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Roitt

Roitt
Roitt | Fundamentos de Imunologia o livro-texto preferido pelos estudantes e professores de
Imunologia em todo o mundo.
Fundamentos de Sumrio

Imunologia
Completamente atualizada, esta 12a edio engloba os mais recentes conceitos sobre o Parte 1: Fundamentos de Imunologia
funcionamento do sistema imune. 1 | Imunidade Inata, 3

Fundamentos de
2 | Imunidade Adquirida

Imunologia
Com estilo original e de fcil leitura, a obra explica claramente os princpios fundamentais
Especfica, 36
necessrios ao aprendizado dos estudantes de medicina e demais cincias da sade, desde os 3 | Anticorpos, 54
conceitos bsicos de imunidade at suas aplicaes clnicas. 4 | Receptores de Membrana
para Antgenos, 80
Roitt | Fundamentos de Imunologia est ricamente ilustrado, com muitas figuras novas, alm
das originais, o que enfatiza sua abordagem didtica. No incio de cada captulo h uma seo Peter J. Delves | Seamus J. Martin | Dennis R. Burton | Ivan M. Roitt 5 | Interao Primria com o
Antgeno, 116
intitulada Para lembrar, que apresenta informaes essenciais sobre o tema a ser explorado, 6 | Mtodos Imunolgicos e suas
e, ao final, um resumo com os principais tpicos para reviso e consulta rpida. Aplicaes, 146
7 | Anatomia da Resposta
12a edio Imune, 195
8 | Ativao de Linfcitos, 212
9 | Produo de Efetores, 234
10 | Mecanismos de Controle, 272
11 | Ontogenia e Filogenia, 292

Delves | Martin | Burton | Roitt


Parte 2: Imunologia Aplicada
12 | Estratgias Concorrentes
durante a Infeco, 323
13 | Vacinas, 356
14 | Imunodeficincia, 380
15 | Alergia e outras
Hipersensibilidades, 406
16 | Transplante, 436
17 | Imunologia dos Tumores, 459
18 | Doenas Autoimunes, 492
Glossrio, 529
ndice Alfabtico, 541

12a edio

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Roitt
Fundamentos
de Imunologia

Roitt | Fundamentos de Imunologia. Amostras de pginas no sequenciais e em


baixa resoluo. Copyright 2013 by EDITORA GUANABARA KOOGAN LTDA.

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Peter J. Delves

O professor Delves concluiu seu doutorado na University of London em 1986


e leciona Imunologia na UCL (University College London). Suas pesquisas tm
como foco os aspectos moleculares do reconhecimento dos antgenos. autor
e editor de vrios livros de Imunologia e ensina esta disciplina em diferentes
nveis de complexidade.

Seamus J. Martin

O professor Martin concluiu seu doutorado na National University of Ireland


em 1990 e foi ps-doutorando na University College London (com Ivan Roitt)
e no The La Jolla Institute for Allergy and Immunology, Califrnia, EUA (com
Doug Green). Desde 1999, ocupa a Smurfit Chair of Medical Genetics do
Trinity College Dublin e tambm diretor pesquisador da Science Foundation
Ireland. Suas pesquisas so direcionadas para os vrios aspectos da morte celular
programada (apoptose) no sistema imune e no cncer, e seus trabalhos nesta
rea renderam-lhe vrios prmios. Participou como autor de dois livros sobre
apoptose e foi eleito como membro da Royal Irish Academy em 2006 e da
European Molecular Biology Organisation (EMBO) em 2009.

Dennis R. Burton

O professor Burton formou-se bacharel em Qumica na University of Oxford


em 1974 e concluiu o doutorado em Bioqumica Mdica na University of
Lund na Sucia em 1978. Tendo trabalhado por um perodo na University of
Sheffield, transferiu-se em 1989 para o Scripps Research Institute em La Jolla,
Califrnia, onde professor de Imunologia e Biologia Molecular. Seu interesse
em pesquisa est voltado para anticorpos, respostas humorais aos patgenos e
desenvolvimento de vacinas, principalmente em relao ao HIV.

Ivan M. Roitt

O professor Roitt nasceu em 1927 e realizou seus estudos na King Edwards


School, em Birmingham, e no Balliol College, em Oxford. Em 1956,
juntamente com Deborah Doniach e Peter Campbell, fez a descoberta clssica
dos autoanticorpos contra tireoglobulina na tireoidite de Hashimoto, o que
ajudou a fundamentar o conceito geral da relao entre autoimunidade e
doenas humanas. Esse trabalho desdobrou-se em um estudo intensivo dos
fenmenos autoimunes na anemia perniciosa e na cirrose biliar primria.
Em1983, foi eleito membro da Royal Society, membro honorrio do Royal
College of Physicians e indicado membro honorrio da Royal Society of
Medicine.

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12 edio

Roitt
Fundamentos
de Imunologia
Peter J. Delves
PhD
Division of Infection and Immunity
UCL Londres, Reino Unido

Seamus J. Martin
PhD, FTCD, MRIA
The Smurfit Institute of Genetics
Trinity College Dublin, Irlanda

Dennis R. Burton
PhD
Department of Immunology and Molecular Biology
The Scripps Research Institute La Jolla, Califrnia, EUA

Ivan M. Roitt
MA, DSc(Oxon), FRCPath, Hon FRCP (Lond), FRS
Centre for Investigative and Diagnostic Oncology
Middlesex University Londres, Reino Unido

Traduo
Carlos Henrique de A. Cosendey (Captulos 1 a 5, 16 a 18 e Glossrio)
Mdico
Cludia Lcia Caetano de Arajo (Captulos 6 a 15)
Mdica

Reviso tcnica
Arnaldo Feitosa Braga de Andrade
Professor Associado do Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia da Faculdade de
Cincias Mdicas da UERJ. Coordenador Geral de Ps-Graduao da Faculdade de Cincias
Mdicas da UERJ. Ps-Doutorado em Imunologia pela Tufts University, Boston, MA, EUA.
Doutore Mestre em Cincias (Microbiologia) pela UFRJ. Graduado em Medicina pela Universidade
Federal do Cear.

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QQ Os autores deste livro e a editora guanabara koogan ltda. empenharam seus melhores esforos para assegurar que as
informaes e os procedimentos apresentados no texto estejam em acordo com os padres aceitos poca da publicao.
Osautores e a Editora no podem ser responsabilizados por quaisquer danos a pessoas ou bens, devido aplicao incorreta
ou uso imprprio do contedo apresentado nesta obra, como resultado de qualquer declarao difamatria, violao de
propriedade intelectual ou direitos de privacidade, mesmo que decorrente de negligncia ou de outra conduta, ou de qualquer
uso de ideias, instrues, procedimentos, produtos ou mtodos contidos neste material.

QQ Os autores desta edio e a Editora se empenharam para citar adequadamente e dar o devido crdito a todos os detentores de
direitos autorais de qualquer material utilizado neste livro, dispondo-se a possveis acertos posteriores caso, inadvertida e
involuntariamente, a identificao de algum deles tenha sido omitida.

QQ ROITTS ESSENTIAL IMMUNOLOGY, TWELFTH EDITION


This edition first published in 2011. Copyright 1971, 1974, 1977, 1980, 1984, 1988, 1991, 1994, 1997, 2001, 2006, 2011
by Peter J Delves, Seamus J. Martin, Dennis R. Burton, Ivan M. Roitt
All Rights Reserved. Authorised translation from the English language edition published by Blackwell Publishing Limited.
Responsibility for the accuracy of the translation rests solely with Editora Guanabara Koogan Ltda, and is not the responsibility
of Blackwell Publishing Limited. No part of this book may be reproduced in any form without the written permission of the
original copyright holder, Blackwell Publishing Limited.

Esta edio uma publicao por acordo com a Blackwell Publishing Limited, Oxford. Traduzida pela Editora Guanabara
Koogan Ltda. da verso original na lngua inglesa. A responsabilidade pela exatido da traduo somente da Editora Guanabara
Koogan Ltda, no tendo a Blackwell Publishing Limited nenhuma responsabilidade pela mesma.

QQ Direitos exclusivos para a lngua portuguesa


Copyright 2013 by
EDITORA GUANABARA KOOGAN LTDA.
Uma editora integrante do GEN | Grupo Editorial Nacional

Travessa do Ouvidor, 11
Rio de Janeiro RJ CEP 20040-040
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QQ Reservados todos os direitos. proibida a duplicao ou reproduo deste volume, no todo ou em parte, sob quaisquer formas
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daEditora.

QQ Capa: Editora Guanabara Koogan


Editorao eletrnica: Imagem Virtual Editorao Ltda.

QQ Ficha catalogrfica

R643r

Roitt, Ivan M. (Ivan Maurice), 1927-
Roitt, fundamentos de imunologia/Peter J. Delves ... [et al.]; traduo por Carlos Henrique de A. Cosendey, Cludia Lcia Caetano
de Arajo; reviso tcnica Arnaldo Feitosa Braga de Andrade. [Reimpr.]. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2013.
552p. : il.; 28 cm

Traduo de: Roitts essential immunology, 12th ed.
ISBN 978-85-277-2142-4

1. Imunologia. 2. Sistema imunolgico. 3. Imunidade. I. Delves, Peter J. II. Ttulo. III. Ttulo: Fundamentos de imunologia.

12-3377. CDD: 616.079


CDU: 612.017

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Prefcio

Bem-vindo nova edio do Roitt|Fundamentos de Imunologia! Quando Ivan escreveu a primeira edio h mais de 40
anos, pretendia que o texto parecesse um dilogo com o leitor, em vez de uma preleo, e decidimos manter esse estilo.
Como disciplina, a Imunologia fascinante e dinmica, e, para convenc-lo de que este tema absolutamente merecedor
de sua ateno, esta edio foi inteiramente atualizada.
Por esse motivo, alm da incluso de vrias ilustraes novas:

QQ Ampliamos a descrio dos padres moleculares associados ao patgeno e ao risco (PAMP & DAMP)
QQ Acrescentamos uma seo sobre clulas dendrticas e sua participao no processamento dos antgenos, incluindo
apresentao cruzada
QQ Atualizamos as sees sobre receptores das clulas B e NK

QQ Aprofundamos a descrio do trfego dos linfcitos

QQ Incorporamos as ltimas descobertas sobre subtipos de clulas T, principalmente Th17 e a diversidade

de clulas T reguladoras
QQ Acrescentamos informaes mais recentes sobre mecanismos de destruio das clulas NK e dos linfcitos T

citotxicos
QQ Aprofundamos as explicaes sobre os efeitos do envelhecimento nas respostas imunes

QQ Reescrevemos praticamente todo o captulo sobre vacinas, com nova nfase nos seus mecanismos de ao

convencionais e base de carboidratos, assim como novas abordagens para o desenvolvimento de vacinas (inclusive
vacinologia reversa), avanos efetuados com as vacinas contra malria e ao dos adjuvantes
QQ Acrescentamos informaes inditas sobre estados de imunodeficincia recm-descobertos, sobre a origem da AIDS e

os inmeros (e sempre crescentes) frmacos usados em seu tratamento e sobre os resultados alcanados com as mais
recentes pesquisas sobre vacinas contra o HIV
QQ Esclarecemos as descobertas recentes sobre transformaes celulares que resultam em cncer, a manipulao do

sistema imune pelos tumores e as relaes entre infeco, inflamao e cncer


QQ Reescrevemos substancialmente o captulo sobre doenas autoimunes.

Esperamos que esta leitura seja agradvel e proveitosa.

Peter J. Delves
Seamus J. Martin
Dennis R. Burton
Ivan M. Roitt

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Agradecimentos

Os autores so sinceramente gratos equipe editorial formada por Elizabeth Johnston, Laura Murphy e Cathryn Gates,
da Wiley-Blackwell, pelo apoio, e a Ruth Swan, pela gerncia de projeto. Todos nos sentimos em dbito com os coedito-
res de Immunology, J. Brostoff, D. Roth e D. Male, e sua editora, Mosby, e com os seguintes autores que nos permitiram
utilizar ou modificar suas ilustraes: J. Brostoff e A. Hall pela Figura 15.11; J. Horton pela Figura 11.19; e J. Taverne pelas
Figuras 12.23 e 12.24.

IMR gostaria de agradecer secretria Christine Griffin pela ajuda incansvel.

DRB deseja agradecer principalmente a Amandeep Gakhal, Erin Scherer, Rena Astronomo e Wendellien Oswald, pela
inestimvel contribuio, e a Jenny Woof, Ann Freeney, Beatrice Hahn, Jim Marks, Don Mosier, Paul Sharp, Robyn
Stanfield, James Stevens e Mario Stevenson, pelos comentrios utilssimos.

PJD gostaria de agradecer especialmente a Per Brandtzaeg, Volker Bringkmann, Greg Campbell, Peter Lydyard, Rand
Swenson e Ulrich Wahn.

SJM grato especialmente a Ed Lavelle, Sean Cullen, Cristina Munoz-Pinedo e a todos os membros do seu laboratrio
pelos comentrios, pelas sugestes e pelo apoio, bem como a Mia, Madeleine e Jamie, pelo apoio e pela tolerncia.

Alguns pesquisadores cederam generosamente ilustraes para esta edio, e expressamos nossa gratido incluindo seus
nomes nas legendas das figuras pertinentes.

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Abreviaturas
(sc)Fv Fragmento de ligao de antgeno VH + VL (cadeia CLIP Peptdio de cadeia invariante associado classe II
nica) CMV Citomegalovrus
5HT 5-hidroxitriptamina CMVH Citomegalovrus humano
AARMD Agente antirreumtico modificador de doena Cn Componente n do complemento
AAV Vrus adenoassociado Cn Componente n ativado do complemento
Ac Anticorpo Cna Pequeno peptdio derivado de ativao proteoltica
ACh-R Receptor de acetilcolina de Cn
ACT Transferncia adotiva de clulas CpG Motivo dinucleotdico fosfato de citosina-
ACTH Hormnio adrenocorticotrfico guanosina
ADA Adenosina desaminase CR(n) Receptor do componente n do complemento
ADCC Citotoxicidade celular dependente de anticorpos CRP Protena C reativa
AEP Asparagina endopeptidase CSR Troca recombinante de classe
Ag Antgeno CTLR Receptor de lectina do tipo C
AID Citidina desaminase induzida por ativao DAF Fator acelerador do decaimento
AIDS Sndrome de imunodeficincia adquirida DAG Diacilglicerol
AIRE Regulador autoimune DAMP Padro molecular associado a risco
ALBA Addressable laser bead assay DCJv Doena de Creutzfeldt-Jakob variante
ANCA Anticorpos contra citoplasma de neutrfilos DII Doena intestinal inflamatria
APC Clula apresentadora de antgeno DMID Diabetes melito insulinodependente
AR Artrite reumatoide DNP Dinitrofenil
ARRE-1 Elemento responsivo 1de receptor de antgeno DO Densidade ptica
ARRE-2 Elemento responsivo 2de receptor de antgeno DTH Hipersensibilidade do tipo tardio
ART Terapia antirretroviral DTP Vacina contra difteria, ttano e coqueluche
ASFV Vrus da febre suna africana EAIE Encefalomielite autoimune (alrgica) experimental
AZT Zidovudina (3'-azido-3'-desoxitimidina) EBV Vrus Epstein-Barr
BAFF Fator ativador de clulas B da famlia do fator de EEB Encefalopatia espongiforme bovina
necrose tumoral EET Encefalopatia espongiforme transmissvel
BCG Forma atenuada do bacilo Calmette-Gurin da ELISA Ensaio imunossorvente ligado enzima
tuberculose EM Esclerose mltipla
BCR Receptor de clulas B EF Eosinfilo
BSA Albumina srica bovina EPE Exotoxinas piognicas estreptoccicas
Btk Tirosinoquinase de Bruton EPO Eritropoetina
BUDR Bromodesoxiuridina ES Clula-tronco embrionria
C Complemento F(ab)2 Fragmento divalente de imunoglobulina que se liga
C a(b/g/d) Parte constante da cadeia a (b/g/d) do receptor de ao antgeno aps digesto por pepsina
clulas T (TCR) F(B) Fator (B etc.)
Cadeia J Cadeia polipeptdica no dmero de IgA e IgM Fab Fragmento monovalente de imunoglobulina que se
CALLA Antgeno comum da leucemia linfoblstica aguda liga ao antgeno aps digesto por papana
cAMP Monofosfato de adenosina cclico FACS Separador de clulas ativado por fluorescncia
CCP Protena de controle do complemento FasL Ligante de Fas
CD Conjunto de diferenciao Fc Originalmente, fragmento de imunoglobulina que
CDR Regies determinantes de complementaridade da podia ser cristalizado; atualmente, parte no Fab da
poro varivel da imunoglobulina ou do receptor imunoglobulina
de clulas T FCT Fator de clula T
CEA Antgeno carcinoembrionrio FcgR Receptor de fragmento Fc da IgG
Clula B Linfcito que amadurece na medula ssea Flt-3 Tirosinoquinase 3 semelhante a FMS
Clula T Linfcito derivado do timo FR Fator reumatoide
CFA Adjuvante completo de Freund g.v.h. Enxerto versus hospedeiro
cGMP Monofosfato de guanosina cclico GADS Protena adaptadora relacionada com GRB2
CGS Cromoglicato srico G-CSF Fator estimulador de colnias de granulcitos
CH(L) Regio constante da cadeia pesada (leve) das GEF Fatores de troca de nucleotdio guanina
imunoglobulinas
Gene D Minigene de diversidade que conecta os segmentos
ChIP Imunoprecipitao de cromatina V e J para formar a regio varivel
CHIP Protena inibidora da quimiotaxia Gene J Gene que liga o segmento V ou D regio
CLA Antgeno cutneo associado ao linfcito constante

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x Fundamentos de Imunologia

Gene V Gene da regio varivel para receptor de LAMP Protenas de membrana associadas ao lisossomo
imunoglobulina ou clula T LAT Conexo para ativao de clulas T
GM-CSF Fator estimulador de colnias de granulcitos- LATS Estimulador tireideo de ao prolongada
macrfagos
LBP Protena ligadora de LPS
gpn Glicoprotena com nkDa
LCMV Vrus da coriomeningite linfoctica
GRB2 Protena 2de ligao ao receptor de fator do
crescimento Lea/b/x Antgenos do grupo sanguneo de Lewisa/b/x
GSK3 Glicognio sintase quinase 3 LES Lpus eritematoso sistmico
H-2 Complexo principal de histocompatibilidade do LFA-1 Antgeno funcional linfocitrio 1
camundongo LGL Grande linfcito granular
H-2D/K/L (A/E) Loci principais para a classe I clssica (classe II) de LHRH Hormnio liberador do hormnio luteinizante
molculas MHC murinas LIE Linfcito intraepitelial
HAMA Anticorpos humanos contra camundongos LIF Fator inibidor de leucemia
HATA Anticorpo humano antitoxina LLA-T Leucemia linfoblstica aguda T
HBsAg Antgeno de superfcie do vrus da hepatite B LMC Linflise mediada por clulas
HCG Gonadotrofina corinica humana LPS Lipopolissacardio (endotoxina)
HEL Lisozima de ovo de galinha LRR Repetio rica em leucina
HEV Endotlio de parede alta de vnula ps-capilar LT(B) Leucotrieno (B etc.)
HIV Vrus de imunodeficincia humana mAb Anticorpo monoclonal
HLA Complexo principal de histocompatibilidade MAC Complexo de ataque membrana
humana MadCAM Molcula de adeso celular da mucosa (adressina)
HLA-A/B/C (DP/ Loci principais para a classe I clssica (classe II) de MALT Tecido linfoide associado mucosa
DQ/DR) molculas MHC humanas
MAM Mitgeno de Mycoplasma arthritidis
HMG Grupo de alta mobilidade
MAP quinase Proteinoquinase ativada por mitgeno
HPN Hemoglobinria paroxstica noturna
MAPKKK Multiproteinoquinase ativada por mitgeno
HRF Fator de restrio homlogo
MBG Membrana basal glomerular
HSA Antgeno termoestvel
MBL Lectina ligadora de manose
HSC Clula-tronco hematopotica
MBP Protena bsica principal de eosinfilos (tambm
hsp Protena do choque trmico denominada protena bsica mielnica)
HTLV Vrus de leucemia de clulas T humano MCP Protena cofator de membrana (regulao de
H-Y Antgeno de transplante masculino complemento)
ICAM-1 Molcula de adeso intercelular 1 MCP-1 Protena quimiottica 1de moncitos
iCn Componente n inativado do complemento M-CSF Fator estimulador de colnias de macrfagos
Id (aId) Iditipo (anti-iditipo) MDP Muramil dipeptdio
IDC Clulas dendrticas interdigitadas ME Microscpio eletrnico
IDO Indolamina 2,3-dioxigenase MHC Complexo principal de histocompatibilidade
IFNa Interferon a (tambm IFNb, IFNg) MICA Cadeia A relacionada com MHC classe I
IFR Fator regulado por interferon MIDAS Local de adeso dependente de ons metlicos
Ig Imunoglobulina MIF Fator inibidor da migrao de macrfagos
Iga/Igb Cadeias peptdicas de membrana associadas a sIg MIIC Compartimentos enriquecidos de MHC classe II
(receptor de clula B) MLA Monofosforil lipdio A
IgG Imunoglobulina G (tambm IgM, IgA, IgD, IgE) MLR Reao linfocitria mista
IgIV Imunoglobulina intravenosa MMTV Vrus de tumor mamrio de camundongo
IgSF Superfamlia de imunoglobulina MO Medula ssea
IL-1 Interleucina-1 (tambm IL-2, IL-3 etc.) MRSA Staphylococcus aureus resistente a meticilina
ILT Irradiao linfoide total MSC Clula-tronco mesenquimatosa
iNOS Sintase do xido ntrico induzvel MSH Hormnio estimulador de melancitos
IP3 Trifosfato de inositol MTP Protena microssmica de transporte de
ISCOM Complexo imunoestimulante triglicerdios
ITAM Motivo de ativao baseado na tirosina do MuLV Vrus da leucemia murina
imunorreceptor MF Macrfago
ITIM Motivo de inibio baseado na tirosina do NADP Nicotinamida adenina dinucleotdio fosfato
imunorreceptor
NAP Peptdio ativador de neutrfilos
JAK Janus quinases
NBT Nitroazul de tetrazlio
Ka(d) Constante de afinidade de associao (dissociao)
(geralmente reaes Ag-Ac) NCF Fator quimiottico de neutrfilos
kDa Unidades de massa molecular em quilodltons NFAT Fator nuclear de clulas T ativadas
KIR Receptores killer semelhantes imunoglobulina NFkB Fator de transcrio nuclear
KLH Hemocianina de caracol marinho (Megathura NK Clulas natural killer
crenulata) NLR Receptor NOD (nod-like receptor)
LAK Clula killer ativada por linfocina NOD Camundongo diabtico no obeso

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Fundamentos de Imunologia xi

NO. xido ntrico SEA (B etc.) Enterotoxina A de Staphylococcus aureus


NZB Camundongo negro da Nova Zelndia (enterotoxina B etc.)
NZB W Camundongo negro da Nova Zelndia hbrido SEREX Anlise sorolgica de bibliotecas de expresso de
branco F1da Nova Zelndia cDNA recombinante
.O2 nion superxido sIg Imunoglobulina de superfcie
ORF Estrutura de leitura aberta siRNA RNA de interferncia curto
OS Cepa de frangos obesos SIV Vrus da imunodeficincia de smios
Ova Ovalbumina SLIT Imunoterapia alergnica por via sublingual
PAF(-R) (Receptor) de fator ativador de plaquetas SLP76 Domnio SH2 (com 76kDa) contendo protena de
leuccito
PAGE Eletroforese em gel de poliacrilamida
SOCs Supressor de sinalizao de citocina
PAMP Padro molecular associado ao patgeno
SRID Imunodifuso radial simples
PCA Anafilaxia cutnea passiva
SSA Superantgeno estreptoccico
PCR Reao da cadeia da polimerase
STAT Transdutor de sinal e ativador de transcrio
PERV Retrovrus endgenos de porco
TACI Interagente de ativador transmembrana e
PG(E) Prostaglandina (E etc.) modulador de clcio e ligante de ciclofilina
PHA Fitoemaglutinina [CAML]
phox Fagcito oxidase TAP Transportador associado ao processamento de
PI3K Fosfatidilinositol 3-quinase antgeno
PIAS Protena inibidora de STAT ativado TB Tuberculose
pIgR Receptor de Ig polimrica Tc Clula T citotxica
PIP2 Fosfatidilinositol difosfato TCR1(2) Receptor de clulas T com cadeias g/d (com cadeias
PKC Proteinoquinase C a/b)
PKR Proteinoquinase dependente de RNA TdT Desoxinucleotidil transferase terminal
PLC Fosfolipase C TFM Tubo fotomultiplicador
PLCg2 Fosfolipase Cg2 TG-A-L Polilisina com cadeias laterais polialanil com
ligaes aleatrias com tirosina e cido glutmico
PMN Neutrfilo polimorfonuclear
TGFb Fator transformador do crescimento-b
PPD Derivado proteico purificado do Mycobacterium
tuberculosis Th(1/2/3/9/17) Clulas T auxiliares (subpopulao 1, 2, 3, 9 ou 17)
PRR Receptores de reconhecimento de padro THF Fator tumoral tmico
PTFE Politetrafluoroetileno Thp Precursor de clula T auxiliar
PTI Prpura trombocitopnica idioptica TLR Receptores toll-like
PTK Protena tirosinoquinase TM Transmembrana
PWM Mitgeno da erva-dos-cancros (Phytolacca TNF Fator de necrose tumoral
americana) TNP Trinitrofenol
RANTES Regulado por meio de ativao de quimiocina TPO Trombopoetina
expressa e secretada por clula T normal Treg Clula T reguladora
RAST Teste radioalergossorvente Ts Clula T supressora
RE Retculo endoplasmtico TSAb Anticorpos tireoestimulantes
RH Resposta de hipersensibilidade TSH(R) Hormnio tireoestimulante (receptor)
Rh(D) Grupo sanguneo rhesus (D) TSLP Linfopoetina do estroma tmico
RIP Promotor de insulina de rato TSST Toxina da sndrome do choque txico
RLR Receptor helicase semelhante a RIG TUNEL Marcao terminal de dUTP (desoxiuridina
RNAi Interferncia no RNA trifosfato) mediada por TdT
ROI Intermedirios de oxignio reativos VCAM Molcula de adeso da clula vascular
RSA Resistncia sistmica adquirida VCP Protena contendo valosina
RSS Sequncia de sinal de recombinao VEGF Fator de crescimento da clula endotelial vascular
SAP Amiloide srico P VH Parte varivel da cadeia pesada da Ig
SAP Protena ativadora de esfingolipdio VIMP Protena de membrana que interage com VCP
SARS Sndrome respiratria aguda grave VIP Peptdio intestinal vasoativo
SARS-CoV Coronavrus associado SARS VL Parte varivel da cadeia leve da Ig
SC Componente secretor da Ig VLA Antgeno muito tardio
SCF Fator de clula-tronco VLP Partcula semelhante a vrus
scFv Fragmento da regio varivel de cadeia nica do VNTR Nmero varivel de repeties seriadas
anticorpo (VH + VL unidas por um ligante flexvel)
VP1 Peptdio 1 vrus-especfico
SCID Imunodeficincia combinada grave
SDF Fator derivado do estroma Va(b/g/d) Parte varivel da cadeia a(b/g/d) do TCR
SDS Dodecil sulfato de sdio Vk/l Parte varivel da cadeia leve k/l
SDS-PAGE Eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecil XL Ligado ao X
sulfato de sdio ZAP-70 Protena de 70kDa associada cadeia zero

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Como usar este livro
Bem-vindo nova edio do Roitt|Fundamentos de Imunologia. Nesta pgina, voc saber como
aproveitar ao mximo todos os recursos de aprendizagem disponveis neste livro.

Cada captulo tem sua prpria pgina de abertura, com os


tpicos principais que sero abordados e sees intituladas
Para lembrar, que oferecem conceitos essenciais sobre o

s
tema.

Ao longo de todo o texto, voc encontrar quadros com


Marcos Histricos, indicados pelo cone ao lado, que
apresentam avanos fundamentais para a Imunologia.

Guia para o leitor


Em todas as ilustraes, foram usadas formas padronizadas
para as clulas e as vias que mais se repetem. A legenda a
seguir apresenta o significado de cada forma.

Guia do leitor

Linfcito pequeno Macrfago (M) Plasmcito

s Leuccito polimorfonuclear
Mastcito (polimorfo)
O livro de texto est repleto de fotografias, ilustraes e
s

tabelas para melhor visualizao e compreenso do Origina Estimula

contedo.
Inibe/destri Via bloqueada

Esperamos que faa uma boa leitura.


Boa sorte em seus estudos!
s
Ao final de cada captulo h um resumo
para estudo e reviso.

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Material
Suplementar

Este livro conta com os seguintes materiais suplementares:

QQ Questes de mltipla escolha


QQ Ilustraes da obra em formato de apresentao (restrito a docentes)

Para ter acesso a esse contedo, que gratuito, o docente ou leitor deve se cadastrar
em http://gen-io.grupogen.com.br. Alm disso, para que este material especfico seja
vlido, necessrio que se informe o cdigo existente na etiqueta colada na parte
interna da capa do livro.

GEN-IO (GEN | Informao Online) o repositrio de material


suplementar e de servios relacionados com livros publicados pelo
GEN | Grupo Editorial Nacional, o maior conglomerado brasileiro
de
Guanabara Koogan, Santos, Roca, AC Farmacutica, Forense,
Mtodo, LTC, E.P.U. e Forense Universitria.

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Sumrio

Parte 1: Fundamentos de Imunologia


1. Imunidade Inata 3
2. Imunidade Adquirida Especfica 36
3. Anticorpos 54
4. Receptores de Membrana para Antgenos 80
5. Interao Primria com o Antgeno 116
6. Mtodos Imunolgicos e suas Aplicaes 146
7. Anatomia da Resposta Imune 195
8. Ativao de Linfcitos 212
9. Produo de Efetores 234
10. Mecanismos de Controle 272
11. Ontogenia e Filogenia 292

Parte 2: Imunologia Aplicada


12. Estratgias Concorrentes durante a Infeco 323
13. Vacinas 356
14. Imunodeficincia 380
15. Alergia e Outras Hipersensibilidades 406
16. Transplante 436
17. Imunologia dos Tumores 459
18. Doenas Autoimunes 492

Glossrio 529

ndice Alfabtico 541

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Captulo6

Mtodos Imunolgicos
e suas Aplicaes

Tpicos principais
Produo programada de anticorpos 147
Purificao de antgenos e anticorpos por cromatografia de afinidade 154
Modulao da atividade biolgica por anticorpos 154
Imunodeteco de antgenos em clulas e tecidos 155
Deteco e quantificao de antgenos por anticorpos 162
Mapeamento de eptopos 167
Estimativa de anticorpos 168
Deteco da formao de imunocomplexos 174
Isolamento de subpopulaes de leuccitos 175
Anlise da expresso gnica 177
Avaliao da atividade funcional 178
Manipulao do sistema imune em modelos animais 183
Uso da engenharia gentica em clulas e organismos modelos 185
Terapia gnica em seres humanos 188

Para lembrar
Agora que o leitor conhece bem todos os principais elementos dos sistemas
imunes inato e adaptativo, recomendvel avaliar como possvel manipular
esses elementos in vitro e in vivo, seja em busca de ampliar o conhecimento
sobre a imunidade, seja para a elaborao de reagentes (basicamente com
o emprego de anticorpos) que possam ser usados em uma imensido de
aplicaes. Tambm muito til saber como os imunologistas desvendam o
conhecimento que ns, com coragem, tentamos resumir nestas pginas.
Esperamos que os mtodos e as aplicaes descritos neste captulo
expliquem, em termos prticos, como se mede a produo de citocinas por
subgrupos de clulas T, a produo de anticorpos por clulas B, a apoptose
induzida por clulas NK e assim por diante.

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Captulo6 | Mtodos Imunolgicos e suas Aplicaes 147

Introduo
Este captulo organizado de modo a avanar das tcnicas moleculares para as celulares e, depois, para o
emprego de animais. A princpio, descreveremos como possvel produzir e purificar anticorpos, us-los para
purificar seu antgeno especfico a partir de misturas complexas de antgenos, empreg-los na simulao
funcional de ligantes naturais a fim de estimular a funo celular ou, ao contrrio, inibir funes especficas,
alm de muitas outras aplicaes. Em seguida, atentaremos para uma srie de variaes sobre o tema do uso
de anticorpos para detectar antgenos em clulas, tecidos, lquidos e suportes slidos (como arranjos de
protenas) e investigaremos como possvel mapear as regies distintas em um antgeno reconhecidas por
anticorpos ou receptores das clulas T (i.e., seus eptopos especficos). A segunda metade do captulo
dedicada a mtodos celulares, empregados para avaliar a funcionalidade e as interaes entre clulas do
sistema imune. Explicaremos como possvel isolar clulas do sistema imune, identificar seu fentipo, fazer
sua avaliao funcional e manipul-las geneticamente, tanto in vitro quanto in vivo. Depois, veremos alguns dos
modelos animais usados com frequncia por imunologistas e como possvel produzir animais modificados
por engenharia gentica.
Muitos dos procedimentos expostos neste captulo foram meticulosamente desenvolvidos e aperfeioados
por vrias geraes de imunologistas e variam de fceis a muito complexos. Convm lembrar que, quando
fazemos afirmaes como foi gerado um anticorpo, o trabalho implicado costuma exigir muitos meses ou at
anos. Do mesmo modo, enquanto bastam dois segundos para dizer knockout do gene X no camundongo,
voc pode ter certeza de que o procedimento ocupou algum durante alguns anos.

Produo programada de anticorpos necessria para o reconhecimento por anticorpos, e uma


molcula relativamente grande, como uma protena, costuma
Alm de serem muito convenientes para a proteo do corpo conter muitos eptopos. Desse modo, a injeo do antgeno
contra agentes infecciosos nocivos, os anticorpos tambm so mdio em um animal quase sempre induz a produo de uma
reagentes incrivelmente teis e extraordinariamente especfi- mistura de anticorpos contra diferentes eptopos no antgeno.
cos para deteco e quantificao de outras protenas e de Tambm possvel que alguns anticorpos nessa mistura sejam
muitas outras substncias. Os anticorpos tm, literalmente, direcionados contra eptopos tambm existentes em outros
numerosas aplicaes prticas, que abrangem a purificao de antgenos. Diz-se que esses anticorpos apresentam reatividade
protenas por meio de colunas de afinidade com anticorpos, cruzada contra o outro antgeno ao qual se ligam. As peque-
a deteco de hormnios circulantes em amostras de sangue nas molculas orgnicas costumam ser imungenos insatisfa-
ou urina para diagnstico clnico, a explorao da expresso trios quando injetadas sozinhas; o sistema imune parece ser
e da localizao subcelular de protenas, a imunoterapia no incapaz de reconhecer com eficincia essas estruturas. Apesar
cncer e o uso como antdotos em picadas de cobra e aranha. disso, os imunologistas descobriram que possvel tornar
Na verdade, para o cientista pesquisador, muito difcil ima- essas molculas visveis para o sistema imune mediante ligao
ginar um mundo sem anticorpos, pois essas molculas so covalente a uma protena carreadora, como a albumina srica
usadas dia a dia como sondas muito especficas e confiveis bovina (BSA, do ingls, bovine serum albumin), que tem
para deteco de quase todas as protenas existentes sob o sol, imunogenicidade intrnseca. Essas pequenas molculas so
em um sem-nmero de contextos. Devemos agora atentar, denominadas haptenos (veja a Figura5.6).
em termos prticos, para o mecanismo de produo em labo- A tcnica convencional de produo de anticorpo contra
ratrio dessas protenas de maravilhosa adaptabilidade.
uma protena de interesse a injeo de pequenas amostras
da protena (da ordem de microgramas) em um animal como
Gerao de anticorpos policlonais
o coelho. No entanto, a administrao do antgeno raramente
Embora seja possvel produzir anticorpos contra quase todas suficiente para provocar uma resposta imune vigorosa,
as substncias orgnicas, algumas molculas incitam respostas mesmo quando o antgeno contm alta proporo de deter-
de anticorpos com muito mais rapidez que outras. De modo minantes estranhos; necessria a coadministrao de um
geral, as protenas so excelentes imungenos (i.e., substn- adjuvante (Figura6.1). Ainda que no esteja totalmente claro
cias que provocam resposta imune), embora quase sempre a o mecanismo de ao dos adjuvantes, um papel importante
resposta imune seja concentrada contra pequenas regies da ativar as clulas dendrticas (DC, do ingls, dendritics cells)
protena (chamadas eptopos ou determinantes antignicos) e outras clulas apresentadoras de antgeno (APC, do
que abrangem cerca de cinco a oito aminocidos. Como j ingls, antigen-presenting cells) no local de implantao do
comentamos (veja o Captulo5), eptopo a estrutura mnima antgeno (veja a p. 31). O Captulo1 explicou que a ativao

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Captulo6 | Mtodos Imunolgicos e suas Aplicaes 153

a Fragmento Fv de cadeia nica c Anticorpo bivalente biespecfico (diabody)

N
N C N

VH VL
VL1
VH VH1 VH2
VL VL2

C N C

b Anticorpo original Mutante com afinidade aumentada d Imunotoxina


Alanina Arginina Glutamato

F(ab)2

+ +


Ab Ag Ab Ag


Toxina

Fenilalanina

Figura6.5 Outros anticorpos produzidos por engenharia gentica. (a) Um nico gene que codifica VH e VL unidas por uma
sequncia de comprimento adequado d origem a um fragmento de ligao a antgeno de cadeia nica Fv (scFv). (b) A
mutagnese local-especfica de resduos na regio determinante de complementaridade (CDR) ou em suas adjacncias possibilita o
aumento da afinidade do anticorpo. (c) Duas construes de ScFV expressas simultaneamente associam-se para formar um
anticorpo bivalente com duas especificidades (diabody). Esses anticorpos biespecficos tm vrios empregos. Note que um
anticorpo biespecfico (Ac) contra dois eptopos diferentes no mesmo antgeno (Ag) tem afinidade muito maior em razo do bnus
da cooperao entre os dois locais de ligao (veja a p. 126). (d) Podem-se construir possveis balas mgicas pela fuso do gene
para uma toxina (p.ex., ricina) com Fab.

ralhamento de genes no qual um gene VH que codifica um da ordem de 20 nM. Caso se conseguisse superar a ade-
anticorpo de afinidade razovel combinado aleatoriamente sividade desses minianticorpos, seria possvel explorar seu
a um pool de genes VL e submetido seleo antignica. O pequeno tamanho para a penetrao tecidual. A criao de
processo pode ser ainda mais ampliado pela mistura de VL possveis balas mgicas para imunoterapia pode empregar a
proveniente dessa associao com um pool de genes VH. fuso de uma toxina (p. ex., ricina) com um anticorpo Fab
Tambm se mostrou possvel embaralhar CDR individuais (Figura6.5d).
entre regies variveis de anticorpos de afinidade moderada
obtidos por panning em antgeno, assim criando anticorpos Campos de anticorpos
de alta afinidade a partir de colees relativamente peque- Os genes para um anticorpo monoclonal podem ser expres-
nas. O isolamento de fragmentos VHH de cadeia pesada de sos em grande quantidade no s no leite de animais lac-
alta afinidade de anticorpos de lhamas imunizados mais tantes, mas tambm os vegetais podem ser aproveitados
uma tcnica. com esse objetivo. Os planticorpos foram expressos em
Outros novos anticorpos foram criados. Em uma constru- banana, batata e tabaco. possvel imaginar um fazendeiro
o, dois fragmentos scFv associam-se para formar um anti- que emprega tecnologia de ponta e chama a ateno de um
corpo com duas especificidades diferentes (Figura 6.5c). visitante confuso para um campo de cultivo de toxoide
Outra constituda por um domnio de regio varivel de antitetnico, outro de polissacardio antimeningoccico e
cadeia pesada nica (DAB) cuja afinidade pode ser muito alta assim por diante. Vegetais multifuncionais seriam muito

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156 Fundamentos de Imunologia

No tratadas anti-Fas

Figura6.7 Ativao do receptor induzida por anticorpo. Clulas T Jurkat transformadas foram divididas em dois grupos: um no
tratado e o outro tratado com anticorpo IgM anti-Fas durante 4horas. A ligao cruzada do receptor Fas (CD95) ao anticorpo ativa
o receptor e inicia uma cascata de transduo que culmina na ativao de uma srie de cistena proteases, chamadas caspases,
que provocam apoptose na clula estimulada. As clulas apoptticas exibem vesculas na membrana plasmtica e colapso da
clula em pequenos fragmentos ou vesculas chamadas corpos apoptticos. Efeitos semelhantes so observados quando o
ligante natural, FasL, usado no lugar do anticorpo anti-Fas. (Gentilmente cedida pelo Dr. Colin Adrain, Dept. of Genetics, Trinity
College, Dublin, Irlanda.)

a distribuio de um autoantgeno tireoidiano que reage com com seu inibidor, IkB. Aps a estimulao do receptor
os autoanticorpos existentes no soro de um paciente com TLR4com LPS, acionada uma cadeia de eventos de trans-
doena de Hashimoto, um tipo de doena autoimune da duo de sinal que culmina na degradao de IkB, o que
tireoide. O processo exigiria o isolamento da IgG do soro do libera NFkB para translocao at o ncleo e incio da
paciente, conjugao com fluorescena e aplicao a um corte transcrio gnica (veja a Figura1.9). Assim, ao usarmos um
de tireoide humana sobre lmina. O exame ao microscpio anticorpo contra NFkB observaramos que, embora os
de fluorescncia mostraria a colorao brilhante do citoplasma macrfagos em repouso contenham grande quantidade de
das clulas epiteliais foliculares (veja a Figura18.1a). NFkB, ele parece estar todo no citoplasma. Entretanto,
Vejamos outro exemplo para ilustrar a versatilidade dessa certamente notaramos que em poucos minutos depois da
tcnica. Acabamos de produzir um anticorpo monoclonal exposio ao LPS, quase todo o NFkB havia entrado no
contra um fator de transcrio (NFkB, por exemplo) impor- ncleo (Figura6.9).
tante para a ativao de macrfagos induzida por LPS e a O uso de dois (ou mesmo trs) antissoros conjugados com
produo de IL1b. Poderamos comparar macrfagos em corante que emitem fluorescncia em diferentes comprimen-
repouso com macrfagos tratados com LPS para verificar se tos de onda (Figura6.10) torna possvel a identificao simul-
o fator de transcrio tem alguma ao interessante aps tnea de vrios antgenos diferentes ao mesmo tempo. Na
exposio dos macrfagos ao LPS. O Captulo 1 (veja a Figura 2.7e, a colorao direta de plasmcitos fixados com
Figura1.9) mostrava que NFkB normalmente est preso no uma mistura de anti-IgG marcada com rodamina e anti-IgM
citoplasma e seu acesso ao ncleo impedido pela interao conjugada com fluorescena mostra, de modo engenhoso, que

Figura6.8 A base dos testes de


Antgeno anticorpos por fluorescncia para
Corte identificao de antgenos teciduais
de tecido ou seus anticorpos. = marcado
Lmina Anticorpo Anticorpo Anti-imunoglobulina com fluorescena
no marcado marcado com marcada com
Luz excitante fluorescena fluorescena

Fluorescena

Anticorpo em
Antgeno
plasmcito

a Teste direto b Teste indireto c Teste sanduche

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158 Fundamentos de Imunologia

Figura6.11 Microscopia de Contraste de fase Tubulina


imunofluorescncia confocal.
Clula HeLa humana
imunocorada com anticorpo
anti-b-tubulina de camundongo
detectada com Ig
anticamundongo marcada com
FITC (verde) e anticorpo
anticitocromo c de coelho
detectado com Ig anticoelho
marcada com vermelho do
Texas (vermelho). As clulas
tambm foram coradas pelo
corante de ligao do DNA,
DAPI (azul). A figura tambm
mostra uma imagem em
contraste de fase da mesma
clula para comparao. As
imagens foram adquiridas com
microscpio confocal Olympus
Fluoroview 1.000. (Cortesia da
Dra. Petrina Delivani, Dept. of
Genetics, Trinity College
Dublin, Irlanda.)

Citocromo c Composto

a nitidez da imagem muito maior que na microscopia de exemplo) para verificar se a expresso dessas protenas
imunofluorescncia convencional (Figura6.11). Uma unidade mutuamente exclusiva. A avaliao da porcentagem de
de varredura X-Y possibilita a avaliao quantitativa de todo o clulas de uma populao que expressa CD4 ou CD8, ou
plano da amostra e, com recursos pticos adequados, possvel ambos, por microscopia de fluorescncia ou microscopia
fazer o uso simultneo de trs ou quatro fluorocromos diferen- confocal seria muito trabalhosa, pois exigiria a contagem
tes. O software do aparelho processa imagens fluorescentes tri- manual de vrias centenas de clulas para obter dados con-
dimensionais a partir de uma srie automtica dessas imagens fiveis. Alm do trabalho, essas anlises tambm seriam bas-
X-Y acumuladas no eixo Z (Figura6.12) e gira-as ao comando tante subjetivas e os resultados variam de acordo com a
do operador. Essas pilhas de imagens no eixo Z so usadas para habilidade do operador. Felizmente, o citmetro de fluxo
reconstruir a viso tridimensional de uma clula, um tecido ou um instrumento que torna essas avaliaes triviais, pois
uma organela e oferecem imagens excelentes da estrutura analisa os nveis de fluorescncia associados a milhares de
celular e molecular. Experincias com a tcnica de lapso de clulas por minuto de modo altamente reprodutvel e quan-
tempo tambm podem ser realizadas com microscpio confo- titativo (Figura6.13)
cal e com frequncia transformam nossa compreenso dos Em sua forma mais bsica, o citmetro de fluxo um
eventos antes s vistos em imagens instantneas. Muitas vezes, instrumento equipado com sistema de controle de lquido
realmente preciso ver para crer! capaz de deslocar milhares de clulas em fila nica atravs
de uma cmara estreita iluminada por laser. A passagem de
Citometria de fluxo uma clula imunomarcada atravs da cmara de fluxo (flow
Quando uma populao de clulas imunocorada para cell) excita o fluorocromo associado clula pelo laser. A
determinado marcador (CD4, por exemplo) um subgrupo emisso do fluorocromo percebida por um detector foto-
da populao pode expressar esse marcador em altos nveis, multiplicador sensvel que possibilita a quantificao precisa
outro subgrupo pode expressar o mesmo marcador em da fluorescncia associada clula. Desse modo, possvel
baixos nveis e o restante pode ser negativo. Para aumentar discriminar rapidamente entre clulas negativas, levemente
ainda mais a complexidade, pode-se desejar fazer a avaliao positivas ou altamente positivas para determinado marcador
simultnea da expresso de outro marcador (CD8, por ou antgeno. A maioria dos citmetros de fluxo modernos

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162 Fundamentos de Imunologia

H-E Anti-CD21 Anti-CD68

Anti-CD3 Anti-CD20 Anti-CD3 (marrom)


Anti-CD20 (vermelho)

Figura6.16 Anlise imuno-histoqumica de centros foliculares de tonsila humana. Amostras de tonsila humana foram
preparadas com o corante histoqumico hematoxilina e eosina (H-E) ou imunocoradas com anticorpos contra CD21 (receptor 2do
complemento, expresso em clulas dendrticas foliculares e clulas B), CD68 (expresso em macrfagos), CD3 (clulas T), CD20
(clulas B) ou uma associao de anti-CD3 e anti-CD20, como mostra a figura. (Imagens gentilmente cedidas pelo Dr. Andreas
Kappeler, University of Bern, Sua.)

Deteco e quantificao de antgenos No caso de molculas pequenas, como frmacos ou horm-


por anticorpos nios esteroides, em que invivel a ligao a dois locais,
convm usar ensaios competitivos (FiguraM6.1.1).
Imunoensaio de antgeno por ELISA O ELISA (ensaio imunossorvente ligado a enzima)
A capacidade de medir a concentrao de um analito (i.e., uma um dos mais usados para medida de antgenos, tais como as
substncia a ser medida) pela ocupao fracionria de seu rea- citocinas, no soro ou em lquido de cultura celular. A tcnica
gente de ligao especfica uma caracterstica de todo sistema bastante direta e implica imobilizao de anticorpo contra
de unio a ligantes (Marco histrico 6.1), mas como possvel a protena de interesse nas cavidades plsticas de uma placa
aumentar a quantidade de anticorpos contra quase todas as de microtitulao. Os locais de ligao a protenas livres na
estruturas, a aplicao mais verstil no imunoensaio. placa so bloqueados por incubao com uma protena irre-
Analitos grandes, como hormnios proteicos, costumam levante como a albumina. Em seguida, amostras contendo o
ser estimados por ensaio no competitivo de dois locais no antgeno de interesse so acrescentadas s cavidades revestidas
qual tanto o agente de ligao ao ligante original quanto o com anticorpos e incubadas por algumas horas para que haja
reagente de deteco marcado so anticorpos (FiguraM6.1.1). captura do antgeno pelo anticorpo. Aps a lavagem para
Ao usar anticorpos monoclonais contra dois eptopos diferen- remover o material no ligado, o antgeno ligado detectado
tes no mesmo analito, o sistema tem maior capacidade de pelo acrscimo de um segundo anticorpo contra um local de
discriminar entre dois analitos relacionados; se a reatividade ligao no antgeno diferente do local reconhecido pelo anti-
cruzada fracionria do primeiro anticorpo para um analito corpo de captura. Agora o antgeno est situado entre os dois
relacionado for igual a 0,1 e a do segundo tambm for 0,1, anticorpos, o que d origem aos termos ELISA sanduche
a leitura final de reatividade cruzada ser de apenas 0,1 0,1, ou ensaio de captura de antgeno. Oanticorpo de deteco
ou seja, 1%. Existem ensaios altamente sensveis para uma conjugado a uma enzima, como aperoxidase de raiz-forte
variedade surpreendente de analitos com emprego de sondas ou fosfatase alcalina, que, aps acrscimo do substrato enzi-
quimioluminescentes e fluorescentes com resoluo temporal. mtico, gera um produto de reao colorido ou quimiolumi-

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174 Fundamentos de Imunologia

Figura6.29 Prova de hemaglutinao para autoanticorpos


5.120 antitireoglobulina. Clulas recobertas por tireoglobulina foram
acrescentadas a diluies de soros de pacientes. Clulas no
2.560 recobertas foram acrescentadas a uma diluio 1:10de soro
como controle. Em uma reao positiva, as clulas
1.280 sedimentam-se no fundo da cavidade como um tapete. Por
causa do formato de V dessas cavidades em corte transversal,
640 nas reaes negativas as clulas se depositam na base do V,
Diluio do soro

formando um boto pequeno e reconhecido com facilidade. O


320 inverso da mxima diluio do soro que produz uma reao
positiva inquestionvel denominado ttulo. Os ttulos, da
160 esquerda para a direita, so: 640, 20, >5.120, neg, 40, 320,
neg, >5.120. O controle no caso do soro n 46foi ligeiramente
80 positivo e preciso repetir o teste nesse soro depois da
absoro com clulas no recobertas.
40

20 ensaios de fluorescncia com resoluo temporal que empre-


gam quelatos de terras raras, como eurpio 3+, embora esses
10 tenham um papel mais importante em ensaios de
antgenos.
Controle

Deteco da formao de
imunocomplexos
N do soro 46 18 58 21 26 11 70 52
Muitas tcnicas para deteco de complexos circulantes foram
descritas e, por causa das variaes de tamanho, da capacidade
A conjugao com a vitamina biotina usada com frequncia, de fixao do complemento e da classe Ig dos diferentes
pois esse conjugado detectado com facilidade por sua reao complexos, convm aplicar mais de um mtodo. Dois
com a avidina ou estreptavidina ligada enzima (a segunda mtodos bastante adequados para uso geral so:
tem menor ligao de fundo); ambas ligam-se com especifi-
cidade e afinidade extraordinrias (K = 1015 M1). 1 Precipitao de complexos de IgG do soro em concentra-
Os sistemas quimioluminescentes por reao de luminol es de polietilenoglicol que no reduzem de maneira sig-
catalisada por HRP, nos quais a luz do substrato luminol nificativa a quantidade de monmeros de IgG, seguida por
oxidado intensificada e a durao do sinal aumentada estimativa de IgG no precipitado por imunodifuso radial
por um reagente potencializador, garantem maior sensibili- simples (SIRD, do ingls, single radial immunodiffusion) ou
dade e variao dinmica. Cabe fazer meno especial aos nefelometria com laser; e

Acrescentar soro Acrescentar anti-Ig


Acrescentar Ag
do paciente marcada

Medio
lavagem lavagem lavagem
do marcador

Tubo plstico

Figura6.30 Imunoensaio em fase slida para anticorpos. Para reduzir a ligao inespecfica de IgG fase slida aps adsoro
do primeiro reagente, comum acrescentar uma protena irrelevante, como leite em p desnatado ou albumina srica bovina, para
bloquear todos os locais livres no plstico. Note que a conformao de uma protena costuma se alterar aps a ligao ao plstico,
por exemplo, um anticorpo monoclonal que distingue entre as formas apo e holo do citocromo c em soluo combina-se
igualmente bem s duas protenas na fase slida. s vezes o acoplamento covalente ao plstico carboxiderivado ou a captura do
substrato antignico (Ag) por anticorpo em fase slida diminui esse efeito.

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Captulo6 | Mtodos Imunolgicos e suas Aplicaes 177

Marco histrico 6.2 Separador de clulas ativado por fluorescncia (FACS)

O FACS foi desenvolvido pelo casal Herzenberg (Leonard e emerge em uma nica gotcula; a clula adquire carga e
Leonore) e seus colegas para medir as molculas de pode ser separada em um campo eltrico (FiguraM6.2.1).
superfcie em leuccitos individuais por sua reao com Asofisticao pode ser ainda maior com o uso de lasers e
anticorpos monoclonais marcados com fluorocromo e para fluorocromos adicionais e disperso da luz tanto frontal
usar os sinais gerados na separao de clulas de fentipo quanto a 90. A seo sobre citometria de fluxo oferece
definido em mistura heterognea. mais detalhes e descreve o uso dessa tcnica para anlise
Nesse aparelho elegante mas complexo, as clulas multiparamtrica quantitativa de populaes de uma nica
fluorescentes fluem obedientemente em fila nica e passam clula (veja a Figura6.14). suficiente dizer que esses
por um feixe de laser. A avaliao quantitativa do sinal ltimos aparelhos de FACS possibilitam o isolamento de
fluorescente em tubo fotomultiplicador em posio clulas com fentipo complexo de uma populao
adequada transmite um sinal para a clula quando esta heterognea com alto grau de discriminao.

1 2 3

Lquido envolvente Suspenso de


(sheath fluid) clulas coradas

Campo
+
eltrico

A
Sinal de carga A

Detectores de fluorescncia

Laser(s) A Detectores de disperso


da luz

Clulas marcadas Clulas no


marcadas

FiguraM6.2.1 Princpio do FACS para citometria de fluxo da fluorescncia em clulas coradas (crculos com aro verde) e
separao fsica das clulas no coradas. O sinal de carga pode ser ativado para separar clulas de alta e baixa fluorescncia e,
usando disperso da luz, grandes e pequenas, bem como mortas e vivas.

(hanging drops); por ocasio da transferncia para condies Anlise da expresso gnica
de cultura normal de rgos depois de algumas horas, h
reagregao em lobos intactos, como em um passe de mgica, A anlise dos padres de expresso gnica pode dizer muito
e ento se revelam os vrios processos de diferenciao e sobre o que uma clula ou uma populao de clulas est
maturao. fazendo, ou prestes a fazer, em determinado momento. Para
possvel produzir animais com basicamente uma nica analisar a coorte de genes expressos por uma populao de
especificidade de clulas T mediante a introduo de genes de clulas, seja em nvel constante ou em resposta a dado est-
receptor a e b de clulas T oriundos de um clone de clulas T, mulo, extrai-se e analisa-se o RNA mensageiro (mRNA) por
como um transgene (veja adiante); como os genes j esto um mtodo que possibilita a deteco dos genes de interesse.
reorganizados, sua presena em todas as clulas T em desenvol- A anlise do mRNA pode ser feita por Northern blot, no
vimento desativam todas as outras recombinaes do gene Vb. qual uma nica sonda gnica hibridizada com a amostra
No houve sucesso na clonagem de clulas B primrias, de mRNA, ou por PCR via transcriptase reversa (RT-PCR),
pois elas morrem logo depois da introduo em cultura na qual, para amplificar os genes de interesse, faz-se pri-
celular. possvel, porm, cultivar hibridomas de clulas B meiro uma cpia cDNA usando a transcriptase reversa e,
imortalizadas ou linhagens de clulas transformadas por EBV, em seguida, faz-se a amplificao do gene por meio de
e, a exemplo das clulas T, foram gerados animais transgnicos primers especficos complementares sequncia de interesse.
que expressam o mesmo anticorpo em todas as clulas B. Embora as tcnicas de Northern blot e RT-PCR possam

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180 Fundamentos de Imunologia

Figura6.35 Anlise de proliferao (a)


Linfcitos no Linfcitos marcados Proliferao de linfcito
celular por marcao com CFSE. marcados com CFSE Ag-especfico
Podem-se marcar linfcitos, ou outras
clulas com potencial proliferativo, com Incubar Acrescentar
com APC Ag+
o corante lipoflico fluorescente, CFSE, CFSE
e depois analisar a distribuio do
corante fluorescente entre as clulas-
filhas. (a) Representao esquemtica
de uma experincia de marcao com
CFSE e os grficos correspondentes
obtidos por citometria de fluxo. (b) Anlise por citometria de fluxo Anlise por citometria de fluxo Anlise por citometria de fluxo
Clulas T perifricas humanas foram
marcadas com CFSE e estimuladas

Nmero de clulas

Nmero de clulas

Nmero de clulas
com anticorpos monoclonais anti-CD3 0
1 0
que recobriam uma placa durante
2
4dias. Imagem esquerda: ausncia 3
de estimulao; imagem direita:
estimulao com anti-CD3. Os nmeros
e as barras na parte superior de cada Colorao com CFSE Colorao com CFSE Colorao com CFSE
histograma referem-se aos respectivos
picos de diviso, e o pico de clulas (b)
no divididas est na extrema direita de
No estimuladas anti-CD3
cada histograma. (Cortesia do Dr. 0
Nmero de clulas

Nmero de clulas
0
Antione Attinger.) 4
5 3
2

6 1
7

100 101 102 103 104 100 101 102 103 104
CFSE CFSE

uma linhagem celular cujos crescimento e sobrevivncia seria alcanado in vivo. Vamos ilustrar esse ponto tomando
dependam de uma citocina especfica. As clulas individuais como referncia a citotoxicidade para clulas murinas infec-
que sintetizam citocinas podem ser contadas no citmetro de tadas pelo vrus da coriomeningite linfoctica (LCMV, do
fluxo por permeabilizao e colorao intracelular com anti- ingls, lymphocytic choriomeningitis virus) ou vrus da estoma-
corpo marcado (veja adiante); outra opo a tcnica tite vesicular (VSV, do ingls, vesicular stomatitis virus). A
ELISPOT (veja adiante). Como de costume, a biologia mole- tcnica in vitro mais sensvel a liberao de cromo das
cular oferece informaes teis, j que mais sofisticada, pois clulas-alvo aps estimulao secundria dos linfcitos. No
clulas T transfectadas com uma construo lacZ acentuadora entanto, isso leva 5 dias, durante os quais relativamente
de IL-2 acionam a expresso de lacZ b-galactosidase quando poucos precursores de clulas T citotxicas CD8de memria
h ativao da resposta da citocina IL-2 (veja a p. 219), o que reproduzem-se e ultrapassam o limiar necessrio para que o
pode ser facilmente revelado com um substrato enzimtico ensaio seja mensurvel. Apesar disso, um ensaio de citotoxi-
fluorescente ou cromognico. cidade fraco nessas condies no foi refletido por nenhuma
A capacidade das clulas T citotxicas de destrurem os das avaliaes in vivo da funo antiviral, o que significa que
alvos celulares por mecanismos extracelulares geralmente no tiveram relevncia biolgica.
avaliada por um ensaio de liberao de cromo. As clulas-alvo
so marcadas com 51Cr e a liberao de protena radioativa Deteco de subgrupos de clulas T por
para o meio maior que a observada em controles o ndice colorao para expresso de citocinas
de citotoxicidade. O teste repetido com diferentes propor- A produo de citocinas por populaes de clulas T foi,
es de clulas efetoras e clulas-alvo. Uma tcnica seme- durante muitos anos, realizada na populao, usando ensaios
lhante empregada para medir a destruio extracelular por ELISA, por exemplo. O motivo que as citocinas, com
clulas NK de alvos recobertos ou no recobertos por anti- algumas excees, costumam ser secretadas rapidamente
corpos. Agora, preciso ateno na interpretao de ensaios medida que so sintetizadas. No entanto, duas tcnicas
in vitro. Como possvel manipular as condies de cultura tornam possvel medir a produo de citocinas diretamente
dentro de limites amplos, pode-se obter um resultado que no na clula. Uma delas emprega inibidores da exportao de

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182 Fundamentos de Imunologia

(a) (b)

Anexina V-FITC

Contagem

Contagem
Anexina V-FITC

100 101 102 103 104 100 101 102 103 104
FL1-H FL1-H

Figura6.37 Anlise da apoptose por marcao com anexina V. A fosfatidilserina (PS) exteriorizada na lmina externa da
membrana plasmtica durante a apoptose e pode ser detectada com facilidade usando-se a protena de ligao PS, anexina V. (a)
Clulas linfoblastoides T humanas no tratadas; e (b) clulas linfoblastoides T apoptticas foram coradas com anexina V conjugada
a FITC (Dados gentilmente cedidos pela Dra. Gabriela Brumatti.)

clula precursora por alquota. Desse modo, possvel calcu- s clula por cavidade), j que a maioria das clulas, com
lar a frequncia de precursores na suspenso celular original. poucas excees, requer sinais de outras clulas para sobrevi-
A Figura6.38mostra um exemplo com alguns detalhes. ver. Martin Raff mostrou que as clulas costumam sofrer
Afirmou-se que a anlise de diluio limitante costuma apoptose na ausncia desses sinais. Uma medida precisa da
subestimar a verdadeira frequncia dos precursores. prov- porcentagem de linfcitos que tem um receptor antignico
vel que isso ocorra porque as clulas geralmente so sobrevi- especfico obtida por citometria de fluxo das clulas coradas
vem muito bem quando cultivadas em isolamento (i.e., uma com antgeno marcado. No caso das clulas B isso bastante

a b

N de clulas que respondem N de clulas que respondem


por cavidade 103 por cavidade 103
40 20 10 5 1 2 3 4 5
70 100
60 80
50
Cavidades negativas (%)

40 60
Lise especfica (%)

30
20
10 40
0
N de clulas que respondem
por cavidade 103 20
2,5 1,25 0,625 0,3125
60
50
40
30 10
20
10
0
-10 5

Figura6.38 Anlise de diluio limitante da frequncia de precursores de clulas T citotxicas em clulas esplnicas de um
camundongo BALB/c estimuladas com clulas esplnicas C57BL/6 irradiadas como antgeno. As clulas esplnicas reativas de
BALB/c foram organizadas em 24 rplicas em cada concentrao testada junto com antgeno e um excesso de fatores auxiliares T.
Observou-se a gerao de citotoxicidade em cada cavidade por acrscimo de clulas tumorais do hapltipo C57BL/6marcadas
com 51Cr (EL-4); em seguida, a citotoxicidade foi revelada por medida da liberao no meio de material intracelular solvel marcado
com 51Cr. (a) Os pontos mostram a porcentagem de lise especfica de cavidades individuais. A linha tracejada indica trs desvios
padro acima do controle de liberao mdia, e cada ponto acima dessa linha contado como positivo para citotoxicidade. (b) Os
dados so representados em grfico em termos da porcentagem de cavidades negativas em cada concentrao de clulas reativas
acima da faixa de titulao dos dados (5 103/cavidade a 0,625 103/cavidade). A linha tracejada foi desenhada em 37% de
cavidades negativas e corta a linha de regresso, apontando uma frequncia de precursores (Tcp) de 1 em 2.327clulas reativas. A
linha de regresso tem valor r2de 1,00 nessa experincia. (Reproduzida com permisso de Simpson E. & Chandler P. (1986) In:
Weir D.M. (ed.) Handbook of Experimental Immunology, Figura 68.2. Blackwell Scientific Publications, Oxford.)

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Captulo6 | Mtodos Imunolgicos e suas Aplicaes 187

Massa celular
interna
Proncleos Blastocisto

Ovcito
Injeo de DNA no proncleo fertilizado Massa celular interna em cultura

Cultura de
Transferncia para a me de aluguel Transfeco com DNA clulas-tronco
embrionrias

Embries
em
desenvolvimento

Seleo de clulas transfectadas


e injeo no blastocisto
Prole
transgnica
Novo
blastocisto
Cruzamento para obter linhagem pura

Implante na fmea
Camundongos
transgnicos
Camundongo
quimrico

Figura6.44 Produo de camundongos transgnicos de


Endocruzamento para transmisso
linhagem pura por microinjeo de ovcito fertilizado,
do transgene na linhagem germinativa
implantao em me de aluguel e subsequente
endocruzamento.
Linhagem
transgnica
Transgenes introduzidos em clulas-tronco pura
embrionrias
As clulas-tronco embrionrias (ES, do ingls, embryonic
Figura6.45 Introduo de um transgene por transfeco de
stem) podem ser obtidas por cultura da massa celular interna clulas-tronco embrionrias. As clulas transfectadas podem
de blastocistos de camundongo. Depois da transfeco com ser selecionadas, por exemplo, para knockouts recombinantes
o gene apropriado, podem-se selecionar as clulas transfecta- homlogos, antes da reimplantao.
das e reimplant-las aps injeo em novo blastocisto. Os
camundongos resultantes so quimricos, porque algumas apenas as clulas ES que tiveram o gene endgeno deletado
clulas tm o transgene e outras, no. O mesmo ocorre com (Figura6.46). Essa tecnologia realmente poderosa e toda
as clulas germinativas, e possvel obter linhagens puras por a comunidade biolgica foi contagiada pela febre do boxe,
endocruzamento para transmisso do transgene na linhagem fazendo knockout de genes direita, esquerda e ao centro.
germinativa (Figura6.45). A Tabela6.2 apresenta apenas alguns exemplos de camun-
A vantagem em relao microinjeo a possibilidade dongos knockout de interesse para imunologistas.
de selecionar as clulas aps transfeco, o que tem especial No particularmente raro observar anomalias congnitas
importncia quando a recombinao homolga necess- inesperadas, causadas pelo knockout de um gene. Embora isso
ria para gerar camundongos knockout sem o gene de possa, por si mesmo, oferecer informaes importantes acerca
interesse. Nesse caso, insere-se nas clulas ES uma sequncia do papel do gene nos processos do desenvolvimento, tambm
de DNA que desorganiza a matriz de leitura do gene end- pode frustrar o objetivo original da experincia. Na verdade,
geno. Visto que a recombinao homloga um processo a letalidade embrionria torna inviveis vrios knockouts. No
raro em comparao com a integrao aleatria, incorpo- tenha medo, mais uma vez a criatividade triunfa, nesse caso
ram-se marcadores selecionveis construo para transferir pelo controle dos sistemas de recombinase de vrus ou leve-

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188 Fundamentos de Imunologia

Sequncia de
interesse
contendo gene tk 5 neo R 3 RAG-1 Plasmdio
inativo
Recombinao
homloga
Gene normal
endgeno em RAG-1 Cromossomo
clulas ES

Gene knockedout
5 neo R 3 RAG-1 Cromossomo
em clulas ES

Figura6.46 Inativao gnica por recombinao homloga com DNA de plasmdio que contm uma cpia do gene de interesse
(neste exemplo, RAG-1) no qual foi inserida uma sequncia especificadora de resistncia neomicina (neoR) de modo a destruir a
matriz de leitura RAG-1 entre as extremidades 5 e 3 do gene. As clulas-tronco embrionrias (ES) nas quais a sequncia de
interesse incorporada ao DNA cromossmico por recombinao homloga so resistentes ao anlogo G418da neomicina. As
clulas-tronco nas quais houve recombinao no homloga no DNA cromossmico incorporaram tambm o gene timidina quinase
(tk) que pode ser usado para destruir essas clulas por cultura na presena de ganciclovir, deixando apenas clulas ES nas quais
houve recombinao homloga, que so usadas para criar um camundongo knockout.

duras. Em vez de usar um gene inativo para criar o camun-


Tabela6.2. Alguns knockouts de genes e seus
dongo knockout, a construo de interesse contm o tipo
efeitos.
normal do gene, porm ladeado por sequncias de reconhe-
cimento (locais loxP) para uma enzima recombinase deno Alvo do knockout Fentipo de camundongos
minada Cre. Esses camundongos so acasalados com knockout
camundongos transgnicos contendo o transgene Cre deri- Cadeia a CD8 Ausncia de clulas T
vado do bacterifago P1 ligado a um promotor indutvel ou citotxicas
tecido-especfico. O gene endgeno de interesse s deletado
p59fynT Anomalia da sinalizao em
no momento e no lugar de expresso de Cre, criando assim timcitos, mas no nas clulas T
um knockout condicional ou tecido-especfico (Figura perifricas
6.47). O sistema Cre/loxP tambm pode ser organizado de
HOX 11 Ausncia do bao
modo a ativar a expresso de um gene por incorporao de
uma sequncia de trmino ladeada por locais loxP. Cadeia a FCeRI Resistncia anafilaxia cutnea
Os camundongos que tm um gene endgeno substitudo e sistmica
intencionalmente por um gene ativo, seja ele uma verso xon da cadeia m da Ausncia de clulas B
modificada do gene original, seja um gene totalmente dife- IgM da membrana
rente, so denominados camundongos knocked in. IL-6 Ausncia de perda ssea
Portanto, no exemplo anterior, o knock-in de um gene ladeado quando ooforectomizada
por loxP acaba por levar ao knockout de um gene em um tipo (implicaes para
celular selecionado. osteoporose?)

IL-18 Suscetvel Leishmania major;


Terapia gnica em seres humanos mudana da resposta Th1
para Th2 (diminuio de IFNg
Aparentemente estamos alcanando a fico cientfica e e aumento da produo
estamos nos estgios iniciais da capacidade de corrigir infor- de IL-4)
tnios genticos pela introduo de genes bons. Por Ab da molcula do Diminuio das clulas T CD4;
exemplo, um tipo de imunodeficincia combinada grave MHC classe II doena intestinal inflamatria
(SCID, do ingls, severe combined immunodeficiency) causado
Perforina Diminuio da funo de CTL e
por mutao do gene gc que codifica uma subunidade dos clulas NK
receptores de citocinas para IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e
IL-21. Esse defeito foi corrigido em crianas por transferncia TAP1 Ausncia de clulas CD8
in vitro do gene normal para as clulas-tronco CD34+ da TNFR-1 Resistente ao choque
medula ssea usando-se vetor derivado de um retrovrus endotxico; suscetvel Listeria
Moloney, uma prova convincente do princpio para terapia
Modificada de Brandon (1995) Current Biology 5, 625.
gnica humana.

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190 Fundamentos de Imunologia

Produo programada de anticorpos H2podem ser usadas para desenvolver novos


QQ possvel produzir antissoros policlonais por frmacos.
Resumo

imunizao repetida com antgenos.


QQ Os anticorpos policlonais reconhecem uma mistura Purificao de antgenos e anticorpos por
de determinantes no antgeno. cromatografia de afinidade
QQ Adjuvantes so necessrios para respostas imunes QQ Imunoabsorventes insolveis preparados por

eficientes contra o antgeno. acoplamento de anticorpo sefarose podem ser


QQ Linhagens celulares imortais de hibridoma usados para purificao de antgenos por afinidade
produtoras de anticorpos monoclonais propiciam em misturas complexas e para purificao
reagentes imunolgicos eficientes e compreenso recproca dos anticorpos.
da resposta imune. As aplicaes abrangem a QQ A cromatografia de afinidade tambm pode ser

contagem de subpopulaes de linfcitos, usada na copurificao de protenas que servem


depleo celular, imunoensaio, diagnstico e como parceiras de ligao de antgenos.
imagem do cncer, purificao de antgeno a partir
de misturas complexas e, recentemente, o uso de Modulao da atividade biolgica
anticorpos monoclonais como enzimas artificiais QQ possvel detectar anticorpos por inibio de
(anticorpos catalticos). funes biolgicas como infectividade viral ou
QQ Fragmentos de anticorpos modificados por crescimento bacteriano.
engenharia gentica podem ser obtidos por QQ A inibio da funo biolgica por anticorpos

expanso dos genes VH e VL de doadores no conhecidos ajuda a definir o papel do antgeno,


imunizados, mas preferencialmente imunizados, e um hormnio ou uma citocina, por exemplo, em
expresso na forma de colees combinatrias respostas complexas in vivo e in vitro.
totalmente randomizadas na superfcie do QQ A ativao da funo biolgica por anticorpos

bacterifago. Fagos com anticorpos de afinidade estimuladores do receptor ou de ligao cruzada


mxima so selecionados por panning em ao receptor pode substituir o ligante natural e ser
antgenos e ento possvel clonar genes de usada para explorar a funo biolgica in vitro ou
anticorpos a partir dos vrus isolados. in vivo.
QQ possvel criar fragmentos Fv de cadeia nica

(scFv) codificados por genes VH e VL ligados e at Imunodeteco de antgenos em clulas e tecidos


mesmo domnios de cadeia pesada nica. QQ Os anticorpos podem ser usados como sondas
QQ A resposta de anticorpos humanos altamente especficas para detectar antgenos em
anticamundongo (HAMA) um obstculo um tecido e para explorar a localizao subcelular
significativo ao uso de anticorpos monoclonais de do antgeno. Os antgenos podem ser localizados
camundongo para fins teraputicos. se corados por anticorpos fluorescentes e
QQ A resposta de HAMA contra anticorpos observados por microscpio de fluorescncia.
monoclonais de camundongo pode ser reduzida QQ A fixao e a permeabilizao das clulas

produzindo-se anticorpos quimricos com regies possibilitam a entrada de anticorpos e a deteco


variveis de camundongo e regies constantes de antgenos intracelulares.
humanas ou, ainda melhor, usando-se anticorpos QQ A microscopia confocal examina um plano muito

humanizados nos quais todas as sequncias de fino em grande aumento e oferece dados
camundongos, exceto CDR, sejam substitudas por quantitativos em imagens muito ntidas das
sequncias humanas. estruturas contendo antgenos que tambm podem
QQ Anticorpos humanizados esto em uso clnico para ser examinadas em trs dimenses.
tratamento de vrios distrbios, como artrite QQ Os anticorpos podem ser marcados diretamente

reumatoide e linfoma de clulas B. ou visualizados por um anticorpo secundrio, uma


QQ Camundongos transgnicos com genes de Ig anti-Ig marcada.
humana podem ser imunizados. Os camundongos QQ Diferentes marcadores fluorescentes so

produzem anticorpos de alta afinidade totalmente conjugados com anticorpos secundrios que
humanos. possibilitam a deteco simultnea de vrios
QQ Os anticorpos recombinantes podem ser antgenos diferentes na mesma clula.
expressos em larga escala nos vegetais. QQ A citometria de fluxo uma tcnica altamente

QQ Colees combinatrias de anticorpos bivalentes quantitativa para detectar fluorescncia associada


biespecficos (diabodies) contendo o VH CDR H1 e a clulas marcadas imunologicamente ou com

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Roitt

Roitt
Roitt | Fundamentos de Imunologia o livro-texto preferido pelos estudantes e professores de
Imunologia em todo o mundo.
Fundamentos de Sumrio

Imunologia
Completamente atualizada, esta 12a edio engloba os mais recentes conceitos sobre o Parte 1: Fundamentos de Imunologia
funcionamento do sistema imune. 1 | Imunidade Inata, 3

Fundamentos de
2 | Imunidade Adquirida

Imunologia
Com estilo original e de fcil leitura, a obra explica claramente os princpios fundamentais
Especfica, 36
necessrios ao aprendizado dos estudantes de medicina e demais cincias da sade, desde os 3 | Anticorpos, 54
conceitos bsicos de imunidade at suas aplicaes clnicas. 4 | Receptores de Membrana
para Antgenos, 80
Roitt | Fundamentos de Imunologia est ricamente ilustrado, com muitas figuras novas, alm
das originais, o que enfatiza sua abordagem didtica. No incio de cada captulo h uma seo Peter J. Delves | Seamus J. Martin | Dennis R. Burton | Ivan M. Roitt 5 | Interao Primria com o
Antgeno, 116
intitulada Para lembrar, que apresenta informaes essenciais sobre o tema a ser explorado, 6 | Mtodos Imunolgicos e suas
e, ao final, um resumo com os principais tpicos para reviso e consulta rpida. Aplicaes, 146
7 | Anatomia da Resposta
12a edio Imune, 195
8 | Ativao de Linfcitos, 212
9 | Produo de Efetores, 234
10 | Mecanismos de Controle, 272
11 | Ontogenia e Filogenia, 292

Delves | Martin | Burton | Roitt


Parte 2: Imunologia Aplicada
12 | Estratgias Concorrentes
durante a Infeco, 323
13 | Vacinas, 356
14 | Imunodeficincia, 380
15 | Alergia e outras
Hipersensibilidades, 406
16 | Transplante, 436
17 | Imunologia dos Tumores, 459
18 | Doenas Autoimunes, 492
Glossrio, 529
ndice Alfabtico, 541

12a edio

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