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I- RESUMEN

La presente práctica tiene la finalidad de identificar algunos aminoácidos que


presentan grupos característicos en las cadenas laterales utilizando ensayos
cualitativos en una proteína al igual que sus propiedades químicas, el cual en
esta oportunidad será la ovoalbúmina de la clara del huevo. Se realizó
pruebas de coloración, observándose las propiedades químicas de la
ovoalbúmina comparando con aminoácidos, mediante ensayos de biuret,
Xantoproteica, ninhidrina, millón, Hopkins-cole, Foly y sakaguchi; para esto
en cada tubo se adiciono la ovoalbúmina, en el primer tubo se adiciono
reactivo de biuret se compara con el aminoácido α-glicina, al segundo tubo
HNO3(c) con un calentamiento suave (Xantoproteica) comparando con el
aminoácido α-histidina, a otro se añadió solución de ninhidrina comparando
con el aminoácido β-alanina, a otro tubo se le agrega reactivo de millón
(mezcla de nitratos nitritos de mercurio (I) (II)) con leve calentamiento, a oro
tubo se le agrego ácido acético glacial después de calentar se agregó ácido
sulfúrico(Hopkins-Cole), esto se compara con el aminoácido triptófano; en
otro tubo se agrega acetato de plomo con hidróxido de sodio y calentamiento
(Foly); por último a otro tubo se agregó arginina con hidróxido de sodio, unas
gotas de α-naftol y una solución de hipobromito (SAKAGUCHI).

Con esas pruebas y sus resultados colorimétricos respectivos se puede


clasificar los aminoácidos como: Esenciales y no esenciales para el hombre,
ácidos y básicos en forma molecular, polares con carga y sin carga, apolares.

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II- INTRODUCCIÓN

Las proteínas son macromoléculas que contienen carbono, hidrógeno,


oxígeno y nitrógeno, las cuales son fuentes de alimentos; además de
conformarse de monómeros que son los aminoácidos, las cuales son
esenciales para nuestro organismo debido a que el cuerpo no es capaz de
producirlos por sí solo, además los grupos R de muchos aminoácidos poseen
elevada reactividad química, lo que les permite ser utilizados por los seres
vivos para diversas funciones en el organismo, como estructural, el cual
suministra implementos necesario para el crecimiento y reparación de tejidos
como la queratina, también como regulador de la actividad celular, cumple un
rol importante en hormonas como la insulina y en enzimas favoreciendo
reacciones orgánicas; además de formar parte del sistema inmunológico,
interviene en procesos de coagulación y transporte de sustancias como
grasas o el oxígeno (hemoglobina y mioglobina), y cuando hay una
insuficiencia energética los aminoácidos de las proteínas se emplean como
combustible energético.

Pero las proteína no son únicamente polipéptidos, sino que son polipéptidos
con una secuencia de aminoácidos propia, y si se altera la secuencia de
aminoácidos de una proteína, se produce anomalías funcionales y
enfermedades.(4)

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III- PRINCIPIOS TEÓRICOS

 PROTEINAS (1)

Son las macromoléculas más versátiles de los seres vivos y desempeñan


funciones cruciales en prácticamente todos los procesos biológicos.
Funcionan como catalizadores, transportan y almacenan otras moléculas
como el oxígeno, proporcionan apoyo mecánico y protección inmunológica,
generan movimiento, transmiten impulsos nerviosos y controlan el
crecimiento y la diferenciación.

La unión de un número pequeño de aminoácidos da lugar a un péptido:

- Oligopéptido: número de aminoácidos < 10


- Polipéptido: número de aminoácidos > 10
- Proteína: número de aminoácidos > 100

Varias propiedades clave permiten a las proteínas participar en una gama de


funciones tan amplia y variada:

- Las proteínas son polímeros lineales construidos a parir de monómeros


llamados aminoácidos empalmados unos tras otros. Cabe destacar que las
proteínas se pliegan espontáneamente en estructura tridimensionales que
vienen determinadas por la secuencia de aminoácidos del polímero proteico
y la función de una proteína depende de su estructura tridimensional.
- Las proteínas contienen un amplio surtido de grupos funcionales, donde en
esos incluyen alcoholes, tioles, tioesteres, ácidos carboxílicos, carboxiamidas
y una serie de grupos básicos, donde la mayoría de estos grupos son
químicamente activos.

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- Las proteínas pueden interaccionar entre sí y con otras macromoléculas


biológicas para formar asociaciones complejas. Esas asociaciones puedes
ser sinérgicas, de forma que se generan capacidades que no existían en los
componentes proteicos individuales.
- Algunas proteínas son muy rígidas, mientras que otras manifiestan una
considerable flexibilidad.

FIGURA Nº1: FORMACION DE ENLACE PEPTIDICO: LA UNION DE DOS AMINOACIDOS SE ACOMPAÑA DE


LA PERDIDA DE UNA MOLECULA DE AGUA

Solamente los L-aminoácidos constituyen las proteínas. Para casi todos los
aminoácidos, el isómero L tiene configuración absoluta S (y no R – FIGURA
Nº2). Aunque no se ha empleado un enorme esfuerzo para entender por qué
los aminoácidos en las proteínas tienen esa configuración absoluta, todavía
no se ha llegado a una explicación satisfactoria.

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FIGURA Nº2: EN PROTEINAS SOLO SE ENCUENRAN L-


AMINOACIDOS: CASI TODOS LOS L-AMINOACIDOS
TIENEN UNA CONFIGURACION ABSOLUTA “S” (DEL LATIN
SINESTER, QUE SIGNIFICA IZQUIERDA). LA DIRECCION
CONTRARIA A LAS AGUJAS DEL RELOJ DE LOS
SUSTITUYENES DE MAYOR A MENOR PRIORIDAD INDICA
QUE EL CENTRO QUIRAL ES, A SALVO EN LA CISTEINA, DE
CONFIGURACION “S”

Los aminoácidos en disolución a pH neutro existen predominantemente


como iones dipolares (llamado también zwitteriones). En la forma dipolar, el
grupo amino esa protonado (-NH3+) y el grupo carboxilo desprotonado (-
COO-). El estado de ionización de un aminoácido varia con el pH (FIGURA
Nº3) en disolución acida (pH=1) el grupo amino esa protonado (-NH3+) y el
grupo carboxilo desprotonado (-COOH) no esa disociado. Cuando se eleva el
pH, el grupo carboxílico es el primero en ceder un protón, ya que su pKa es
cercano a 2. La forma dipolar permanece hasta que el pH se acerca a 9,
cuando el grupo amino protonado pierde un protón.

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FIGURA Nº3: EL ESTADO DE IONIZACION COMO FUNCION DEL pH: EL ESADO DE IONIZACION DE LOS
AMINOACIDOS SE ALTERA POR UN CAMBIO EN EL pH. CERCA DEL pH FISIOLOGICO PREDOMINA LA
FORMA ZWITTERIONICA.

 NIVEL DE ORGANIZACIÓN DE LAS PROTEINAS (1) (2)

ESTRUCTURA PRIMARIA:

Es una serie de aminoácidos unidos por enlaces peptídicos forman una


cadena polipéptidica y cada unidad aminoacidica de un polipéptido se
denomina residuo. Una cadena polipeptídica tiene polaridad porque sus
extremos son diferentes, con un grupo α-amino en un extremo y en el otro un
grupo α-carboxilo. Por convención el extremo amino terminal se considera
que es el comienzo de la cadena polipeptídica. La secuencia de aminoácidos
se deducen a parir de la fragmentación de los polipéptidos en péptidos más
pequeños mediante el uso de reactivos específicos para cierto tipo de

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enlaces peptídicos, seguida por la determinación de la secuencia de cada


fragmento.

ESTRUCTURA SECUNDARIA

Es la disposición espacial local de los átomos de cadena principal en un


determinado segmento de la cadena polipeptídica. Una de las estructuras
más comunes que se encuentra es la hélice α, la conformación β y los giros
β. Además la estructura secundaria de un segmento polipeptidico puede
definirse completamente si se conocen los valores de los ángulos ∅ 𝑦 𝜓 de
todos los aminoácidos del segmento.

ESTRUCTURA TERCIARIA

Es la estructura tridimensional completa de una cadena polipeptídica,


muchas proteínas pertenecen a una de las dos clases generales de
proteínas según la estructura terciaria: globulares y fibrosas; donde las
fibrosas desempeñan en su mayoría papeles estructurales, están formadas
por elementos repetitivos simples de estructura secundaria, y las globulares
tienen estructuras terciarias más complicadas y complejas el cual contiene
varias estructuras secundarias en la misma cadena polipeptídica.

ESTRUCTURA CUATERNARIA

Este tipo de estructuras se forma como consecuencia de interacciones entre


las subunidades de proteínas con múltiples subunidades (multimericas) o de
grandes complejos proteicos. Algunas proteínas multimericas poseen una
unidad repetitiva consistente en una única subunidad o en un grupo de
subunidades que se denomina protomeros.

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FIGURA Nº4: REPRESENTACION DE LOS


NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LAS
PROTEINAS

 AMINOACIDOS (2) (3)

Las proteínas son polímeros de aminoácidos, en los que cada residuo


aminoácido está unido al siguiente a través de un tipo específico de enlace
covalente (“residuo” refleja la perdida de los elementos del agua cuando un
aminoácido se une a otro). Un aminoácido es una molécula que contiene un
grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2) libres. Las α-aminoácido
pueden representarse en general por NH2-CHR-COOH, siendo R un radical o
cadena lateral característica de cada aminoácido. Estos grupos R son muy
variados químicamente. Muchos aminoácidos forman proteínas (aminoácidos
proteicos), mientras otros nunca se encuentran en ellas. En todos los
aminoácidos que componen proteínas -excepto la glicina- el carbono alfa es
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un carbono asimétrico. (El carbono alfa es el adyacente al grupo carboxilo.).


Toda las moléculas con un carbono asimétrico o centro quiral son también
ópticamente activos, es decir, hacen girar el plano de la luz polarizada.

Existen aproximadamente 20 aminoácidos distintos componiendo las


proteínas. La unión química entre aminoácidos en las proteínas se produce
mediante un enlace peptídico, esos aminoácidos se agrupan en 5 grandes
clases principales basadas en las propiedades de sus grupos R, en especial
por su polaridad o tendencia a interaccionar con el agua a pH biológico
(cerca de pH= 7). La polaridad de los grupos R varía enormemente desde
totalmente apolar o hidrofóbico (insoluble en agua) a altamente polar o
hidrofílico (soluble en agua). Algunos aminoácidos son algo difíciles de
caracterizar o no encajan a la perfección en ningún grupo como es el caso de
la glicina, histidina y cisteína (asignación a sus grupos son aproximadas).

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FIGURA Nº5: CLASIFICACION EN 5 CLASES PRINCIPALES DE LOS


AMINOACIDOS EN BASE A LAS PROPIEDADES DE SU GRUPO R

Los grupos R polares sin carga, son más solubles en agua debido a que
contienen grupos funcionales que forman puentes de hidrogeno con el agua,
aquí la polaridad de la serina, treonina y caso especial de la tirosina (el cual
es poco polar por su anillo bencénico), se debe al grupo hidroxilo que poseen
en su cadena lateral como el aminoácido cisteína y su grupo tiol (-SH), y la
asparagina y glutamida su polaridad se debe al grupo amino que posee en
su cadena lateral, también se tiene polares cargados, como la lisina (posee
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un segundo grupo amino en el carbono épsilon) formando pare de su cadena


lateral, la arginina por su grupo guanidino en su cadena lateral y la histidina
que tiene un grupo imidazol. Esos cargados positivamente son de carácter
básicos, donde esos exhiben una carga neta positiva a un pH menor de 6.
Caso contrario hay 2 aminoácidos polares mas pero cargados
negativamente, esos son el glutamato (Ácido glutámico) y aspartato (Acido
aspártico), el cual poseen ambos un segundo grupo carboxílico y una carga
neta negativa donde el pH es mayor a 6 o 7, estos aminoácidos son acidicos.

Los grupos R apolares alifáticos como la alanina, leucina, isoleucina, valina,


prolina por que en su cadena lateral esa constituida por residuos de
hidrocarburos alifáticos, la metionina es caso particular a que existe un
átomo de azufre en su cadena hidrocarbonada y los cíclicos apolares como
la fenilalanina y triptófano por que poseen un anillo aromático, aunque cabe
destacar que el triptófano es más polar por su anillo indólico.

FIGURA Nº6: CLASIFICACION DE LOS 20 AMINOACIDOS ESENCIALES CON SU RESPECTIVA ABREVIATURA

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IV- DETALLES EXPERIMENTALES

 MATERIALES
• Tubos de ensayo
• Probeta de 10mL
• 3 Vasos de precipitado
• Termómetro
• Cocinilla

 REACTIVOS
• Reactivo de Biuret
• Ninhidrinna
• Ácido nítrico concentrado
• Hidróxido de sodio 10% y 20%
• Reactivo Millon
• Ácido acético glacial
• Ácido sulfúrico concentrado y al 2,5%
• Acetato de plomo al 5%
• Nitroprusiato de sodio al 5%
• -naftol (0,2%) en alcohol
• Hipobromito de sodio
• Ácido sulfanílico (1%) en ácido clorhídrico (5%)
• Nitrito de potasio (0,5%)
• Carbonato de sodio (10%)
• Sulfato de cobre (0,04M)

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 MATERIAL
• Clara de huevo (ovoalbúmina)
• Soluciones al 1% de glicina, β-alanina.
• Soluciones al 0,01% de triptófano, histidina, ácido aspártico y
glutámico, lisina, β-alanina, arginina, glicina

 PROCEDIMIENTO

 Reacción de Biuret sobre el grupo peptídico:

En un tubo de ensayo se colocan 5 gotas de ovoalbúmina (obtenida de la


clara de huevo), en otro; glicina.

A cada tubo agregamos 2 gotas del reactivo de biuret, agitan suavemente y


observamos la aparición de la coloración.

 Reacción de la ninhidrina sobre el grupo -amino:

En un tubo de ensayo colocamos 5 gotas de ovoalbúmina y en otro -


alanina. Luego agregamos a cada tubo 2 gotas de solución de ninhidrina,
calentamos hasta ebullición y, después de 1-3 minutos se observó la
aparición coloración.

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 Reacción Xantoproteica sobre el anillo aromático de aminoácidos


cíclicos.

En un tubo de ensayo colocamos 5 gotas de ovoalbúmina, en otro


fenilalanina, en el tercer tubo tirosina y en el cuarto histidina.

A cada tubo se le añadió 3 gotas de ácido nítrico concentrado, y se calentó


hasta ebullición.

 Reacción de Millón sobre la tirosina

En un tubo de ensayo colocamos 10 gotas de ovoalbúmina, luego se le


añadió 3 gotas del reactivo de Millón y los calentamos cuidadosamente en un
baño de agua no mayor a 50ºC, observando la aparición de la coloración.

 Reacción de Hopkins-Cole (Adamkiewickz) sobre triptófano

En un tubo de ensayo colocamos 2 gotas de proteína no diluida de huevo


fresco, en otro solución de triptófano.

A cada tubo se le agrego 10 gotas de ácido acético glacial y calentamos


cuidadosamente los tubos hasta disolución del precipitado formado en el
primer tubo, después se enfrió este tubo.

Luego con mucho cuidado inclinamos este tubo y se le agrego por las
paredes cerca de 1mL de ácido sulfúrico concentrado, cuidando de que los
líquidos no se mezclen. Finalmente en el límite de esas dos capas
observamos un anillo coloreado que va difundiéndose por toda la solución.

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 Reacción de Foly sobre aminoácidos que contienen azufre


débilmente unido (cisteína, cistina)

En un tubo de ensayo colocamos 10 gotas de solución de acetato de plomo


y, por gotas se le agregó hidróxido de sodio hasta disolución del precipitado
formado al principio. Finalmente a este se le agrego la solución de huevo
(ovoalbúmina) y se hirvió durante 2 minutos.

 Reacción de SAKAGUCHI (característica de las guanidinas como la


arginina)

En un tubo de ensayo colocamos 2 mL de solución de arginina, 2 mL de


hidróxido de sodio al 10% y algunas gotas de solución alcohólica de alfa
naftol al 0,2%. Agitamos bien el contenido del tubo y añadimos 0,5 mL de
solución de hipobromito y agitamos nuevamente. Inmediatamente se
adiciono 1 mL de urea al 40% para la estabilización de la coloración
anaranjado-rojiza.

 Prueba de Pauly (característica de la histidina)

A 1 mL de solución al 1% del ácido sulfanílico en ácido clorhídrico al 5% le


agregamos 2 mL de solución de nitrito de potasio al 0,5%. Agitamos
fuertemente la mezcla e inmediatamente le añadimos, al principio 2 mL de
histidina al 0,01% y luego, después de agitar el contenido del tubo, 6 mL de
solución de carbonato de sodio al 10%.

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V- REACCIONES QUÍMICAS

 Reacción de Biuret
R O

··· CH C N CH C N CH ···
R O- R´´

Cu

R O R´´
··· CH C N CH C N CH ···
R O-

 Reacción de Ninhidrina

O H2O O

Reagrupación
O + HN CH COOH N CH COOH
2

R R
O O
Base de Shiff
O
O
CO2 O
H
H O
H
Disociación + R
N C COOH C H
Descarboxilación N CHR
R NH2
O
O
O Aldehído
Dicetohidrindamina

O O H2O O O

H H
+ O N
NH2

O O O O

O O O O

N N + H+

-
OH O O O
Azul-violeta de Ruemann

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 Reacción Xantoproteica

O
OH OH O O ONa
O2N NO2 O2N N O2N N O
O
+ 2 HNO3 + NaOH
- 2 H2O - H2O

CH2 CH2 CH2 CH2


H2N C COOH H2N C COOH H2N C COOH H2N C COOH
H H H H
Tirosina Dinitrotirosina Forma quinoidea Sal de sodio de la
de dinitrotirosina estructura quinoidea
(color amarillo) de dinitrotirosina
(color anaranjado)

 Reacción de Millón

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 Reacción de Hopkins – Cole

Reacción del triptófano en


presencia del reactivo
Hopkins Cole.

 Reacción de Foly

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 Reacción de Sakaguchi

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VI- RESULTADOS

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VII- DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 Reacción de Biuret

La reacción de Biuret proviene del calentamiento de dos moléculas de


urea y un equilibrio ceto-enol, este es una prueba para identificar péptidos
y proteínas, ya que sirve para reconocer las uniones peptídicas, de
aminoácidos libres, debido a la formación de un complejo de coordinación
entre los iones Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del
nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos en un medio alcalino,
donde los grupos peptídicos de los polipéptidos pasan a la forma enólica y
reaccionan con los iones de Cobre (II). Como se mencionó antes el
reactivo de biuret reacciona con los péptidos (enlaces peptídicos) de las
cadenas polipeptidas pero no identifica aminoácidos, puesto que da una
reacción negativa, donde no se observa un cambio de coloración. (4)

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 Reacción de Ninhidrina

Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno


carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina, por esa razón las proteínas
y los aminoácidos se pueden identificar ya que poseen esta característica.
La positividad se manifiesta por la aparición de un color violáceo o
amarillo. Donde por calentamiento, en presencia de ninhidrina se produce
una desaminación oxidativa del grupo α-amino de los aminoácidos y
péptidos, reduciéndose la molécula de ninhidrina; que en principio se
observa la formación de la base de shiff, posteriormente la reagrupación
se descarboxila y se descompone a aldehído y aminodicetohidrinceno.
Este último compuesto se condensa con una molécula más de ninhidrina y
el compuesto obtenido se enoliza, ahí aparece la forma coloreada azul-
violeta el cual se denomina “Purpura de Ruheman”.

En la práctica se comparó la proteína con el aminoácido de β-alanina, en


el tubo Nº1 se observó la formación de una coloración violeta intenso, eso
se debe a la presencia de varias cadenas de aminoácidos con grupo
amino primario en sus cadenas, a sean libres o unidos por enlaces
peptídicos. En el tubo Nº2 se observó poca coloración debido a que el
aminoácido β-alanina no tiene un grupo amino primario en su cadena, si
no uno secundario el cual no da reacción positiva por esa razón en la
prueba.

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 Reacción Xantoproteica

Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado


de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con
aminoácidos portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y
triptófano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven
anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico
o trinitrofenol). En esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico
presente en dichos aminoácidos.

En la práctica se comparó esa prueba entre la proteína (ovoalbúmina) y el


aminoácido histidina, en el cual el tubo Nº1 donde en la proteína primero
se observó un precipitado blanco al agregar el ácido nítrico que cambia a
amarillo al calentarlo, así dando positiva la reacción debido a que se
muestra que hay presencia de aminoácidos aromáticos, y en el tubo Nº2

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no se observó cambio alguno, eso se explica porque el aminoácido


histidina no es un aminoácido aromático, como a se había mencionado
antes esta prueba solo da positiva en presencia de aminoácidos
aromáticos, y la histidina no lo es debido a que es un aminoácido con un
grupo imidazol en su cadena y no reacciona con el ácido.

 Reacción de Millón

Este precipitado rojizo nos indica que en la ovoalbúmina existe tirosina, ya


que esta prueba es muy específica para este aminoácido, el cual contiene
un anillo de benceno al que se une un grupo hidroxilo (Imagen Nº 4). En
esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido
nítrico del reactivo) se condensan con el grupo fenólico formando un
compuesto de color rojo ladrillo o rojizo.

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Imagen Nº 4. Estructura de la
tirosina.

 Reacción de Hopkins – Cole

El anillo indólico presente en la cadena lateral de los – aminoácidos


libres o haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer
mediante reacción con el ácido glioxílico a pH ácido, puesto que forma
complejos de coloración violeta o amarillo violeta (como en la

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experiencia realizada “Imagen Nº 5”), permitiendo así identificar al


triptófano.
El triptófano en esta reacción se condensa con el formaldehído, que se
desprende del ácido glioxílico por acción del ácido sulfúrico. Por
calentamiento, dos moléculas de triptófano interaccionan con el ácido
glioxílico con la formación del compuesto coloreado.

Imagen Nº 5

 Reacción de Foly

Este método se usa para identificar el azufre que contienen algunos


aminoácidos, en este caso la cisteína presente en la ovoalbúmina.
Podemos observar como el azufre precipito como sulfuro de plomo. La
cisteína en medio básico (NaOH) se transforma en serina liberando sulfuro
de sodio (Na2S) el cual reacciona con el plumbito de sodio (Na2PbO2) para
formar el sulfuro de plomo.

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 Reacción de Sakaguchi

Esta reacción se realizó para observar la presencia de arginina en la


albúmina, dando un resultado positivo debido a la presencia de un
grupo guanidino, el cual reaccionó con la solución de α – naftol en la
presencia de Hipobromito de sodio (componente del reactivo de
sakaguchi) en medio alcalino. Luego por oxidación de naftilarginina se
forma un compuesto del tipo quinonimina, que en vista de sus
derivados, en los cuales el hidrógeno del grupo imino esta sustituido por
un radical alquilo o arilo siempre está coloreado de un tono amarillo –
rojizo (Imagen Nº 6). Por lo visto el color anaranjado – rojizo de la
solución durante la ejecución de la reacción de Sakaguchi, se explica
por la formación precisamente del derivado de naftoquinonimina.

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Imagen Nº 6

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VIII- CONCLUSIONES

- El ensayo de biuret sirve para identificar la cantidad de enlaces peptídicos


que contiene una cadena polipeptídica de una proteína por medio de la
intensidad de su coloración del complejo de cobre formado, pero no
identifica aminoácidos.
- La reacción de ninhidrina identifica un grupo amino primario en una
cadena de aminoácido, así ese libre o en una cadena polipéptida.
- La reacción Xantoproteica ayuda a identificar aminoácidos aromáticos
mediante una coloración amarilla que se da por nitración con el anillo
aromático de este compuesto.
- En la prueba de Millón, los compuestos mercúricos en medio fuertemente
ácido (ácido nítrico del reactivo) se condensan con el grupo fenólico
formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo.
- La ovoalbúmina presenta en su composición aminoácidos con azufre
(cisteína). El cual se identifica como un precipitado pardo o negro como
sulfuro de plomo.
- La ligera coloración amarilla del anillo en la reacción de Hopkins – Cole,
indica la pequeña presencia de triptófano.
- En la reacción de Sakaguchi, la coloración anaranjado – rojizo nos indica
la presencia de arginina fundamentada con la formación del derivado de
naftoquinonimina.

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IX- RECOMENDACIONES

- Usar la solución de huevo preparada en las reacciones en las que la indican,


ya que si usamos la clara de huevo sin diluir, las reacciones se verán
afectadas, por ejemplo la coloración estará muy concentrada, impidiendo asi
una mejor identificación cualitativa de las reacciones.

- Usar en todo momento el material de protección debido para evitar los


accidentes, por ejemplo en la reacción Xantoproteica debemos usar lentes
protectores para que la solución al ebullir no nos caiga en los ojos.

- Los ácidos y bases concentrados se utilizan en la campana.

- En la reacción de Hopkins-Cole se agrega el ácido sulfúrico, inclinando el tubo


y por las paredes, para que no combine con el ácido acético glacial.

- Debido a que los reactivos en el laboratorio son escasos, tratar de no


excederse en el uso de estos.

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X- BIBLIOGRAFÍA

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Madrid: Editorial ELSEVIER, Pág.14-15
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 Rogelio Ocampo C., Curso práctico de química orgánica: Enfocado a


biología y alimentos, Edit Universidad de caldas - 2008, pág 141.

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XI- ANEXOS

 CUESTIONARIO

1- ¿Cuáles son los aminoácidos básicos, ácidos y neutros?

-Aminoácidos neutros: son aquellos que no tienen grupos funcionales ni


ácidos ni básicos en la cadena lateral. Entre ellos están: glicina, alanina,
fenilalanina, valina, leucina, isoleucina y prolina. Por su parte el hidrógeno
del grupo OH de la serina y de la treonina, lo mismo que el hidrógeno del
grupo indol del triptófano, son grupos muy levemente ácido, por lo cual
estos aminoácidos se consideran formalmente aminoácidos neutros. De
manera similar los dos aminoácidos que tienen un grupo amida en la cola
(asparagina y glutamina) son aminoácidos neutros aunque los átomos de
hidrógeno de las amidas son levemente ácidos. El aminoácido metionina
también es considerado aminoácido neutro, a pesar del moderado carácter
básico que exhibe el grupo éter de la cola. El hidrógeno del grupo OH de la
tirosina (por ser OH fenólico) es un poco más ácido; también el H del grupo
SH de la cisteína es significativamente ácido, así que estos dos
aminoácidos están catalogados como aminoácidos moderadamente ácidos.

-Aminoácidos ácidos: como sus nombres lo sugieren, acido aspártico y


glutámico son aminoácidos ácidos, y este carácter es debido a los grupos
carboxilo de la cola.

-Aminoácidos básicos: En contraposición a los dos anteriores, la lisina,


arginina e histidina tienen en la cola de su respectiva estructura grupos de
muy alto carácter básico (un grupo amino, un grupo guanidino y un grupo
imidazol respectivamente).
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2- ¿Cuáles son los aminoácidos esenciales?

Los aminoácidos esenciales son: isoleucina, leucina, lisina, metionina,


fenilalanina, treonina, triptófano, valina e histidina. El organismo humano no
los puede sintetizar y tiene que recibirlos de su alimentación diaria.

3- ¿Qué aminoácidos dan reacción positiva con el reactivo de Biuret y


por qué?

El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH


o KOH). La reacción se basa en la formación de un compuesto de color
violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los
iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que
forma parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción
a 540 nm. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no

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los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (- CO-


NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos.
“Da positiva esta reacción en todos los compuestos que tengan dos o más
enlaces peptídicos consecutivos en sus moléculas”
Como ya se mencionó, con los aminoácidos libres generalmente dan
reacción negativa, a excepción de los aminoácidos histidina, serina,
treonina y asparragina, los cuales en solución y a altas concentraciones
pueden formar el complejo coloreado de biuret Cu2+.

4- ¿En que se fundamentan las reacciones de coloración de los


aminoácidos?

La caracterización de las proteínas puede ser realizada por reacciones de


coloración o precipitación. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos
en las uniones peptídicas las proteínas reaccionan con una variedad de
compuestos formando productos coloreados.
Existen reacciones de coloración que son específicas para aminoácidos de
esas proteínas y son importantes tanto para la detección como para el
dopaje de aminoácidos y proteínas. Existen también reacciones generales
porque sirven para caracterizar grupos comunes a todas las proteínas como
grupos amino o uniones peptídicas (ninhidrina y biuret).

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