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1.

TEMA: Extracción de DNA


2. OBJETIVOS:
3. MARCO TEÓRICO:

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el


material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los
cromosomas y el material del que los genes están formados. (Marcia, 2010).
En la extracción de ADN, existen diferentes métodos que permiten su obtención
partiendo de diferentes fuentes por ejemplo; plantas plásmidios, gtas de sangre,
cabellos, células bacterianas, o eucariotas, etc. El método de extracción para la
purificación de ADN depende de la aplicación del anterior. (Vindel , 2013)
Existen diversas etapas para la extracción de ADN, y consta de:

 Lisis celular: Las sales caotrópicas ayudan a romper la estructura


tridimensional de macromoléculas como las proteínas o los ácidos nucleicos
consiguiendo su desnaturalización. La adición de un detergente como el SDS
es necesaria a menudo para eliminar las membranas. (Microbial, 2009)
 Purificación, este paso es opcional, para obtener una muestra de ADN de
mejor calidad. Esto depende de la cantidad de material de partida, condiciones
en las que se encuentra el material de inicio (fresco, congelado, fijado), o a su
vez de contaminantes interferentes en el material biológico. (Marcia, 2010)
 Precipitación: El ADN es insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar
en etanol frío o isopropanol y recuperar mediante una centrifugación. El alcohol
del sobrenadante se llevará las sales añadidas previamente. (Microbial, 2009)
 Lavado: con alcohol
 Suspensión de ADN: con un tampón TE (Tris EDTA) o también se puede
realizar en agua. (Marcia, 2010)
Para la extracción de ADN, existen diversos protocolos, en esta ocasión se utilizó el
DNAzol Reagent, este es un protocolo reactivo rápido y permite el aislamiento de ADN
genómico de un gran número de muestras de volúmenes pequeños o grandes. Este
protocolo se basa en el uso de una novedosa solución de lisis guanidina-detergente que
permite la precipitación selectiva de ADN a partir de un lisado celular. (Thermo Fisher
Scientific Inc. , 2016)

4. MATERIALES Y MÉTODOS:
5. RESUTADOS Y OBSERVACIONES:

Tejido de Tomate
Riñon de as hojas

Figura 1. Lisis celular y homogenización de tejido


Fotografía de: (Molina,P & Galarraga,C.,2016)

DNA se observa a manera


de hileras pequeñas

Figura 2. DNA sin el paso de lavado


(Molina,P & Galarraga,C.,2016)

Tampón TE

DNA extraído

Figura 3. Suspensión de DNA


(Molina,P & Galarraga,C.,2016)
6. DISCUSIÓN:
7. CONCLUSIONES:
 La utilización de etanol al 100% permite la precipitación del DNA mientras el
uso de etanol al 95% permite lavar la muestra de DNA, considerando que este
paso en especial ocasiona la perdida de DNA.
 Se debe utilizar los reactivos en una cantidad adecuada para obtener los
resultados deseados, dado que el detergente permite el hidrolisis del RNA, el
cloroformo desnaturaliza proteínas y el tampón TE evita que nucleasas actúen
en el DNA obtenido.
 Una dificultad notable al extraer DNA de plantas es la composición de sus
células, dado que estas poseen pared celular y esto dificulta el acceso a su
contenido de la célula, y para conseguir esto se necesita de la utilización de
nitrógeno líquido logrando la pulverización del tejido vegetal.

8. BIBLIOGRAFÍA:

Marcia, K. (2010, Sep 10). SlideShare. Retrieved from Extracción de ADN:


http://es.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn
Microbial. (2009). La extracción y purificación del ADN para el análisis por PCR.
Newsletter Microbial, 2. Retrieved from La extracción y purificación del ADN
para el análisis por PCR.
Naranjo, R., & Torres , A. (2012). documents.MX. Retrieved from INFORME EXTR DE
ADN: http://documents.mx/documents/informe-extr-de-adn.html
Thermo Fisher Scientific Inc. . (2016). Retrieved from La extracción de ADN usando
DNAzol® Reactivo:
https://www.thermofisher.com/ec/en/home/references/protocols/nucleic-acid-
purification-and-analysis/dna-extraction-protocols/extraction-of-dna-using-
reagent.html
Thermo Fisher Scientific Inc. (2016). Thermo Fisher Scientific. Retrieved from
Extracción de ADN genómico - PureLink ™:
https://www.thermofisher.com/ec/en/home/references/protocols/nucleic-acid-
purification-and-analysis/dna-extraction-protocols/genomic-dnaextractiion-
purelink.html
Vindel , R. G. (2013, Octubre 21). SlideShare. Retrieved from Extraccion de acidos
nucleicos lab. Genetica UNAH:
http://es.slideshare.net/glexirodriguez/extraccion-de-acidos-nucleicos-lab-
genetica-unah-27425914

9. ANEXOS:
CUESTIONARIO:
 ¿Cuál es la función del DNA zol Reagent?
La función del DNAzol Reagent es realizar la lisis de la muestra biológica y a su vez ser
precipitante del ADN genómico a partir de la lisis con etanol. (Thermo Fisher Scientific
Inc. , 2016)
 ¿Con que otros reactivos se puede realizar la extracción de DNA y
describa brevemente un protocolo?
Se puede utilizar Tris-HCL pH8 que alcaliniza el medio dándole mayor estabilidad al
DNA, además, emulcifica las grasas y permite separar el DNA de las proteínas
al degradarlas con fenol. Se aumenta EDTA para quelar los iones de magnesio y NaCl
para estabilizar el ADN evitando así su degradación. Se agrega el detergente CTAB
para eliminar las grasas y destruir las membranas celulares. Se necesita de un buffer
PVP para remover los polifenoles al formar puentes de hidrógenos con ellos y
separándolas con centrifugación. (Thermo Fisher Scientific Inc., 2016)

 ¿Por qué es importante mantener a temperatura ambiente el DNAzol


Reagent?
El reactivo DNA zol se mantiene estable entre 15 y 30 °C, límites que representan la
temperatura ambiente promedio, por lo que si se mantiene a una temperatura que esté
bajo o que exceda estos límites el reactivo se volverá inestable y ya no funcionar
áeficientemente. Esto se debe a que el DNAzol es estable a temperatura ambiente, pero
se activa con un cambio de ella. (Naranjo & Torres , 2012)