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RECONOCER LA MORFOLGÍA BACTERIANA:

PREPARACIONES HÚMEDAS
CHAYACAÑA CHOQUEPATA NAZARETH, CUTIPA CHOQUE SONIA, DORIS
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEÚTICAS
UNIVERSIDAD CATÓLICA SE SANTA MARIA - AREQUIPA

RESUMEN

Objetivo: Reconocer la morfología bacteriana: preparaciones húmedas. Materiales y métodos: Lavar y desengrasar los portaobjetos
y cubreobjetos. Para ello emplear jabón líquido y agua; enjuagar varias veces con alcohol al 95%, ponerlos a secar al aire a
temperatura ambiente y flamearlos de 2 a 3 veces. Para las preparaciones húmedas, con la ayuda del asa de nicrom, colocar en
un portaobjetos una gota de la muestra en el centro del portaobjetos, cubrir la gota con un cubreobjetos. Seguidamente observar
al microscopio con los objetivos de 10x y 40x con baja intensidad de luz para conseguir el contraste con las células. Y finalmente
esquematizar la morfología y movimiento de los microorganismos observados. Resultados: Se observó varias estructuras bacterianas
en las diferentes muestras de cultivo y muestras frescas; así como agua estancada, agua de florero y cultivos de microorganismos.
Conclusiones: Se concluye que las diferentes muestras que se analizaron se encontraron varias estructuras bacterianas así como:
bacillus, mohos, hifa, cocos.

Palabras claves: morfología, microorganismos, células, cultivo, microscopio.

ABSTRACT

Objective: Recognize bacterial morphology: wet preparations. Materials and methods: Wash and degrease slides and coverslips.
For this use liquid soap and water; Rinse several times with 95% alcohol, put them to air dry at room temperature and flame them
2 to 3 times. For wet preparations, with the help of the nichrome loop, place a drop of the sample in the center of the slide on a
slide, cover the drop with a coverslip. Then observe the microscope with the 10x and 40x objectives with low light intensity to
achieve the contrast with the cells. And finally outline the morphology and movement of the microorganisms observed. Results:
Several bacterial structures were observed in the different culture samples and fresh samples; as well as stagnant water, vase
water and microorganism cultures. Conclusions: It is concluded that the different samples that were analyzed were several bacterial
structures as well as: bacillus, molds, hyphae, cocci.

Key words: morphology, microorganisms, cells, culture, microscope.

INTRODUCCIÓN supravitales se recomienda aplicar una pequeña


cantidad del colorante al portaobjetos y dejar
El tamaño de los microorganismos impide secar y posteriormente colocar la muestra. Para
detectarlos a simple vista, por lo que es esencial que la aplicación del colorante sea uniforme, se
el uso del microscopio. Para que un objeto pueda recomienda extenderlo con la ayuda de otro
ser percibido a través del microscopio, este debe portaobjetos.
poseer cierto grado de contraste con el medio
circundante. Para aumentar el contraste de los ESTRUCTURA BACTERIANA
microorganismos y lograr una mejor observación
de los mismos, se emplean diferentes
preparaciones y técnicas de tinción.

Las preparaciones pueden ser húmedas o frotes


fijos, las primeras se utilizan para observar
movilidad y en ambos casos la adición de
colorantes, al aumentar el contraste, permite una
mejor observación.

Los colorantes vitales permiten observar


movilidad, así como algunos de sus organelos o
inclusiones teñidas, sin daño aparente; estos se
preparan en soluciones acuosas o alcohólicas muy
diluidas. En tanto que los colorantes supravitales,
aun cuando tienen la ventaja de hacer más
evidentes algunos organelos, presentan el
inconveniente de afectar la viabilidad de los
organismos. Estos colorantes varían en su
composición y consisten en mezclas de reactivos
que incluyen el colorante, ácidos, aldehídos,
alcoholes y agua. Los primeros se aplican
directamente en la muestra, en tanto que para los
 Las bacterias pertenecen al reino que la preparación no se seca y puede ser
Procaryotae. observada durante un tiempo más largo
 Son elementos unicelulares sin un núcleo
verdadero. 2. Preparaciones fijas y teñidas:
 Su tamaño aproximado es de 1-3 micras.
La preparación consiste en una capa de la
muestra extendida sobre un portaobjetos libre de
grasa. Esta preparación debe ser lo
suficientemente delgada para permitir el paso de
la luz a través de ella. El “extendido” o “frote” se
puede hacer de varias maneras.
 Suspendiendo el desarrollo microbiano
en una pequeña gota de agua mediant
e el asa y distribuyéndolo en el
portaobjetos.
 Por “impronta”, presionando el porta
sobre la muestra.
 Con cinta adhesiva transparente
 Con hisopo
 Colocando una gota de la muestra fluida
en el porta.

MATERIALES Y MÉTODOS

ELEMENTOS BACTERIANOS Materiales


 Microscopio
A los elementos bacterianos los podemos dividir  Laminad portaobjetos
en:
 Cubreobjetos
Elementos obligados:
 Solución fisiológica
 Pared bacteriana.
 Membrana citoplasmatica. Procedimiento
 Citoplasma.
 Ribosomas. 1. AGUA ESTANCADA
 Nucloide (Nucleoide) o cromosoma
bacteriano. Colocar el agua estancada en un tubo de ensayo
Elementos facultativos: y centrifugar a 3000rpm por 5 min.
 Capsula. Eliminar el sobrenadante, colocar el sedimento en
 Flagelos. un portaobjeto y colocar un cubreobjeto y
observar en el microscopio
 Fimbrias o pili.
 Esporo.
 Glicocalix.
 Plasmidos.
 Transposones.

TIPOS DE PREPARACIONES

1. Preparaciones en fresco:

Existen dos técnicas, una preparación en fresco


simple que consiste en colocar una gota de líquido
con los microorganismos sobre un portaobjetos y
a continuación cubrirla con un cubreobjetos.
Una preparación en gota pendiente; esta
preparación se realiza colocando una gota de la
suspensión bacteriana en un cubreobjetos en el 2. AGUA DE FLORERO
cual se ha hecho previamente un círculo
con vaselina (actúa como sellador) o parafina; Colocar la muestra de agua de florero en un tubo
sobre el cubreobjetos se coloca un portaobjetos de ensayo y centrifugar por 5 min a 3000 rpm.
con una excavación central que queda adherido Eliminar el sobrenadante, colocar el sedimento en
gracias a la vaselina. Se invierte la preparación un portaobjetos y colocar un cubreobjeto
y se observa colocándola en la platina del
microscopio. La ventaja de esta última técnica, es
 Colocar una gota de AZUL DE LACTOFENOL
en una lámina portaobjeto.
 Flamear el asa de colle y esperar a que se
enfrié y recolectar el micelio del Rhyzopus y
colocarlo en una lámina portaobjeto y
distribuirlos n el AZUL DE LACTOFENOL
 Colocar en un portaobjeto
 Observar al microscopio con el objetivo de
10X y 40X.

3. CULTIVO DE MICROORGANISMO
RHYZOPUS CON KOH

DIBUJE
EL MOHO Y SEÑALE SUS PARTES

4. CULTIVO DE MICROORGANISMOS
DEMATIACEO CON KOH.

 Colocar una gota de hidróxido de potasio en


una lámina portaobjeto.
 Flamear el asa de colle y esperar a que se
enfrié y recolectar el micelio del Rhyzopus y
colocarlo en una lámina portaobjeto y
distribución en el KOH.
 Colocar en un portaobjeto

6. CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Bacillus o E.coli
 Si la muestra proviene de un cultivo líquido,
con un asa de kolle se coloca una gota del
líquido sobre un portaobjetos, sobre el que
5. CULTIVO DE MICROORGANISMOS se coloca un cubreobjeto.
DEMATIACEO CON AZUL DE  Si la muestra proviene de un cultivo solido
LACTOFENOL se deposita primero una gota de solución
fisiológica sobre el portaobjeto , para
posteriormente con la ayuda del asa de RESULTADOS
kolle (previamente flameada y enfriada )  Los microorganismos no se visualiza a
realizar una suspensión , y colocar un simple vista, es muy difícil su observación,
cubreobjeto. la evidencia es que los microorganismos
 Observar al microscopio con el objetivo de vivos presentan movimientos.
10X y 40X  Los hongos filamentosos son muy visibles a
40X
 La E. coli son bacilos muy pequeños tienen
5 micras de tamaño, solo se pudo
determinar su presencia por sus
movimientos
 Los bacilos son bacterias más grandes en
comparación con la E.coli, son blancos y
las paredes son más gruesas.
 En el caso de la cándida albicans se pudo
observar sus hifas
 En el agua estancada no se observó algas,
paracitos a pesar d haber utilizado
centrifugación lo que es raro ya que en
las aguas estancadas siempre hay
presencia de algas y paracitos en grandes
cantidades.
 Pudimos observar células viejas como el
aspergillus , estas son esporas que están en
plena reproducción

CONCLUSIONES
7. CULTIVO DE MICROORGANISMOS
CANDIDA  Se logró observar los microorganismos
 Si la muestra proviene de un cultivo líquido, vivos y en suspensión tanto como en
con un asa de kolle se coloca una gota del preparaciones húmedas y coloraciones
líquido sobre un portaobjetos, sobre el que supra vitales
se coloca un cubreobjeto.  Se logró observar protozoarios, mohos,
 Si la muestra proviene de un cultivo solido algas, bacterias y así podernos darnos
se deposita primero una gota de solución cuenta que existen diferentes estructuras
fisiológica sobre el portaobjeto , para y composición ha permitido comprender
posteriormente con la ayuda del asa de como muchas bacterias se relacionan con
kolle (previamente flameada y enfriada ) el hombre, ya sea como integrantes de
realizar una suspensión , y colocar un la flora normal o como agresoras para
cubreobjeto. el mismo.
 Observar al microscopio con el objetivo de  Se logró observar su morfología y pared
10X y 40X. celular d ciertas muestras así como
células que están en proceso de
reproducción.
 Con esta práctica se aprendió a realizar
adecuadamente los tipos preparaciones
que se utilizan en microbiología, además
de la correcta preparación de un frotis
para poder realizar posteriormente las
tinciones más utilizadas para el
laboratorio de microbiología que son
indispensables para el correcto estudio
de los microorganismos; así mismo
mediante la realización de estas
tinciones y preparaciones se logró
observar la forma, agrupación y
cápsula, además de características de
locomoción de algas y protozoarios, así
como de algunos tipos de levaduras, que
aunque no son bacterias algunas de esta
preparaciones y tinciones nos ayudan
también a observar algunas de sus
características.
BIBLIOGRAFIA
1. Madigan M.T, Martinko J.M., Stahl D and Clark
D.P., Brock Biology of microorganisms, 13th
edition, UK, Pearson Benjamin Cummings, 2010.
2. Madigan M.T, Martinko J.M., Dunlap P.V. and
Clark D.P., Brock Biología de los microorganismos,
12a edición, UK, Pearson Education, 2009.
3. Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A.,
Microbiología, 3a edición, Madrid, México, Mc
GrawHill-Interamericana, 2009.