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Biosensor microfluídico para determinación de β-hidroxibutirato

(βHBA) de diagnóstico de cetosis subclínica
Abstracto
Antecedentes: la determinación de β-hidroxibutirato (βHBA) es un
estándar de oro para el diagnóstico de la cetosis subclínica (SCK), una
enfermedad común en las vacas lecheras que causa pérdidas
económicas significativas. La detección temprana de SCK puede
ayudar a reducir el riesgo de que la enfermedad progrese a la etapa
clínica, minimizando así las pérdidas económicas en el ganado
lechero. Los métodos de laboratorio convencionales requieren mucho
tiempo y mano de obra, lo que requiere un equipo costoso y
voluminoso. El desarrollo de dispositivos portátiles y robustos para el
diagnóstico rápido de SCK en el lugar es una forma efectiva de
prevenir y controlar la cetosis y puede ayudar significativamente en
el manejo de la salud de los animales lecheros. La tecnología de
microfluidos proporciona una forma rápida y rentable de desarrollar
dispositivos portátiles para la detección en el campo de la cetosis
subclínica. En este estudio, se desarrolló un biosensor altamente
sensible basado en microfluidos para el diagnóstico in situ de SCK.
Resultados: se desarrolló un biosensor microfluídico rápido y de bajo
costo con alta sensibilidad y especificidad para el diagnóstico de SCK.
La determinación de βHBA se empleó como indicador en el
diagnóstico de SCK. La detección en el chip utilizando un sensor
óptico miniaturizado y rentable puede finalizar en 1 minuto con un
límite de detección de concentración de 0,05 mM. El biosensor
microfluídico desarrollado se probó con éxito con las muestras de
suero de vacas lecheras afectadas por SCK. Los resultados del
biosensor desarrollado coincidieron bien con otros dos métodos de
laboratorio. El biosensor se caracterizó por una alta sensibilidad y
especificidad hacia βHBA con un límite de detección de 0,05 mM.

desplazamiento del abomaso y un mayor riesgo de cetosis clínica. SCK es una enfermedad común en vacas lecheras de alta producción y típicamente ocurre en la lactación temprana [2]. demostramos un dispositivo desplegable en el campo para identificar y medir con precisión la cetosis subclínica mediante el etiquetado específico y la cuantificación de β-hidroxibutilato en muestras de sangre de vaca. Se ha encontrado que SCK se asocia con una disminución de la producción de leche. el tiempo de detección se reduce significativamente en comparación con otros métodos de laboratorio. diagnóstico in situ. que es mucho mayor que el 2 ~ 15% incidencia de cetosis clínica [2. El β-hidroxibutirato (βHBA) se considera un estándar de oro para el diagnóstico de SCK debido a su estabilidad en la sangre. lo que provoca enormes pérdidas económicas [4. Sin embargo. un rendimiento reproductivo deteriorado. 3]. Un sistema de detección en el sitio en tiempo real maximizará la conveniencia para los agricultores. debe identificarse en una etapa temprana para las vacas.5]. es difícil identificar SCK debido a la falta de signos clínicos y puede no detectarse mediante pruebas de cetosis clínicas regulares. biosensor microfluídico. Para evitar que SCK se convierta en una enfermedad clínica y para minimizar las pérdidas económicas. Palabras clave: β-hidroxibutirato (βHBA). Un valor de .Conclusiones: El biosensor microfluídico desarrollado proporciona un prototipo prometedor para un medidor de mano rentable para el diagnóstico in situ de SCK. Se informa que la incidencia de SCK puede ser tan alta como 40 ~ 60% rebaños. de modo que pueda comenzar el tratamiento efectivo. Al usar el método microfluídico. Aquí. cetosis subclínica Fondo La cetosis subclínica (SCK) se caracteriza por el aumento en la concentración de cuerpos cetónicos circulantes sin la presencia de signos clínicos de cetosis [1].

absorbancia o detección electroquímica que aún involucran procedimientos complejos y dependen de un instrumento óptico especial y costoso para la detección de la señal. La evaluación de los dispositivos manuales de cetosis humana en la determinación de βHBA en muestras de sangre de vaca proporcionó niveles moderados a excelentes de acuerdo con las pruebas de laboratorio. el detector de cetosis humana se ha utilizado como prueba de cetosis en cowside [7. dado que estas . München. Usualmente.13-18]. kit de ELISA BHBA de anticuerpos en línea de vaca (bovino). Alemania). solo pueden proporcionar resultados semicuantitativos [11.corte de 1. Recientemente. especificidad. lo que resulta en un largo tiempo de ensayo. Sin embargo. los resultados de la evaluación del medidor portátil de cetosis humana Optimum Xceed realizado por Voyvoda y Erdogan [12] mostraron que la sensibilidad para la detección de βHBA en comparación con la prueba de laboratorio era inferior al 85%. se han desarrollado numerosas pruebas de "cowside" para el diagnóstico de cetosis basadas en la determinación de βHBA. mano de obra intensiva actualmente para la determinación de βHBA (kit de ensayo colorimétrico de β-hidroxibutirato (cuerpo cetona) de Cayman Chemical®. Además.4 mM de βHBA en muestras de sangre se utiliza para distinguir entre las vacas con y sin SCK [6 .8].12]. generalmente basado en una catálisis enzimática seguida de fluorescencia.2 a 1. se usa un volumen de muestra y una cantidad de reactivo relativamente altos. Más recientemente. todas las limitaciones antes mencionadas previenen aplicaciones desplegables en campo y en el sitio. Ketolac. La determinación cuantitativa convencional para βHBA se lleva a cabo en un laboratorio mediante el uso de equipo especial y requiere procedimientos que requieren mucho tiempo. Biolab. ensayo de betahidroxibutirato beta de Abcam. Aunque algunas de las pruebas de diagnóstico en cowside han estado disponibles comercialmente para cetosis mediante la detección de βHBA (por ejemplo.

Los biosensores microfluídicos presentan ventajas distintivas. hemos desarrollado un biosensor microfluídico de alto rendimiento para satisfacer las necesidades del mercado.pruebas están diseñadas específicamente para su uso en humanos. está claro que el detector de cetosis humano puede no ser aplicable para la medición consistente y precisa de βHBA en sangre de vaca y muestras de animales. deben evitarse los instrumentos ópticos costosos. altamente sensible y miniaturizado como un dispositivo de mano capaz de detectar de manera rápida y precisa el βHBA para el diagnóstico de SCK en vacas lecheras. como un aumento significativo de la sensibilidad con un tiempo de ensayo reducido y un consumo reducido de muestras y reactivos [19]. motivados por las limitaciones de los dispositivos actuales para el diagnóstico SCK en cowside. El objetivo de este estudio fue desarrollar un biosensor microfluídico de bajo costo. La tecnología de microfluídica y lab-on-a-chip se ha utilizado ampliamente en aplicaciones de biosensores. [18] afirma que el biosensor Novavet proporcionó solo el 82% de especificidad en βHBA en comparación con las pruebas de laboratorio. Para hacer un biosensor rentable. Por lo tanto. la aplicación veterinaria puede no ser compatible y el uso de estas pruebas podría perderse si el fabricante decide que el mercado humano no es compatible con las ventas. El estudio de Mahrt et al. La singularidad del biosensor presentado es que se basa en un sistema microfluídico con especificidad y sensibilidad superiores junto con la mayor precisión para la determinación de βHBA en muestras de suero de vacas. voluminosos y complejos como la espectroscopía de espectroscopía (RMN) FTIR y la espectrometría de masas / cromatografía de gases (GC-MS). con resultados falsos positivos significativos que indican que este biosensor puede no ser adecuado para la detección en el establecimiento de cetosis subclínica. Por lo tanto. mejorando el rendimiento analítico mediante la miniaturización. .

ON. solución de enzima βHBA y βHBA detector colorimétrico La solución patrón de βHBA que varía de 0. Brevemente. Canadá) que consistía en tampón de ensayo βHBA.materiales y métodos Reactivos y materiales Los reactivos y materiales se obtuvieron como un kit comercial (kit de ensayo colorimétrico Cayman Chemical® β-Hydroxybutyrate (cuerpo ceténico). Preparación de muestra de suero Las muestras de sangre recogidas de las vacas lecheras Holstein periparturientas de 4 granjas lecheras en el suroeste de Ontario se utilizaron para el análisis. Burlington. La muestra de sangre recogida se centrifugó a 4 ° C dentro de las 6 h posteriores a la recolección a 2990 xg para recoger el suero y se almacenó a -20 ° C para su uso posterior. El procedimiento detallado de preparación de muestras se puede encontrar en otro lugar [20]. la sangre de la vaca se recolectó primero de los vasos sanguíneos coccígeos en un tubo de vacío sin anticoagulante y se almacenó en un lugar fresco. Antes de analizar. el cofactor nicotineamida adenina dinucleótido (NAD +) se convierte en su forma reducida de . Cedarlane Labs. la muestra de suero se descongeló a temperatura ambiente y se diluyó 1: 6 con el tampón de ensayo βHBA.0 mM se preparó diluyendo el patrón de βHBA reconstituido con tampón de ensayo βHBA para preparar la curva estándar de βHBA. Principio del ensayo colorimétrico El método para la determinación de βHBA en este estudio se basa en la conversión enzimática de βHBA en acetoacetato (AcAc) por βHBA deshidrogenasa y. patrón de βHBA reconstituido. concomitantemente.05 mM a 1. La solución de enzima βHBA y el detector colorimétrico se mezclaron para hacer el tampón de la mezcla detectora en una proporción de 24: 1 antes de cada prueba.

El chip microfluídico consiste en el canal de mezcla que contiene cientos de postes. la mezcla se vertió en el molde maestro y se curó a 75 ° C durante 4 h. Después del curado. proporcional a la concentración de βHBA. dos entradas y una salida. la réplica . se colocó una fotomáscara con la geometría de microcanales diseñada sobre la oblea de silicio revestida y se expuso a UV usando un sistema de exposición a UV (UV-KUB. La Figura 1 muestra el principio de determinación de βHBA basado en la reacción enzimática.β-nicotinamida adenina dinucleótido (NADH). Burlington. Diseño y fabricación de chip PDMS microfluídico El diseño del chip microfluídico se creó utilizando el software AutoCAD y se realizó siguiendo el protocolo estándar de litografía blanda según lo detallado por Biddiss et al. Francia). [21]. ON. Kloé. El diseño del chip microfluídico se muestra en la Figura 2a. Canadá) se agitó a fondo y se desgasificó al vacío. En presencia de diaforasa. EE. Se fabricó un molde maestro de obleas de silicio mediante el primer recubrimiento por rotación de una capa delgada de fotorresistencia negativa SU-8 2025 (MicroCHEM. canal de incubación. Después del precocido. Luego. pozo de detección.) Sobre la superficie de la oblea. Después de la cocción y el revelado. Dow Corning. NADH reacciona con el detector colorimétrico WST-1 para producir un colorante formazan con una absorbancia máxima a 445 nm a 455 nm. Una mezcla 10: 1 (p / p) de prepolímero de PDMS y el agente de curado (Sylgard. se utilizó como molde para crear el chip PDMS. UU.

El chip microfluídico tenía una salida y dos entradas para la solución patrón de βHBA o muestra de suero y la mezcla de detector. EE. (a): Diagrama esquemático. VWR International. un canal de incubación y un pozo de detección. El canal principal de 200 μm de ancho y 60 μm de profundidad consistió en un canal de mezcla.) Después del tratamiento con plasma de oxígeno para 40 s. En la Figura 2b se muestra una imagen del chip microfluídico. Suwanee. Cientos de mensajes dispuestos en una línea en zigzag se diseñaron en el canal de mezcla para mejorar el efecto de . respectivamente. UU. se perforó con orificios para proporcionar entradas y salida y se unió a un portaobjetos de vidrio (25 × 75 × 1 mm. Figura 2 Diseño de chip microfluídico.de PDMS se retiró del patrón. GA. Se utilizó un marcador de posición para facilitar la alineación entre el pozo de detección y la ventana de detección del fotodiodo montado en una caja de diseño personalizado al realizar la unión.

ON.5 mm. UU. CO. fotodiodo de Si de alta sensibilidad y ruido (Hamamatsu. Canadá) con un filtro de paso de banda de una sola banda (435 nm. EE. El LED y el filtro se montaron en la tapa y en la parte superior de la plataforma de chip microfluídico para iluminar el micropozo de detección.) A través de un circuito de interfaz. EE. LEDs Luxeon Star. Bridgewater. El análisis de absorción de luz fue realizado por un biosensor óptico miniaturizado y de bajo costo hecho a medida. El biosensor usó un LED (447. El diámetro del pozo de detección era de 2. El flujo fue impulsado por las fuerzas capilares. SparkFun Electronics. La señal de intensidad de luz recogida por el fotodiodo Si se digitalizó y transfirió a una PC para su almacenamiento mediante un microcontrolador programable (Arduino Uno.mezcla.5 nm. NY.) con preamplificador como detector para el análisis de absorción de luz. . EE. (b) La imagen del chip microfluídico relleno con un tinte azul para visualización. Biosensor óptico miniaturizado y de bajo costo El principio del biosensor se basa en la propiedad del complejo resultante de absorber UV en el rango de 445 a 455 nm. Rochester. Se diseñó una ruta larga para líquidos para mejorar aún más la mezcla y la incubación. UU. El fotodiodo de Si se colocó en el fondo de la plataforma alineado con el pozo de detección. semielaborado. Brantford.) Como fuente de luz de iluminación y una fuente de luz baja. que era comparable al área de detección del fotodiodo de Si. como se muestra en la Figura 3b. UU. La señal de intensidad de luz transmitida adquirida por el fotodiodo de Si depende de la concentración de βHBA en las muestras. Niwot. NJ. Luxeon Rebel. Los componentes ópticos y eléctricos se ensamblaron en un conjunto de empaquetado de sensor para bloquear la luz ambiental. El diagrama esquemático del sensor óptico se muestra en la Figura 3a.

(b) Envasado de biosensores a medida para el montaje de componentes ópticos y eléctricos. respectivamente. 2. Todos los experimentos fueron realizados a temperatura ambiente. Procedimiento de detección Como se mencionó anteriormente. se cargó un volumen de relación 1: 1 de solución patrón de βHBA o muestra de suero diluida y la mezcla de detector que contenía la solución de enzima βHBA y el detector colorimétrico βHBA en las entradas respectivas del chip microfluídico colocado en la plataforma de chip. . se calculó la desviación estándar (SD) para las señales de 3 pruebas duplicadas. La señal de luz se grabó durante 5 s. y se indica mediante las barras de error (Figuras 4. filtro paso banda. Las dos soluciones se mezclaron por completo en el canal de mezcla y luego pasaron a través del canal de incubación y el pozo de detección a la salida. la fuente de alimentación y el microcontrolador Arduino se activaron para registrar la señal. 3. Primero. Para cada experimento. Las etiquetas 1. 4 indican las posiciones para el montaje de LED. Después del tiempo de incubación de 1 minuto. (a) Componentes del biosensor óptico. sensibilidad y especificidad del biosensor se evaluaron en base a los experimentos. chip microfluídico y fotodiodo Si.Figura 3 Diagrama esquemático del biosensor óptico. El límite de detección. la determinación de βHBA se basó en una reacción enzimática. 5 y 6).

La concentración de βHBA de la muestra de suero se detectó mediante tres enfoques diferentes para evaluar el rendimiento del biosensor presentado. El LED sirvió como fuente de luz de iluminación para el biosensor. UU. (a) Respuesta del biosensor en varios puntos de tiempo para una solución patrón de βHBA de 0. Determinación de los parámetros de operación El principio del biosensor se basa en el análisis de absorción de luz. La señal de intensidad de luz transmitida depende de la concentración de βHBA. respectivamente. Laval. un lector de microplacas híbrido Synergy H4 Multi-Mode (Biotek. fue capturada por un fotodiodo de Si.) Y el laboratorio de microfluidos desarrollado en -a biosensor Chip. Figura 4 Determinación del tiempo de incubación. Se analizaron las mismas muestras de suero utilizando un analizador de química automatizado Roche Cobas 6000 c501 (Roche Canada. VT. QC. (b) Relación del tiempo de incubación de saturación y los volúmenes de mezcla.5 mM en el volumen de mezcla de 10 μL con corriente de entrada de LED a 33 μA. Se encontró que los . Los valores de βHBA en una muestra se calcularon usando las ecuaciones de regresión lineal de sus propias curvas estándar obtenidas por cada enfoque. EE. Canadá). Winooski.

10 μL y 6 μL) de la mezcla de reacción para investigar la viabilidad y el rendimiento del biosensor. el volumen del complejo resultante y el tiempo de incubación estaban interconectados. Se estudiaron una serie de volúmenes del complejo resultante asociado con el tiempo de incubación optimizado para cada uno. se llevaron a cabo pruebas en el chip utilizando el chip microfluídico. Se realizó una serie de experimentos utilizando una solución estándar de βHBA que variaba de 0 ~ 1. y la optimización de estos parámetros se realizó para obtener un resultado estable. La Figura 7 muestra la determinación de la intensidad de luz de iluminación generada por LED. efectivo y confiable con alta sensibilidad. La intensidad de la luz de iluminación se ajustó mediante la regulación de la corriente aplicada al LED. Resultados y discusión Optimización de los parámetros de funcionamiento basados en pruebas bien basadas.parámetros de la intensidad del LED aplicado. En primer lugar.0 mM para estudiar y optimizar los parámetros de operación. Sobre la base de los experimentos de optimización iniciales. Se optimizaron tres parámetros de funcionamiento: intensidad de la luz de iluminación. . Se fijó el volumen de la mezcla de reacción con una serie de concentraciones de muestra y se varió la intensidad de la luz de iluminación para investigar la respuesta del fotodiodo de Si. volumen de muestra / reactivo y tiempo de incubación. Se obtuvo una intensidad de luz diferente del LED ajustando el voltaje aplicado en el LED. se evaluaron las pruebas de base biológica con volúmenes relativamente grandes (15 μL.

Una intensidad de luz demasiado baja y muy alta produjo una resolución deficiente. Se da un ejemplo en la Figura 4a. De forma similar. el tiempo podría reducirse en consecuencia. La magnitud de la corriente fue directamente proporcional a la intensidad de la luz del LED. se estudió el tiempo de incubación. se probó un volumen .Figura 5 Curva estándar del biosensor βHBA por volumen diferente con intensidad de luz optimizada respectiva. Por lo tanto. la intensidad del LED bajo 14 μA era apropiada. Para un volumen de solución de mezcla de 6 μL. la salida del fotodiodo se muestra en la Figura 7a. se determinó que para un volumen de mezcla de 6 μL. que se muestra en la Figura 7b. se aplicaron 3 intensidades de luz. Una vez que se determinó la intensidad de la luz LED. Dado que la muestra y el volumen de reactivo se redujeron significativamente en comparación con los 100 μl aplicados por el kit comercial asociado. Se encontró que la señal del fotodiodo de Si era proporcional a la intensidad de la luz de entrada y que se obtenía un amplio rango lineal cuando la corriente aplicada era de 14 μA. se investigó una relación del volumen de mezcla y las intensidades de LED optimizadas individualmente.

fueron construidos (Figura 5).3 V y 3. La salida del fotodiodo de Si se registró cada minuto para investigar la velocidad de reacción de la reacción enzimática. Siete minutos. las salidas del fotodiodo fueron 1.5 mM. a la concentración de 0. Se midió una serie de soluciones patrón de βHBA con la concentración que varía de 0.0 V para el volumen de 15 μL. 15 μL. La lectura del fotodiodo se controló hasta que no se observó ninguna variación adicional con el tiempo. El punto de tiempo en ese momento se consideró entonces como el tiempo de saturación basado en la cinética de la enzima para la reacción enzimática bajo el volumen asociado. tres minutos y un minuto de puntos de tiempo se investigaron como el tiempo de saturación para el volumen de 15 μL. 2. Después de la determinación de la intensidad optimizada de la luz de iluminación y el tiempo de incubación. respectivamente. respectivamente. 10 μL y 6 μL. como se muestra en la Figura 4b. 10 μL y 6 μL. curvas estándar para tres volúmenes representativos.2 mM a 1. Se investigó una señal de fotodiodo global inferior con el cambio en el volumen de la mezcla de reactivo. 10 μL y 6 μL.5 V. Se aplicó una corriente de 33 μA al LED para determinar la intensidad de luz optimizada para el volumen de reactivo en funcionamiento (Figura 7b). .0 mM mediante el biosensor presentado. Por ejemplo.5 mM.de la mezcla de reacción de 10 μL con la concentración de βHBA a 0.

(a) Determinación de la intensidad de luz LED mediante la detección de diferentes concentraciones de solución estándar βHBA. (a) Respuesta del biosensor con diferente intensidad de luz LED para diferentes concentraciones de solución estándar de βHBA a un volumen de 6 μL. Figura 7 Determinación de la intensidad de luz LED optimizada. (b) curva estándar de βHBA del biosensor microfluídico. . Figura 6 Respuesta del biosensor para la prueba en chip a un volumen de 0. (b) Intensidad de luz LED optimizada para diferentes volúmenes.Este resultado se puede explicar debido a la relación lineal entre la absorción de luz y la cantidad de sustancia absorbente.2 μL.

2 μl. De forma similar.0 mM en un chip para crear la curva de calibración para el biosensor microfluídico. Después de 1 minuto de tiempo de incubación. La curva estándar (Figura 6b) de la salida del biosensor microfluídico tenía una buena linealidad con el βHBA a concentraciones de 0. Se determinó que el modelo de regresión era y = -0. Se determinó una corriente de 14 μA como la intensidad de LED apropiada para las pruebas en el chip. .05 mM.4858x + 4. particularmente con la dilución de muestras. El volumen real detectado de solución de muestra de mezcla en el pozo de detección fue de 0.991. una intensidad de luz relativa más alta o más baja daría como resultado una resolución deficiente y conduciría a una disminución en el rango de detección de las muestras.0 mM.Optimización de los parámetros de funcionamiento basados en pruebas basadas en chips La factibilidad y el rendimiento de detección del biosensor microfluídico se ha demostrado sobre la base de los resultados obtenidos por las pruebas bien basadas. se analizó la solución patrón de βHBA con una serie de concentraciones que varían de 0. Se cargó un microlitro de la solución estándar de βHBA y la mezcla del detector en las entradas en el chip microfluídico.467 con R2 = 0. El límite de detección del biosensor microfluídico fue de 0.2 μL. El límite de detección y el rango superior probado son más que suficientes para distinguir las vacas sanas de las SCK.05 mM a 1. simultáneamente.05 mM a 1. Como se muestra en la Figura 6a. se determinó la intensidad de LED apropiada para este volumen de 0.

Una serie de muestras de suero y un control se analizaron mediante los tres métodos en el mismo día. un analizador de química y un lector de microplacas. . a saber. Determinación de βHBA en muestra de suero El rendimiento de detección del biosensor microfluídico se comparó con los otros dos métodos de laboratorio.Figura 8 Respuesta del biosensor en la determinación de la concentración de βHBA en muestras de suero.

S. el detector de cetosis humano no se puede desplegar eficientemente para la medición precisa y confiable de βHBA en sangre de vaca y muestras de animales. Las vacas tienen 11 sistemas principales de grupos sanguíneos (A. Las vacas y los humanos son mamíferos con diferencias considerables en su fisiología. C.Las muestras de suero se diluyeron a una proporción de 1: 6 antes de realizar los experimentos de ensayo Los resultados de la señal de luz capturada por el fotodiodo de Si se muestran en la Figura 8. ya que el fotodiodo detectaba una concentración mayor (> 1. los detectores de cetosis humana de mano disponibles comercialmente están limitados en su función. 13. Los valores de la concentración de βHBA en las muestras de suero se calcularon luego usando la curva estándar obtenida como se muestra en la Figura 6b. R. T y Z) a diferencia de 4 grupos en el sistema humano debido a diferentes expresiones de antígenos. M. Por lo tanto. Los resultados de la detección de BHBA en muestras de sangre utilizando nuestro biosensor microfluídico desarrollado están de acuerdo con el ensayo del lector de microplacas y las pruebas del analizador químico (Tabla 1). lo que hace que sea complejo e impreciso determinar βHBA en vacas usando detector de cetosis de medicina humana. L. F. Dado que el diagnóstico y la determinación de βHBA dependen de una variedad de fluidos corporales. Además. La evaluación de los dispositivos de mano de medicina humana [7. el biosensor microfluídico mostró un buen rendimiento en el ensayo de muestras con concentración de βHBA que variaba en un amplio intervalo. B. La singularidad del laboratorio desarrollado en un sistema de chips es que el sensor se ha construido en base a sistemas microfluídicos con mayor especificidad y sensibilidad junto con una mayor precisión . 16] en la determinación de βHBA en muestras de sangre de vaca proporcionó un nivel aceptable de acuerdo con las pruebas de laboratorio. J. pero con pruebas significativas de falsos positivos.9 V).0 mM) con resultados efectivos ( 0 V a 3. de 0 mM a 5 mM (Figura 6b).

El prototipo de biosensor microfluídico presentado en este estudio tiene sus ventajas distintivas. precisos. Debido a las diferencias en los tipos de sangre y las diferencias de expresión de antígenos entre los humanos y las vacas. Los reactivos y soluciones utilizados para el evento de detección pueden almacenarse durante 2 meses con refrigeración @ -80 ° C para evitar la pérdida de bioactividad y contaminación. el sistema de biosensor óptico microfluídico desarrollado es específico para determinar βHBA en muestras de sangre de vaca. El consumo de muestra / reactivo y el tiempo de incubación se redujeron significativamente a 1 minuto y 0. son intensivos en mano de obra y requieren un alto consumo de muestra / reactivo. como bajo costo.05 mM. altamente sensibles y específicos para en granja y en cowside diagnóstico de SCK.2 μl.95 nmol / ml. . Conclusiones Los métodos de laboratorio convencionales para la determinación de βHBA requieren mucho tiempo. Existe una clara necesidad en la miniaturización y simplificación de los dispositivos de detección para βHBA. el sistema de detección de cetosis humana comercialmente disponible no se puede emplear eficientemente para aplicaciones veterinarias. a través del método de microfluidos.para la medición en muestras de sangre de vacas. que sirve como una alternativa para el desarrollo de dispositivos portátiles rápidos. respectivamente. La detección de reactividad cruzada entre el antígeno diana y los análogos para otras especies se considera baja debido a la sensibilidad de sensibilidad y sensibilidad de 0. El prototipo de biosensor microfluídico desarrollado supera las limitaciones anteriores. A diferencia del sistema de detección de cetosis humana. Se ha desarrollado un sensor óptico miniaturizado de bajo costo para la detección fotométrica e incorporado en el biosensor con un LOD de 0. menor consumo de muestra y menor límite de detección.