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MÉTODO: TRICRÓMICA DE POLLACK 1

Fijador: Bouin
Cortes: Histosec a 6 mµ.

Soluciones:

Hematoxilina de Weigerth

Sol. A Hematoxilina en polvo 1 g.


Alcohol de 96% 100 ml.

Sol. B Cloruro férrico al 29% 4 ml.


Agua destilada (de calidad óptima) 95 ml.
HCl concentrado (calidad reactivo) 1 ml.

Solución de Trabajo

Unir volúmenes iguales de Solución A y B momentos antes de colorear.

Tricrómica de Pollack

Fucsina ácida 0,5 g.


Ponceau 2R 1 g.
Verde claro S.F. 0.45 g.
Orange G 0.75 g.
Ácido fosfotúngstico 1.5 g.
Ácido fosfomolíbdico 1.5 g.
Ácido acético glacial 3 ml.
Alcohol etílico al 50% 300 ml.

Preparación

Disolver el ácido acético en el alcohol, dividir el total de solución en 4 volúmenes iguales, en balones.

En el primer balón disolver la Fucsina ácida y el Ponceau 2R.


En el segundo balón disolver el Verde Luz S.F.
El el tercer balón disolver el Orange G y el Ácido fosfotúngstico
En el cuarto balón disolver el Ácido fosfomolíbdico (al calor suave)
A continuación mezclar y filtrar
Esta solución se conserva muy bien por un periodo largo de tiempo
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Ácido Acético Glacial

Ácido acético glacial 100% (grado reactivo) 1 ml.


Agua destilada 99 ml.

Técnica de Coloración

1. Desparafinar en dos cambios de xilol, tiempo 5 minutos c/u.


2. Neutralizar el xilol en alcohol de 96%, por 5 minutos.
3. Hidratar en agua destilada, por 5 minutos.
4. Colorear en Solución de Trabajo de Hematoxilina de Weigert, por 10 minutos.
5. Baño en agua corriente hasta que el agua sea incolora, por 10 minutos.
6. Controlar al microscopio la intensidad de la coloración nuclear.
7. Diferenciar si es necesario en alcohol ácido al 0.5%, por breves segundos.
8. Controlar al microscopio.
9. Colorear en Tricrómica de Pollack, por 60 minutos a 24 horas, controlar al microscopio la coloración óptima y por tanto el
tiempo adecuado.
10. Lavar el exceso de colorante, en agua destilada brevemente.
11. Controlar al microscopio la intensidad de coloración de las estructuras histológicas coloreadas.
12. Diferenciar las estructuras histológicas con sol. de ácido acético glacial.
13. Baño breve en agua destilada, para eliminar exceso del ácido.
14. Deshidratar en:
Alcohol de 70% x 5 minutos
Alcohol de 96% x 5 minutos
Alcohol de 96% x 5 minutos
Alcohol de 96% x 5 minutos
Etanol Absoluto x 5 minutos
Etanol Absoluto x 5 minutos
Etanol Absoluto x 5 minutos

15. Diafanización o aclaramiento en:


Xilol x 5 minutos
Xilol x 5 minutos

Xilol x 5 minutos

16. Montaje en bálsamo del Canadá.


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Resultados:

Núcleo: Color negro.


Colágena: Color Verde azulado.
Músculo: Color rojo.
Queratina: Color rojo naranja.

José Soldado Muro


Tecnólogo Médico
Histólogo