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Meios de cultura

Quanto ao estado físico os meios podem ser:

 SÓLIDO – Ágar-ágar (1.5%).


 Utilizado isolamento de colônias bacterianas (plaqueamento);

 SEMI-SÓLIDO – Ágar-ágar (0.5/0.7%)


 Utilizado para observação de motilidade;

 LÍQUIDO – Caldo.
 Utilizado para enriquecimento bacteriano;

A consistência dos meios é dada pela concentração


de “AGAR-AGAR” constituído de polissacarídeo
complexo (gelose)
MEIOS SÓLIDOS

 ÁGAR SANGUE: Crescimento das bactérias


piogênicas e observação dos três tipos de
hemólise: alfa, beta e gama.

 AGAR CHOCOLATE: Observa-se hemólise


alfa e crescimento de Streptococcus e
Haemophylus

 ÁGAR CHOCOLATE THAYER MARTIN:


Crescimento de Neisserias

 ÁGAR CHOCOLATE TELURITO DE


POTASSIO: Crescimento de
Corynebacterium;
Teague

MEIOS SÓLIDOS:

 ÀGAR TEAGUE, McCONKEY, HECTOEN


ENTERIC e SS: São seletivos (crescem
Gram negativas) e indicadores (separam as
bactérias em LACTOSE POSITIVA E McConkey
LACTOSE NEGATIVA)

 ÁGAR TCBS: Crescimento de Vibrio

 ÁGAR DNAse: Classificação dos


Staphylococcus DNAse
MEIOS SÓLIDOS cont.

Ágar-sangue

Ágar-chocolate
Ágar-Chocolate
Thayer Martin
MEIOS LÍQUIDOS
 BHI (Brain Heart Infusion):
Enriquecimento de cultura de bactérias
piogênicas em secreções ou em frascos
para hemocultura

 TIOGLICOLATO: Crescimento de CALDO DE TIOGLICOLATO


bactérias anaeróbias

 TETRATIONATO: Crescimento de
bactérias do trato fecal (enriquecimento
das bactérias lactose negativas)

 ÁGUA PEPTONADA ALCALINA:


Crescimento do bacilo da cólera
MEIOS SEMI-SÓLIDOS

 FLETCHER: utilizado em hemoculturas e


conservação de Leptospiras

 URÉIA: Produção de urease


MEIOS ENRIQUECIDOS
São acrescentadas substâncias para aumentar o
poder nutritivo do meio
Exemplos:
 BHI Ágar-sangue (sólido): 5 a 10% de sangue
desfibrinado de ovelha, coelho ou humano.
 Fletcher (semi-sólido): soro de coelho, hemoglobina.
 Ágar-chocolate (sólido): sangue de ovelha aquecido:
fastidiosos
 Ágar Müller-Hinton:
 Infusão animal, casaminoácidos e amido: crescimento de
muitos organismos.
 Ágar Thayer-Martin
 Fatores de crescimento:hemoglobina, vitaminas,
difosfopiridina e glutamina
MEIO SÓLIDO ENRIQUECIDO

ÁGAR-CHOCOLATE

HEMÓLISE:

• ALFA (PARCIAL)
• BETA (TOTAL)
• GAMA (AUSÊNCIA)

ÁGAR-SANGUE
Padrões de hemólise

Hemólise alfa
Hemólise beta

Hemólise gama
MEIOS SELETIVOS
Têm o objetivo de favorecer ou selecionar um tipo
bacteriano

 Manitol Ágar sal: Tem 7.5% de NaCl (favorece o S. aureus);

 MacConkey: Contém sais biliares e cristal de violeta 1% (inibe


os Gram positivos)

 Teague, EMB: Contém eosina 2% e azul de metileno 0,5%


(Inibe os Gram positivos, selecionando os Gram negativos)

 HE: sais de bile (inibição de Gram positivos e retardamento


do crescimento de Gram negativos da microbiota normal)
MEIOS INDICADORES
Indicam características bioquímicas/fisiológicas dos microrganismos

Ex.: se o microrganismo fermenta a lactose ou não – coloração das


colônias

 Teague: :
 modificação na cor e precipitação dos corantes como resultado da queda do pH.

 MacConkey:
 Produção de ácido pelos fermentadores de lactose: mudança do corante neutro
absorvido pelas colônias para vermelho e precipitação de sais de bile.
 Não fermentadores de lactose: colônias sem coloração ou transparentes

 HE:
 Sais de ferro (tiosulfato de sódio e citrato de amônio férrico): detecção da
produção de gas sulfídrico (H2S): precipitado negro nas colônias.
MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS

MEIO SELETIVO E INDICADOR

TEAGUE TEAGUE COM CRESCIMENTO


MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
McConkey

MEIO SELETIVO E INDICADOR


MEIOS DE CULTURAS SÓLIDOS
MEIO SELETIVO E INDICADOR E H2S

HECTOEN ENTERIC - HE HE -COM CRESCIMENTO


Composição de meios de cultura comumente
utilizados

 Agar citrato de Simmons


 Diferenciação de bacilos
entéricos Gram negativos.
 Citrato=fonte de carbono
 Crescimento = utilização sais de
amônio
 Quebra dos sais de amônio:
alcalinização do meio = indicador
azul de bromotimol : de verde
para azul.
Composição de meios de cultura comumente
utilizados
 TSI (Triple Sugar Iron)
 Fermentadores e não-
fermentadores de glicose,
lactose e sacarose,
produção de gás e de H2S
 Fermentadores:
acidificação = amarelo
 Sais de ferro e tiosulfato:
H2S + tiosulfato: sultato
ferroso: precipitado negro.

TSI
Composição de meios de cultura
comumente utilizados

 Agar Bile-Esculina
 Isolamento e identificação de
Streptococcus do grupo D, incluindo os
Enterococcus.
 Streptococcus do grupo D, incluindo
Enterococcus: hidrólise da esculina.
 Reação com o citrato férrico no meio
para produzir sais de ferro insolúveis.
 Deposição dos sais de ferro:
enegrecimento do meio, indicando a
hidrólise da esculina.
.
Composição de meios de cultura
comumente utilizados

 Agar Mueller-Hinton
 meio transparente
 susceptibilidade de organismos a
antibióticos.
 Amido no meio:proteção dos
organismos contra substâncias
tóxicas e fonte de energia.
Composição de meios de cultura
comumente utilizados
 Agar Lisina Ferro
 Três parâmetros: dascarboxilação da lisina, desaminação da lisina e produção de H 2S.
 Contém lisina (aminoácido), glicose (carboidrato), uma pequena quantidade de
proteína, violeta de bromocresol (indicador de pH) e tiosulfato de sódio/ citrato de
amônio férrico (fonte de enxofre e indicador de H2S).

enegrecimento
na região inferior
indica produção
de H2S a partir
do tiossulfato de
sódio.

Região inferior Região inferior ácida


Região inferior alcalina ácida (amarelo) e (amarelo) e superior
(violeta) e superior superior alcalina
alcalina (violeta) (violeta) indicam que vermelho-bordeaux
indicam que o o organismo indicam que o
organismo descarboxila fermentou a glicose organismo desamina
a lisina mas não pode mas não foi capaz de a lisina mas não é
desaminá-la. desaminar ou
descarboxilar a capaz de realizar a
lisina. descarboxilação.
Composição de meios de cultura
comumente utilizados

 Agar Manitol-Sal
 Alta concentração de sal (7,5%):
 Staphylococcus aureus é capaz de
fermentar manitol, a única fonte de
carbono no meio
 baixa no pH: indicador vermelho de
fenol para amarelo.
 S. aureus: colônias amarelas, rodeadas
por uma área amarelada.
 Outras espécies de Staphylococcus e
Micrococcus :colônias rodeadas por uma
área avermelhada ou rosada
TÉCNICAS DE SEMEIO

 Para o isolamento, cultivo como também a identificação, são


necessárias técnicas adequadas de inoculação em meio de
cultura, que permitam o crescimento rápido e sem contaminação
TECNICAS DE SEMEIO
Cuidados:
 Técnicas assépticas;

 Ambiente estéril – próximo à chama (bico de Bunsen);

 Alças devem ser flambadas antes e depois do uso;

 Tubos, quando abertos, devem ser flambados antes e


depois do uso.
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO
POR ESGOTAMENTO

 Técnica necessária para o


isolamento e obtenção de culturas puras;

 Com a alça de platina fazer estrias na superfície do


meio de cultura, até o esgotamento de todo material
presente na alça

Alça de platina
SEMEIO POR ESGOTAMENTO
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM
ALÇA DE DRIGALSKY

 Quantificação

 Semeio uniforme;

 Uso de suspensão bacteriana;

 Inóculo: 50-100ųl da suspensão;

 Semeio cobrindo toda a superfície do meio


Semeio – Alça Drigalsky
SEMEIO EM MEIO SÓLIDO COM “SWAB”
 Técnica de antibiograma;

 Suspensão bacteriana
padronizada: 0,5 na Escala de
McFarland

 Umedecimento do “swab” na
suspensão;

 Retirada do excesso

 Semeio cobrindo toda a superfície


do meio.
SEMEIO EM MEIO LÍQUIDO

 Tocar com a alça de platina na amostra;

 Inocular o meio líquido;

 Incubar;

 Observar a turvação do meio.


SEMEIO EM PICADA

 Utilizado nas provas bioquímicas


(TSI, citrato, lisina);
 Meios sólidos em tubos inclinados
ou “slants”
 Semeio com a agulha de platina em
profundidade, e no caso do TSI na
superfície do meio
Semeio em picada

TSI