Professional Documents
Culture Documents
potente antiglicación y
propiedades antioxidantes en
comparación con el extracto
de ajo fresco in vitro
1, 2
Abdulhakim Elosta 1, Mark Slevin y Khalid Rahman Nessar Ahmed 1
A pesar de los avances en el tratamiento, las complicaciones a largo plazo de la diabetes son una de
las principales causas de preocupación. Por lo tanto, la inhibición de daño tisular AGE-mediada y el
estrés oxidativo puede ofrecer potencial terapéutico para prevenir o retrasar la aparición o la
progresión de las complicaciones diabéticas 1. Diversos compuestos antiglicación se han estudiado
e incluyen aminoguanidina, un fármaco encontrado para ser eficaz tanto in vitro como in vivo 1.
Otros compuestos incluyen la edad reticulan interruptores tales como bromuro de N-fenaciltiazolio
se han propuesto como agentes para la reversión de reticulación de proteínas causada por AGEs 3.
Además, existe un interés considerable en los compuestos capaces de bloquear la interacción entre
las edades y sus receptor llamado receptor para AGE (RAGE) 4. Aunque muchos compuestos han
sido estudiados, ninguno ha sido aprobado para uso clínico. Mientras que la búsqueda de nuevos
agentes sintéticos de la antiglaciación continúa, poca atención se ha dedicado a los agentes
antiglycation de fuentes naturales. Varios estudios han indicado que la suplementación de la dieta
con nutrientes que poseen tanto antiglicación y antioxidantes prop-piedades puede ser un
complemento seguro y simple de las terapias tradicionales dirigidos a prevenir complicaciones de la
diabetes 5.
Figura gel 1. (A) SDS-PAGE que muestra los efectos de los extractos de ajo envejecido y frescas
en la formación de reticulado Los AGE formados por glicosación de lisozima (10 mg / ml) por
glucosa 0,5 M en tampón fosfato 0,1 M, pH 7,4 durante 4 semanas a 37ºC. Lisozima no modificada
(carril a), lisozima glicosilada (carril b) o lisozima glicosilada en presencia de 5 (carril c), 10 (carril
d) o 15 mg / ml (carril e) de extracto de ajo envejecido o 5 (carril f) , 10 (carril g) o 15 mg / ml
(carril h) de extracto de ajo fresco. (B) Porcentaje de inhibición de los AGE reticuladas. Cada valor
representa la media ± SD (n = 3). La significancia estadística se definió como ** P <0,01 en
comparación con extracto de ajo envejecido.
El ajo (Allium sativum) se ha utilizado como un agente de sabor, alimentos funcionales y
en medicina tradicional. De hecho, sus propiedades medicinales se han utilizado para tratar
una amplia variedad de enfermedades desde la antigüedad 6. El ajo es un agente medicinal
profiláctico y terapéutico bien establecido, que ha sido investigado para la salud Ben-ficios,
lo que resulta en más de 3000 publicaciones de todo el mundo 7. El ajo es una fuente rica de
compuestos organosulfurados -soluble el agua y lípidos, pero los constituyentes
responsables de los beneficios para la salud de ajo puede variar en tipo y concentración,
dependiendo de diferentes procesamiento, preparaciones y las condiciones del suelo 8. El
ajo está disponible en diferentes formulaciones; uno de los cuales es el extracto de ajo
envejecido y se fabrica remojando el ajo crudo en rodajas en etanol acuoso al 15-20% hasta
20 meses a temperatura ambiente. A continuación, el extracto se filtra y se concentra a
presión reducida a baja temperatura. Durante este envejecimiento, los compuestos irritantes
olorosos y duras en el ajo se convierten en no irritantes, compuestos de azufre sin olor,
seguro 9. Este proceso provoca la pérdida de la alicina y aumenta la actividad de otros
compuestos organosulfurados solubles en agua, tales como S -alil cisteína (SAC),
mercaptocysteine S-alilo (SAMC), allixin y selenio, todos los cuales son antioxidantes 8,10.
Otro antioxidante presente en el extracto de ajo envejecido es arginina fructosil N-, que no
está presente en las preparaciones de ajo crudo o de calor tratados con 11. El objetivo de
este estudio fue investigar y comparar las habilidades de los extractos de ajo envejecido y
fresco para inhibir la formación de AGE. Además, también se investigó la actividad
antioxidante del extracto de ajo envejecido y se comparó con la del extracto de ajo fresco.
Resultados
Efectos de los extractos de ajo envejecido y fresco en los AGE
reticulados. Glicación de la lisozima por glucosa produce AGE reticulados que se
presentan como dímeros con un peso molecular aproximado de 28 kDa. La lisozima glicada
(figura 1A, carril b) mostró una movilidad electroforética reducida para el monómero de
lisozima y la presencia de dímeros formados a través de enlaces cruzados AGE en
comparación con la lisozima nativa (figura 1A, carril a). El ajo envejecido (Fig. 1A, carriles
c-e) y extractos de ajo fresco (Fig. 1A, carriles f-h) inhibieron la dimerización inducida por
AGE de la lisozima de una manera dependiente de la dosis. Los valores promedio de
extracto de ajo envejecido a concentraciones de 5, 10 y 15 mg / mL fueron 11,2%, 40,4% y
56,4%, frente al 5,9%, 24,9% y 33,5% respectivamente. Extracto de ajo envejecido mostró
una significativa (P <0,01) mayor efecto inhibidor en comparación con el extracto de ajo
fresco a concentraciones más altas solamente (10-15 mg / ml) (Fig. 1B).
www.nature.com/scientificreports/
Figura 2. Efecto de (A) 5 mg / ml, (B) 10 mg / ml y (C) 15 mg / ml de los extractos de ajo
envejecido y frescas en la formación de AGE post-Amadori medidos usando ELISA a
diferentes puntos de tiempo. Los resultados se presentan como media ± SD (n = 3). En cada
intervalo de tiempo, la significación estadística se definió como * P <0,05, ** P <0,01,
*** P <0,001 en comparación con el extracto de ajo fresco.
www.nature.com/scientificreports/
Grupos
carbonilo Grupos tiol
nmol / mg de pmol / mg de
proteína proteína
BSA 0,4 ± 0,2 11,4 ± 0,9
BSA glicada en ausencia 12 C
± 0,4 5 C
± 0,2
de extractos
Glycated BSA in
presencia de ajo
envejecido 5.9 Ab
± 0,5 9.4 Ab
± 0,5
extraer
Glycated BSA in
presencia de ajo fresco 8.3 Ba
± 0,6 8 Ba
± 0,5
extraer
Tabla 2. Actividades antioxidantes de ácido ascórbico, ajo envejecido y extractos de ajo fresco
según se determina por los ensayos de barrido de radicales ABTS y DPPH. Los datos se
presentan como media ± SD (n = 6). El símbolo UN y segundo se refieren a la diferencia significativa
entre los valores marcados en comparación con el ácido ascórbico. Medios etiquetados en cada
columna sin letras mayúsculas comunes difieren significativamente de ácido ascórbico, P <0,001.
Medios etiquetados en cada columna sin letras minúsculas comunes difieren significativamente de
extracto de ajo envejecido, P <0,001.
www.nature.com/scientificreports/
Actividades de quelación de metales de extractos de ajo envejecido y
fresco. La Figura 4 mostró el metal quelante efectos de los extractos de ajo envejecido y fresco.
Ambos extractos mostraron potentes habilidades quelantes para los iones ferrosos. Sin embargo, en
todas las concentraciones ensayadas el ajo fresco tuvo un efecto quelante más fuerte en
comparación con el extracto de ajo envejecido (Figura 4). A concentraciones más altas (15-20 mg /
ml), los extractos de ajo fresco mostró significativa (P <0,05) habilidades Chelat-ing para iones
ferrosos, mientras que el extracto de ajo envejecido mostraron significativa (P <0,001) efecto
quelante com-recortó a ácido etilendiaminotetraacético (EDTA). Sin embargo, EDTA mostró
significativamente (P <0,001) más fuerte Fe 2 + -chelation actividad incluso a concentraciones
mínimas de 0,1 mg / ml en comparación con los extractos de ajo envejecido y frescas.
Discusión
Existe un interés considerable en los agentes antiglicantes debido a su potencial terapéutico para
reducir la morbilidad y la mortalidad asociadas con la diabetes. Se han propuesto diferentes
estrategias para revertir los efectos de AGEs, centrándose en la inhibición de la formación de AGE,
la eliminación de AGEs o interferencia con efectos celulares de los AGE 2. Este estudio mostró
extractos de ajo tanto envejecidas y frescas inhiben la formación de AGEs y está de acuerdo con
estudios previos que demuestran extracto de ajo envejecido y SAC inhibir eficazmente la formación
de AGE in vitro 12. De hecho, se demostró que el extracto de ajo envejecido tiene propiedades
antiglaciación más potentes en comparación con el extracto de ajo fresco. Además, la adición de
SAC a extracto de ajo fresco aumentó la inhibición de AGE (resultados no mostrados). Además de
SAC, otros compuestos pueden estar presentes en el extracto de ajo envejecido que contribuye a su
antigelación
Los informes científicos | 7: 39613 | DOI: 10.1038 / srep39613 5
www.nature.com/scientificreports/
Los compuestos naturales con propiedades antioxidantes pueden inhibir la formación de AGE. En
este sentido, los compuestos tales como la rutina 15, garcinol 16, té loubuma 17 y el té verde 18 se han
demostrado para prevenir la formación de AGE in vitro e in vivo. Por lo tanto, la actividad
antiglaciación de extractos de plantas podría atribuirse a sus propiedades antioxidantes. De hecho,
varios estudios han demostrado que los efectos protectores de ajo se deben a sus propiedades
antioxidantes y de eliminación de radicales capacidades 19,20. Las capacidades de los extractos de
ajo envejecido y frescas para barrer ABTS ˙ se compararon con ácido ascórbico, siendo este último
un excelente marcador para la determinación de la capacidad antioxidante de antioxidantes de
hidrógeno donación. La mayor actividad de barrido de ajo envejecido en comparación con el
extracto de ajo fresco se consideró similar a la capacidad antioxidante del ácido ascórbico y puede
estar relacionado con el alto contenido polifenólico de extracto de ajo envejecido. Los compuestos
antioxidantes también pueden reducir el color púrpura del DPPH ˙ proporcionando átomos de
hidrógeno o por donación de electrones y la producción de un complejo incoloro causando la
disminución de la absorbancia, que es una medida del grado de eliminación de radicales. La
actividad de eliminación de DPPH ˙ de compuestos fenólicos en extractos de ajo envejecido y
frescas se debe principalmente a sus propiedades redox y depende de la estructura química del
compuesto, el número de grupos hidroxilo, el patrón de sustitución de los grupos hidroxilo y en el
método de análisis 21 .
Este estudio tiene varias limitaciones, uno de los cuales es el uso de altas concentraciones de azúcar
para acelerar la reacción Gly-catión, que de otro modo se produce lentamente in vivo depender de
grado y la duración de la glucemia. Sin embargo, este enfoque es útil para los estudios mecánicos
que permiten realizarlos en una escala de tiempo aceptable y reducir la posibilidad de
contaminación microbiana de la muestra. No está claro cómo se metabolizan estos extractos in vivo
y si los ingredientes activos relevantes estarían presentes en la sangre en apropiadas con-
centraciones o si los efectos sinérgicos todavía serían operacional. Sin embargo, el enfoque
utilizado proporciona un simple proceso de selección para evaluar las propiedades antioxidantes y
antioxidantes de extractos interesantes.
La suplementación dietética con antioxidantes puede ser una forma sencilla y segura de
complementar los tratamientos tradicionales dirigidos a detectar y prevenir complicaciones
diabéticas. Este estudio demuestra que los extractos de ajo envejecido y frescas protegen contra la
glicación de proteínas in vitro. El extracto de ajo envejecido inhibe la formación de AGE más
eficazmente que el extracto fresco de ajo, y este hallazgo junto con datos previos sugieren que el
consumo diario de extracto de ajo envejecido podría ser beneficioso para la prevención de
enfermedades relacionadas con el estilo de vida. Es importante identificar todos los compuestos en
el extracto de ajo viejo y aclarar su papel preciso. La biodisponibilidad de diferentes componentes
del ajo y su capacidad para inhibir la formación de AGE requieren una investigación adicional. Se
necesita investigación adicional para aclarar si el extracto de ajo envejecido atenúa el desarrollo de
lesiones vasculares diabéticas in vivo.
Materiales y métodos
El ácido etilendiaminotetraacético se obtuvo de Fisher Scientific International, Reino Unido. El
extracto de ajo envejecido fue proporcionado amablemente por Wakunaga of America Company
Ltd. Se obtuvieron Ribosa, dodecilsulfato sódico (SDS) y Tris (hidroximetil) -amino metano de
BDH, UK. La solución de acrilamida se obtuvo de Bio-Rad Laboratories (Hemel Hempstead, RU).
El azul de bromofenol se obtuvo de Serva, Alemania. El etanol, el ácido acético glacial y el metanol
se obtuvieron de Fisher Scientific International, Reino Unido. Tubo de diálisis con un peso
molecular de corte de 3,5 kDa y 67 kDa se obtuvo de Medical International Ltd Company (Londres,
Reino Unido). El anticuerpo avanzado del producto final de la glicación (anticuerpo policlonal de
conejo a AGE) y anticuerpo IgG de conejo secundario
www.nature.com/scientificreports/
anticuerpo (cabra policlonal a IgG de conejo) se adquirieron de Abcam, UK. Todos los
demás reactivos eran de calidad reactiva analítica de Sigma-Aldrich Company (Poole, RU).
Preparación de extracto de ajo fresco. El ajo fresco fue comprado en una tienda
minorista de alimentos (Manchester, Reino Unido). Los bulbos del ajo fueron identificados
por un botánico en la universidad. Los bulbos (50 g) en buena forma fısica fueron pelados y
pesados. Extracto de ajo acuosa se preparó de acuerdo con un método establecido 28. En
pocas palabras, se homogeneizaron 50 g de ajo en 75 ml de NaCl frío al 0,9% en presencia
de algún hielo triturado. La homogeneización se llevó a cabo en un mezclador a la
velocidad más alta con ráfagas de 1 minuto durante un total de 12 minutos. La mezcla
homogeneizada se filtró a través de tela de queso, se centrifugaron a 2000 xg durante 10
minutos y el sobrenadante claro se completó hasta 100 ml con solución salina. Este extracto
de ajo acuosa se almacenó en pequeñas alícuotas a - 20 ° C hasta su uso. La dosis de ajo
fresco se calculó sobre la base del peso de ajo fresco en mg utilizado para preparar un
extracto de 1 ml (un mililitro de extracto acuoso contenía material de 500 mg de ajo). El
extracto acuoso de ajo contiene aproximadamente el 50% de material de ajo.
www.nature.com/scientificreports/
expresada en términos de equivalentes micromolares de trolox. Se determinó la inhibición
del 50% de concentración que causa (IC 50) de cada extracto y se compara con la TEAC
correspondiente.
Ensayo de quelación de metales. La capacidad de ajo extrae para quelar iones ferrosos
(Fe 2 +) se evaluó según una versión modificada de un método establecido 34. Se usó EDTA como
un control positivo y se diluyó a 0,01 - 20 mg / ml para uso posterior. La actividad quelante del
extracto para Fe 2 + se calculó usando la fórmula:
Referencias
1 Ahmed, N. productos finales de glicación avanzada: papel en la patología de las complicaciones diabéticas. Diabetes
Res Clin Pract . 67, 3-21 (2005).
2 Elosta, A., Ghous, T. & Ahmed, productos N. naturales como agentes anti-glicación: Posible potencial
terapéutico para complicaciones diabéticas. Curr Diabetes Rev . 8, 92-108 (2012).
3 Vasan, S., Foiles, P. & Funda, H. potencial terapéutico de los interruptores de reticulaciones avanzadas
producto en proteínas finales de glicación. Arco Biochem Biophys . 419, 89-96 (2003).
4 Alexiou, P., Chatzopoulou, M., Pegklidou, K. & Demopoulos, VJ RAGE: a múltiples ligandos revelando
receptor nuevos conocimientos en la salud y la enfermedad. Curr Med Chem . 17, 2232-2252 (2010).
5 Farsi, DA et al. La inhibición de la glicación no enzimática de extractos de seda de una raza mexicana de la
tierra y modernas líneas endogámicas de maíz ( Zea mays ). Phytother Res . 22, 108-112 (2008).
6 Rahman, K. & Lowe, GM ajo y las enfermedades cardiovasculares: una revisión crítica. J Nutr . 136,
736S-740S (2006).
7 Amagase, H., Petesch, BL, Matsuura, H., Kasuga, S. & Itakura, la ingesta de Y. de ajo y sus componentes
bioactivos. J Nutr . 131, 955S-962s (2001).
8 Borek, C. Antioxidantes efectos de salud de extracto de ajo envejecido. J Nutr . 131, 1010S-1015S (2001).
9 Weiss, N. et al. Extracto de ajo envejecido mejora la disfunción endotelial homocisteína inducida en
macro- y microcirculación. J Nutr . 136, 750S-754S (2006).
10 Dillon, SA, Burmi, RS, Lowe, GM, Billington, D. & Rahman, propiedades K. antioxidantes del extracto de
ajo envejecido: un in vitro estudio incorporación de la lipoproteína de baja densidad humana. Life Sci
. 72, 1583-1594 (2003).
11 Ryu, K., Ide, N., Matsuura, H. & Itakura, Y. (N alfa- (1-desoxi-D-fructos-1-il) -L-arginina, un compuesto
antioxidante identificado en extracto de ajo envejecido. J Nutr . 131, 972S-976S (2001).
12 Ahmad, MS, Pischetsrieder, M. & Ahmed, N. extracto de ajo envejecido y cisteína S-alil evitar la
formación de productos finales de glicación avanzada. Eur J Pharmacol . 561, 32-38 (2007).
13 Stadtman, ER oxidación de proteínas y el envejecimiento. La ciencia . 257, 1220-1224 (1992).
14 Liggins, J. & Furth, AJ Papel de grupos carbonilo unidos a proteínas en la formación de productos finales
de glicación avanzada. Biochim Biophys . 1361, 123-130 (1997).
15 Kiho, T., Usui, S., Hirano, K., Aizawa, K. & Inakuma, T. tomate fracción pasta de inhibir la formación de
productos finales de glicación avanzada. Biosci Biotechnol Biochem . 68, 200-205 (2004).
16 Yamaguchi, F., Ariga, T., Yoshimura, Y. y Nakazawa, H. antioxidante y actividad antiglicación de
garcinol de Garcinia indica cáscara de la fruta. J Agric Food Chem . 48, 180-185 (2000).
17 Yokozawa, T. & Nakagawa, T. efectos inhibitorios de Luobuma té y sus componentes contra el daño de
proteínas mediada por la glucosa. Comida Chem Toxicol . 42, 975-981 (2004).
18 Rutter, K. et al. Extracto de té verde suprime el aumento relacionado con la edad en la reticulación de
colágeno y productos fluorescentes en ratones C57BL / 6. Int J Vitam Nutr Res . 73, 453-460 (2003).
19 Dhawan, V. & Jain, la suplementación de S. ajo previene el daño oxidativo del ADN en la hipertensión
esencial. Mol Cell Biochem . 275, 85-94 (2005).
20 Jastrzebski, Z. et al. La bioactividad de ajo procesado ( Allium sativum L. ) como se muestra in vitro y in
vivo estudios en ratas. Food Chem Toxicology . 45, 1626-1633 (2007).
21 Molay Kumar, R., Makiko, T. & Seiichiro, procesamiento térmico I. aumenta la actividad anti-radicales y
reduce la actividad pro-oxidante en la fracción soluble en agua de vegetales seleccionados. J Sci
Food Agric . 87, 2259-2265 (2007).
22 Zhao, G.-R., Xiang, Z.-J., Ye, T.-X., Yuan, Y.-J. Y Guo, Z.-X. Actividades antioxidantes de Salvia
miltiorrhiza y notoginseng de Panax . Comida Química . 99, 767-774 (2006).
23 Choi, DJ et al. Características fisicoquímicas de ajo negro ( Allium sativum L. ). J coreana Soc Food Sci Nutr . 37,
465-471 (2008).
24 Kessler, M., Ubeaud, G. & Jung, L. Anti- y la actividad pro-oxidante de derivados de rutina y quercetina. J Pharm Sci .
55, 131-42 (2003).
25 Wu, J.-W., Hsieh, C.-L., Wang, H.-Y. Y Chen, H.-Y. Efectos inhibidores de guayaba ( Psidium guajava L.
) extractos de hojas y sus compuestos activos en el proceso de glicación de las proteínas. Food
Chemistry . 113, 78-84 (2009).
26 Nagae, S. et al. Farmacocinética del compuesto ajo S-allylcysteine. Planta Med . 60, 214-217 (1994).
Scientific Reports | 7: 39613 | DOI: 10.1038 / srep39613 8
www.nature.com/scientificreports/
27 Queiroz, YS, Ishimoto, EY, Bastos, DHM, Sampaio, GR & Torres, EAFS ajo ( Allium sativum L. ) y
productos de ajo listos para comer: vitro En actividad antioxidante. Food Chemistry . 115, 371-374
(2009).
35 Miliauskas, G., Venskutonis, PR & van Beek, TA Screening de la actividad de eliminación de radicales de
algunos extractos de plantas medicinales y aromáticas. Food Chemistry . 85, 231-237 (2004).
36 Woisky, RG & Salatino, A. Análisis de propóleos: algunos parámetros y procedimientos para la calidad
química. J. Apic. Res . 37, 99-105 (1998).
Expresiones de gratitud
Estamos muy agradecidos a Wakunaga de América Company Ltd para que nos proporciona
el extracto de ajo envejecido utilizado en este estudio.
También se agradece al Ministerio de Educación Superior,
Libia para proporcionar una beca de doctorado para el Dr.
Abdulhakim Elosta. Nos gustaría reconocer Tor Yip por su
ayuda con las ilustraciones.
Contribuciones de autor
AE, MS, KR y NA destinadas a la investigación. AE realizó la investigación; AE, MS, KR y
NA analizaron los datos y NA y AE escribió el documento.
Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.
Información Adicional
Conflicto de intereses financieros: Los autores declaran no tener intereses financieros en
competencia.
Cómo citar este artículo : Elosta, A. et al. ajo envejecido tiene más potente antiglicación
y propiedades antioxidantes
en comparación con el extracto de ajo fresco in vitro . Sci. Rep. 7 , 39613; doi: 10.1038 /
srep39613 (2017).
Nota del Editor: Springer Naturaleza se mantiene neutral con respecto a las reclamaciones
jurisdiccionales en los mapas publicados y afiliaciones institucionales.
los usuarios tendrán que obtener el permiso del titular de la licencia para reproducir el
material. Para ver una copia de esta licencia, visite
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/