MATERIALES Y MTODOS
referencia. Mientras que se utiliz
Condiciones del cultivo
Geobacter Sulfurreducens se
cultiv bajo condiciones de
anaerobiosis (N2/C02, 80/20 %) con
medio de cultivo fresco DMSZ 826
con acetato (20 mM) como dador de
electrones y fumarato (50 mM) como
aceptor de electrones, la temperatura
de cultivo se mantuvo a 30.5C.
DSMZ 826- Geobacter mdium
contiene por litro: 1.5 g NH4Cl, 0.6 g
Na2HPO4, 0.1 g KCl, 0.82 g Na-acetato,
2.5 g NaHCO3, 10 ml de solucin de
vitaminas y 10 ml de solucin de
minerales. pH= 7, estril,
Mtodos electroqumicos
El sistema bioelectroqumico
(BES) consisti en una celda de vidrio
de una cmara (200 ml de volumen),
con alambre de platino (0,5 mm de
dimetro) como contra-electrodo,
Ag/AgCl MF-2052 RE-5b como
electrodo de referencia y distintos
electrodos de trabajo:
- Barra de grafito: rea
superficial por BET 0,204 +/-
0,01 m2/g, peso promedio
2,2675 g, dimensiones:
- Malla de acero inoxidable:
AISI 304, mesh 50, dimetro
del hilo 0,2 mm y luz de
malla 0,31 mm. La misma se
dispuso en forma de tubo.
- Tela de Carbono:
- Hidrogel de grafeno sobre
tela de carbono:
- Hidrogel de grafeno sobre
malla de acero inoxidable:
Limpieza de los electrodos:
Solucin 10% NaClO por 10 minutos y
10 minutos bajo UV para electrodos de
H3PO4 (10 M) por 5 minutos y 3 lavados
de 1 minuto en bao de ultrasonido,
posteriormente se autoclav junto al
BES. Por ltimo la limpieza de los
electrodos de trabajo fue variable
debido a la fragilidad de los distintos
materiales, para el caso de los
electrodos con hidrogel de grafeno la
limpieza fue por UV 15 minutos,
mientras que para el caso de la barra
de grafito se procedi a pulir por 1
minutos con lija 2000 y luego se
enjuag 3 veces durante 1 minuto en
bao de ultrasonido con agua
destilada, finalmente se llev a
autoclave. Para el caso de la tela de
Carbono y la malla de acero inoxidable
se procedi a realizar los mismos
pasos que para el grafito salv el
pulido.
Antes de la inoculacin, las
celdas bioelectroqumicas
(configuracin 3 electrodos en una
cmara ), se llenaron con 200 ml de
medio de cultivo estril DMSZ 826
Conteniendo acetato (20mM) como
dador de electrones y ningn otro
aceptor soluble de electrones ms que
el electrodo de trabajo
potenciostatizado a 240 mV. Los BES
se mantuvieron en constante agitacin,
con agitador magntico, y burbujeo
(N2/C02, 80/20 %) para mantener las
condiciones de anaerobiosis. Las
celdas fueron inoculadas con 10% v/v
del cultivo de Geobacter
Sulfurreducens en fase estacionaria
DO.
Cada electrodo de trabajo se
teste de forma individual con su
correspondiente control, BES sin
inoculo de bacterias. De forma tal que
la intensidad de corriente observada
respondiera al efecto de la
potenciostatizacion del material del
electrodo de trabajo y las posibles
reacciones electroqumicas con el
medio.

En resumen, dicha
configuracin de 3 electrodos en una
cmara se utiliz para monitorear el
crecimiento de biofilm minuto a minuto,
a travs de la cronoamperometra
observando la intensidad de corriente
andica producida. A dicha intensidad
de corriente se le rest la intensidad
registrada en el correspondiente
control. Pasadas las 24 h se dispuso en
flujo continuo la celda de forma tal que
la tasa de renovacin fue 200 ml/da.
Adems de la cronoamperometra se
emple la voltamperometra cclica
cada 48 horas, con los siguientes
parmetros potenciales de barrido de
0,24 V a -0,55 V, velocidad de barrido
0,003 V/s y 2 ciclos.

Para todas las pruebas

electroqumicas se utiliz un
potenciostato/galvanostato AUTOLAB
PGSTAT 101.