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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4779 (Primera actualización)


2007-08-29

MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS Y DE ALIMENTOS PARA ANIMALES


METODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO DE ESTAFILOCOCOS
COAGULASA-POSITIVA (Staphylococcus aureus Y OTRAS ESPECIES)

1. OBJETO
Esta norma específica los métodos horizontales para el recuento de estafilococos
coagulasa positiva en productos destinado al consumo humano o para la
alimentación de animales, mediante el recuento de colonias obtenidas en medio
sólido medio Baird-Parker o medio plasma de conejo fibrinógeno como medio
alternativo véase el anexo B (Informativo)] después de incubación aeróbica a 36 °C
± 2 ºC.
2- REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la
aplicación de este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica
únicamente la edición citada. Para referencias no fechadas, se aplica la última
edición del documento normativo referenciado (incluida cualquier corrección).
NTC 4002. Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Requisitos
generales para el examen microbiológico (ISO 7218).
NTC 4491-1, Microbiología de alimentos y de alimentos para animales, preparación
de muestras para ensayo, suspensiones iniciales y diluciones decimales para los
análisis microbiólogos. Parte 1: Reglas generales para la preparación de la
suspensión inicial y de diluciones decimales (ISO 6887-1).
NTC 4491-2. Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Preparación
de muestras para ensayo, suspensiones iniciales y diluciones decimales para los
análisis microbiológicos. Parte 2. Reglas específicas para la preparación de carne y
productos cárnicos (ISO 6887-2).
NTC 4491-3, Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Preparación
demuestras para ensayo, suspensiones iniciales y diluciones decimales para los
análisis microbiológicos. Parte 3. Reglas específicas para preparación de muestras
de pescado y productos de la pesca (ISO 6887-31).
NTC 4491-4. Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Preparación
de muestras para ensayo, suspensiones iniciales y diluciones decimales para los
análisis microbiológicos. Parte 4.Reglas específicas para la preparación de
productos diferentes de leche, productos lácteos, carne, productos cárnicos,
pescado y productos de la pesca (ISO 68874).

3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
Para los propósitos de esta norma se aplican los siguientes términos y definiciones:

3.1 Estafilococos coagulasa-positiva. Bacteria esférica aeróbica. Gram (+), que


aparece aislada, formando parejas, tétradas o agrupadas en racimos, inmóviles,
capaces de coagular el plasma, convirtiendo el fibrinógeno en fibrina siguiendo el
método especificado en esta norma.
3.2 Recuento de estafilococos coagulasa-positiva. Determinación del número de
estafilococos coagulasa-POSITIVA encontrados por mililitro o por gramo de muestra
cuando el ensayo se lleva a cabo de acuerdo con el método especificado en esta
norma.
4 PRINCIPIO
4.1 Se inocula en la superficie de un medio de cultivo selectivo sólido, usando cajas
de petri por duplicado, una cantidad específica de muestra de ensayo.
4.2 Se incuba las cajas en condiciones aeróbicas a 35 °C ± 1 ºC y se realiza la
lectura a las 24 h y 48 h.
4.3 Se calcula el número de estafilococos coagulasa-positiva por mililitro, o por
gramo, de muestra a partir del número de colonias típicas, colonias atípicas, o
ambas, obtenidas en cajas de los niveles de dilución escogidos de tal forma que de
un resultado significativo, y confirmado con el resultado positivo de la prueba de la
coagulasa.
5. DILUYENTE Y MEDIO DE CULTIVO
5.1 GENERAL
Para la práctica actual de laboratorio, Véase la NTC 4092.
5.2 DILUYENTE
Véanse las NTC 4491-1, NTC 4491-2. NTC 4491-3, NTC 44914 y la norma
específica relacionada con el producto a examinar.
5.3 MEDIO BAIRD-PARKER
Se puede usar medios de cultivo comercialmente disponibles. En tal caso, deben
seguirse cuidadosamente las instrucciones del fabricante.
5.3.1 Medio base
5.3.1.1 Composición
Caseína por digestión pancreática 10,0 g
Extracto de lavadura 1,0 g
Extracto de carne 5,0 g
Piruvato de sodio 12,0 g
L-Glicina 12,0 g
Cloruro de litio 5,0 g
Agar 12 g a 22g
Agua 1 000 ml
Dependiendo de la fuerza del gel del agar

5.3.1.2 Preparación
- Se disuelven los componentes de la base completa deshidratada en agua
hasta ebullición.
- Se ajusta el pH de tal forma que después de la esterilización sea de 7.2 ±
0,2 a 25°C.

Se transfiere el medio en cantidades de 100 ml a Erlenmeyer á frascos (Véase el


numeral 6.5) de capacidad apropiada.
Se esteriliza el medio por 15 min a 121 °C.
5.3.2 Soluciones
5-3.2-1 Solución de telurito de potasio
5.3.2.1.1 Composición

Telurito de potasio ( k2TeO3) 1.0 g


Agua destilada o des ionizada 100ml
Se recomienda asegurarse previamente de que el telurito de potasio disponible
es apropiado para este ensayo (Véase el numeral 5.3.2.1.2)

5.3.2.1.2 Preparación
- Se disuelve el telurito de potasio en el agua calentando lentamente hasta
disolución completa.
- El sólido debe ser soluble. Si se presenta material blanco insoluble, se
descarta el reactivo,
- Se esteriliza por filtración usando membranas con tamaño de poro de 0,22
µn.
- La solución puede ser almacenada como máximo por un mes a 3°C ± 0,2
°C.
- Se descarta la solución si se forma un precipitado blanco.
5.3.2.2 Emulsión de yema de huevo (concentración aproximada del 20% o de
acuerdo con las instrucciones del fabricante).
Se usan huevos de gallina con las cáscaras intactas que tengan menos de siete
días. Se lavan los huevos con un cepillo en detergente líquido. Se enjuagan con
agua corriente, luego se desinfectan sumergiéndolos en etanol al 95 % (V/V)
durante 30 s o etanol al 70 % durante 1 h y se secan. Empleando procedimientos
asépticos, se rompe cada huevo y se separa la yema de la clara. Se colocan las
yemas en una probeta estéril para su medición y se añaden 4 partes por volumen
de agua estéril y/o solución salina al 0.85 %. Se transfiere asépticamente a un
matraz estéril y se mezcla vigorosamente.
Se calienta la mezcla por 2 h en un baño de maría a 45 °C. Luego se deja por 18 h
a 24 h a una temperatura a 3°C± 2°C para permitir que se forme un precipitado.
Se retira asépticamente el sobrenadante. La solución debe ser en lo posible utilizada
en su totalidad.
Se adiciona, bajo condiciones asépticas, la yema de huevo. Se mezcla bien después
de cada adición mediante rotación para minimizar la formación de espuma.
Servir inmediatamente en las cajas de petri.
5.3.2.3 Solución de Sulfamezatina (sulfametazina, sulfadimidina)
5.3.2.3.1 Composición
Sulfamezatina 0.2 g
Solución de hidróxido de sodio (NaOH)- 0,1 MOL/L 10ml
Agua destilada o des ionizada 90 ml

5.3.2.3.2 Preparación
- Se disuelve la sulfametazina en la solución de hidróxido de sodio.
- Se completa hasta 100 ml con agua.
- Se esteriliza por filtración usando membranas con un tamaño de poro de 0.22
µm.
- La solución puede ser almacenada como máximo por un mes a 3°C± 2°C.
5.3.3 Medio completo
5.3.3.1 Composición
Medio base (Véase el numeral 5.3.1) 100ml
Solución de telurito de potasio (Véase el numeral 5.3.2.1 ) 1,0ml
Emulsión de yema de huevo (Véase el numeral 5.3.2.2) 5,0ml
Solución de Sulfametazina 2,5ml

5.3.3.2 Preparación
- Se funde el medio, luego, se enfría a 45°C± 2°C, mediante el baño maría.
- Se adiciona, bajo condiciones asépticas, las otras dos soluciones (si se
sospecha que especies de Proteus están en la muestra de ensayo) la
solución de sulfametazina (Véase numeral 5.3.2.3). siendo previamente
calentadas en el baño de maría a 45°C± 1°C.
- se mezcla bien después de cada adición.
5.3.4 Preparación de las cajas
Se coloca la cantidad apropiada de medio completo (véase el numeral 5.3.3) en
cajas de Petri estériles para obtener un agar de 4 mm, de espesor
aproximadamente, y se permite la solidificación.
Las cajas pueden ser almacenadas, de 24 h hasta 72 h a 3 °C± 2°C.

NOTA Las instrucciones del fabricante sobre el periodo de almacenamiento deben


seguirse para cajas preparadas industrialmente.
Antes del uso para eliminar la condensación, se deben dejar las cajas, con las
tapas sueltas en un área aséptica.
5.4 CALDO INFUSIÓN CEREBRO-CORAZÓN
5.4.1 Composición
Tejidos animales por digestión enzimática 10,0 g
Infusión deshidratada de cerebro de ternero 12,5g
Infusión deshidratada de corazón de vaca 5,0g
Glucosa 2,0g
Cloruro de sodio 5,0g
Fosfato de sodio di básico, anhidro 5,0g
Agua destilada o des ionizada 1 000ml

5.4.2 Preparación
- Se disuelven los componentes de la base completa deshidratada en agua
por ebullición.
- Si es necesario, se ajusta el pH de tal forma que después de la esterilización
sea de 7.4 ± 2 a 25 °C.
- Se transfiere el medio en cantidades de 5 ml a tubos de ensayo o frascos
(Véase el numeral 8.5) de capacidad apropiada
- Se esteriliza el medio por 15 min a 121 °C.

6. EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO


NOTA los equipos desechables son una alternativa aceptable al material reutilizable
si tienen especificaciones apropiadas.
Equipo microbiológico usual de laboratorio y en particular lo siguiente:
6.1 Equipos para esterilización en seco (horno) y para esterilización húmeda
(autoclave) Véase la NTC 4092.
6.2 Incubadora, para mantener el medio inoculado, cajas y tubos de ensayo a un
rango de temperatura de 35 °C± 2°C.
6.3 Baño de maría, o equipo similar, capaz de mantener la temperatura de 46 °C±
1°C y 48°C± 1°C.
6.4 Tubos de ensayo, Erlenmeyer o frascos con tapa rosca, de capacidad
apropiada, para la esterilización y almacenamiento de medios de cultivo e
incubación de medios líquidos: en particular tubos estériles de hemólisis, o tubos de
fondo redondo de aproximadamente 10 mm x 75mm.
6.5 Cajas de Petri estériles, de vidrio o plástico.
6.6 Asa bacteriológica (Véase la NTC 4092) y pipeta Pasteur.
6.7 Pipetas graduadas de vaciado total, de capacidades nominales de 1ml, 2 ml y
10 ml, graduadas en divisiones de 0.01 ml, 0.1 ml y 0.5 ml. respectivamente o micro
pipetas.

6.8 Varillas de vidrio o plástico (Diglastic) rastrillos o varillas de Jockey, estériles.


6.9 pH-metro, con capacidad de lectura de 0,01 unidades de pH, permitiendo
mediciones con una precisión de ± 0.1 unidades de pH.
7. MUESTREO
Es importante que el laboratorio reciba una muestra representativa y adecuada para
su correspondiente análisis y que no haya sufrido daños o cambios durante el
transporte o el almacenamiento.
El muestreo no hace parte del método especificado en esta norma. Debe verse la
norma específica para el producto en cuestión. Si no hay norma específica, se
recomienda que las partes interesadas lleguen a un acuerdo sobre este aspecto.
8. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO
Se prepara la muestra de acuerdo con la norma específica apropiada para el
producto en cuestión.
Si no existe una norma específica, se recomienda que las partes involucradas
lleguen a un acuerdo.
9. PROCEDIMIENTO
9.1 PORCIÓN DE ENSAYO, SUSPENSIÓN INICIAL Y DILUCIONES
Véase la NTC 4491-1, NTC 4491-2. NTC 4491-3. NTC 4491-4 y la norma específica
para el producto en cuestión.
9.2 INOCULACIÓN E INCUBACIÓN CUANDO SE EMPLEA MEDIO BAIRD
PARKER (VÉASE
EL NUMERAL 5.3.3)
9.2.1 Se transfiere por medio de una pipeta estéril [véase el numeral 6.8), 0.1 ml de
la muestra de ensayo si es líquida, o 0.1 ml de la suspensión (dilución 10-1) en el
caso de otros productos a cada una de las dos cajas (véase el numeral 6.8). Se
repite el procedimiento para la dilución 10-2 y para las demás diluciones decimales
si es necesario.
9.2.2 Si para ciertos productos, se espera contar bajo número de estafilococos
coagulasa positiva, el límite de detección se puede incrementar por un factor de 10
inoculando 1,0 ml de la muestra de ensayo si es líquida o 0,1 ml de la suspensión
para otros productos, tanto en la superficie de cajas de agar grandes (140 mm) o en
la superficie de tres cajas de agar pequeñas (90 mm). En ambos casos, se preparan
duplicados usando 2 cajas grandes o seis pequeñas.
9.2.3 Cuidadosamente se esparce el inóculo tan rápido como sea posible sobre la
superficie del agar tratando de no tocar los lados de las cajas, usando la varilla
(véase el numeral 6.9). Se permite que las cajas se sequen con sus tapas por 1 min
aproximadamente a la temperatura del laboratorio.
9.2.4 Se invierten las cajas preparadas de acuerdo con el numeral 9.2.3 y se
incuban por 24 h a 48 h ± 2 h (véase el numeral 6.2) a 35°C ±2°C.

9.3 SELECCIÓN DE LAS CAJAS E INTERPRETACIÓN


9.3.1 Cuando se emplea Medio Baird Parker Véase el numeral 5.3.3
9.3.1.1 Después de la incubación por 24 h ± 2 h, se marca en la caja las posiciones
de cualquier colonia típica presente (véase la Nota 2).
Se re incuban todas las cajas a 35°C±2 °C por 24 h ± 2 h adicionales, y se marca
cualquier nueva colonia típica. También se marca cualquier colonia atípica presente
(véase la Nota 2 del numeral 9.4.1.1).
Si se inoculó 1.0 ml sobre tres cajas (véase el numeral 9.2.2), considerarlas como
una sola en todos los recuentos subsecuentes y procedimientos de confirmación.
Para el recuento se toman solo aquellas cajas (véase la Nota 2 del numeral 9.4.1.1)
que contengan entre 20 y 200 colonias típicas, atípicas, o ambas, en dos diluciones
sucesivas. Para confirmación, (véase el numeral 9.5), se selecciona un número
dado A (véase el numeral 10.1.1) (en general de 3 colonias a 5 colonias típicas, si
solo hay colonas típicas, o de 3 a 5 colonias atípicas, si solo hay colonas atípicas,
o de 3 a 5 colonias típicas y de 3 a 5 colonias atípicas si están presentes ambas, de
cada caja).
Si hay menos de 20 colonias típicas, atípicas, o ambas, presentes en las cajas
inoculadas con el producto líquido no diluido o con la dilución menor de otros
productos, es posible hacer un recuento estimado como el descrito en los numerales
9.4.1.3 y 10.2.
NOTA Las colonias típicas son negras o grises, brillantes y convexas (de 1 mm a
1.5 mm de diámetro después de 24 h de incubación y 1.5 mm a 2.5 mm de diámetro
después de 48 h de incubación y rodeadas por una zona clara (halo) que puede
ser parciamente opaca. Después de por lo menos 24 h de incubación puede
aparecer en esta zoca clara, un halo claro opalescente, inmediatamente en contacto
con, las colonias.
NOTA 2 Si para el análisis es el recuento de staphylococcus coagulasa positiva es
necesario tener en cuenta las colonias típicas.
Las colonas atípicas pueden presentar una de las siguientes morfologías:
a) colonias negras brillantes con o sin un estrecho borde blanco: la zona clara está
ausente o ligeramente visible y el halo opalescente está ausente o es apenas
visible;

b) colonias grises sin zonas claras.


Las colonias atípicas están formadas principalmente por cepas de estafilococos
coagulas positiva contaminantes, por ejemplo productos lácteos, camarones y
vísceras de ave. Están formadas menos frecuentemente por cepas de estafilococos
coagulasa-positiva contaminantes de otros productos.
NOTA 3 Otras colonias son el resto de colonias que pueden estar presentes en la
placa y que no muestran la apariencia típica, consideradas como la flora de fondo.
Las bacterias pertenecientes a otros generes diferentes al staphylococos pueden
dar colonias con una apariencia similar a los estafilococos. El examen microscópico
con tinción de Gram antes de la confirmación, facilitara la diferenciación de otros
géneros.
9.3.1.3 Para hacer un recuento estimado de número bajos de estafilococos
coagulasa-positiva, se retinen todas las cajas que contengan colonias típicas y
atípicas. Se seleccionan todas aquellas colonias para confirmación con los
requisitos siguientes.
9.4 CONFIRMACIÓN (PRUEBA DE LA COAGULASA)
De la superficie de cada colonia seleccionada (Véase el numeral 9.41), se remueve
un inóculo con un asa estéril (Véase el numeral 5.5) y se transfiere a un tubo o
frasco con caldo infusión cerebro-corazón (Véase el numeral 5.4)
Se incuba a 35°C±2 °C por 24h ±2 h.
Se adiciona asépticamente 0.1 ml de cada cultivo a 0.3 ml del plasma de conejo
(véase el numeral 5.5) (a menos que se especifiquen otras cantidades por el
fabricante) en tubos de hemólisis o frascos estériles (especificados en el numeral
6.5), y se incuba a 35 °C±2 °C se inclina el tubo, se examina el coágulo del plasma
después de 4 h a 6 h de incubación y, la prueba es negativa, se re-examinan a las
24 h de incubación, o se examina a los tiempos de incubación especificados por el
fabricante.
Se considerará la prueba de coagulase positiva, si el volumen de coágulo ocupa
desde un cuarto del volumen original del líquido.
Como control negativo, para cada lote de plasma, se adicionan 0.1 ml de caldo
infusión cerebro-corazón (véase el numeral 5.4) a la cantidad recomendada de
plasma de conejo (véase el numeral 5.5) y se incuba sin inoculación. Para validar la
prueba, el pasma de control no debe mostrar ningún signo de coagulación.
10. EXPRESIÓN DE RESULTADOS
10.1 CASO GENERAL
10.1.1 Cálculo del número a de estafilococos coaguasa-positva identificados para
cada caja seleccionada.
Se calcula para cada una de las cajas, el número a de estafilococos coagulasa-
positiva, de acuerdo con la ecuación:

= _____x +_____x
En donde
Ac = es el número de colonias típicas sometidas a la prueba coagulasa
(Véase el numeral 9.5)

Anc = es el número de colonias atípicas sometidas a la prueba coagulasa


(Véase el numeral 9.5);

Bc = es el número de colonias típicas positivas para la prueba de la


coagulasa;

Bnc = es el número de colonias atípicas positivas para la prueba de la


coagulasa;

Cc = es el número total de colonias típicas vistas en la caja (Véase el


numeral 9.4.1);

Cnc = es el número total de colonias atípicas vistas en la caja (Véase el


numeral 9.4.1).

Se redondea el resultado con dos cifras significativas (véase la NTC 4092).


10.1.2 cálculo del número N de estafilococos coagulasa-positiva presentes en la
porción de muestra.
Para aquellas cajas que contienen como máximo 200 colonias, con 100 colonias
típicas y/o atípicas en dos diluciones sucesivas, se calcula el número de
estafilococos coagulasa-positiva para cada caja como se especifica en el numeral
10.1.1 se calcula, como un promedio ponderado de dos diluciones sucesivas, el
número N de estafilococos coagulasa-positiva presentes en la porción de muestra,
usando la siguiente ecuación:

=
(1 + 0,1 2)
En donde

∑a = es la suma de colonias de estafilococos coagulasa-positiva en


todas las cajas seleccionadas;
V = es el volumen del inoculo de cada caja, en mililitros;
N1 = es el número de cajas seleccionadas de la primera dilución.
N2 = es el número de cajas seleccionadas de segunda dilución;
D = es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución
seleccionada (la suspensión inicial es una dilución)

Se redondea el resultado calculando con dos cifras significativas (véase la NTC


4092)

Se reporta el resultado como el número de estafilococos coagulasa-positiva por


mililitro (productos líquidos) o por gramo (otros productos), expresado como un
número entre 1.0 y 9,9 inclusive multiplicado por 10x donde x es la apropiada
potencia de 10.
10.1.3 Ejemplo
El recuento para un producto después de incubación con 0.1 ml de producto dio los
siguientes resultados:
- para la primera dilución (10-2): 65 colonias típicas y 85 colonias atípicas:
- para la segunda dilución (10-3): 3 colonias típicas y 7 colonias atípicas:
Se obtuvieron los siguientes números.
- . de 65 colonias, 5 colonias fueron seleccionadas y todas las 5 fueron
coagulasa positiva, dando a = 65:

- de 85 colonias, 5 colonias fueron seleccionadas, 3 de las cuales fueron


coagulasa positiva, dando a= 51

- de 3 colonias, todas las 3 fueron coagulasa-positiva, dando a = 3:

- de 7 colonias, 5 colonias fueron seleccionadas, y todas las 5 fueron


coagulasa-positiva, dando a = 7.

-
65 + 51 + 3 + 7
𝑁= = 57 272
(0.22 x 10 − 2)

El resultado, después de redondearlo, es 5, 7 x 10-4

10.2 ESTIMACION DE NUMEROS BAJOS


10.2.1 Si dos de las cajas, correspondientes a la muestra de ensayo (productos
líquidos) o la suspensión inicial (otros productos) contienen menos de 20 colonias
identificadas, se reportan los resultados como sigue.

a) Para productos líquidos, se estima el número N, de estafilococos coagulasa-


positiva por mililitro:


=
𝑥2
En donde

∑a = es la suma de colonias identificadas de estafilococos coagulasa-


positiva (Véase el numeral 10.1.1) en las dos cajas seleccionadas;

V = es el volumen esparcido en cada caja.

c) Para otros productos, se estima el número N de estafilococos coagulasa-positiva


por gramo:


=
2

en donde
∑a = es la suma de colonias identificadas de estafilococos coagulasa-
positiva (Véase el numeral 10.1.1) en las cajas seleccionadas;

D = es el factor de dilución de la suspensión inicial;

V = es el volumen esparcido en cada caja.

10.2.2 Si dos de las cajas, correspondientes a la muestra de ensayo (productos


líquidos) o la suspensión inicial (otros productos) no contienen ninguna colonia de
estafilococos coagulasa positiva y si el inóculo ha sido hecho con 0,1 ml demuestra,
reportar los resultados como sigue (caso general de un inóculo de 0.1 ml):
- menor de 10 estafilococos coagulasa-positiva por mililitro (productos
líquidos):
- menor de 10/d estafilococos coagulasa-positiva por gramo (otros productos),
donde d es el factor de dilución de la suspensión inicial.

Si el inóculo ha sido hecho con 1 ml de muestra, se reportan los resultados como


sigue:
- menor de 1 estafilococos coagulasa-positiva por mililitro (productos líquidos):
- menor de 10/d estafilococos coagulasa-positiva por gramo (otros productos).

11. PRESICION
11.1 GENERALIDADES
La precisión de los métodos cuantitativos puede expresarse en términos de
repetitividad y reproducibilidad, según se define en Ia norma ISO 5725-2. Sin
embargo, el método de cálculo utilizado en Ia noema ISO 5725-2, basado en la
media, no siempre resulta apropiado para los análisis microbiológicos, que no
siempre muestran una distribución normal (Gaussiana).Por consiguiente, se ha
seguido la norma ISO 16140, que se ha desarrollado especialmente para los
métodos microbiológicos y que utiliza estimadores robustos para calcular la
repetibilidad y la reproducibilidad. Estas estadísticas presentan la ventaja de ser
menos sensibles a los valores extremos, permitiendo por lo tanto conservar los
datos discrepantes de los análisis estadísticos.
Por tanto estos estimadores se utilizan en esta parte de la NTC 4779 (ISO 6888)

Los detalles de un análisis interlaboratorio respecto a la precisión del método se


resumen en el Anexo A. Los valores obtenidos a partir de este análisis
interlaboratorio pueden no resultar aplicables a rangos de concentraciones y
matrices diferentes de las indicadas. Los datos de precisión se determinaron
utilizando tres tipos de alimentos, contaminados a distintos niveles y para materiales
de referencia. Factores tales como la cepa considerada, la flora competitiva y el
estado fisiológico de los microorganismos blanco (Target) y de los competidores
influyen sobre los valores de precisión.

11.2 REPETIBILIDAD
11.2.1 Limite de repetibilidad
La diferencia absoluta entre los resultados (transformados a log10) de dos análisis
individuales (número de estafilococos coagulasa-positiva por gramo o por mililitro),
o Ia proporción entre el mayor y el menor de los dos resultados del análisis en escala
normal, obtenidos utilizando el mismo método sobre idéntico material de análisis por
el mismo analista, utilizando los mismos aparatos dentro del intervalo de tiempo lo
más corto posible, no sobrepasará el límite de repetibilidad (r) en más del 5% de los
casos.

11.2.2 Valores globales


Como indicación general del límite de repetibilidad (r) pueden utilizarse los
siguientes valores cuando se analicen muestras alimenticias en general. Estos
valores de r son medias generales para todas las matrices consideradas:
r = 3,28 (expresado como diferencia absoluta entre resultados de análisis
transformados a log10), o
r = 1.9 (expresado como relación entre el mayor y el menor de los dos resultados
del análisis, en escala normal).
Para materiales de referencia (cápsulas que contienen aproximadamente 5000
UFC. (Véase el Anexo A), pueden utilizarse los siguientes valores:
r = 0.19 (expresado como diferencia absoluta entre resultados de análisis
transformados a log10), o
r = 1.55 (expresado como relación entre el mayor y el menor de los dos resultados
del análisis, en escala normal).
EJEMPLO. Se obtuvo un primer resultado de un análisis de 10 000 0 1.0 x 10 -4
estafilococos coagulasa-positiva por gramo de alimento. Bajo condiciones de
repetibilidad, la relación entre el resultado del análisis más alto y el más bajo no
debería ser mayor de 1.9. Por consiguiente, el resultado del segundo análisis
debería estar entre 5 263 (=10 000 /1,9) y 19 000 (10 000 x 1,9) estafilococos
coagulasa-positiva por gramo.

11.3 REPRODUCIBILIDAD

11.3.1 LÍMITE DE REPRODUCIBILIDAD


La diferencia absoluta entre los resultados transformados a log10) de dos análisis
individuales (números de estafilococos coagulasa-positiva por gramo o por mililitro),
o la proporción entre el mayor y el menor de los dos resultados del análisis en escala
normal, obtenidos utilizando el mismo método sobre idéntico material de análisis en
laboratorios diferentes o por analistas diferentes del mismo laboratorio (Véase en
Bibliografía la referencia [41). por analistas distintos que utilizan aparatos distintos,
no sobrepasará el Límite de reproducibilidad (R) en más del 5 % de los casos.
11.3.2 Valores globales
Como indicación general del límite de reproducibilidad (R) pueden utilizarse los
siguientes valores cuando se analicen muestras alimenticias en general. Estos
valores de R son medias generales para todas las matrices consideradas:
R = 0,43 (expresado como diferencia entre resultados de análisis transformados a
log10), o
R = 2.7 (expresado como relación entre el mayor y el menor de los dos resultados
del análisis, en escala normal).
Para materiales de referencia (cápsulas que contienen aproximadamente 5 000
UFC. véase el Anexo A), pueden utilizarse los siguientes valores:
R = 0.39 expresado como diferencia entre resultados de análisis transformados a
log10), o
R = 2.4 (expresado como relación entre el mayor y el menor de los dos resultados
del análisis, en escala normal).
EJEMPL0 1 En un primer laboratorio se obtuvo un resultado del análisis de e 1,1 x
10-4 estafilococos coagulasa positiva por grano de producto alimenticio. Bajo
condiciones de reproducibilidad a relación entre los resultados de los análisis entre
el primer y el segundo laboratorio no debería ser no tenerla ser superior a 2.7. Por
consiguiente el resultado del siguiente laboratorio debería estar entre 3,7 x 10 3 =
(1,0 x 104 /2,7) y 2,7 x104 = (1,0 x 104 x 2,7) estafilococos coagulasa-positiva por
gramo.
EJEMPLO 2 Un laboratorio quiere saber cuál es el nivel máximo que puede
encontrar que aun este en conformidad con el límite preestablecido (por ejemplo
un límite de 105 o de 5 unidades log10). Para esto, el valor de R (en escala
logarítmica) tiene t.ie multiplicarse por un factor te 0.59. Este valor es 0,25 (0,43 x
0.59) cuando se considere la diferencia entre los resultados de análisis
transformados a log10 o de 100,25 cuando se considere la relación entre resultados
de análisis. Por consiguiente, resultados de hasta log10, 5,25 (log10 5 + log10 0,25)
o 1,8 x 105 no indican falta de conformidad por dicho límite. El factor de 0.59 refleja
el hecho de que se utiliza un análisis por un intervalo de confianza mono direccional
del 95 % para verificar si se supera el límite S .El factor de 0,59 se obtiene a partir
de la siguiente formula.
1,65
0.59 =
1,96√2

Se añade el siguiente Anexo A tras la finalización del numeral 12

12. INFORME DE ENSAYO


El informe de ensayo debe especificar:
- toda la información necesaria para la completa identificación de la muestra;
- el método de muestreo utilizado, si se conoce;
- el método de ensayo utilizado, con referencia a esta parte de la norma;
- todos los detalles operativos no especificados en esta parte de la norma, o
considerado como opcional, cualquier incidente detallado que pueda haber
influenciado los resultados del ensayo;
- el resultado obtenido.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4779 (Primera actualización)

ANEXO A
(Informativo)
RESULTADO DE UN ESTUDIO NTERLABORATORIOS

Se organizó un estudio interlaboratorio internacional en 1999 a cargo del laboratorio


para el Laboratory for Study and Research on Hygiene and Quality of Food
(LERHQA) de la French Food Salety Agency (AFSSA), en el marco del proyecto
Europeo SMT CT 96 2098 (véase la referencia [8] de la Bibliografía). En este estudio
participaron 24 laboratorios de 16 países de Europa y se realizó sobre queso, carne,
huevo en polvo y un material de referencia. Cada una de las muestras alimenticias
se analizó en tres niveles de contaminación con Staphylococcus coagulasa-
Positivas, más un control negativo.
Los datos de precisión obtenidos a partir de este estudio interlaboratorio se
muestran para cada tipo de muestra en las Tablas A. 1 a A.4. Se han calculado
utilizando estadísticas robustas, según se describe en la norma ISO 16140. Se han
excluido de los cálculos los datos procedentes de algunos laboratorios cuando se
sabía que se apartaban del protocolo de estudio descrito.

Tabla A.1. Resultados del análisis de datos obtenidos con muestras de queso

Muestra/Nivel de contaminación Queso Queso Queso


nivel bajo nivel nivel
medio alto

Número de laboratorios que proporcionaron resultados 22 22 22

Número de muestras por laboratorio 2 2 2

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los discrepante 19 19 19

Número de muestras aceptadas 38 38 38

Valor medio (en log10 C UFC/g) 3,33 5,12 6,06


Desviación estándar de la repetibilidad, s, (en 10gm) UFC/g) 0,18 0,06 0,12

Desviación estándar relativa de la repetibilidad (%) 5,36 1,16 1,96

Límite de repetibilidad (r), en forma de diferencia en escala de 10gw 0,50 0,17 0,33
(en log1o UFC/g)

Desviación estándar de la reproducibilidad, sr (en log10 UFC/g) 0,19 0,16 0,24

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad (%) 5,61 3,24 3,91

Límite de reproducibilidad (R), en forma de diferencia en escala de 0,52 0,47 0,66


log10 (en log10 UFC/g)

Tabla A.2. Resultados del análisis de datos obtenidos con muestras de carne

carne carne carne


Muestra/Nivel de contaminación
nivel nivel nivel
bajo medio alto

Número de laboratorios que proporcionaron resultados 23 23 23

Número de muestras por laboratorio 2 2 2

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los discrepante 18 18 18

Número de muestras aceptadas 36 36 36

3,27 4,20 6,19


Valor medio (en log10 UFC/g)

Desviación estándar de la repetibilidad, s, (en 10gm) UFC/g) 0,12 0,07 0,10

Desviación estándar relativa de la repetibilidad (%) 3,64 1,58 1,67


Límite de repetibilidad (r), en forma de diferencia en escala de 10gw 0,33 0,19 0,29
(en log1o UFC/g)

Desviación estándar de la reproducibilidad, sr (en log10 UFC/g) 0,17 0,17 0,24

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad (%) 5,25 3,99 2,26

Límite de reproducibilidad (R), en forma de diferencia en escala de 0,48 0,47 0,39


log10 (en log10 UFC/g)

Tabla A.3. Resultados del análisis de datos obtenidos con muestras de


huevo en polvo

Muestra/Nivel de contaminación Huevo en Huevo en Huevo


polvo polvo en
nivel nivel polvo
bajo medio nivel
alto

Número de laboratorios que proporcionaron resultados 23 23 23

Número de muestras por laboratorio 2 2 2

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los discrepante 20 20 20

Número de muestras aceptadas 40 40 40

Valor medio (en log10 UFC/g) 3,17 4,10 5,23

Desviación estándar de la repetibilidad, s, (en 10gm) UFC/g) 0,09 0,09 0,12

Desviación estándar relativa de la repetibilidad (%) 2,78 2,17 1,96

Límite de repetibilidad (r), en forma de diferencia en escala de 10gw 0,25 0,25 0,22
(en log1o UFC/g)
Desviación estándar de la reproducibilidad, sr (en log10 UFC/g) 0,11 0,10 0,11

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad (%) 3,57 2,55 2,08

Límite de reproducibilidad (R), en forma de diferencia en escala de 0,32 0,29 0,30


log10 (en log10 UFC/g)

Tabla A.4. Resultados del análisis de datos obtenidos con materiales de


referencia

materiales de referencia
Muestra/Nivel de contaminación (capsula que contiene unas 5
000 UFC
Número de laboratorios que proporcionaron resultados 23

Número de muestras por laboratorio 2

Número de laboratorios participantes tras eliminar a los discrepante 20

Número de muestras aceptadas 40

Valor medio (en log10 UFC/g) 3,79

Desviación estándar de la repetibilidad, s, (en 10gm) UFC/g) 0,07

Desviación estándar relativa de la repetibilidad (%) 1,76

Límite de repetibilidad (r), en forma de diferencia en escala de 10gw 0,19


(en log1o UFC/g)

Desviación estándar de la reproducibilidad, sr (en log10 UFC/g) 0,14

Desviación estándar relativa de la reproducibilidad (%) 3,68

Límite de reproducibilidad (R), en forma de diferencia en escala de 0,39


log10 (en log10 UFC/g)
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4779 (Primera actualización)

ANEXO B
(Informativo)
MEDIO DE CULTIVO ALTERNO

B.1 PLASMA DE CONEJO


Se usa plasma de conejo deshidratado comercialmente disponible y se rehidrata de
acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Si no se dispone de plasma de conejo deshidratado, se diluye un volumen de
plasma de conejo estéril fresco con tres volúmenes de agua estéril.
Se adiciona la solución de EDTA (ácido etilén-diamina-tetra-acético) para dar 0,1 %
de EDTA en el plasma rehidratado o diluido, si se ha usado citrato de potasio o
citrato de sodio como anticoagulante.
A menos que lo indique el fabricante, el plasma rehidratado o diluido debe ser usado
inmediatamente.
Antes de su uso, se ensaya cada lote de plasma con cepas de estafilococos
coagulasa positiva y cepas de estafilococos coagulasa-negativa.
B.2 MEDIO PLASMA DE CONEJO FIBRINÓGENO (VER REFERENCIAS [6] Y
[7])
NOTA Se puede usar medio de cultivo comercialmente disponible. Sin embargo,
considerando la conocida variedad de los lotes de suplemento fabricados, se
recomienda que cada lote de solución de fibrinógeno bovino/plasma de conejo se
pruebe antes de su uso, frente a controles positivos y negativos.
B.2.1 Medio base
Preparar el medio base como se menciona en el numeral 5.3.1 con la excepción de
que la distribución del medio base se hace en cantidades de 90 ml por Erlenmeyer
o frasco.
B.2.2 Soluciones
B.2.2.1 Solución de telurito de potasio
Prepararla solución de telurito de potasio como se indica en el numeral 5.3.2.1.
B.2.2.2 Solución de fibrinógeno bovino
B.2.2.2.1 Composición
Fibrinógeno bovino 5ga7g
Agua destilada o desionizada 100 ml
Dependiendo de la pureza del fibrinógeno bovino.

B.2.2.2.2 Preparación
Bajo condiciones asépticas, se disuelve el fibrinógeno bovino en el agua justo
antes de su uso.
B.2.2.3 Solución de plasma de conejo e inhibidor de tripsina
B.2.2.3.1 Composición
Plasma de conejo con EDTA para coagulasa 30 ml
Inhibidor de tripsina 30 mg

B.2.2.3.2 Preparación
Operando bajo condiciones asépticas, disolver los componentes en el agua justo
antes de su uso.
B.2.3 Medio completo
B.2.3.1 Composición
Medio base 90 ml
solución de telurito de potasio 0,25ml
solución fibrinógeno bovino 7,5 ml
Solución de plasma de conejo e inhibidor de tripsina 2,5 ml

B.2.3.2 Preparación
Fundir el medio, luego enfriarlo a 48 °C ± 1 °C en un baño de maría (véase el
numeral 6.4).
Se adiciona, bajo condiciones asépticas, las tres soluciones previamente calentadas
en un baño de maría a 48°C ± 1°C. Se mezcla bien después de cada adición
mediante rotación para minimizar La formación de espuma.
Se usa el medio completo inmediatamente después de su preparación, con el fin de
evitar cualquier precipitación del plasma.
ADVERTENCIA Si se consigue comercialmente solución de plasma de fibrinógeno
bovino/plasma de conejo, se deben seguir con mucho cuidado las indicaciones del
fabricante para la preparación de esta solución y del medio completo (en particular
la temperatura del medio base) de lo contrario, el medio puede perder
completamente su actividad.
B.3 PREPARACIÓN DE LAS CAJAS
Véase el numeral 5.3.4.
B.4 INOCULACIÓN E INCUBACIÓN CUANDO SE EMPLEA MEDIO PLASMA
DE CONEJO FIBRINÓGENO VÉASE NUMERAL B.2
B.4.1 Se transfiere por medio de una pipeta estéril (véase el numeral 6.8), 1 ml de
la muestra de ensayo si es líquida, o 1 ml de la suspensión en el caso de otros
productos, a cada una de las dos cajas (véase el numeral 6.6). Se toman otras dos
cajas de Petri estériles y se transfiere 1 ml de la primera dilución decimal a cada
una de las cajas.
Se repiten estas operaciones con diluciones decimales sucesivas usando una
pipeta estéril para cada dilución decimal.
B.4.2 En cada caja de Petri (véase el numeral 9.3.1), se vierte inmediatamente
medio completo recién preparado (véase el numeral 5.6.3) (no guardar en forma
líquida) hasta una profundidad de 3 mm aproximadamente.
Se mezcla cuidadosamente el inóculo con el medio de cultivo y se deja solidificar
colocando las cajas de Petri en una superficie horizontal fría.
B.4.3 Después de una completa solidificación, se invierten las cajas preparadas
colocándolas en la incubadora (véase el numeral 6.2) a 35 °C± 2 °C por 18 h a 24
h. Si es necesario, se re incuba por 18h a 24 h.
B.5 SELECCIÓN DE LAS CAJAS E INTERPRETACIÓN CUANDO SE EMPLEA
MEDIO PLASMA DE CONEJO FIBRINÓGENO VÉASE EL NUMERAL 5.6
Después de un periodo de incubación suficiente (véase el numeral 9.3.3), los
estafilococos forman pequeñas colonias negras o grises o aún blancas rodeadas de
un halo de precipitación, indicando la coagulación. Las colonias de Proteus pueden
mostrar, al inicio de la incubación, una apariencia similar a las colonias de
estafilococos coagulasa-positiva. Sin embargo, después de 24 h a 48 h de
incubación, pueden tener una apariencia de un cultivo extendido, más o menos
pardo, que las permiten diferenciar de los estafilococos.
Se cuentan las colonias típicas de cada placa.
Debido a que el agar plasma de conejo fibrinógeno está basado en una reacción
de coagulasa, no es necesario confirmar esta actividad.
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NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4779 (Primera actualización)
__________________________________________________________________
ANEXO C
(Informativo)
CUADRO COMPARATIVO RESPECTO DE LAS MODIFICACIONES
REALIZADAS A LA NTC 4779 (Primera actualización) Y LA NTC 4491:2000

NTC 4491 NTC 4779 sustentación


(primera actualización)

0. INTRODUCCION 0. INTRODUCCION Se modifica la


0.2 0.2 introducción para explicar
En general, se usa la En general, se usa que en la nueva versión
técnica con agar Baird empleando la técnica con se incluye un anexo B
Parker. En casos de agar Baird Parker. Sin (informativo) con la
encontrar colonias embargo, es preferible técnica de agar
atípicas de estafilococo o usar 51 procedimiento fibrinógeno de plasma de
flora acompañante en el descrito cuando en la conejo que es utilizada
agar Bair Parker. técnica se usa el agar para el diagnóstico de S.
procedentes de ciertas plasma de conejo Aureus en productos
muestras como quesos fibrinógeno solo para los tales como lácteos o
hechos de leche cruda o alimentos (talos como carnes crudas.
ciertos productos a base queso, leche cruda o
de carne cruda, se ciertos productos a base
recomienda utilizar de carne cruda, que
alternativamente la probablemente estén
técnica de agar contaminados por
fibrinógeno de plasma de - colonias atípicas de
conejo estafilococos de agar
Baird Parker.
- flora acompañante que
pueda ocultar las colonias
observadas.

Se incluyeron las
2. REFERENCIAS 2. REFERENCIAS referencias normativas
NORMATIVAS NORMATIVAS para la preparación de las
muestras para ensayo,
NTC 4491-1, NTC 4491:1998, suspensiones iniciales y
Microbiología de Microbiología de diluciones decimales que
alimentos y de alimentos alimentos y de alimentos reemplazaron la NTC
para animales. para animales. 4491, que han sido
Preparación de muestras Preparación de muestras adoptadas por el comité
para ensayo, para ensayo, técnico.
suspensiones iniciales y suspensiones iniciales y
diluciones decimales diluciones decimales
para los análisis para los análisis
microbiológicos. Parte 1: microbiológicos. Parte 1:
Reglas generales para la Reglas generales para la
preparación de la preparación de la
suspensión inicial y de suspensión inicial y de
diluciones decimales. diluciones decimales.
(ISO 6887-1). (ISO/DIS 6887).

NTC 4491-2, NTC 4092:1998,


Microbiología de Microbiología de
alimentos y de alimentos alimentos y de alimentos
para animales. para animales.
Preparación de muestras Requisitos generales
para ensayo, para el examen
suspensiones iniciales y microbiológico. (ISO
diluciones decimales 7218)
para los análisis
microbiológicos. Parte 2:
Reglas específicas para
la preparación de carne y
productos cárnicos. (ISO
6887-2).

NTC 4491-3,
Microbiología de
alimentos y de alimentos
para animales.
Preparación de muestras
para ensayo,
suspensiones iniciales y
diluciones decimales
para los análisis
microbiológicos. Parte 3:
RegIas específicas para
preparación de muestras
de pescado y productos
de la pesca. (ISO 6887-
3).

NTC 4491-4,
Microbiología de
alimentos y de alimentos
para animales.
Preparación de muestras
para ensayo,
suspensiones iniciales y
diluciones decimales
para los análisis
microbiológicos. Parte 4:
RegIas específicas para
la preparación de
productos deferentes de
leche, productos lácteos,
carne, productos
cárnicos, pescado y
productos de la pesca.
(ISO 6887-4).
NTC 4092, Microbiología
de alimentos y de
alimentos para animales.
Requisitos generales
para el examen
microbiológico. (ISO
7218).

3.1 Estafilococos 3.1 ESTAFILOCOCOS Se modifica la definición


coagulasa positiva. COAGULASA - de acuerdo con el Manual
Bacteria esférica POSITIVA Bergey’s, para la
aeróbica, gram (+), que Cocos en forma de clasificación y
aparece aislada, racimos, gram (+), descripción
formando parejas, catalasa (-f) en la morfológica de
tétradas o agrupadas en superficie de un medio de microorganismos,
racimos, inmóviles, cultivo selectivo, con una Versión 2005.
capaces de coagular el reacción positiva de la
plasma, convirtiendo el coagulasa cuando el
fibrinógeno en fibrina ensayo es realizado
siguiendo el método siguiendo el método
especificado en esta especificado en esta
norma. norma.

4.3 Se calcula del 4.3 Se calcula del Se incluye la nota


número de estafilococos número de estafilococos aclaratoria respecto al
coagulasa positiva por coagulasa-positiva por uso de métodos alternos
mililitro, o por gramo, de mililitro, o por gramo, de actualmente para la
muestra a partir del muestra a partir del determinación de S.
número de colonias número de colonias Aureus.
típicas y/o atípicas típicas y/o atípicas
obtenidas en cajas de los obtenidas en cajas de los
niveles de dilución niveles de dilución
escogidos de tal forma escogidos de tal forma
que de un resultado que de un resultado
significativo, y significativo, y
confirmado con el confirmado con el
resultado positiva de la resultado positiva de la
prueba de la coagulasa. prueba de la coagulasa.

NOTA La determinación
de S. aureus puede
realizarse también por
los siguientes métodos:
siembra en membranas
hidrofóbicas. PCR u otro
método búsqueda.

5.3.2.2 Emulsión de 5.3.2.2 Emulsión de


yema de huevo yema de huevo
(concentración (concentración
aproximada del 20 % o aproximada del 20
de acuerdo con las % o de acuerdo con las
instrucciones del instrucciones del
fabricante) fabricante)

... Se retira ... Se retira


asépticamente el asépticamente el
sobrenadante. La sobrenadante. La
solución debe ser en lo solución debe ser
posible utilizada en su almacenada + 3ºC ± 2ºC,
totalidad. máximo por 72 h.
Se adiciona, bajo
condiciones asépticas, la
yema de huevo. Se
mezcla bien después de
cada adición mediante
rotación para minimizar
la formación de espuma.

Servir inmediatamente
en las cajas de Petri.

5.3.4 Preparación de las 5.3.4 Preparación de las Se modifica el numeral


cajas cajas respecto a normas de
...Antes del uso para ...Antes del uso, se bioseguridad y buenas
eliminar la condensación, secan las cajas, prácticas de laboratorio
se deben dejar las cajas, preferiblemente con las en los laboratorios de
con las tapas sueltas en tapas sueltas y con la microbiología dictados en
un área aséptica. superficie del agar hacia curso por entes
abajo, en un horno a una regulatorios, buscando
temperatura entre 25ºC y evitar la contaminación
50ºC, hasta que las de los medios de cultivo,
gotas se hayan utilizadas para las
dispersado en la determinaciones.
superficie del medio
6.3 Cabina de secado o Se elimina este equipo
incubadora, capaz de debido a que el secado
mantener la temperatura de los medios de cultivo
de 25ºC ±1ºC. se realiza en un área o
cabina aséptica y no en
una estufa de secado.
9.1 Porción de ensayo, 9.1 Porción de ensayo, Se incluyen las
suspensión inicial y suspensión inicial y referencias de las
diluciones. diluciones. normas técnicas que
reemplazaron la ISO
Véase la NTC 4491-1, Véase la NTC 4491 y la 4491.
NTC 4491-2, NTC 4491- norma específica para el
3, NTC 4491-4 y la producto en cuestión.
norma específica para el
producto en cuestión

9.4.1 Cuando se emplea 9.4.1 Cuando se emplea Se modifica el numeral


Medio Baird Parker Medio Baird Parker de acuerdo con la
Véase el Véase el actualización realizada
numeral 5.3.3 numeral 5.3.3 en el documento de
referencia, respecto con
…Véase el numeral en la el numero colonias
norma NTC 4779 típicas o colonias
(primera actualización) atípicas o ambas que
deben ser tenidas en
cuenta para realizar la
confirmación.
Adicionalmente en las
notas se aclara que las
colonias que deben ser
tenidas en cuenta para
esta determinación se
aclara en la nota 1.
11. PRESICION 11. PRESICION Se incluye la información
Véase el numeral en la para determinar la
norma NTC 4779 precisión de la prueba,
(primera actualización) que se encuentra en la
actualización del
documento de referencia.
ANEXO A Se incluyen los
(informativo) resultados de los
RESULTADO DE estudios interlaboratorio
ESTUDIO realizados por el grupo
INTERLABORATORIOS de trabajo de la ISO para
estandarizar la técnica
analítica.
ANEXO B 5.6 MEDIO DE PLASMA Se envía la preparación y
(informativo) DE CONEJO la técnica del medio del
MEDIO DE CULTIVO FIBRINOGENO plasma de conejo con un
ALTERNO 9.3 INOCULACION E medio alternativo para la
B.1 PLASMA DE INCUBACION CUANDO determinación de S.
CONEJO SE EMPLEA MEDIO aureus en productos
PLASMA DE CONEJO como cárnicos crudos y
FIBRINOGENO lácteos y no como parte
de la prueba de rutina
para la su determinación.
__________________________________________________________________
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4779 (Primera actualización)
__________________________________________________________________
BIBLIOGRAFIA

[1] NTC 5014, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Protocolo


para la validación de métodos alternos.
[2] ISO 5725-2 - Accuracy (Trueness and Precision) 01 Measurement Methods and
Results. Part 2: Basic Method for the Determination Repeatability and
Reproducibility of Standard Measurement Method.
[3] ISO 16140 - Microbiology of Food and Animal Feeding stuffs. Protocol for the
Validation of Alternative Methods.
[4] DE BUYSER, M.L., LOMBARD, B., SHULTEN, S.M., lN’r VELO, P.R.,
SCOTTER, S.L., ROLLIER, R., LAHELLEC, C. Validation of EN ISO Standard
Methods 6888 Part I and Part 2:1999, Enumeration of Coagulase-Positive
Staphylococci in Foods. Int. Food Microbiol…83(2), 2003, pp. 185-194.
[5] AOAC INTERNATIONAL Official Methods of Analysis 18th Ed 2005, AOAC
INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, Method 975.55.S aureus in dairy
foods. p 87-89. Chapter 17.
[6] BECKERS H.L. et al. Evaluation of a Pour-Plate System with Rabbit Plasma-
Bovine Fibrino gen Agar for the Enumeration of Staphylococcus Aureus in Food.
Can. J. Microbio!., 30, 1984, pp 470-474.
[7] SAWNEY D. The Toxicity of Potassium Tellurite to Staphylococcus Aureus in
Rabbit Plasma Fibrinogen Agar, J. Applied Bacteriology. 61, 1986, pp. 149-155.