08/09/13 infoagro.com - Cultivo in vitro de gerbera (Gerbera jamesonii H.

Bolus) y su aclimatación

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P o r ta d a In f o r m a c i ó n a l i m e n ta r i a

CULTIVO IN VITRO DE GERBERA (Gerbera jamesonii H. Bolus) Y SU ACLIMATACIÓN

Resum en.
1 . Introducción.
2 . Materiales y Métodos.
2 .1 . Fase de inducción de brotes.
2 .2 . Fase de enraizam iento in vitro.
2 .3 . Fase de aclim atación de las plantas.
3 . Resultados y discusión.
3 .1 . Fase de inducción de brotes.
3 .2 . Fase de enraizam iento in vitro.
3 .3 . Fase de aclim atación de las plántulas.
4 . Conclusiones.
5. Literatura citada.

RESUMEN.

La gerbera se puede propagar por m edio de sem illa, div isión de planta, esqueje o cultiv o in vitro. Este últim o m étodo de propagación ofrece la posibilidad de obtener plantas
hom ogéneas, en m ay or cantidad, libres de patógenos y en cualquier época del año. De ahí, que en esta inv estigación se consideró de interés ev aluar la respuesta
organogénica de Gerbera jamesonii H. Bolus bajo cultiv o in vitro y su aclim atación en inv ernadero. El estudio se div idió en tres fases experim entales, en la prim era se
ev aluaron diferentes concentraciones de benciladenina (BA), cinetina y tidiazuron (TDZ) en la inducción y m ultiplicación de brotes in vitro. En la segunda fase se estudió el
efecto de dos concentraciones de sacarosa en el m edio de cultiv o en el enraizam iento in vitro; en la tercera se analizó el efecto residual de los tratam ientos utilizados en las dos
prim eras fases así com o el em pleo de dos tipos de sustrato durante la aclim atación de las plántulas en el inv ernadero. En la prim era fase la m ay or form ación de brotes se
logró utilizando 8,8 μm olar de BA (5,4 brotes/explante). En la segunda fase, se observ ó que con 4 0 g L-1 de sacarosa se obtuv o el enraizam iento m ás efectiv o. En la tercera
fase el porcentaje global de sobrev iv encia en inv ernadero fue de 82 ,4 8 %, observ ándose efecto de los tratam ientos usados durante la inducción de brotes, pues las plantitas
obtenidas con el uso de cinetina dieron los m ejores resultados de sobrev iv encia (89 ,3 %).

1. INTRODUCCIÓN.

La gerbera (Gerbera jamesonii H. Bolus) se puede propagar por m edio de sem illa, div isión de planta, esqueje o in vitro. La selección del m étodo de propagación depende del
m aterial disponible así com o de la dem anda de plantas. La propagación in v itro perm ite obtener plantas hom ogéneas, en m ay or cantidad y libres de patógenos (Murashige
et al., 1 9 7 4 ; Zárraga y Granada, 1 9 9 0).

Es im portante considerar que el m aterial v egetal utilizado en México para el establecim iento de los cultiv os florícolas en general prov iene del extranjero, lo que repercute en
el increm ento de los costos de producción; es aquí donde la m icropropagación puede ser una alternativ a para la disponibilidad del m aterial v egetal que perm ita un m ejor
aprov echam iento del cultiv o de gerbera.

A los m edios de cultiv o originalm ente em pleados para la propagación in vitro se les han adicionado v arios reguladores del crecim iento en un rango m uy am plio: acido3 -
indolacético (AIA) (0,1 8 m gL1 ), Benciladenina (BA) (0,2 -2 0 m g L-1 ), 6 -(γ, γ-dim etilalilam ino) purina (2 iP) (0,5-5,0 m g L-1 ) y cinetina (2 ,0-2 0 m g L-1 ), obteniéndose un
prom edio de brotes satisfactorio al bajar la concentración de AIA e increm entar la cinetina hasta 1 0 m g L-1 (Pierik et al., 1 9 7 3 ). Sin em bargo, Pierik et al. (1 9 82 )
encontraron que con 5 y 1 0 m g L-1 de cinetina hubo form ación de callo y deform ación en las hojas de las plantas, notando que tanto el 2 iP com o BA tenían un efecto positiv o
en la regeneración de brotes, aunque tam bién en la form ación de callo.

Para el enraizam iento de brotes de gerbera obtenidos in vitro se han utilizado dos procedim ientos: enraizam iento in vivo y enraizam iento in vitro. La v entaja del prim ero
radica en que a la v ez que se está llev ando a cabo el enraizam iento, los brotes se adaptan a las condiciones am bientales en las cuales crecerán y se desarrollaran las plantas;
sin em bargo, con este m étodo existe una probabilidad m uy alta de que el núm ero de plántulas sobrev iv ientes sea bajo, y a que éstas aún no han desarrollado raíces para
realizar sus funciones de absorción y transporte nutrim ental. Con el segundo m étodo se induce el enraizam iento in vitro y posteriorm ente los brotes son establecidos en las
condiciones de adaptación, usando una hum edad relativ a alta durante el período de aclim atación, la cual se v a reduciendo gradualm ente hasta alcanzar el niv el norm al en
inv ernadero o cam po (Pierik, 1 9 9 0).

En el enraizam iento in vitro, en general se ha observ ado que la iniciación de raíz y la posibilidad de enraizam iento pueden aum entar de m anera significativ a al dism inuir
los niv eles de sales m inerales en el m edio nutritiv o e increm entar la concentración de sacarosa del 2 al 5 %, lo cual m ejora el enraizam iento y la aclim atación en
inv ernadero (Pierik et al., 1 9 7 5).

Con base a lo anterior y considerando la im portancia económ ica que rev iste esta especie, es conv eniente establecer protocolos de m icropropagación y estudiar el efecto de
éstos durante la aclim atación en condiciones de inv ernadero. Este estudio contribuiría en la propagación clonal m asiv a de plantas uniform es, v igorosas, libres de patógenos
que puedan estar disponibles en cualquier época del año.

2. MATERIALES Y MÉTODOS.

La presente inv estigación se desarrolló en el Laboratorio de Cultiv o de Tejidos Vegetales de la Especialidad de Fruticultura y en un inv ernadero de las instalaciones del
Colegio de Postgraduados en Montecillo, Edo. de México. Se utilizaron plantas de gerbera prev iam ente establecidas in vitro, prov enientes del v iv ero San Fernando, ubicado
en Coatepec de Harinas, Estado de México.

El m edio de cultiv o utilizado fue el de Murashige y Skoog (MS) m odificado por Zárraga y Granada (1 9 9 0), suplem entado con sacarosa (3 0 g L-1 ) y NaH2 PO4.H2 O para
ev itar la form ación de callo, y 80 m g L-1 de Sulfato de Adenina; el pH se ajustó a 5,7 ± 0,1 usando NaOH y HCl.

2.1. Fase de inducción de brot es.

Bajo condiciones asépticas se disectaron brotes sin hojas v isibles, con un tam año aproxim ado de 2 cm de longitud y fueron establecidos en tubos de ensay o que contenían 1 0
m L del m edio de cultiv o. Este m edio contenía, adem ás de lo señalado, BA o cinetina en tres concentraciones (2 ,2 ; 4 ,4 y 8,8 μm olar) o tidiazuron (TDZ) en cinco
concentraciones (0,4 5; 1 ,1 ; 2 ,2 ; 4 ,4 y 8,8 μm olar).

Se utilizó un diseño experim ental com pletam ente al azar con diez repeticiones por tratam iento y la ev aluación se efectuó a las cinco sem anas, cuantificando las v ariables:
inicio de form ación de brotes; núm ero de brotes por explante y núm ero de hojas por brote.

2.2. Fase de enraizamient o in vitro.

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Se utilizaron brotes de cinco v ariedades de gerbera de 2 cm de longitud con tres hojas com o m ínim o, usando el m edio MS m odificado por Zárraga y Granada (1 9 9 0) al 50 %
adicionando 0,3 m g L-1 de AIA, dos concentraciones de sacarosa (2 y 4 %, p/v ) 6 ,0 g L-1 de agar ajustando el pH a 5,7 ± 0,1 con NaOH y HCl.

Se utilizó un diseño experim ental en bloques com pletos al azar con seis repeticiones por tratam iento donde cada repetición estuv o integrada por un brote. En esta prueba no
se incluy eron aquellos prov enientes de los tratam ientos con concentraciones de 8,8 μm olar debido a que presentaron deform ación en brotes y hojas.

Las v ariables ev aluadas fueron: inicio de form ación de raíz (días), núm ero de raíces y longitud de raíz (cm ).

Una v ez concluida la fase de enraizam iento in vitro se procedió a trasladar las plantitas prov enientes de dicho experim ento en charolas de unicel de 1 2 0 cav idades de 2 cm 2 .

2.3. Fase de aclimat ación de las plant as.

Se ev aluaron dos sustratos: Sunshine Growing- Mix 3 m arca Sun Gro® (m ezcla com ercial) y una m ezcla de laboratorio, así com o el efecto de los cuatro m ejores
tratam ientos de inducción de brotes com binados con 2 0 y 4 0 g L-1 de sacarosa durante el enraizam iento de los brotes. La m ezcla de laboratorio estuv o constituida por
gránulos inertes de origen v olcánico conocidos com o"agrolita", suelo orgánico rico en hum us y polv o de fibra de coco en proporción 1 :2 :1 . El procedim iento consistió en
elim inar los residuos de agar de las raíces y sum ergir las plantitas en una solución de Captán (2 g L-1 ). A los brotes que no presentaron raíz se les aplicó Radix 7 500® para
asegurar el enraizam iento. La tem peratura se m antuv o entre 3 5 y 3 8 ºC durante el día y entre 1 5 y 1 8 ºC durante la noche.

Al final de las cinco sem anas, se ev aluó el núm ero de plantas sobrev iv ientes y se trasplantaron a bolsas de polietileno que contenían los sustratos antes referidos, finalm ente
se colocaron en inv ernadero por un período de dos m eses. Con la finalidad de ev aluar el crecim iento y desarrollo de las plántulas, se ev aluaron cada quince días las
siguientes v ariables: núm ero de hojas por planta, área foliar, peso fresco y peso seco.

Se utilizó un diseño experim ental de bloques com pletos al azar con seis repeticiones. Se aplicó análisis de v arianza a los resultados de cada prueba y separación de m edias
según la prueba de Tukey .

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN.

3.1. Fase de inducción de brot es.

La aparición de brotes ocurrió entre el prim er y tercer día, siendo en los tratam ientos con TDZ donde (prim eram ente se inició) la form ación de brotes (desde 0,8 días),
seguidos por la cinetina (desde 1 ,7 días), m ientras que con BA la form ación de brotes se observ ó un poco m ás tarde (Cuadro 1 ). El núm ero de hojas fue m ay or en los
tratam ientos con BA (9 ,8-1 1 ,2 ) y cinetina (7 ,9 -8,8) y considerablem ente m enor en los tratam ientos que contenían TDZ. Por otro lado, se observ ó que el m ay or núm ero de
brotes se logró utilizando 8,8 μm olar de BA (5,4 brotes/explante) (Cuadro 1 ).

Cuadro 1. Respuest a organogénica en la fase de inducción de brot es de Gerbera jamesonii con varios reguladores de crecimient o.

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A pesar de que los tratam ientos con cinetina m ostraron un efecto interm edio en las tres v ariables ev aluadas, se observ ó que los brotes obtenidos con esta horm ona
presentaron buen aspecto y tam año, caracterizándose por presentar hojas grandes y brillantes con tallos firm es y v igorosos a diferencia de las plantas tratadas con BA y
TDZ, en los cuales el crecim iento y desarrollo fue m enor. Adem ás de la baja respuesta organogénica (1 ,4 - 2 ,7 brotes/explante), los tratam ientos con TDZ indujeron
producción de callo y deform ación de brotes, por lo que los m ism os fueron descartados.

3.2. Fase de enraizamient o in vitro.

La concentración de sacarosa utilizada en el m edio de inducción de raíces afectó el proceso de rizogénesis en brotes de gerbera, m anifestándose principalm ente en la longitud
de las m ism as. Las dos concentraciones de sacarosa estudiadas produjeron diferente respuesta en las tres v ariables de estudio, observ ándose que el increm ento en la
concentración m ejoró ligeram ente el enraizam iento, obteniéndose la m ay or longitud de raíces (0,4 7 cm ) con 4 0 g L-1 (Cuadro 2 ). Esto perm itió m ay ores oportunidades de
sobrev iv encia y aclim atación a las plantas con estas características. Sin em bargo, se encontró que la form ación de raíces en el m edio con 4 0 g L-1 se inició un poco m ás
tarde (5,7 días) que en las plantas tratadas con 2 0 g L-1 de sacarosa (4 ,8 días) (Cuadro 2 ).

Cuadro 2. Respuest a organogénica durant e el enraizamient o in vit ro promedio de Gerbera jamesonii con dos concent raciones de sacarosa.

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Estos resultados guardan relación con lo observ ado por Koroch et al. (1 9 9 7 ), quienes m encionan que al increm entar la concentración de sacarosa en el m edio de cultiv o de 0
a 4 5 g L-1 aum entó el núm ero de raíces en Hedeoma multiflorum. Asim ism o, estos resultados coinciden con lo encontrado por Andrade y López (1 9 9 4 ), quienes señalan que el
increm ento en la concentración de sacarosa causó un aum ento en el núm ero y longitud de raíces en gerbera. Sin em bargo, en tom ate de cáscara (Phy salis ixocarpa Brot.) la
respuesta fue a la inv ersa (Andrade, 1 9 9 8). Al respecto, Edwin (1 9 9 3 ), señala que la concentración de azúcar requerida depende del tipo y edad del m aterial v egetal
utilizado, y a que generalm ente el crecim iento y desarrollo es directam ente proporcional al increm ento en la concentración de azúcar hasta alcanzar un punto óptim o
después del cual hay una dism inución.

Por otro lado, Galiba y Erdei (1 9 86 ) m encionan que la concentración de sacarosa en el m edio de cultiv o es de sum a im portancia, y a que influy e decisiv am ente no sólo en el
crecim iento de las plantas, sino en la form ación de cloroplastos y en la inducción de brotes, observ ándose que los cam bios en la concentración de sacarosa producen
alteraciones en el desarrollo de las plantas, los cuales afectan tanto su m etabolism o com o las condiciones osm óticas del m edio.

3.3. Fase de aclimat ación de las plánt ulas.

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3.3. Fase de aclimat ación de las plánt ulas.

La aclim atación de las plantas de gerbera fue afectada en form a significativ a por el efecto residual de los tratam ientos usados durante la fase de inducción de brotes y
enraizam iento in v itro, observ ando que en general, los tratam ientos con cinetina dieron m ejores resultados de sobrev iv encia (86 ,7 - 9 2 ,5 %) en com paración con los de BA,
especialm ente en las prov enientes de 2 ,2 μm olar (Cuadro 3 ). Esto indica que la calidad de las plantas producidas in v itro repercutió en su capacidad de aclim atación, pues
com o se señaló anteriorm ente, las producidas m ediante el uso de cinetina presentaron m ejores características cualitativ as.

Las plantas que generaron el m ay or núm ero de hojas (5,1 ) fueron las prov enientes del tratam iento con cinetina a 2 ,2 μm olar. Sin em bargo, a m ay or concentración de la
horm ona (4 ,4 μm olar) tam bién se generó m enor núm ero de hojas (entre 3 ,9 y 4 ,5).

Se detectó un efecto v ariable sobre área foliar, peso fresco y peso seco, destacando que las plantas que recibieron cinetina presentaron un área foliar ligeram ente superior y
aquellas con BA 2 ,2 μm olar y 4 0 g L-1 de sacarosa m ostraron un peso fresco m uy alto. Sin em bargo, no hubo concordancia entre este peso y el peso seco por lo que se
atribuy ó a fallas en la determ inación.

En general, se observ ó que la cinetina produjo un efecto notable tanto en el porcentaje de superv iv encia (89 ,4 % en prom edio) com o en las características de las plantas, las
cuales presentaron aspecto y tam año excelentes, caracterizadas por hojas grandes y brillantes, con tallos firm es y v igorosos, a diferencia de las plantas prov enientes de
tratam ientos con BA en las cuales el crecim iento y desarrollo fue m enor.

Los resultados obtenidos concuerdan con lo m encionado por Torrey (1 9 7 6 ), referente a que el efecto residual de cinetina prolongó la superv iv encia de plantas de Xanthium
y m antuv o los niv eles de proteina y clorofila en sus hojas. Esto probablem ente fue debido a que las citocininas estim ulan la síntesis de proteinas, por lo que pueden prom ov er
la m aduración de los cloroplastos y retardar la senescencia de las hojas (Edwin, 1 9 9 3 ).

Cuadro 3. Efect o residual de los t rat amient os en la sobrevivencia, crecimient o y desarrollo de Gerbera jamesonii en invernadero.

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Con respecto al efecto residual de la sacarosa en la etapa de aclim atación se observ ó que conform e se increm entó la concentración de la m ism a, la apariencia de las plantas
fué m ejor. Esto coincide con los resultados obtenidos por Langford y Wainwright (1 9 87 ), quienes afirm an que la sacarosa tiene un efecto fav orable sobre las plántulas
durante el período de aclim atación. De igual m anera, Grout y Millan (1 9 85) y Wainwright y Scrace (1 9 89 ) señalan que el preacondicionam iento con alta concentración de
azúcar increm enta la cantidad de carbohidratos alm acenados en los brotes y aum enta tam bién la energía disponible para plántulas con hojas form adas in v itro que actúan
com o órganos de reserv a de carbohidratos que serv irán para desarrollar hojas m ás eficientem ente fotosintéticas. Adem ás, destacan que aunque este m ecanism o no está bien
definido la concentración de sacarosa y los tipos de carbohidratos durante el preacondicionam iento y enraizam iento in v iv o de v itroplantas tienen una influencia
significativ a en la calidad de las plantas establecidas en inv ernadero.

Con respecto a los sustratos ev aluados, se pudo observ ar que en general m ostraron resultados sim ilares, difiriendo en el núm ero de hojas y en área foliar (Cuadro 4 ),
indicando que la m ezcla com ercial es la que aparentem ente aportó los m ejores resultados.

Cuadro 4. Efect o del sust rat o en la supervivencia, crecimient o y desarrollo de Gerbera jamesonii.

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Por otra parte, el porcentaje de sobrev iv encia durante esta etapa fue bueno y a que en general se obtuv o un 82 %, lo cual indica que la aplicación de esta técnica en la
propagación m asiv a de plantas produjo resultados fav orables al m antener una alta capacidad de éstas para sobrev iv ir al período de transición que ocurre desde las
condiciones de cultiv o in vitro hasta las de inv ernadero.

4. CONCLUSIONES.

La m ay or form ación de brotes se logró utilizando 8,8 μm olar de BA (5,4 brotes/explante). Asim ism o, el TDZ indujo m ás rápidam ente la form ación de brotes. Sin em bargo, el
núm ero y calidad de los m ism os fue baja, y a que en todas las concentraciones em pleadas se observ ó deform ación de brotes y hojas así com o inducción de callo.

En la fase de enraizam iento in vitro la m ejor concentración de sacarosa en el m edio de cultiv o fue 4 0 g L-1 , observ ándose que el increm ento de su concentración m ejoró la
longitud de las raíces. El efecto residual de los tratam ientos con cinetina produjo los m ejores resultados de sobrev iv encia, con un prom edio de 89 ,4 %.

5. LITERATURA CITADA.

1 . Andrade R., M. y M. C. López, P. 1 9 9 4 . Propagación in v itro de gerbera (Gerbera jam esonii). In: Mem orias del 1 1 º Congreso Latinoam ericano de Genética y XV Congreso
de Fitogenética. Monterrey Nuev o León. México. p. 2 6 0.
2 . Andrade R., M. 1 9 9 8. Cultiv o in v itro de tom ate de cáscara. Tesis de Maestría en Ciencias. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas. Montecillo, México. 1 6 3 p.
3 . Edwin, F. G. 1 9 9 3 . Com ponents of culture m edia. In: Plant Propagation by Tissue Culture. Part 1 . F. G. Edwin (ed.). Second Edition. Exegetics Lim ited. N. Y. pp. 3 2 2 -
326.
4 . Galiba, G. y L. Erdei. 1 9 86 . Dependence of wheat callus growth, diferentiation and m ineral content on carbohy drate supply . Plant Sci. 4 5: 6 5-7 0.
5. Grout, B. W. W. y S. Millan. 1 9 85. Photosy nthetic dev elopm ent of m icropropagated strawberry plantlets following transplanting. Ann. Bot. 55:1 2 9 - 1 3 1 .
6 . Koroch, A. R., R. Juliani, Jr. H. Juliani R. y V. Trippi. 1 9 9 7 . Micropropagation and acclim atization of Hedeom a m ultiflorum . Plant Cell Tiss. Org. Cult. 4 8:2 1 3 -2 1 7 .
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8. Murashige, T., M. Serpa y J. Jones. 1 9 7 4 . Clonal m ultiplication of gerbera through tissue culture. HortScience 9 (3 ): 1 7 5-1 80.
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Aut ores:

Victoria Z. Olivera Ortega.

María A. Gutiérrez Espinosa.
Jorge A. Gutiérrez Espinosa.
María Andrede Rodríguez.

Universidad Centro-Occidental Lisandro Alvarado.

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