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Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas
Escuela de Biología
AISLAMIENTO DE GLUCOGENO
Arauz Anyeliz, Brown Yaney, Candanedo Juan, Salazar Lorena

I. Resumen

Con el objetivo de extraer glucógeno de una muestra de hígado se procedió a
extraer el mismo mediante un tratamiento con KOH más calor, con este tratamiento,
las proteínas y lípidos complejos son hidrolizados, pero no el glucógeno.
Posteriormente, cuando se adiciona etanol, el glucógeno se hace insoluble y los
otros compuestos permanecen en solución. El glucógeno insoluble es luego
separado por centrifugación y determinado como glucosa, sin previa hidrólisis. Se
ha demostrado que en tejidos con alto contenido de glucógeno como hígado, este
polisacárido puede ser determinado en presencia de proteínas y sin hidrólisis. Esto
representa una ventaja sobre otros métodos en los cuales hay que precipitar el
glucógeno y someterlo a un proceso de hidrólisis larga.
unidades de glucosa unidas por
enlace α (1-4) y ramificaciones α (1-6)
II. Objetivos El glucógeno actúa como regulador de
 Extraer el glucógeno presente en la glucosa sanguínea, almacenándola
una mezcla de hígado de pollo. como glucógeno durante una buena
alimentación (gluconeogénesis) y
 Caracterizar mediante pruebas liberándola por fosforolisis
químicas el glucógeno extraído (glucogenolisis) durante el ayuno, ya
III. Marco Teórico que en esta situación no hay absorción
intestinal. La duración del glucógeno
Introducción: hepático en ayunas es de
aproximadamente 24h. A partir de ese
El glucógeno consta de cadena de
momento, la concentración en sangre
glucosa unidas por enlaces
se mantiene por síntesis de glucosa a
glicosidicos α (1-4) y ramificaciones,
partir de sustancias distintas de
cada 8 o 10 unidades, de glucosa
carbohidratos (gluconeogénesis). En
mediante enlace glicosidicos α (1-6).
estos mecanismos de control, actúan
El glucógeno es la forma de
la adrenalina y el cortisol. (L. Díaz
almacenamiento de la glucosa en los
2002)
tejidos animales. Se encuentra
principalmente en el hígado y en el El glucógeno se libera de los tejidos
musculo representado hasta un 10% y que lo contienen por calentamiento
un 1-2% de su peso húmedo, con una base fuerte (KOH) hasta la
respectivamente. Está formado por

Fase Experimental anillo de color violeta. Reactivos Toxicidad destrucción total del tejido. (M. (Monosacáridos). Mediante este método. Dolor es hidrolizado por un ácido H2SO4 de Molish abdominal. la prueba da positiva cuando se forma un V. 1 Vasos 2 50ml Adcionamos la mezlca en tubos de centrifuga químicos. Rouse 2005) Ingestión: Dosis grandes provocan envenenamiento alcohólico. Después de la exposición produce un precipitado que contiene puede pasar un tiempo antes de que aparezca la una mezcla de glucógeno. náuseas. posterior con ácido hace que Etanol al Inhalación: Los efectos no son serios precipiten proteínas y ácidos nucleicos 95% siempre que se use de manera razonable. resequedad y agrietamiento. y se dejo mL. anemia hemolítica. Calentamos en un Se corto en trozos IV. Matraz 1 250 mL y Erlenmeyer 500 mL. que han resistido el un fuerte irritante y es corrosivo para la piel. reposar por 10 min. El tratamiento membranas mucosas. Materiales y Reactivos erlemeyer 36ml de KOH pequeños los 50 g de al 50% y adicione higado de pollo inmediatamente los previamente pesados Descripción Cant. Capacidad trozos de higado. La separación del glucógeno del tejido se KOH al Hidróxido de potasio: DL50 365 mg/kg en consigue mediante la adición de 50% rata. alcoholismo. (mayores de 5000 ppm) produce irritación de ojos y tracto obteniéndose una preparación con un respiratorio superior. produciendo dermatitis caracterizada por constituyentes de un polisacárido. El tratamiento Contacto con ojos: Se presenta irritación solo en concentraciones mayores a 5000 que contiene (H2SO4) es un método a 10000 rápido para la determinación de las ppm. Diarrea. vómito. ojos y calentamiento anterior. El glucógeno aislado se prolongada de concentraciones altas vuelve a precipitar con etanol. 100 agitandolo agitamos. para pasar a 5 min de Tubos de 2 10ml centrifugacion y Realizar centrifuga la Prueba de Molish . el glucógeno Reactivo Provoca mareos. hasta sus unidades elementales Al ser ingerido y al contacto con la piel provoca peladuras. que pueden ser luego deshidratadas dando furfural. Pasados 40 min Probetas 1 de 25 mL. 1 Centrifugadora. irritación u otros efectos. Luego se caleno en baño adicionas 30 ml de agua maria por 40 min y 70 ml de alcohol y 50 mL. La gravedad del daño al tejido depende de etanol (Precipita polisacáridos y la concentración del producto. Una inhalación de la muestra. Contacto con la piel: El líquido hexosas y a lo pentosas puede afectar la piel. la elimina monosacáridos solubles) y prolongación del contacto con el tejido y el estado del sulfato de sodio (Precipitante). náuseas. Este material es ácidos nucleicos. Baño María. proteínas. alto grado de pureza. mientras que su ingestión constante. Así se tejido local.

Así. esto se logra colocándolo en baño María hirviente durante 45 minutos. lo que pudo ocasionar que no se formara el precipitado fue que se pesó en vez de 50g fueron 18g que era la cantidad de hígado que se . esto ocasiono que no se en medio alcalinas. La luego de pasar separación del glucógeno del tejido se por 5 minutos consigue mediante la adición de de etanol (precipita polisacáridos y centrifugación elimina los monosacáridos solubles). da de un anillo rojo. El glucógeno se libera de los tejidos que lo contienen por los 10 minutos calentamiento con una base fuerte de reposo. (KOH) hasta la destrucción total del tejido. El de los 40 hígado como ya se mencionó contiene minutos de un mayor porcentaje de glucógeno de centrifugación y reserva. positivo (violeta). se produce un precipitado que contiene una mezcla de glucógeno. Aún no se tiene pudiera hacer la prueba de Molish para glucógeno concentrado. La Para aislar el glucógeno del tejido mezcla luego animal se utilizó hígado de pollo. que han resistido el calentamiento anterior. Discusión Fig 1. VI. Prueba de glucógeno pues toda muestra en Molish da positivo presencia de carbohidratos a la cual por la formación se le agrega el reactivo de Molish. proteínas y ácidos nucleicos. Se procedió a centrifugar por 5 minutos para precipitar el tejido fibroso no Nota: En los resultados presentados no se digerido y dejar en el sobrenadante el observó el precipitado luego de pasar a glucógeno más las proteínas solubles centrifugación. Resultados y Discusiones VII. El hidróxido de potasio al calentarse en agua hirviendo alcaliniza el medio ya que es una base fuerte. El tratamiento posterior se realiza con el reactivo de Molish dando positivo para Fig 3. Como se observa en violáceo que nuestros resultados no se pudo indica la realizar la prueba de Molish por que no presencia de se formó el precipitado luego de ser glucógeno. procede a extraer cuidadosamente el sobrenadante que contiene A continuación una imagen de lo que se polisacáridos. centrifugado. solubles en medio alcalinos. así que se observar la presencia de glucógeno. Tubos componentes que se hidrolizan. El glucógeno es estable en este medio en comparación a los demás Fig 2. monosacáridos debió observar.

IX. El glucógeno puede separarse de los monosacáridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitación con el etanol. Bibliografía • L. Talvez si se hubiera añadido Bioquímica. Nelson D. Identificación de carbohidratos.2005 estipulado para un floculado de 50g de • Lehninger. además se agregó 30 ml de agua • R.2002 . que van a ser los lugares de unión de las enzimas glucógeno fosforilasa y glucógeno sintetiza. que al estar unidos entre si no poseen extremos reductores libres. M. Universidad de colorado. menos agua y alcohol se podía Editorial Omega (2002). Díaz. así como de extracción y la eliminación de las proteínas. este es un proceso de homogenización del tejido y ruptura celular. Polisacáridos. Laboratory experiment and organic chemistry 7º ed Chicago VIII. y 70ml de alcohol que estaba Universidad de Colorado. Johnson and wilcon (1979). las ramificaciones facilitan tanto la velocidad de síntesis como la de degradación del glucógeno. El glucógeno se libera de los tejidos mediante el calentamiento con una base fuerte (KOH) hasta la destrucción total del tejido. 1 vol. La importancia de que el glucógeno sea una molécula tan ramificada es debido a que su ramificación aumenta su solubilidad y a que la ramificación permite la abundancia de residuos de glucosa. Principios de hígado. 3ª ed. • Adams. Rouse. El reactivo de Molish da positivo en presencia de carbohidratos presentando una coloración violeta esto demuestra la presencia de glucógeno. y Cox. obtener un mejor resultado. trajo.000 moléculas de glucosa. Es importante saber que Una sola molécula de glucógeno puede contener más de 120. Conclusión Se realizó el aislamiento del glucógeno a partir del hígado de pollo. es decir.