“AISLAMIENTO DE BACTERIAS POTENCIALMENTE DEGRADADORAS DE HIDROCARBUROS PRESENTES EN

SEDIMENTOS DE UNA ESTACIÓN DE SERVICIO DE COMBUSTIBLE EN JULIACA-PERÚ-2017”

Hinojosa Quispe, Roddy, Toque Peralta, Tomy y Quispe Cristian

Estudiantes de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional del Altiplano-Puno.

RESUMEN

En la investigación se evaluó el efecto de la bioestimulación en sedimentos contaminados con

hidrocarburos de la Estación de Servicio de Combustible PETRO PERÚ - Juliaca – Perú,
producto de la venta del combustible, llenado de tanques de almacenamiento de combustible y
otros. Los objetivos del estudio fueron conocer el efecto de la bioestimulación (adición de guano
de vacuno) en el crecimiento bacteriano y como afecta su desarrollo colonial y establecer la
sobrevivencia de las bacterias biodegradadoras, en los diferentes mesocosmos (muestras), para
lo cual se realizó la técnica de bioestimulación, a los sedimentos contaminados, se les añadió un
nutriente (guano de vacuno), se realizó el tratamiento, beneficiando el desarrollo y crecimiento
de los microorganismos degradadores para lo cual se utilizó 4 mesocosmos (muestras),
resultando que en el primero (200g de suelo con hidrocarburos y 200g de guano más agua
destilada) se evidenció la presencia de cocos gram positivos con probabilidad de pertenecer a
la familia de Rhodococcus. Para la muestra 2 (200g de suelo con hidrocarburos y 100g de guano
más agua destilada) se hallaron bacillus gram negativos, presumiblemente del género
Pseudomonas. Para la muestra 3 (200g de suelo con hidrocarburos y 50g de guano más agua
destilada), se encontró mayor prevalencia de cocos gram positivos y pseudomonas gram
negativas. Para la muestra 4 (200g de suelo con hidrocarburos con ausencia de guano más agua
destilada), se encontró la precedencia de cocos dispersos gram positivos con ausencia de
pseudomonas.

Palabras Clave: Biodegradadoras, bioestimulación, mesocosmos, Rhodococcus, Pseudomonas

INTRODUCCION la biotecnología, a mediados del siglo XX,
las primeras patentes, para remediación
Según (Shanidul y Tanaka 2004) la de vertidos de gasolina, aparecen en los
contaminación por hidrocarburos del años 70 y (Canon 2013) mencionad que
petróleo es una problemática de carácter en los años 80 se generalizó el uso de la
mundial y amplia distribución geográfica, Bioventilación para suministrar oxígeno a
teniendo como posibles zonas afectadas las zonas contaminadas. Durante los
(lagos, suelos, zonas freáticas, ríos y años 90 el desarrollo de las técnicas de
playas), al respecto (Cooney 1985) afirma Bioburbujeo, sin embargo (Volke 2002)
que el petróleo es una mezcla altamente difiere del anterior autor indicando que
compleja compuesta por una gran más bien se trataría de una tecnología
variedad de hidrocarburos, formados relativamente nueva, que representa
solamente por hidrógeno y carbono, tanto varias ventajas con respecto a los
el petróleo crudo como sus derivados métodos y químicos, mediante el cual es
contienen diversos tipos 8 de posible cambiar el estado de valencia de
hidrocarburos cuyas proporciones los hidrocarburos contaminantes,
relativas varían entre las diferentes clases favoreciendo así su absorción por parte
de estos compuestos y (Escalante 2000) de microrganismos. (Ercoli 2008) refiere
afirma que el hidrocarburo de petróleo que la tasa de biorremediación es
crudo y sus productos refinados pueden controlada por tres principales procesos:
dividirse en cuatro grupos: (i) transferencia de oxígeno desde el aire a
hidrocarburos alifáticos, (ii) hidrocarburos la solución acuosa, transferencia del
cíclicos, (iii) hidrocarburos aromáticos y aceite desde el suelo a la solución
(iv) compuestos orgánicos polares. acuosa, tasa de biodegradación del aceite
en la solución acuosa, (Buendia 2014)
(Rosenberg et al. 1992) indica que la ratifica que la biorremediación de suelos
biorremediación es una tecnología contaminados por hidrocarburos es una
basada en la utilización de los técnica que consiste en usar
microorganismos y su potencial microorganismos vivos para el consumo
degradador para eliminar los de los hidrocarburos de petróleo en el
contaminantes del medio, mediante su suelo, los cuales pueden ser según
transformación en productos inocuos (Maroto 2008) naturales (levaduras,
como el CO2 y el H2O, (Alegría 2013) hongos o bacterias) existentes en el
menciona que surgió como una rama de medio para descomponer o degradar
sustancias peligrosas en sustancias de clase de productos químicos orgánicos
carácter menos tóxico o bien inocuas para que consisten en dos o más benceno
el medio ambiente y la salud humana, fundido anillos y que estos son
mismos que son recomendados por componentes de la mayoría de los
(Vitale 2006), ya que realizan una combustibles fósiles y son ubicuo en el
degradación del agente contaminante entorno natural, (Castro 2014) ratifica la
más segura y menos costosa que importancia de este sector como pieza
soluciones alternativas tales como la clave del crecimiento de la economía
incineración o el enterramiento de los mundial, consumo de energía, por lo cual
materiales contaminados. Finalmente la exploración, las reservas y la
(Iturbe 2000) manifiesta que existen los producción han aumentado de manera
siguientes factores físicos y químicos para considerable y este es actualmente
que este proceso se realice de manera considerado como motor del crecimiento
eficiente: agua, temperatura, pH, oxígeno, económico en varios países del mundo,
nutrimentos mayores y menores, los (Maldonado 2010) establece que es la
cuales según (Wong 2009). son fuente de energía más importante con el
agregados al lugar afectado para 33% del consumo mundial (Garcia 2014),
estimular las poblaciones naturales y manifiesta que a la par del cerramiento del
aumentar su actividad consumo de esta materia prima, ha
crecido la contaminación producida por
(Velasquez 2016) señala que los los mismos, siendo el caso más común los
hidrocarburos son combustibles fósiles derrames accidentales que en el caso del
ampliamente utilizados alrededor del suelo impiden el intercambio gaseoso con
mundo como generadores fundamentales la atmosfera, iniciando una serie de
de diversas formas de energía que se procesos físico-químicos, como:
encuentra en la naturaleza gracias a la evaporación y penetración, que
acumulación de biomasa durante millones dependiendo del tipo de hidrocarburo,
de años, sin embargo (Cavazos 2014) temperatura, humedad, textura del suelo
indica que es posible que en su extracción y cantidad vertida pueden ser procesos
se genere contaminación en cuerpos de más o menos lentos lo que ocasiona una
agua y suelos debido a constantes mayor toxicidad, (Benavides 2006)
derrames accidentales, (Wcisło 1998) argumenta que los daños serían tan
argumenta que los hidrocarburos graves que también se ven reflejados en
aromáticos policíclicos (HAP) son una consecuencias ambientales tanto en la
flora como en la fauna, ya que según mecanismos: degradación, contención o
(Díaz 2013) dichas sustancias tienden a transferencia, (Irabien 2013) indica que no
acumularse y a formar una capa solo el petróleo causa estos daños sino
hidrofóbica, induciendo la fragmentación también los aceites derivados como es el
de los agregados, causando de igual caso de TPH, PAH y BTEX, al respecto
forma reducción, inhibición de la (Khalilova 2015) añade que en estos
cobertura vegetal y modificación las casos la contaminación del suelo alcanza
poblaciones microbianas del ambiente 1,5 m de profundidad por lo que las aguas
edáfico, por su parte (SHUKLA, 2011) subterráneas se ven severamente
indica que el petróleo es tóxico y puede afectadas, mimas que según (Konečný y
ser letal dependiendo de la naturaleza de Müller 2013) no permanecen en su solo
la fracción de petróleo, la forma de lugar sino que discurren y transportan
exposición a ella y el tiempo de dichos contaminantes hacia otros lugares,
exposición, pudiendo dañar cualquier afectando diversos ecosistemas durante
sistema de órganos en el cuerpo humano su recorrido (Parvizi 2015) ratifica que un
como el sistema nervioso, sistema impacto medioambiental crítica de la
respiratorio, sistema circulatorio, sistema industria del petróleo es la contaminación
inmune, sistema reproductivo, sistema de suelo por petróleo y otros productos
sensorial, sistema endocrino, hígado, relacionados que son altamente tóxicos y
riñón, etc. y, en consecuencia, pueden exhiben resistencia molecular.
causar una amplia gama de
enfermedades y trastornos. (Bastão 2010) (Hilasaca 2013) manifiesta que la ciudad
manifiesta que también daña a los de Juliaca se ha visto afectada en los
invertebrados se exponen fácilmente a últimos años por la contaminación de
dichos contaminantes, lo cual puede hidrocarburos producto de las actividades
afectar a su función ecológica y la del parque automotor y procesos
influencia indirecta del ecosistema y relacionados con la explotación,
alterar la relación depredador-presa y transporte, manejo del petróleo y sus
consecuentemente afectar al complejo derivados, al respecto (Swannell 1996)
“cadena alimentaria”, (Frick 1999) afirma indica que en Juliaca existen problemas
que las plantas que crecen en suelos debido a derrames leves en las
contaminados con hidrocarburos de estaciones de servicio de petróleo,
petróleo pueden reducir la concentración terminales petroleros. Las zonas más
de estos contaminantes mediante tres afectadas son casi todos los alrededores
del Servicio de Combustible por lo que favorecidas en su desarrollo, por lo tanto
(Morales 2013) acota que uno de los el mesocosmos 1 con 200ml de agua será
principales ríos contaminados en la el que permita mayor desarrollo de
ciudad de Juliaca seria el rio coata debido bacterias degradadoras de hidrocarburos.
a que los lixiviados producidos por el
derramamiento del petróleo y sus METODOS
derivados provocarían que sus aguas se Para el aislamiento de bacterias
vieran seriamente contaminadas, para lo biodegradadoras de hidrocarburos se
cual los objetivos especificos fueron aislar utilizó el método de bioestimulación que
mediante cultivo en agar a las bacterias comprende estimular el crecimiento
biodegradadoras presentes en los bacteriano del grupo de bacterias locales,
mesocosmos con tierra contaminada con el cual según diversos autores es el más
hidrocarburos agregando nutriente indicado para realizar una biodegradación
(guano) y agua destilada para potenciar el de hidrocarburos eficiente y de bajo costo.
desarrollo de poblaciones bacterianas y
.e stablecer la sobrevivencia de las El 06OCT17 a Hrs. 15.00 en el Km. 2.5
bacterias biodegradadoras, en los de la vía Juliaca Puno (altura del surtidor
diferentes mesocosmos con tierra de combustible de la Empresa “Petro
contaminada con hidrocarburo y Perú”), se procedió con la ayuda de
diferentes concentraciones de nutrientes herramientas (pico y badilejo) a la
y agua. Y las hipótesis especificas fueron recolección de muestras en dicha zona a
la aplicación de nutrientes (huano) 200gr una profundidad que abarco desde la
y la estimulación adicionando agua con superficie a 0.40 metros, la cual se realizó
200ml como fuente de oxígeno, a 200 gr en forma aleatoria, identificando las zonas
de tierra contaminada con hidrocarburos, más optimas de muestreo. Colocamos las
favorece el crecimiento microbiano y esto muestras en bolsas de polietileno con su
ayuda a asimilar todos los compuestos respectivo rotulado para su identificación
presentes en el suelo degradando así los posterior.
hidrocarburos en menor tiempo y las
concentraciones de agua en mayor El 10OCT17 a Hrs. 12.00, colocamos las
porcentaje proveerá el oxígeno necesario muestras tomadas en recipientes de
además de mantener un ambiente polietileno limpios con la finalidad de que
húmedo muy necesario para que las las muestras obtenidas no sean
poblaciones de bacterias se vean contaminadas con otras sustancias.
El 14OCT17, se realizaron las pruebas
paramétricas a las diferentes muestras
para determinar el Ph, temperatura,
conductividad eléctrica y peso con la
ayuda de la balanza electrónica y el
equipo multiparámetro, para determinar
una línea de base respecto a las
condiciones iniciales y su posterior
comparación con las condiciones óptimas
que se espera lograr.
El 15OCT17, en la vía Puno-Juliaca
(altura del peaje ILLPA) se recolecto
guano de vacuno (vaca) con la ayuda de
una herramienta de recolección y bolsas
de polietileno limpias.
El 22OCT17, se realizó la trituración del
guano para luego añadir dicha sustancia
a las muestras 1 (200 gr.), 2 (100 gr.), 3
(50 gr.) y 4 (0 gr.) mismas que fueron
especificadas en el proyecto.
El 24OCT17, se añadió la cantidad de ml
de agua de acorde a la cantidad de agua
determinada para cada mesocosmo a
cada una de las muestras lo cual se
realizara cada martes y cada viernes
durante el transcurso de la
bioestimulación que durara 4 semanas.
Con la finalidad de darle las condiciones
apropiadas para el desarrollo bacteriano
dentro de cada uno de los mesocosmos.
El 31OCT17 y el 07NOV17, se tomó
pruebas paramétricas. Las cuales se
realizaran los martes y los viernes
programados de acuerdo con el
cronograma del proyecto.
El 14NOV17, para la preparación del agar
Hicimos un recipiente de papel aluminio
para pesar el agar nutritivo, pesamos el
recipiente en la balanza, lo taramos y
pesamos los 3.1 gramos de agar nutritivo
con la ayuda de la espátula, vertimos en
un matraz Erlenmeyer, y seguido le
agregamos 100ml de agua destilada, lo
diluimos lo mejor que se pueda y lo
ponemos al autoclave, durante 15
minutos a 20rev/15min a 121°C, luego
descargamos el agar en las 4 placas Petri,
y luego, por “método directo”, le
agregamos una cantidad de suelo diluido
a las 3 placas con ayuda de una pipeta
graduada. La 4ta placa solo tiene agar
nutritivo, y para experimentarlo, solo le
añadimos petróleo, colocamos en la
incubadora a 105°C/24H.
El 21NOV17, para la identificación de
bacterias que sobrevivieron en las placas,
estudiamos las placas en el que se
desarrollaron las bacterias, la primera por
tener mayor cantidad de guano se
observo detalladamente al microscopio
con la intención de encontrar además de
las batcerias degradadoras otro tipo de bacteriano se presentan de la siguiente
batcerias que pudieran aver desarrollado manera:
por la adicion de guano de vacuno. Con
una aza de siembra, se saca un poco de
a. Humedad gravimétrica:
las colonias en el que crecieron las
bacterias, y se pone en un portaobjetos.
tabla 1: Análisis de humedad
Se le agrego 3 gotas de cristal violeta, y gravimétrica
después de 30 segundos, se lavó con una
Muestras Peso Peso Peso
pizeta a chorro, se agregaron 2 gotas de
papel muestra después
Lugol, esperamos 30 segundos y lo (gramos) (gramos) de 24h a
lavamos con una pizeta a chorros, 105°C en
agregamos decolorante, 2 gotas de el
horno
alcohol acetol, esperamos 60 segundos, y
mufla
procedimos a agregar 2 gotas de
Muestra 0.7731 10.0013 (gramos)
10.2965
safranina, también esperamos 30
01
segundos y también lo lavamos a chorros
Muestra 0.6665 10.0039 10.2555
con una pizeta, finalmente en un
02
microscopio con una ampliación de 100X
Muestra 0.7309 10.0033 10.2100
se realizó la identificación de las
03
bacterias. De esa forma identificamos
Muestra 0.6843 10.0049 10.3023
bacterias en formas de cocos, y bacilos.
04

RESULTADOS Y DISCUSION:
La Humedad gravimétrica del suelo es la
Las bacterias fueron sometidas a diferencia del peso húmedo del suelo
desarrollo bacteriano en medio comparada con el peso seco del suelo
después de ser sometido a un proceso de
contaminado con hidrocarburos como secamiento.
única fuente de carbono y energía las
cuales por las características de cada
Método de determinación de humedad de
mesocosmos varían en porcentaje de
suelo directo Procedimiento.
desarrollo, para los cuatro mesocosmos
 Toma de muestras de suelo
se realizó el mismo procedimiento con las
 Pesaje de la nuestra.
características indicadas teniéndose  Secado en estufa a 105°C hasta
resultados diferentes, para cada uno los peso constante.
aspectos que intervienen en el desarrollo  Pesado de la muestra seca.
Tabla 2: Resultados de Humedad
gravimétrica en las muestras de suelo.
Muestras %agua
Muestra 01 4.6414%
Muestra 02 4.0456%
Muestra 03 5.1342%
Muestra 04 3.7555%

En la tabla muestra la cantidad de agua

por porcentajes al realizar la prueba de
huemedad gravimétrica la cual Indica
que al inicio del experimento la muestra
3 contenia Mas agua que las demás
muestras. El cual es un factor al
determinar el crecimiento bacteriano en
el mesocosmos adaptado
posteriormente.

Tabla 3: Resultados de pH y
b. Determinar cuál es el
conductividad eléctrica.
mesocosmo con la mayor
PH Conductivi Temperat eficiencia para el desarrollo
dad ura bacteriano.
Eléctrica
Muest 8.8 1104 /cm 18.4°C
 Se observó mediante microscopio
ra 01 4
y la tinción de Gram que tipo de
Muest 8.9 892 /cm 18.9°C
microorganismos bacterianos
ra 02 8
están presentes en los
Muest 8.9 470 /cm 18.4°C
mesocosmos sin embargo definir
ra 03 6
la familia género y especie de las
Muest 9.1 1158 /cm 18.65°C
bacterias requiere tecnología y
ra 04 4
métodos más precisos y
específicos de identificación lo
Promedio Comportamiento pH esta entre cual requiere un trabajo más
7.3 y 8.5, para los mesocosmos con especializado.

huano y el mesocomos que no contiene

huano durate 5 semanas, estos cambios
se deben al metabolismo de los
microorganismo en las distintas etapas
sin embargo en ambos casos el pH está
en condiciones óptimas para el desarrollo
bacteriano
Figura 1. Cultivos bacterianos de los Figura 2
mesocosmos 1, 2, 3 y 4 Vista al microscopio del
mesocosmo con mayor cantidas
de colonias bacterianas

La tinción de gram así como la

En la figura se muestra el resultado de los
observación al microscopio permiten
mesocosmos preparados en cultivo in vitro
identificar las colonias de bacterias
de bacterias biodegradadoras de
biodegradadoras. La forma y la
hidrocarburos, se muestra la similaridad que
disposición de colnias indican bacterias
adoptan los mesocosmos antes de aplicar la
gram positivas Pseudomona
tinción de gram

 Resultado para el  Resultado para el

mesocosmos 2
mesocosmos 1
En el mesocosmo 2 Las
La prueba de tinción de Gram así
muestras son significativamente
como la observación y la
similares a el mesocosmos 1 (fig
caracterización de bacterias
3), de esto se debe a la cantidad
demuestra que existen bacilos
de guano que se utiliza para
Pseudomonas Gram negativas y
estos mesocosmos que son los
Cocos Gram positivas así como
más elevados de los cuatro
familias de Streptococos (fig. 2) y
experimentos. La prueba de
Stafilococos. Los cuales son
tinción de Gram así como la
biodegradadores eficientes de
observación y la caracterización
hidrocarburos y sus derivados, la
de bacterias demuestra que
concentración de 200gr de huano
existen bacilos Pseudomonas
de vacuno favorece en mayor
Gram negativas y Cocos Gram
medida el crecimiento bacteriano
positivas así como familias de
en comparación con los
Streptococos y Stafilococos.
mesocosmos 2, 3 y 4 que el
desarrollo bateriano se queda
relegado.
 Resultado para el Figura 3 Vista al microscopio de
colonia biodegradadora de
mesocosmos 3 hidrocarburos sometida a tinción de
gram que obedece al mesocosmo 2 (b)
Para el mesocosmo 3 Las
muestras son significativamente
similares a el mesocosmos 2, de
esto se debe a la cantidad de
guano que se utiliza para estos
mesocosmos que son
relativamente similares 100gr y 50
gr respectivamente. La prueba de
tinción de Gram así como la
observación y la caracterización
de bacterias demuestra que La tinción de gram demuestra la
existencia de bacterias gram positivas
existen bacilos Pseudomonas
las cuales constituyen la poblacion de
Gram negativas y Cocos Gram bacterias biodegradadoras las
características de la colonia indican
positivas así como familias de
que son bacilos y pseudomonas.
Streptococos y Stafilococos.

 Resultado para el
COMPARACION ENTRE
mesocosmos 4
MESOCOSMOS
Este mesocosmos solamente se le
añadió agua por espacio de 5 Muestra que hubo diferencia
semanas para su cultivo en placa significativa al comparar los
Petri el cual resulto en que se aisló mesocosmos, siendo este valor
bacterias cocos gram positivas inferior a 0.05 el cual indica que
estas bacterias tuvieron una los experiementos son lo
dispersión aleatoria y no hubo suficientemente diferentes para
proceso de colonización, el cual se alterar el crecimiento y desarrollo
presume que es por la falta de bacteriano (fig 1).
nutrientes en su etapa de
bioestimulación.
Prueba de multiple de rangos,
para porcentaje de crecimiento CONCLUSIONES
de mesocosmos A, B, C y D
(Statgraphics centurion)
Se aisló satisfactoriamente bacterias
Este metodo aplica un
degradadoras de hidrocarburos que
procedimiento de comparación
poseen características que permiten
múltiple para determinar cuáles
identificarlas como bacillus y la familia de
medidas son significativamente
los cocos. Las cuales pertenecen al
diferentes de otras. muestran
género de Pseudomonas y también
diferencias estadisticamente
Rhodococcus,
significativas con un nivel de
95.0% de confianza siendo el que
El efecto del fertilizante natural (guano
más diferencia obtuvo el
de vacuno) para las muestras 1,2,3 y 4
mosocosmo 1 con un crecimiento
fueron distintas para cada una, ello por el
bacteriano elevado.
contenido de guano en cada
mesocosmos siendo los de más
Porcentaje de crecimiento desarrollo aquellos que contaban con
bacteriano (statgraphics
centirion) mayor cantidad de guano siendo el
Se muestra el porcentaje de mesocosmo 1 el que desarrollo más
crecimiento bacteriano en los colonias de bacterias degradadoras
mesocosmos A, B, C y D el cual es Pseudomonas y cocos en su mayoría,
del 48.25% para el mesocosmo A, aunque también se encontró
29.5% para el mesocosmo B, Streptococos y Stafilococos.
13.5% para el mesocosamo C,
8,75% para el mesocosmo D
indicando ello que existe diferencia
signiificativa en el método de
bioestimulacion resultando
entonces la más ade4cuada la que
se utilizó para bioestimular el
crecimiento bacteriano del
mesocosmo A.
 Ercoli 2008, Factores físicos determinantes
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS para la sobrevivencia de organismos
microbianos.pdf
Shanidul, I. y M. Tanaka. 2004. Impacts of
pollution on coastal and marine ecosystems Buendia 2014, Biorremediación por
including coastal and marine fisheries tecnologías que utilizan el potencial
approach for management: a review and metabólico de las bacterias degradadoras de
synthesis. Mar. Pollut. Bull., 48: 624 649. hidrocarburos.

Coney, P., et al., 1985. Manejo de Maroto 2008, Hidrocarburos y derivados del
biorremediación de suelos contaminados petróleo. Química, análisis de principios y
con hidrocarburos método convencional. aplicaciones mezclas de hidrocarburos
publicación científica sólidos líquidos y gaseosos. Tomo II, 2010

Escalante, J., y Herrera, D. 2000. Seminario
de hidrocarburos. Escuela Superior de Salud
y Ambiente. Universidad Nacional
Comahue. Neuquén. Argentina. Pdf
Rosenberg et al. 1992. Biorremediación en
suelos contaminados con derivados de
petróleo.
Alegria, S., et al., 2013 la acidificación o la
reducción del pH en el suelo se puede
realizar adicionando compuestos del azufre.
Nutrientes y macronutrientes para bacterias
degradadoras.
Canon, R., 2013 Temperatura y factores
físicos en correlación con la degradación de
organismos bacterianos de hidrocarburos
Volke, T., y Velasco, J., 2002 Factores que
afectan a los microorganismos relacionados
con el pH.
Vitale, 2006, Fertilizantes, abonos, compost,
usos y técnicas de manejo de biofertilizantes
del naturales elaborados domésticamente &
aprovechamiento de recursos naturales
renovables
Iturbe, R., 2002. Uno de los principales
problemas de la biodegradación, presencia
de altas concentraciones del contaminante
en el suelo, pueden existir efectos de
toxicidad sobre la población microbiana.
Wong DWS (2009) Structure and action
mechanism of ligninolytic enzymes. Appl
Biochem Biotechnol 157:174–209.
doi:10.1007/ s12010-008-8279-z.
Velasquez 2016, estrategia nacional para el
mejoramiento de la calidad de los recursos
hídricos
Cavazos AM, Gil G, (2014) Polycyclic
aromatic hydrocarbon transformation with
laccases of a white-rot fungus isolated from
a Mediterranean schlerophyllous litter. Diaz. A. J. Tonín. N. L. Díaz. V. Pucci. G
Geoderma 149:267–271. (2013). Optimización de un sistema de
doi:10.1016/j.geoderma.2008.12.011 biorremediación de hidrocarburos a escala
de laboratorio. Ing invest y tecnol,
WCISLO E., KUPERBERG M., TEAF C. Risk 13(1),105–112.
(1998) assessment for the Czechowice Oil
Refinery Lagoons. Internal Report. Insti tute Shukla AK. (2011) Biotechnological
for Ecology of Industrial Areas.. approach of microbial lipase: a review.
Biotechnology.;10(1):23–40.
Castro-Díaz, (2014). Analysis of arsenic,
lead and mercury in farming areas with Bastão L, Moreno-Jiménez E, (2010) Effects
mining contaminated soils at Zacatecas, of biochar and greenwaste compost
Mexico. amendments on mobility, bioavailability and
toxicity of inorganic and organic
Maldonado-Chávez et al. 26(2):121- contaminants in a multi-element polluted soil.
136,2010, Effects of rizosphere, Environ Pollut 158:2282–2287.
microorganisms and fertilization on doi:10.1016/j.envpol.2010.02.003
bioremediation and phytoremediation of soils
with new and weathered crude oil. Frick, C.M., R.E. Farrell, 1999. Assessment
of phytoremediation as an in situ technique
García-Delgado (2014) Influence of chemical for cleaning oil-contaminated sites. PTAC
and mineralogical properties of organic Petroleum Technology Alliance, Canada,
amendments on the selection of an adequate Calgary, pp: 8.
analytical procedure for trace elements
determination. Talanta 88:375–384. doi:
10.1016/j.talanta.2011.11.003. Irabien Á. A (2013) comparison of models for
assessing human risks of petroleum
Benavides J , Roldan F, Ocampo A, Londoño hydrocarbons in polluted soils. Environ
M, Pardo A, Perdomo C. (2006) Efecto de la Model Software. 2014;55:61–9. doi:
adición de nutrientes (nitrógeno y fósforo) e 10.1016/j.envsoft..01.022.
identificación de microorganismos
degradadores de hidrocarburos de suelos Khalilova (2015) Hydroxyl radical generation
contaminados con petróleo. (Fase I). Trabajo by an extracellular low-molecular-weight
de grado (Ingeniera (s) ambiental). substance and phenol oxidase activity during
Universidad de la Salle. Facultad de wood degradation by the white-rot
Ingeniería ambiental. Ambiental. Bogotá. basidiomycete Trametes versicolor. J
Biotechnol 75:57–70. doi:10.1016/ S0168-
1656(99)00138-8

František Konečný – Zbyněk Boháček –
Pavel Müller – Miloslava Kovářová – Irena
Sedláčková (2013), Contamination of soils
and groundwater by petroleum hydrocarbons
and volatile organic compounds – Case
study: ELSLAV BRNO.
Parvisi-Giménez A, Pardo-González JE
(2015) Evaluation of casing materials made
from spent mushroom substrate and coconut
fibre pith for use in production of Agaricus
bisporus (Lange) Imbach. Spanish J Agr Res
6:683–690. doi:10.5424/361.
Hilasaca M. (2013), informe de trabajo
hidrocarburos que contaminan el rio coata.
Swannell, R., K. Lee y M. McDonagh. 1996.
Field evaluations of marine oil spill
bioremediation. Microbiol. Rev., 60 (2): 342-
365.
L. Morales (2013), trabajo Biorremediación
de suelos contaminados por hidrocarburos.