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Exposição pré-natal à testosterona como modelo para o estudo

de produtos químicos que interrompem o endócrino na


próstata gerbil
Abstrato
O desenvolvimento da próstata depende de um controle androgênico preciso, de modo que
interferências sensíveis podem predispor esta glândula a desenvolver doenças da próstata
durante a vida. Esses aspectos são de interesse e preocupação, uma vez que os seres humanos
estão expostos a um número crescente de produtos químicos perturbadores do sistema
endócrino com potencial androgênico. Portanto, nosso objetivo era avaliar as próstatas de
gerbilas adultas expostas à testosterona durante a vida intra-uterina. Foram utilizadas análises
de reconstrução serológica, morfológica, morfométrica-estereológica, imuno-histoquímica e
tridimensional. Descobrimos que os efeitos da testosterona eram dose-dependentes e mais
prejudiciais para as mulheres, levando ao desenvolvimento de características masculinas,
evidenciadas por uma distância anogenital aumentada e ausência de abertura vaginal e
desenvolvimento ectopico do tecido prostático. Além disso, as lesões pré-malignas, como a
neoplasia intra-epitelial prostática, foram observadas além dos focos inflamatórios na
próstata. Os resultados mostraram que a exposição pré-natal à testosterona pode afetar o
sistema reprodutivo, interrompendo os processos de desenvolvimento e aumentando a
susceptibilidade ao desenvolvimento de doenças da próstata no gerbil da Mongólia.
Introdução
Os produtos químicos que interrompem o endócrino (EDCs) são substâncias exógenas que
podem potencialmente perturbar o sistema endócrino afetando o metabolismo dos
hormônios.1,2 Além dessa peculiaridade, essas substâncias podem até mesmo atuar
diretamente nos órgãos do sistema reprodutor em machos e fêmeas por Competindo com
esteróides endógenos para locais ativos em receptores específicos. O número de EDCs com
potencial androgênico para o qual os seres humanos e os animais selvagens estão expostos
vem aumentando. Alguns deles, como a metiltestosterona, 3 acetato de trembolona4 e
metidihidrotestosterona 5, demonstraram estar presentes no meio ambiente. Além da
contaminação ambiental, há vários casos em que as mulheres grávidas utilizam compostos
androgênicos. Essas substâncias podem atuar como EDCs, atingindo os fetos e aumentando a
susceptibilidade ao desenvolvimento de malformações de órgãos reprodutivos. O número de
estudos que avaliam os efeitos de EDC com potencial estrogênico no trato reprodutivo de
roedores, especialmente na próstata, aumentou recentemente.6-8 No entanto, poucos
estudos avaliaram os efeitos da exposição intra-uterina a EDCs com potencial androgênico na
próstata . Sugeriu-se que a susceptibilidade a doenças, como a hiperplasia benigna da próstata
(HPB) e o câncer de próstata (PCa) inicia-se mais cedo na vida, principalmente devido à
exposição anormal aos andrógenos, especialmente durante o desenvolvimento.9 No entanto,
os mecanismos envolvidos na predisposição induzida Por exposição anormal aos andrógenos e
sua relação com a manifestação de doenças da próstata durante a vida adulta e senil.
Desconhece-se que as investigações com camundongos expostos à diidrotestosterona durante
a fase pré-natal mostraram que a programação da expressão gênica, que é controlada pela via
do receptor de andrógenos (AR) E é responsável por guiar a organogênese da próstata,
também é ativado durante a instalação do câncer de próstata.9 Esses aspectos mostram que
esta programação de expressão gênica está presente tanto nos processos que originam a
iniciação e progressão da PCa quanto durante a organogênese da próstata. Estes estudos
mostraram que os genes dependentes de AR que estão associados a eventos característicos do
processo de carcinogênese, como angiogênese, apoptose, migração, motilidade e proliferação,
são semelhantes aos genes que se expressam durante o desenvolvimento prostático. 9 Esses
aspectos são importantes, especialmente porque mais de uma centena de genes dependentes
de AR são expressos e finamente regulados durante a organogênese da próstata11. Assim, o
conhecimento detalhado de como as EDCs com potencial androgênico podem afetar o
desenvolvimento da próstata pode fornecer algumas informações importantes sobre a
suscetibilidade Desta glândula, quando expostos a substâncias androgênicas exógenas, para
desenvolver lesões ao longo da vida. Além disso, esses estudos podem até fornecer alguma
idéia de como os eventos anormais anteriores durante a organogênese da próstata podem
estar envolvidos na promoção de lesões prostáticas ao longo da vida. Estudos realizados neste
laboratório mostraram que o gerbil mongol (Meriones unguiculatus) é um bom modelo para
estudos envolvendo drogas e manipulação hormonal. 12 - 14 Esta característica deve-se ao
fato de que a próstata do gerbil é sensível tanto aos desequilíbrios hormonais endógenos
como exógenos. Além disso, o trabalho anterior15 mostrou que os gerbils fêmeas possuem
tecido prostático bastante semelhante à próstata ventral de gerbils masculinos, o que permite
esse tipo de estudos com fêmeas desta espécie. Estudos sobre o tecido prostático feminino
(também conhecido como glândula de Skene) de várias espécies de roedores foram publicados
anteriormente na literatura.15 - 19 Embora alguns estudos tenham relatado alguns roedores
fêmeas com baixa freqüência de tecido prostático, 16,19 o gerbil da Mongólia Apresenta uma
alta incidência desta glândula entre as fêmeas desta espécie.15 Esta alta incidência de tecido
prostático em gerbilas femininas simula o que ocorre em mulheres que apresentam alta
incidência de tecido prostático20, fato que já foi discutido na literatura. Levando em
consideração esses aspectos, nossa hipótese é que a exposição à testosterona durante a
embriogênese da próstata pode interromper o processo normal de desenvolvimento da
próstata, levando ao desenvolvimento de lesões prostáticas, como a HBP e a neoplasia intra-
epitelial prostática, tanto no sexo masculino como feminino Gerbils. Assim, nosso objetivo
neste trabalho foi avaliar o impacto da exposição à testosterona cipionato durante a fase
embrionária na próstata de gerbilas adultas masculinas e femininas usando análises de
reconstrução morfológica, estereologica-morfométrica, imuno-histoquimica e tridimensional
(3D).
material e métodos
Animais e design experimental Os animais foram fornecidos pela Universidade Estadual do
Estado de São Paulo (UNESP) (São José do Rio Preto), foram mantidos em gaiolas de polietileno
sob condições controladas de luz e temperatura e foram providos de água filtrada e roedor
Comida ad libitum. O manuseio de animais e os experimentos foram realizados de acordo com
as diretrizes éticas da Universidade Estadual de São Paulo (UNESP), seguindo o Guia de
Cuidados e Uso de Animais de Laboratório (NIH, Bethesda, MD, EUA). Quinze fêmeas adultas e
15 gerbilas de macho adulto (90 dias) (M. unguiculatus, Muridae: Gerbillinae) foram
usadas. Um homem foi combinado com cada fêmea para formar famílias independentes. As
fêmeas grávidas desses casais foram submetidas a diferentes manipulações e seus filhos
formaram os grupos experimentais da seguinte forma: grupo C (controle): prole de fêmeas
grávidas não manipuladas; Grupo LT (baixa testosterona durante a gestação): descendentes de
mães expostas a uma única injeção subcutânea de 100 mg de T (cipionato de testosterona -
Deposteron, EMS Sigma-Pharma, Sao Bernardo do Campo, São Paulo, Brasil) diluído em 100
mL de óleo de milho durante a gestação; Grupo HT (alto testosterona durante a gestação):
prole de mães expostas a uma única injecção subcutânea de testosterona de 1 mg de T diluída
em 100 mL de óleo de milho durante a gestação. Somente os filhotes expostos à testosterona
que nasceram seis a oito dias após o tratamento foram empregados neste estudo. Todos os
animais utilizados neste estudo foram mortos dentro de 120 dias após o nascimento. O
protocolo do tratamento T foi adaptado de Wolf et al.21 O projeto experimental geral, as
janelas de tratamento para T e a idade em que os animais foram mortos são mostrados na
Figura 1. Todos os animais foram mortos por inalação de CO2 seguido de decapitação. Apenas
as fêmeas (grupos C e LT) na fase proestro foram mortas, de acordo com Nishino e
Totsukawa.22 As fêmeas do grupo HT não foram trocadas devido à ausência de abertura
vaginal. Amostras de sangue também foram coletadas. O corpo, o complexo prostático dos
machos (UPT - uretra mais ventral, dorsal e próstata dorsolateral), complexo prostático de
fêmeas (UPT - uretra mais próstata), testículos, ovários e glândulas adrenais foram todos
pesados. Esses fragmentos foram dissecados usando um microscópio estereoscópico SD-ILK
Olympus (Olympus Optical Co. Ltd, Tóquio, Japão) para remover o tecido adiposo e isolar o
segmento uretral mais o tecido prostático associado. Dosagem plasmática total de
testosterona e estradiol As amostras de soro sanguíneo de gerbilas femininas e masculinas
foram coletadas após a decapitação seguida pela ruptura dos vasos cervicais. O soro foi
separado por centrifugação (3000 rpm) e armazenado a 2208 ° C para posterior análise
hormonal. A concentração de testosterona e estradiol no soro circulante foi determinada via
imunoensaio de quimioluminescência em um analisador automático Vitros-ECi (Johnson &
Johnson, Orthoclinical Diagnostics Division, Rochester, NY, EUA). A sensibilidade foi de 0,02 ng
/ mL para testosterona e 5 pg / mL para estradiol. Microscópio de luz As UPT de gerbilas
masculinas e femininas foram fixadas por imersão na solução de Karnovsky (5% de
paraformaldeído, 2,5% de glutaraldeído em 0,1 mol / L de tampão de fosfato, pH 7,2). Após a
fixação, os tecidos foram lavados com água corrente da torneira, desidratados em uma série
de etanol, clarificados em xileno e incorporados na Historesina usando um kit de encaixe
(Leica, Nussloch, Alemanha). As seções de tecido (3 mm) foram obtidas com um microtome
rotativo automático (Leica RM2155) e coradas com hematoxilina-eosina (HE) para análise
morfológica geral. As fibras reticulares prostáticas foram identificadas pela reticulina de
Go¨mo¨ ri. Os espécimes foram analisados com um microscópio de luz Olympus BX60
(Olympus, Hamburgo, Alemanha), e as imagens foram digitalizadas usando o software DP-BSW
V3.1 (Olympus) e Image-Pro Plus versão 6.1 para Windows (Media Cybernetics Inc., Silver
Spring, MD, EUA). Morfometria e estereologia As análises estereológicas foram realizadas
utilizando o graticulado multifuncional de Weibel com 130 pontos e 10 linhas de teste23 para
comparar a proporção relativa (volume relativo) de cada componente do tecido prostático
(epitélio, lúmen e estroma), conforme descrito por Huttunen et al .24 Treze campos
microscópicos foram escolhidos aleatoriamente em cada grupo experimental (seis campos
para animais, N ¼ 5). Em resumo, os valores relativos foram determinados contando os pontos
coincidentes na grade de teste e dividindo-os pelo número total de pontos. A análise
morfométrica também incluiu a determinação da altura das células epiteliais e da espessura da
camada muscular lisa. Todos os parâmetros morfométricos foram avaliados usando o software
Image-Pro Plus versão 6.1 para Windows (Media Cybernetics Inc.). Imuno-histoquímica Os
tecidos prostáticos foram fixados em paraformaldeído a 4% durante 24 h e em metacarnos
(proporções: metanol 60%, clorofórmio 30% e ácido acético 10%) durante três horas. Após a
fixação, os tecidos foram lavados em água, desidratados em etanol, clarificados em xileno e
incorporados em parafina (Histosec, Merck, Darmstadt, Alemanha). As seções de tecido
(espessura 5 mm) foram submetidas a imuno-histoquímica para a detecção do receptor de
androgênio (AR), conforme descrito em protocolos aplicados à próstata, 14 receptores de
estrogênio alfa (ERa), proteína p63, a-actina e antígeno nuclear de células proliferantes
(PCNA). Anticorpos primários reativos a AR (IgG policlonal de coelho, N-20, Santa Cruz
Biotechnology, Santa Cruz, CA, EUA), ER-a (IgG policlonal de coelho, MC-20, Santa Cruz
Biotechnology), p63 (IgG2a monoclonal de mouse, sc -843, 4A4; Santa Cruz Biotechnology), a-
actina (IgG2a monoclonal de ratinho, sc-32251, IA4; Santa Cruz Biotechnology) e PCNA (IgG2a
monoclonal de rato, sc-56, PC10; Santa Cruz Biotechnology) foram empregadas em uma
diluição De 1: 100. Foram utilizados anticorpos específicos conjugados com peroxidase (Sigma
Chemical Co., St Louis, MO, EUA) ou polímeros (bloco primário e polímero; Novocastra,
Newcastle Upon Tyne, Reino Unido) como anticorpos secundários durante 45 minutos a 378 °
C. As seções foram reveladas com diaminobenzidina e contrastadas com hematoxilina de
Harris. As seções histológicas foram então analisadas sob um microscópio de luz Olympus BX60
(Olympus). Reconstrução 3D A reconstrução em 3D foi feita para determinar o padrão de
distribuição de tecido prostático em gerbílios masculino e feminino dos grupos experimentais
C e HT. Para fazer isso, 20 seções histológicas (3 mm) da região central do complexo prostático
foram coradas com HE (como descrito acima) e analisadas com um microscópio de
estereoscopia Leica M125 acoplado a uma câmera fotográfica AxioCam HRC 10-33 (Zeiss -
Jenaval, Jena, Alemanha). As imagens foram digitalizadas usando o software AxioVison Release
4.7.2 (Zeiss) para Windows. O software Reconstruct25 alinhou a uretra, vagina, ductos e
alvéolos prostáticos de secções histológicas. Finalmente, foi criado um link de interface entre
cada seção e um modelo 3D. Análises estatísticas Os testes de hipóteses utilizados para
determinar a significância estatística foram o teste de Kruskal-Wallis para distribuições não-
paramétricas e análise de variância para distribuições paramétricas. A localização adicional das
diferenças estatisticamente significativas entre os grupos experimentais foi feita usando o
teste de Dunn para distribuições não-paramétricas eo teste de Tukey para distribuições
paramétricas. O teste de hipóteses utilizado para duas amostras de dados não paramétricos foi
Mann-Whitney. Os dados foram analisados usando o Statistica 6.0 (StarSoft, Inc., Tulsa, OK,
EUA) e BioEstat 5.0 (software de programa estatístico gratuito) (Instituto de Desenvolvimento
Sustenta'vel Mamiraua, Tefe', Amazonas, Brasil). O nível de significância foi estabelecido em
5% (P 0,05). Os valores foram apresentados como média + erro padrão da média (SEM).
Resultados
Análises biométricas As análises biométricas (Tabela 1) não apresentaram alterações
significativas do peso corporal nos machos. O peso do complexo prostático masculino diminuiu
em animais tratados, atingindo os valores mais baixos no grupo HT. A diferença no peso
relativo de complexos prostáticos de machos nos grupos tratados (LT e HT) foi
estatisticamente significante para aqueles do grupo C. As análises biométricas do peso
corporal, do peso do complexo prostático e do peso relativo não mostraram diferenças entre
as fêmeas dos grupos experimentais (Tabela 1). A distância anogenital (AGD) mostrou
diferença estatisticamente significante apenas para as mulheres no grupo HT. As medidas do
peso do complexo prostático e do peso relativo das fêmeas HT não foram tomadas porque o
tecido prostático mostrou distribuição dispersa em torno da parede vaginal, prejudicando o
isolamento preciso do complexo prostático feminino (UPT). Dosagem total de testosterona e
estradiol em plasma As concentrações de testosterona mostraram (Tabela 1) uma diminuição
tanto para LT como HT nos grupos masculinos em comparação com o controle, sendo
estatisticamente significativo apenas para HT em comparação com o grupo C. No entanto, não
houve diferença estatisticamente significativa entre os grupos masculinos LT e HT. Em relação
às fêmeas, apenas o grupo LT apresentou valores mais elevados de testosterona do que os
grupos C e HT. Os dados de dosagem hormonal para estradiol não mostraram diferenças
significativas para os grupos experimentais masculinos ou femininos. Aspectos anatômicos
observados durante a dissecção animal Não foram observadas alterações microscópicas no
sistema reprodutivo de gerbilas masculinas durante a dissecção. No entanto, as fêmeas do
grupo HT mostraram ausência de abertura vaginal, AGD aumentada e hidrometrocolpos
(dados não apresentados). Características morfológicas das glândulas prostáticas masculinas e
femininas As análises morfológicas utilizando a coloração HE (Figura 2) mostraram um padrão
normal de arquitetura do tecido epitelial e estromal para as glândulas prostáticas de machos
do grupo C (Figuras 2a e b). Por outro lado, os machos dos grupos LT (Figuras 2e e f) e HT
(Figuras 2i e j) apresentaram diferentes alterações prostáticas distribuídas no tecido
prostático. A formação de arcos intraepiteliais (Figura 2f) e PIN (Figura 2j) foram observados,
assim como os focos inflamatórios dentro do compartimento luminal (Figura 2f). Da mesma
forma, os componentes da próstata epitelial e estromal do grupo C fêmea mostraram um
padrão morfológico normal (Figuras 3a e b). No entanto, observaram-se alterações da próstata
nas fêmeas dos grupos LT (Figuras 3e e f) e HT (Figuras 3i e j), especialmente no grupo HT, que
apresentou o padrão mais alterado de tecido prostático devido à exposição à testosterona. As
alterações prostáticas mais comuns observadas foram hiperplasia do compartimento epitelial
(Figura 3f) e PIN (Figura 3j). A técnica de Reticulin de Go¨mo¨ ri permitiu a observação da
disposição normal das fibras reticulares nas próstatas dos machos C (Figura 2c) e uma
rearranjo desses elementos em algumas regiões das próstatas da LT (Figura 2g) e dos machos
HT (Figura 2k). A imunorreação para a actina mostrou um padrão de distribuição para a
camada muscular lisa ao redor da acina prostatica dos diferentes grupos experimentais
(Figuras 2d, h e 1). Enquanto os grupos C (Figura 2d) e LT (Figura 2h) geralmente mostraram
um padrão normal de distribuição da camada muscular lisa, no grupo HT (Figura 2l), foi
possível observar regiões de uma camada de músculo liso interrompida em torno do PIN
Lesões no epitélio de HT próstatas masculinas. No que diz respeito às fêmeas, os grupos C
(Figura 3c) e LT (Figura 3g) mostraram um padrão normal de distribuição de fibras reticulares,
enquanto as fêmeas HT (Figura 3k) apresentaram regiões de rearranjo intenso dessas fibras no
compartimento estromal. A imunorreação para a actina permitiu a observação de um padrão
normal de distribuição de camada de músculo liso em C (Figura 3d) e prostras femininas LT
(Figura 3h) e uma reorganização estromal intensa em áreas que foram feridas com alterações
prostáticas nas próstatas feminas HT (Figura 3l). Dados estéreis de próstatas masculinas e
femininas Embora tanto os grupos macho LT como o HT apresentaram aumento do
compartimento epitelial, observou-se um aumento estatisticamente significante nas próstatas
(Tabela 2) do grupo masculino HT em comparação com o grupo C. O grupo macho LT não
mostrou diferenças estatisticamente significativas em comparação com os grupos masculinos
C e HT. O compartimento luminal sofreu uma redução expressiva em animais do grupo macho
HT quando comparado com o grupo C, de forma diferente do estroma, que aumentou, embora
não significativamente, atingindo o maior valor estereológico neste grupo. Para as mulheres,
as principais alterações ocorreram no grupo HT (Tabela 2), que apresentaram aumento do
epitélio seguido de uma diminuição significativa do compartimento luminal da próstata. Além
disso, as mudanças mais significativas foram o aumento intenso da área estromal no grupo HT
em comparação com o grupo C. Aspectos morfológicos das próstatas masculinas e femininas A
altura do epitélio prostático dos grupos LT masculino e HT (Tabela 2) aumentou
significativamente. No que diz respeito à camada muscular lisa, apenas os machos do grupo LT
tinham um valor médio de espessura da camada de músculo liso que era significativamente
diferente dos outros grupos. Todas as fêmeas dos grupos experimentais expostos à
testosterona (LT e HT) durante a fase embrionária apresentaram aumento significativo da
altura do epitélio da próstata. Os valores mais elevados de espessura da camada muscular lisa
foram observados nas fêmeas dos grupos LT e HT. Reconstrução 3D A reconstrução em 3D
permitiu observar o padrão de distribuição de tecido prostático sobre o trato reprodutivo em
machos e fêmeas dos grupos C e HT (Figura 4). Os machos de dois grupos (C e HT)
apresentaram um padrão característico de distribuição prostática na porção ventral da uretra
(Figuras 4a e b). No entanto, o grupo HT masculino mostrou uma glândula prostática com acini
que geralmente eram mais reduzidas que as encontradas nas próstatas do grupo C. As fêmeas
do grupo C mostraram um padrão característico do tecido prostático em posição parauretral
(Figura 4c). Nas fêmeas do grupo HT, embora a próstata também tenha apresentado uma
localização parauretral típica, foi possível observar uma distribuição atópica de tecido
prostático em torno da parede vaginal (Figura 4d), que é completamente anormal em animais
selvagens. Imuno-histoquímica (AR, ERa, p63 e PCNA) AR O teste de imuno-histoquímica para
o AR mostrou um padrão similar de reação nuclear no tecido prostático masculino de todos os
grupos experimentais analisados: C (Figura 5a), LT (Figura 5e) e HT (Figura 5i). Além das células
epiteliais secretoras, as células do estroma, como os fibroblastos e as células do músculo liso,
foram positivas para AR. A reação AR para todas as fêmeas também apresentou um padrão
similar de imunorreatividade para os grupos C (Figura 6a), LT (Figura 6e) e HT (Figura 6i). Além
disso, havia poucas células estromáticas ou células musculares lisas com reações positivas para
AR (Figura 6e). P63 Um padrão semelhante de imunorreatividade foi encontrado para os
marcadores basocelulares (p63) em ambos os prostatos masculinos de C e LT (Figuras 5b e
f). No entanto, áreas de lesões prostáticas nas próstatas do grupo HT masculino foram
caracterizadas por imunolocalização anormal de p63 (Figura 5j). Em relação às fêmeas, as
células basais foram normalmente dispostas nas próstatas dos grupos C (Figura 6b) e LT (Figura
6f). No entanto, nas próstatas do grupo HT, notamos alguns aspectos anormais bem como um
aumento nas células basais em regiões com focos inflamatórios (Figura 6j). ERa Observamos
uma reação estromal para ERa apenas para os grupos macho LT (Figura 5g) e HT (Figura
5k). Algumas células do estroma da próstata, como fibroblastos e células musculares lisas com
reação positiva para ERa (Figuras 5g e k), foram identificadas em machos. No entanto,
observou-se uma intensa reação epitelial para ERa nas próstatas do grupo macho HT em
regiões hiperplasicas (Figura 5k), que não foi observada para os grupos C (Figura 5c) e LT
(Figura 5g). Por outro lado, houve maior imunorreação para ERa, em termos de células
positivas visualizadas, tanto no estroma quanto no epitélio do tecido prostático em todos os
grupos femininos (Figuras 6c, g e k) em comparação com os grupos masculinos. Além disso, a
identificação de células de estroma e células secretoras epiteliais marcadas para ERa foi mais
freqüente no tecido prostático feminino do que no tecido masculino. Além disso, observou-se
uma intensa reação epitelial e estromal para ERa nas próstatas do grupo feminino HT (Figura
6k) em regiões com lesões, como o PIN (Figura 6k), que são caracteristicamente
freqüentemente encontrados neste grupo ainda não são comumente encontrados Nos grupos
C (Figura 6c) e LT (Figura 6g). PCNA Foi encontrado um padrão semelhante de
imunolocalização para PCNA em ambos os machos nos grupos C (Figura 5d), LT (Figura 5h) e
HT (Figura 5l), e nas fêmeas no C (Figura 6d), LT (Figura 6h) E HT (Figura 6l). No entanto, na
próstata dos machos (Figura 5l) e nas fêmeas (Figura 6l) do grupo HT, um alto número de
células proliferativas foi encontrado em regiões com PIN, que comumente foram encontradas
nos animais desse grupo, especialmente nas fêmeas.
Discussão
O presente estudo mostrou que a exposição intrauterina ao cipionato de testosterona altera a
morfofisiologia da glândula prostática de gerbillas monges masculinas e femininas adultas,
levando a um estado patológico caracterizado por um epitélio mais hiperplásico e pela
presença de lesões como PIN. Além disso, a exposição excessiva à testosterona afetou
severamente as fêmeas do grupo HT, de modo que esses animais desenvolveram AGD
aumentado, ausência de abertura vaginal, formação atópica de tecido prostático ferido ao
redor da parede vaginal e hidrometrocolpos, que é definida como distensão de A vagina e o
útero, com conteúdo mucoso, produzido pelas glândulas uterinas e cervicais, ou pelo acúmulo
de urina na presença de uma obstrução vaginal.26 Nossos resultados sugerem que a
diminuição significativa do peso do complexo prostático em machos do LT e Os grupos HT
podem ter ocorrido em resposta à interferência da testosterona exógena durante a vida intra-
uterina. No entanto, estudos adicionais são necessários para revelar os mecanismos
envolvidos nas mudanças do peso total da próstata. As alterações mais significativas
ocorreram nas fêmeas do grupo HT, que apresentaram várias lesões prostáticas e
características masculinizadas, devido à exposição anormal à testosterona durante a vida intra-
uterina. As mudanças mais evidentes foram o AGD aumentado, a aparência de tecido
prostático em torno da parede vaginal, o desenvolvimento de hidrometrocolpos e lesões
PIN. Um estudo anterior mostrou que a exposição das fêmeas Sprague-Dawley ao propionato
de testosterona durante o desenvolvimento (14-19 dias de gestação) levou à aparência de
hidrometrocolpos.21 Algumas dessas alterações já foram descritas em outros estudos4,10,21,
27 conduzidos com outros roedores, especialmente ratos. No entanto, poucos estudos
avaliaram os impactos tardios da exposição anormal androgênica durante a fase intra-uterina
sobre a fisiologia da próstata. Além disso, não há relatórios disponíveis sobre os efeitos dos
EDC com potencial androgênico no desenvolvimento da próstata feminina (glândula de Skene)
e seus efeitos durante a vida adulta ou senil. Uma reconstrução em 3D mostrou que as fêmeas
expostas a uma alta dose de testosterona durante a vida intrauterina (grupo HT) apresentaram
um padrão anormal de localização do tecido prostático em torno da parede vaginal. Esses
resultados reforçam o papel essencial dos androgênios durante a organogênese da próstata,
influenciando o padrão de formação e a ramificação dos brotos prostáticos, como
demonstrado por outros estudos com roedores.28,29 Por outro lado, embora os machos não
apresentassem tecido atípico da próstata, Como observado em fêmeas HT, o grupo macho HT
apresentou próstatas caracterizadas por um diâmetro reduzido de acini. O aumento grave da
AGD em mulheres do grupo HT foi dependente da dose em relação à testosterona. Estudos
realizados com ratos Sprague-Dawley mostraram que as fêmeas recém-nascidas expostas a
uma dosagem de 1 mg / dia de propionato de testosterona durante os dias de gestação 14-19
tiveram AGD aumentado, enquanto que os machos não sofreram alterações, mesmo quando
expostos a um Maior concentração deste andrógeno.21 Estudos de ratos Wistar fêmeas
também demonstraram que a exposição fetal aos andrógenos promoveu um aumento da
AGD.30 No entanto, esses autores adotaram uma metodologia diferente, na qual os
andrógenos foram administrados diariamente por um período prolongado, Enquanto o estudo
atual mostrou que uma dose única de 1 mg era suficiente para promover um aumento na AGD
em mulheres do grupo HT. Uma resposta dose-dependente poderia ser explicada quando a
placenta é vista como uma barreira. Estudos de ratos Sprague-Dawley mostraram que a
placenta pode bloquear a passagem ou até mesmo metabolizar androgênios em outros
esteróides, modulando a concentração de hormônios do feto.28 Um desses eventos é a
aromatização da testosterona (por p450 ou enzimas aromatase) em 17-b Estradiol, o que faz a
determinação da concentração exata de testosterona que afetaria os fetos difíceis.30 As
alterações estromáticas foram estudadas com a reticulina e a imuno-histoquímica de Go¨mo¨
para a alfa-actina do músculo liso. As principais alterações morfológicas foram registradas na
próstata de machos e fêmeas do grupo HT em contraste com os grupos C e LT. Encontramos
regiões com fibras reticulares danificadas adjacentes ao epitélio. A imuno-histoquímica de alfa-
actina do músculo liso mostrou áreas com uma camada de músculo liso descontinuada, que é
característica de regiões com remodelação estromal intensa devido à proliferação celular e à
infiltração de células inflamatórias no estroma adjacente. Observou-se aumento significativo
da altura epitelial da próstata em machos e fêmeas expostas à testosterona durante a
gestação. Esses aspectos sugerem que as células da próstata foram afetadas pela exposição
anormal à testosterona durante a embriogênese. No entanto, os mecanismos envolvidos nesta
marca andrógena ainda são desconhecidos, fazendo mais estudos necessários para revelar as
vias ativadas durante este processo. Geralmente, as próstatas de machos e fêmeas dos grupos
HT mostraram um aumento na área correspondente ao epitélio, uma diminuição no volume
luminal e um aumento no compartimento estromal. O aspecto mais significativo foi o aumento
da área estromal em mulheres do grupo HT, que apresentaram glândulas prostáticas
compostas principalmente por tecido estromal. Além da estereologia, as análises
morfométricas também apresentaram um compartimento estromal mais desenvolvido,
caracterizado pelo aumento da camada muscular lisa em mulheres dos grupos LT e
HT. Estudos recentes sugeriram que um traço diferencial da HBP é a transição de células
epiteliais para células mesenquimais e, posteriormente, sua diferenciação em miofibroblastos,
resultando em aumento significativo da área estomática glandular.31 Em relação a isso, nossos
dados sugerem que a exposição a A alta dosagem de testosterona durante o período pré-natal
pode levar ao desenvolvimento da HBP nos animais fêmeas, que foram os mais afetados pelos
andrógenos. Em relação à AR, tanto os grupos masculino como feminino apresentaram um
padrão similar de reação nuclear. Embora as próstatas masculinas e femininas tenham
reatividade estromal a AR, a presença de células positivas nas próstatas das fêmeas foi rara,
enquanto os machos apresentaram uma intensa positividade para AR nos compartimentos do
estroma. Um padrão diferenciado de imunolocalização foi encontrado para p63 na próstata de
machos do grupo HT, que foi caracterizada pela perda da camada basal celular em regiões com
PIN. Nas próstatas das fêmeas do grupo HT, observaram-se regiões com aumento de células
basais perto de focos inflamatórios. Essas descobertas estão de acordo com os dados da
literatura. De acordo com Grisanzio e Signoretti, 32 há uma perda progressiva da camada de
células basais em PIN de alta qualidade, causando uma expressão diferencial de p63. O uso de
p63 tem sido uma ferramenta importante no diagnóstico de câncer de próstata, levando em
conta o fato de que esta proteína regula a diferenciação, desenvolvimento, proliferação e
apoptose de células epiteliais da próstata. No entanto, o papel da p63 na tumorigênese não é
bem conhecido, fazendo novas abordagens para entender os mecanismos da regulação p63
necessária.32 Os dados de imuno-histoquímica para ERa mostraram que houve maior
imunorreação, em termos de células positivas visualizadas, para ERa Tanto no estroma quanto
no epitélio do tecido prostático de todos os grupos femininos em comparação com os grupos
masculinos. Além disso, uma maior reatividade ERa foi observada em regiões da próstata
afetadas por PIN, tanto em machos e fêmeas do grupo HT. Nesses casos, observou-se uma
intensa positividade das células epiteliais a ERa, que não era comum na próstata dos grupos C
e LT.Estes resultados estão de acordo e reforçar o papel do EEI na promoção da proliferação e
inflamação, além de ser um indutor de lesões pré-malignas. Estudos recentes em relação as
diferentes funções dos receptores de ERa estrogénica e ERb na próstata. 31 - 35 De acordo
com a literatura, a activação da via de ERa envolve alguns processos, bem como a proliferação
celular aberrante, inflamação e desenvolvimento de lesões pré-malignas, enquanto que a via
ERb está envolvido em funções críticas, sinalização estroma-epitelial e no mediação de efeitos
antiproliferativos dos estrogénios sobre as epithelium.33 prostáticos Além p63 e eRa, PCNA
também é usado para estudar o padrão de proliferação celular em investigações com
intervention.36 terapêutico Um aumento em células proliferativas foi visto,especialmente em
regiões afectadas por PIN, em ambos os machos e fêmeas do grupo HT, confirmando a
presença de lesões proliferativas nestes casos. Por outro lado, em outros grupos
experimentais, ou para machos ou fêmeas, algumas células em proliferação foram marcados
para PCNA na próstata. Acredita-se que as situações anormais durante a organogénese da
próstata, bem como a exposição ao CDE e hormonas exógenas, ovário policístico e
hiperandrogenismo pode causar mudanças epigenética no padrão de desenvolvimento da
próstata, favorecendo o desenvolvimento de lesões pré-malignas neoplásticas durante a vida
adulta. Considerando-se o emprego de testosterona exógena como um modelo de
desregulação endócrina, conclui-se que a ação da EDCs com potencial androgênica é
dosagedependent, como mencionado em outros estudos com andrógenos. 21,Observou-se 28
Este facto ao longo da expericia, com as mudanças mais significativas sendo mais evidente no
grupo HT. Além disso, este trabalho mostrou que as próstatas de fêmeas, principalmente no
grupo HT, foram mais afetados, já que os andrógenos teve um efeito masculinizing durante o
desenvolvimento do sistema reprodutivo desses animais. Em relação a lesões prostáticas, tais
como PIN, embora a incidência destas lesões em glândulas não foi avaliada por um método
quantitativo, a evidência sugere claramente que a exposição a testosterona durante a fase pré-
natal, aumenta a susceptibilidade da próstata desenvolvimento destas lesões, especialmente
nas fêmeas. Esta resposta diferencial à exposição androgênica intra-uterino em mulheres
merece atenção, especialmente no monitoramento da próstata. De acordo com Santos e
Taboga,15 80% dos gerbilos fêmeas têm uma glândula da próstata, uma frequência que é
muito semelhante à encontrada em mulheres.20 Estes aspectos apoiar gerbilos como um
excelente modelo para o estudo da glândula prostática. Além disso, é importante destacar o
fato de que o ambiente hormonal típico nas mulheres simula aproximadamente o que
acontece nos homens durante a senescência, que é um momento em que a relação estrógeno
/ testosterona cai drasticamente. Este período de desequilíbrio hormonal coincide, mais
frequentemente, com o início de lesões prostáticas, tais como hiperplasia prostática benigna e
PCA. A preocupação com a exposição aos desreguladores endócrinos tem crescido desde o
emprego destas substâncias tem aumentado ao longo dos anos devido ao desenvolvimento da
sociedade. Deste modo, os seres humanos são expostas a uma grande variedade destes
agentes químicos, quer com ou estrogenic6-8 androgenic4,27 potencial.O acetato de
trenbolona, por exemplo, é um androgénio sintético que é frequentemente usado para
melhorar o crescimento do gado. Além disso, este composto é amplamente empregado em
papermills, sendo responsável pela poluição de efluentes de rivers.4 Além exposição ao CDE,
existem outros factores de risco que podem afectar o desenvolvimento da próstata, tais como
ovários poliquísticos, 37 hiperandrogenismo e o abuso de esteróides por atletas e as mulheres
que procuram substituição hormonal. Todos estes aspectos são de grande preocupação, tendo
em conta o fato de que o desenvolvimento do sistema reprodutivo é composto por eventos
que são finamente reguladas durante a embriogênese, e pequenas interferências são
suficientes para causar danos permanentes que serão realizadas pelo organismo ao longo do
vida inteira.Estudos recentes têm reforçado a importância do período embrionário como um
momento crítico do desenvolvimento da glândula prostática. De acordo com Schaeffer et ai.,
Em 9 de CaP podem ter origem a partir de programas celulares desregulados que são activados
durante a embriogénese. É bem conhecido que a via AR regula a expressão de mais do que
uma centena de genes na próstata normal e também em linhagens de próstata cancerosa
cells.11 O programa inicial de desenvolvimento da próstata é muito semelhante ao programa
que controla o desenvolvimento da próstata cancro, que está envolvido na regulação de genes
relacionados com a fosfatase ácida e as vias de Wnt, bem como outros processos, tais como
angiogese, apoptose, migrao e proliferation.9 celular Considerando que pouco é conhecido
sobre a origem do APC,estudos envolvendo EDCs com ação androgênica pode contribuir para a
compreensão dos mecanismos que regulam a via AR. Isso pode destacar como este receptor
nuclear, o que é essencial durante a embriogênese prostática, se comporta em ambientes
hormonais alterados eo que isso pode significar para a saúde da próstata durante a vida. Este
estudo demonstra que um produto químico que causa perturbações endócrinas com acção
androgénica pode actuar como uma das substâncias perigosas para a saúde, especialmente
durante períodos críticos da vida ontogênicos, como a fase embrionária. A presença de
malformações graves em animais adultos, tais como, o aumento da hidrometrocolpos AGD e
mesmo o desenvolvimento de lesões pré-malignas da próstata, tais como o PIN, mostram o
potencial que estas substâncias podem ter para a saúde.Todas essas linhas de evidência deve
ser considerada desde a variedade e quantidade dessas substâncias no nosso ambiente tem
vindo a aumentar. Embora o presente estudo mostrou algumas limitações em relação à
metodologia na manipulação de roedores durante a fase pré-natal, que já foram relatados na
literatura científica, 38-40 presente trabalho nos permite desenvolver procedimentos novos e
mais precisos em manipular este modelo para futuros estudos que envolve a morfogénese da
próstata. Portanto, estas experiências demonstram que gerbos são um excelente modelo para
estas abordagens, que abre várias perspectivas para futuras pesquisas enfocando a influência
de um ambiente pré-natal interrompido e sua relação com o desenvolvimento e
envelhecimento da próstata. Contribuições Autor:O trabalho aqui apresentado foi realizado
como uma colaboração. Todos os autores (MFB, APSP, RMG, FCAS, PSLV e SRT) participou na
concepção, interpretação dos estudos, a análise dos dados e revisão do manuscrito. MFB e
APSP realizou os experimentos, e MFB e FCAS escreveu o manuscrito. FCAS, RMG, PSLV e SRT
igualmente contribuído para a supervisão deste trabalho.