAS
PLANTAS INDEXADAS
INDEXAO
i
REGENERAO DA PLANTA
A PARTIR DO MERISTEMA APICAL
SINTOMA
5.3.4. Microenxertia
Este processo empregado para aquelas espcies que no podem ser
submetidas a temperaturas elevadas e, principalmente, para as espcies que, ao
Multiplicao 57
C O L E T A DO B R O T O
C O R T E E DESINFESTAO
SEPARAO DO PICE C A U L I N A R
COM 2 O U 3 PRIMRDIOS F O L I A R E S
Renato Paiva 2
6.1. INTRODUO
IN VITRO EX VITRO
Brotaes em
meio de Estacas enraizadas
, enraizamento
movidas para o solo
A induo do
enraizamento
Brotaes
usualmente
sem
envolve
razes *\
Estacas transferidas Estacas tratamento das
diretamente para o solo enraizadas estacas com
auxina
AIA, 0,05 - 1,0 mg.L" para ANA e 0,5 - 3,0 mg.L" para AIB. Estas substncias
1 1
podem ser misturadas de vrias maneiras para se encontrar a frmula ideal para o
enraizamento de cada espcie. A avaliao dos resultados encontrados utilizando-se
diferentes concentraes e misturas de auxinas no deve considerar apenas a
porcentagem de estacas enraizadas, mas tambm a qualidade, o tamanho e o
nmero de razes formadas. A auxina deve ser aplicada no meio de cultura ou
anteriormente inoculao do explante (no caso de enraizamento ex vitro), levando-
se em conta que a sua concentrao inversamente proporcional ao tempo de
permanncia com o regulador.
Associadas s auxinas, outras substncias tambm interferem de forma direta
* )M'.
u r enraizamento dos explantes. Poliaminas, cido sulfrico, cloreto de
1 1 0
Renato Paiva 2
7.1. INTRODUO
7.3. FOTOSSNTESE
7.5. FITOSSANIDADE
5) O solo deve ter pH apropriado para cada espcie, ser tampo, frtil e
lOlflTlflt PQTQSQ Dat promover drenagem adequada e aerao. Algune
produtores aquecem o solo atravs de serpentinas de gua quente, para maior
atividade da raiz, promovendo o crescimento mais rpido da planta;
Aclimatizao 67
Renato Paiva 2
8.1. INTRODUO
Para produzir uma resposta, a luz deve primeiramente ser absorvida por um
pigmento fotorreceptor. Nos vegetais, os dois pigmentos mais importantes so o
fitocromo e o criptocromo. O criptocromo absorve luz na faixa do azul (400-500 nm) e
prximo da regio do ultravioleta (320-400 nm) do espectro. O fitocromo, em
contraste, absorve principalmente nas regies do vermelho (600-700 nm) e
vermelho-distante (700-760 nm).
A maioria das instalaes de micropropagao utilizam lmpadas fluorescentes
tubulares (brancas) como nica fonte de luz. Entretanto, existem diferentes tipos
destas lmpadas no mercado, o que pode influenciar profundamente o processo de
fotomorfognese.
A baixa quantidade de comprimento de onda na faixa do azul que certas
lmpadas fluorescentes fornecem pode afetar algumas respostas morfognicas
Toda lmpada fluorescente emite alguma radiao na faixa do ultravioleta sem efeito,
no entanto morfogentico.
Renato Paiva 2
9.1. INTRODUO
9.2. OXIDAO
9.3.2. Habituao
No cultivo in vitro de algumas plantas tem sido observado a habituao pela
citocinina, que consiste em uma excessiva multiplicao de brotos em meio livre de
citocinina, mas os brotos produzidos so pequenos, e do origem a poucas radculas
adventcias dificultando o estabelecimento ex vitro.
9.4. NECROSES
Necrose pode ser descrita como sendo a morte de uma parte de um organismo
vivo. Isto ocorre com explantes colocados in vitro, podendo ter uma perda parcial ou
a de toda a cultura.
9.4.1.1. Causas
com uma colorao verde azulada. Algumas vezes a folhas de brotos afetados
apresentam-se grossas e enroladas, e podendo aparecer regies de colorao verde
escuro, devido a superposio de clulas. Brotos altamente anormais produzem
razes adventcias ou alguma fraca radcula.
9.5.1. Ocorrncia
A vitrificao pode ocorrer em culturas de brotos e ns, em regenerao de
brotos a partir de calos, em todos as espcies. mais frequente em massa de calos
de plantas lenhoas, mas tambm ocorre em plantas herbceas. Por exemplo, plantas
da famlia Caryophyllaceae, so particularmente vulnerveis.
O grau de susceptibilidade e o aparecimento dos sintomas no est apenas
vinculado espcie das plantas, mas tambm depende da natureza da cultura.
Pode-se encontrar vrios graus de vitrificao em um mesmo meio de cultivo ou em
meios diferentes para uma mesma espcie.
A vitrificao pode ser consequncia da difuso passiva da gua dentro dos
tecidos ou um fenmeno ativo relacionado a um distrbio no processo metablico da
planta.
Renato Paiva2
Patrcia Duartt
Luciano Vilela Paiva*
10.1. INTRODUO
plantas obtidas dever ser comprovada por indexao, seja ela por plantas
indicadoras, tcnicas imunolgicas ou marcadores moleculares.
b) Recuperao do vigor e da produtividade: Fatores biolgicos (doenas e
pragas) podem diminuir a qualidade do material vegetal e, consequentemente, sua
produtividade. Um declnio gradual no vigor e na produtividade contribui para o
desenvolvimento de doenas, que podem expressar sintomas ou permanecer
latentes.
c) Multiplicao de cultivares: Uma das principais vantagens do uso da
propagao in vitro a alta taxa de multiplicao que pode ser obtida. Neste caso,
um conjunto de indivduos geneticamente idnticos so produzidos partir de um
nico explante. Este processo de propagao de um indivduo selecionado
conhecido como clonagem. Alm do mais, pode ainda constituir uma fonte de
material juvenil para o caso de variedades ou linhas promissoras que se encontram
atacadas por doenas sistmicas.
d) Germinao de sementes in vitro: Em espcies com germinao lenta ou
desuniforme, a germinao in vitro de sementes uma importante alternativa para
superar a fase inicial do desenvolvimento vegetal.
Renato Paiva 3
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