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Actividad Enzimática

Practica 9

UNIVERSIDAD DE GUANAJUATO

División De Ciencias Naturales Y Exactas.

Departamento de Química.

Laboratorio De Fisicoquímica en Biología y Farmacia.

QU 30605

RESPONSABLE: Martha Lilia Ramírez Ramírez

EQUIPO 1

INTEGRANTES DE EQUIPO:

 Bautista García Diana Jessica.


 Juárez Pérez Gabriela de Jesús.
 Ugalde Estrella Georgina.
PRACTICA No. 9

ACTIVIDAD ENZIMATICA

OBJETIVOS
1. Observar la actividad de la enzima catalasa.
2. Comparar la actividad de la catalasa de tejidos de organismos vivos, con un catalizador no
proteico.
3. Examinar los factores que afectan la actividad enzimática.

INTRODUCCION
Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que
sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es
energéticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente
favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas
reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se
convierten en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en
las células necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones
mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticas.
Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su velocidad crece
sólo con algunas reacciones, el conjunto (set) de enzimas sintetizadas en una célula determina el
tipo de metabolismo que tendrá cada célula. A su vez, esta síntesis depende de la regulación de la
expresión génica.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG‡)
de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no
alteran el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el
equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una
reacción que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el
equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada.
Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que
catalizan, ni alteran su equilibrio químico. Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores
por ser más específicas. Las enzimas catalizan alrededor de 4.000 reacciones bioquímicas
distintas.4 No todos los catalizadores bioquímicos son proteínas, pues algunas moléculas
de ARN son capaces de catalizar reacciones (como la subunidad 16S de los ribosomas en la que
reside la actividadpeptidil transferasa). También cabe nombrar unas moléculas sintéticas
denominadas enzimas artificiales capaces de catalizar reacciones químicas como las enzimas
clásicas.
La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. Los inhibidores
enzimáticos son moléculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas, mientras que los
activadores son moléculas que incrementan dicha actividad. Asimismo, gran cantidad de enzimas
requieren de cofactores para su actividad. Muchas drogas o fármacos son moléculas inhibidoras.
Igualmente, la actividad es afectada por la temperatura, el pH, la concentración de la propia
enzima y del sustrato, y otros factores físico-químicos.
Algunas enzimas son usadas comercialmente, por ejemplo, en la síntesis de antibióticos y
productos domésticos de limpieza. Además, son ampliamente utilizadas en diversos procesos
industriales, como son la fabricación de alimentos, destinción de jeans o producción
de biocombustibles.

MATERIAL REQUERIDO REACTIVOS


8 tubos de ensaye de 13 x 100 mm Peróxido de hidrógeno al 3 %
1 agitador de vidrio Acido clorhídrico 0.1 M
2 pipetas graduadas de 5 mL Hidróxido de sodio 0.1 M
1 vaso de precipitados de 150 mL Cianuro de potasio 0.1 M
1 gradilla metálica

1 parrilla de calentamiento con agitación

DESARROLLO EXPERIMENTAL
En los siguientes experimentos mide la velocidad de reacción de acuerdo a la siguiente escala: 0 = no hay
reacción; 1 = lenta; 2 = moderada; 3 = rápida; 4 = muy rápida.

PARTE A. Comparación de la actividad de la catalasa y el dióxido de manganeso


1. Coloca en 4 tubos de ensaye 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 %.
2. Agrega a cada tubo las siguientes sustancias:
3. Registra la velocidad de reacción en cada tubo y compara los resultados obtenidos.

Observaciones y resultados.

Tubo Agregar (1) Agregar (2) Velocidad


1 1 ml de H2O2 al 3% Un poco de arena fina 0
2 1 ml de H2O2 al 3% Un poco de MnO2 3
3 1 ml de H2O2 al 3% Una porción de papa cruda 2
4 1 ml de H2O2 al 3% Una porción de hígado 4

PARTE B. Efecto del pH sobre la actividad enzimática

1. Coloca una pequeña cantidad de papa fresca en 3 tubos de ensaye. Usa el agitador y un poco de arena
fina para triturar la papa.
2. Agrega 1 mL de agua destilada al primer tubo, 1 mL de HCl 0.1 M al segundo y 1 mL de NaOH 0.1 M al
tercer tubo. Registra el pH de cada tubo.

3. Adiciona a cada tubo 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 % y registra los resultados al cabo de 5


minutos.
Observaciones y resultados.

Tubo c/papa Agregar (1) pH (1) Agregar (2) pH (2)


1 1 ml H2O d. 5 1 ml de H2O2 al 3% 5
2 1 ml HCl 0.1M 1 1 ml de H2O2 al 3% 1
3 1 ml NaOH 0.1M 12 1 ml de H2O2 al 3% 11

PARTE C. Efecto de la temperatura

1. Coloca una pequeña cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena, Pon el tubo en un baño
de agua hirviendo durante 5 minutos.

2. Añade 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 %. Observa y registra los resultados.

3. Repite lo anterior pero a temperatura ambiente.

4. Coloca en dos tubos de ensaye 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 %. Coloca uno de los tubos en un
baño de agua a 37°C y el otro tubo en un baño de agua helada, durante 5 minutos. Agregar una pequeña
cantidad de papa triturada a cada tubo. Compara las velocidades de reacción.

Observaciones y resultados.

Tubo Agregar Observaciones


C/papa en B.M 5 min. 1 ml de H2O2 al 3% La reacción se observo mas rápida.

C/papa a Temp. ambiente 1 ml de H2O2 al 3% La reacción fue mínima de cero.

Tubo Agregar Observaciones


C/1 ml de H2O2 al 3% en B.M a Papa triturada Se observa reacción con mayor rapidez
37°C 5 min. y más efervescencia.

C/1 ml de H2O2 al 3% en B.H a Papa triturada Si se observa reacción con


≈0°C 5 min. efervescencia.

PARTE D. Efecto de un inhibidor

1. Coloca una pequeña cantidad de papa en un tubo de ensaye y tritura con arena, agrega 3 gotas de KCN
0.1 M. Mezcla bien el contenido del tubo.

2. Añade 1 mL de peróxido de hidrógeno al 3 % al tubo y registra los resultados.

Observaciones:
Cuando se agrego el KCN 0.1M no se observaron cambios; al agregar el ml de H2O2 al 3% no se observo
reacción ni cambio alguno.
Anotación de los resultados del experimento y discusión

1. Elabora una tabla con los resultados obtenidos y 2. Basado en tus anotaciones sobre la velocidad de las
reacciones de los experimentos anteriores, elabora un gráfico de barras.

Tubo Velocidad
1 c/arena 0
2 c/MnO2 3
3 c/papa cruda 2
4 c/hígado 4

4.5
4 Actividad Enzimatica
3.5
3
Velocidad

2.5
2
1.5 Serie 1
1
0.5
0
1 c/arena 2 c/MnO2 3 c/papa cruda 4 c/hígado
Tubo

3. ¿Puede el peróxido de hidrógeno ser descompuesto por otros catalizadores diferentes de los que se
encuentran en los tejidos vivos? Explica.

A pesar de que el peróxido de hidrógeno es relativamente estable a temperatura ambiente,


numerosas sustancias actúan como catalizadores de su descomposición, entre otras: metales de
transición, álcalis, y óxidos metálicos. La luz del día también favorece la descomposición del
peróxido de hidrógeno, por lo que debe conservarse en envases opacos.
4. Describe el efecto del tamaño de partícula, de la temperatura, el pH y del inhibidor sobre la velocidad de
reacción de la enzima.

 Efecto del pH sobre la actividad enzimática


Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH;
imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos
pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra.
Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH
en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica .Este es el llamado pH
óptimo.
La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas décimas
por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente su actividad.
Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a
pH 10. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalización de la proteína, los
seres vivos han desarrollado sistemas más o menos complejos para mantener estable el pH
intracelular: Los amortiguadores fisiológicos.
 Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática
En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas: por cada 10ºC de
incremento, la velocidad de reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen
esta ley general. Sin embargo, al ser proteínas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a
desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama
temperatura óptima.
Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido a la temperatura
es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la
actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.
A mayor temperatura, mayor velocidad de reacción. La temperatura representa uno de los tipos
de energía presente en la reacción. El sentido del flujo de energía entre los miembros de la
reacción, determina si esta es exotérmica o endotérmica.

 Efecto de los inhibidores sobre la actividad enzimática


Ciertas moléculas pueden inhibir la acción catalítica de un enzima: son los inhibidores. Estos
inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el
sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la conformación espacial del enzima,
impidiendo su unión al sustrato (inhibidor no competitivo).
 Efecto del tamaño de partícula: Superficie de contacto:
A mayor superficie de contacto, mayor velocidad de reacción. La superficie de contacto determina
el número de átomos y moléculas disponibles para la reacción. A mayor tamaño de partícula,
menor superficie de contacto para la misma cantidad de materia.

Conclusiones

Se cumplió el objetivo de la practica al comparar la actividad de la enzima catalasa en diferentes


muestras observando su velocidad de reacción, donde logramos ver que en un tejido vivo la
actividad enzimática de la catalasa es muy rápida; Se demostró que el pH influye en la actividad
enzimática de las proteínas así mismo se comprobó que el factor temperatura es de gran
influencia en la actividad enzimática ya que se observo mayor velocidad de actividad a
temperaturas altas que en temperatura ambiente o bajas. En la prueba del efecto de inhibidor se
corroboró que al adicionar una especie química con esta función si se evita que la enzima tenga
actividad pues después de agregar el inhibidor y realizar la prueba ya no se observo reacción como
en los casos que no tenían inhibidor.

Bibliografia:
http://es.wikipedia.org/wiki/Enzima

www.scribd.com/doc/19002681/actividad-enzimatica

genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm