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UNIVERSIDAD AUTONÓMA AGRARIA ANTONIO NARRO

DIVISIÓN DE AGRONOMIÁ
Departamento de Fitomejoramiento – laboratorio de Genética
Materia: Genética

Práctica no. 1

Nombre de la práctica:
“Determinación de color de cuerpo y herencia con un par de alelos en Drosophila
melanogaster (mosquita de la fruta)”

Buenavista, Saltillo, Coahuila a 18 de abril de 2018

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INTRODUCCIÓN

La historia de la genética se considera que comienza con el trabajo del monje


agustino Gregor Mendel. Su investigación sobre hibridación en guisantes,
publicada en 1866, describe lo que más tarde se conocería como las leyes de
Mendel.

El año 1900 marcó el “redescubrimiento de Mendel” por parte de Hugo de Vries,


Carl Correns y Erich von Tschermak, y para 1915 los principios básicos de la
genética mendeliana habían sido aplicados a una amplia variedad de
organismos, donde destaca notablemente el caso de la mosca de la fruta
(Drosophila melanogaster). Bajo el liderazgo de Thomas Hunt Morgan y sus
compañeros “drosofilistas”, los especialistas en genética desarrollaron la teoría
mendeliana-cromosómica de la herencia, la cual fue ampliamente aceptada
para 1925. Paralelamente al trabajo experimental, los matemáticos
desarrollaron el marco estadístico de la genética de poblaciones, y llevaron la
interpretación genética al estudio de la evolución.

Con los patrones básicos de la herencia genética establecidos, muchos


biólogos se volvieron hacia investigaciones sobre la naturaleza física de los
genes. En los años cuarenta y a principios de los cincuenta, los experimentos
señalaron al ADN como la parte de los cromosomas (y quizás otras
nucleoproteínas) que contenía genes.

El enfoque sobre nuevos organismos modelo tales como virus y bacterias, junto
con el descubrimiento en 1953 de la estructura en doble hélice del ADN,
marcaron la transición a la era de la genética molecular. En los años siguientes,
algunos químicos desarrollaron técnicas para secuenciar tanto a ácidos
nucleicos como a proteínas, mientras otros solventaban la relación entre estos
dos tipos de biomoléculas: el código genético. La regulación de la expresión
génica se volvió un tema central en los años sesenta, y para los años setenta
dicha expresión génica podía ser controlada y manipulada utilizando ingeniería
genética. Durante las últimas décadas del siglo XX muchos se enfocaron a
proyectos genéticos a gran escala, secuenciando genomas enteros.

OBJETIVOS

1. Confirmar principio de dominancia


2. Confirmar la ley de la segregacion

2
HIPOTESIS

1. Que las moscas cuerpo ambar (Silvestre) domine sobre las moscas cuerpo
negro (Ebony)

2. Al cruzar los organismos resultantes de la primera generación filial, se


observará que el carácter oculto reaparece o vuelve a manifestarse,
presentándose una característica en una proporción de ¾ color ámbar y ¼
color oscuro. (75% a 25%)

REVISIÓN DE LITERATURA
Drosophila melanogaster
Drosophila melanogaster (en latín significa literalmente amante del rocío de vientre
negro), también llamada mosca del vinagre o mosca de la fruta, es una especie de
díptero braquícero de la familia Drosophilidae. Recibe su nombre debido a que se
alimenta de frutas en proceso de fermentación tales como manzanas, bananas,
uvas, etc. Es una especie utilizada frecuentemente en experimentación genética,
dado que posee un reducido número de cromosomas (4 pares), breve ciclo de vida
(15-21 días) y aproximadamente el 61 % de los genes de enfermedades humanas
que se conocen tienen una contrapartida identificable en el genoma de las moscas
de la fruta, y el 50 % de las secuencias proteínicas de la mosca tiene análogos en
los mamíferos.
 https://es.wikipedia.org/wiki/Drosophila_melanogaster
Genética Mendeliana: Experimentos de Mendel
Mendel escogió el chícharo de comer o guisante como organismo experimental
porque es una planta anual con caracteres bien definidos que se pueden cultivar y
cruzar fácilmente. Además, los chícharos tienen flores perfectas, es decir, flores que
contienen partes femeninas y partes masculinas, que se autofecundan, esto quiere
decir que el óvulo (gameto femenino) es fertilizado por el polen (gameto masculino)
proveniente de la misma planta (por lo general de la misma flor). Mendel fue
afortunado al elegir una planta diploide, ya que los organismos diploides contienen
dos juegos de cromosomas. Si hubiera elegido un organismo poliploide, con más
de dos juegos de cromosomas, no hubiera obtenido resultados sencillos y
comprensibles. A través de muchas generaciones de autofecundación, los
chícharos habían dado origen a líneas puras.

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Por lo tanto, una sola alteración en un carácter se reflejaba en una diferencia visible
entre variedades. Además, en los siete pares de caracteres contrastantes que
Mendel eligió para estudiar, las dos formas parentales presentan caracteres
morfológicos o efectos visibles bien definidos y contrastantes en las plantas. Los
tallos son altos o enanos; las vainas son verdes o amarillas; las flores son axiales
(distribuidas a lo largo del tallo) o terminales (agrupadas en la punta); los cotiledones
de las semillas maduras son amarillos o verdes; la superficie externa de la semilla
es lisa o arrugada; y la testa (cubierta) de la semilla es blanca o gris. El color de la
flor se correlaciona con este último en carácter. Las semillas con cubiertas blancas
producen plantas cuyas flores son blancas, y las que tienen cubiertas grises
producen plantas con flores color violeta. (Gardner, 1980).

Thomas Morgan
El descubrimiento de estudios enfatizados en Drosophila se la debe al padre de la
genética experimental moderna, el biólogo estadounidense Thomas Hunt Morgan
(1866-1945). Desde 1910 Morgan y sus jóvenes colaboradores centraron toda
actividad investigadora en el estudio genético de Drosophila Melanogaster, logrando
conseguir aislar un número considerable de mutantes morfológico para el color del
cuerpo, color de ojos, tamaño y forma de las quetas, aspectos de las alas y entre
muchas más formas de mutaciones (Eduard Petitpierre 1997).

En 1915 Morgan encontró 85 mutantes diferentes con una gran variedad de


estructuras afectadas. Conforme se aislaron las mutantes de Drosophila
melanogaster, fueron criadas, cruzadas y mantenidas como reserva en el
laboratorio. Tal como se esperaba, las 85 mutaciones no se permutaron de manera
independiente; en vez de eso, Morgan encontró que pertenecían a 4 diferentes
grupos ligados, uno con muy pocos genes mutantes. Este dato se relaciona
perfectamente con la observación de que las células de Drosophila poseen 4 pares
de cromosomas homólogos. (Karp, 1998).

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Drosophila Melanogaster silvestre: presenta ojos rojos, de forma oval, alas de
borde liso, venación uniforme que se extienden hasta más allá del abdomen y
setas largas y suaves, el color del cuerpo marron, con un patrón de áreas claras
y oscuras.
Genéticamente hablando, la gente y las moscas de la fruta son
sorprendentemente parecidas, explica la bióloga Sharmila Bhattacharya del
Centro de Investigación Ames de la NASA. "Aproximadamente el 61% de los
genes de enfermedades humanas que se conocen tienen una contrapartida
identificable en el código genético de las moscas de la fruta, y el 50% de las
secuencias proteínicas de la mosca tiene análogos en los mamíferos".
Esta es la razón por la cual las moscas de la fruta, conocidas para los científicos
como Drosophila melanogaster, son comunes en los laboratorios de
investigación genética. Para propósitos de investigación, fácilmente pueden
reemplazar a los humanos. Se reproducen rápidamente, de modo que muchas
generaciones pueden ser estudiadas en un corto tiempo, y ya se conoce el mapa
completo de su genoma. "La Drosophila es utilizada como modelo genético para
varias enfermedades humanas, incluyendo las de Parkinson y de Huntington",
hace notar Bhattacharya.
 https://ciencia.nasa.gov/science-at-nasa/2004/03feb_fruitfly

Teniendo en cuenta lo anterior las características y la importancia en estudios


genéticos con Drosophila Melanogaster, este informe pretende evaluar una de
las variables mutaciones que se pueden presentar en estas moscas, la mutación
ebony en Drosophila melangaster realizando cruces y retro-cruces entre
individuos silvestres con individuos ebony, con el fin de analizar el proceso
biológico y los patrones de herencias al transcurrir etapas F1 y F2.

Para evaluar la mutación se tendrá en cuenta el método experimental de conteo


según características presentes en las moscas y confirmando los resultados con
la prueba de chi-cuadrado.

Para lo propuesto se debe tener en cuenta las características de cada mosca


que vamos a cruzar y el ciclo de vida que Drosophila melanogaster presenta.

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MATERIALES Y METODOS
El experimento fue llevado a cabo dentro del laboratorio de Genética, que
corresponde al departamento de Fitomejoramiento, ubicado dentro de la
Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro, Buenavista, Saltillo, Coahuila. CP.
25315.
Los materiales que utilizamos para realizar las cruzas, se enlistan a continuación:
 Microscopio (sin marca)
 Cepas de Drosophila melanogaster
 Éter
 Aceite
 Aguja de disección
 Frasco anestesiador
 Estufa
 Embudo
 Frasco con alimento
 Platina de acrílico
 Pincel

Medios de cultivo
En el laboratorio los medios de cultivo utilizados requieren una preparación especial,
a fin de evitar serios problemas tales como contaminación por hongos o bacterias,
licuefacción del medio etc.
Las principales características que debe reunir un medio de cultivo son las
siguientes:
a) Contener la cantidad necesaria de azúcar para permitir el
crecimiento de las levaduras, principal alimento de las larvas, ya
que constituyen una fuente de proteínas y vitaminas.
b) Tener una consistencia apropiada, para que no se desprenda al
sacudir el frasco, lo cual se logra al añadir agar bacteriológico o
carragenina en combinación con harina de maíz; esta última se
utiliza como fuente de carbohidratos.
c) Inhibir el crecimiento de hongos y bacterias que contaminan los
cultivos y retardan o impiden el desarrollo de las moscas.

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El medio que más se utiliza en este laboratorio es el siguiente:
Componentes:
 Agar bacteriológico 10 g
 Azúcar común 50 g
 Harina de maíz 50 g
 Levadura de cerveza (comercial) 15g
 Ácido propiónico 4 ml (como inhibidor de hogos y bacterias)
 Agua 1250 ml

PROCEDIMIENTO
Cruza Monohíbrida
Cepas de Drosophila melanogaster utilizadas:
 Normal o silvestre (E): Cuerpo color ámbar
 Ebony (e): Cuerpo color negro
Fecha de apareamiento: 31 de enero de 2018

Cruza Directa
1. Para realizar las cruzas es necesario tener, machos y hembras
(vírgenes) de la misma edad de cada cepa por emplear.
2. Se utilizó dos frascos, uno con 10 hembras silvestres (ámbar) y otro
con 10 machos Ebony (oscuros).
3. En cada uno se golpeó suavemente el frasco con el fin de que las
moscas bajaran y se entorpecieran, a continuación, con la ayuda
de un embudo se colocaron hembras y machos en un mismo frasco
con medio de cultivo fresco.
4. Se etiquetó el frasco con: fenotipos de la cruza, generación, fecha,
sección y equipo.

P1) ♀ Silvestre x ♂Ebony


EE ee
(ámbar) (oscura)

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Cruza Recíproca
1. Para realizar las cruzas es necesario tener, machos y hembras
vírgenes, de la misma edad de cada cepa por emplear.
2. Utilizamos dos frascos, uno con 10 hembras Ebony (oscuras) y otro
con 10 machos silvestres (ámbar).
3. En cada uno se golpeó suavemente el frasco con el fin de que las
moscas bajaran y se entorpecieran a continuación con la ayuda de
un embudo se colocaron hembras y machos en un mismo frasco
con medio de cultivo fresco.
4. Se etiquetó el frasco con: fenotipos de la cruza, generación, fecha,
sección y equipo.
5. Se almacenó el frasco en una cámara de temperatura constante de
25ºC.

P1) ♀ Ebony x ♂Silvestre


ee EE
(oscura) (ámbar)

Fecha de liberación de P1: 07 de febrero de 2018

Liberación de progenitores
1. Al transcurrir una semana después de las cruzas se liberaron los
progenitores de la cruza monohíbrida (directa y recíproca).
2. Inicialmente en un frasco se agregó éter a la gasa con un gotero y
se tapó para conservar los vapores.
3. Se golpeó suavemente el frasco, con el fin de que las moscas
bajaran y entorpecieran.
4. Se vaciaron a un frasco limpio con ayuda del embudo y se le colocó
nuevamente la gasa con éter.
5. Se dejó transcurrir un tiempo de aproximadamente 20 segundos,
hasta que las moscas quedaron dormidas.
6. Finalmente se colocaron en aceite.
7. Los frascos con medio de cultivo ya tenían huevos y pupas de
mosca y se devolvieron a la cámara de temperatura constante.

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Fecha de evaluación de F1: 14 de febrero de 2018
1. Obtuvimos nuestra generación F1.
2. Cuando emergieron todas las moscas en los cultivos procedimos a
evaluar resultados.
3. En un frasco limpio se agregó éter a la gasa con un gotero y se tapó
para conservar los vapores.
4. Se vaciaron las moscas del medio de cultivo de la cruza recíproca
al frasco con la ayuda de un embudo, las moscas se quedan
dormidas en un lapso de aproximadamente 15 a 20 segundos
(se debe cuidar que no se expongan por más tiempo, de lo contrario
morirán).
5. A continuación, se colocaron las moscas ya dormidas sobre una
platina de acrílico.
6. Se colocó la platina de acrílico en el microscopio estereoscopio y
procedimos a su evaluación, nos apoyamos con un pincel y una
aguja de disección para obtener un mejor manejo de las moscas.
7. Se evaluó que hubiese uniformidad, contamos y anotamos el
número de hembras y de machos y el fenotipo que presentaron.
8. Se hizo el mismo procedimiento tanto en la cruza directa como en
la recíproca.

Fecha de cruzamiento: 14 de febrero de 2018


P2) F1 X F1
1. Se colocaron 5 hembras y 5 machos procedentes de la cruza
monohíbrida directa (resultado del paso anterior Filial 1) en un
frasco con medio de cultivo fresco.
2. Se colocaron 5 hembras y 5 machos procedentes de la cruza
monohíbrida recíproca (resultado del paso anterior Filial 1) en un
frasco con medio de cultivo fresco.
3. Llevamos ambos frascos a la cámara de temperatura constante.

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Fecha de liberación P2: 21 de febrero de 2018
1. Al transcurrir una semana después de las cruzas se liberaron los
progenitores 2 de la cruza monohíbrida (directa y recíproca).
2. Inicialmente en un frasco se agregó éter a la gasa con un gotero y
se tapó para conservar los vapores.
3. Se golpeó suavemente el frasco, con el fin de que las moscas
bajaran y entorpecieran.
4. Se vaciaron al frasco con ayuda del embudo y se le colocó
nuevamente la gasa con éter.
5. Se dejó transcurrir un tiempo de aproximadamente 20 segundos,
hasta que las moscas quedaron dormidas.
6. Finalmente se colocaron en aceite.
7. Los frascos con medio de cultivo ya tenían huevos y pupas de
mosca y se devolvieron a la cámara con temperatura de 25º c.

Fecha de evaluación F2: 28 de febrero de 2018


1. Cuando emergieron todas las moscas en los cultivos procedimos a
evaluar resultados.
2. En un frasco se agregó éter a la gasa con un gotero y se tapó para
conservar los vapores.
3. Se vaciaron las moscas del medio de cultivo de la cruza recíproca
al frasco con la ayuda de un embudo, las moscas se quedan
dormidas en un lapso de aproximadamente 15 a 20 segundos.
4. A continuación, se colocaron las moscas ya dormidas sobre una
platina de acrílico
5. Se colocaron la platina de acrílico en el microscopio estereoscopio
y procedimos a su evaluación, nos apoyamos con un pincel y una
aguja de disección para obtener un mejor manejo de las moscas.
6. Evaluamos resultados, contamos y anotamos el número de
hembras y de machos y el fenotipo que presentaron.
7. Se hizo el mismo procedimiento tanto en la cruza directa como en
la cruza recíproca.

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Cruza Monohíbrida
Cepas de Drosophila melanogaster utilizadas:
 Normal o Silvestre (E): Cuerpo color ámbar
 Ebony (e): Cuerpo color negro
Fechas de apareamiento: 31 de enero de 2018

Cruza Directa: P1 Silvestre x Ebony


EE (Ámbar) ee (Oscura)

Cruza Recíproca: P1 Ebony x Silvestre


ee (Oscura) EE (Ámbar)
Fecha de liberación P1: 07 de febrero de 2018
Fecha de evaluación de F1: 14 de febrero de 2018
F1
Monohíbrida Directa Monohíbrida Recíproca
Clases Fenotípicas Número de individuos Número de individuos
Silvestre (cuerpo 5 5 5 5
ámbar)
Total = 10 10

En la cruza directa, como en la recíproca, obtuvimos un gran número total de


individuos (los cuales no se contaron) pero finalmente, solo escogimos 5 machos y
5 hembras del total, todos de color de cuerpo ámbar. Los 5 machos y 5 hembras
fueron seleccionados e introducidos en su respectivo frasco, uno para cruza directa
y oro para cruza recíproca. Teniendo un total de 10 individuos color ámbar en cada
frasco.
P2 F1 x F1
Fecha de cruzamiento: 14 de febrero de 2018
Fecha de liberación P2: 21 de febrero de 2018
Fecha de liberación de F2: 28 de febrero de 2018

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F2
Monohíbrida DirectaMonohíbrida
Recíproca
Clases Fenotípicas Número de Individuos Número de Individuos
Silvestre (cuerpo 103 127
ámbar)
Ebony (cuerpo 25 32
negro)
Total = 128 159

Al cruzar nuestros individuos resultantes en la F1, obtuvimos la generación F2. En


la cruza directa obtuvimos 103 moscas de cuerpo ámbar y 25 de cuerpo negro, en
total: 128
Dividiendo nuestro total entre 4, significa que esperábamos 32 de cuerpo negro, (1/4
del total) y al multiplicar 32 por 3, significa que esperábamos 96 de cuerpo ámbar
(3/4 del total). En el cuadro se observa que nuestros resultados son muy
aproximados a los esperados.
Por otro lado, en la cruza recíproca obtuvimos 127 moscas de cuerpo ámbar y 32
de cuerpo negro, en total: 159.
Dividiendo nuestro total entre 4, significa que esperábamos 39.75 de cuerpo negro,
(1/4 del total) y al multiplicar 39.75 por 3, significa que esperábamos 119.25 de
cuerpo ámbar (3/4 del total). En el cuadro se observa que nuestros resultados son
muy aproximados a los esperados.

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FOTOS

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Prueba de ji cuadrada (chi cuadrada)
El estadístico ji-cuadrado (o chi cuadrado), que tiene distribución de probabilidad
del mismo nombre, sirve para someter a prueba hipótesis referidas a distribuciones
de frecuencias. En términos generales, esta prueba contrasta frecuencias
observadas con las frecuencias esperadas de acuerdo con la hipótesis nula.

Formula general

Cuadro 1.1 Individuos resultantes de la Cruza Monohíbrida Directa

Cruza Monohíbrida
Directa
Ámbar Oscura
Esperadas Obtenidas Esperadas Obtenidas
96 103 32 25
Total 128

Cuadro 1.2 Individuos resultantes de la Cruza Monohíbrida Recíproca

Cruza Monohíbrida
Recíproca
Ámbar Oscura
Esperadas Obtenidas Esperadas Obtenidas
119.25 127 39.75 32
Total 159

Cuadro 1.3 Prueba de ji cuadrada en cruza Monohíbrida Directa


Fenotipos Prop. O E O-E (0-E)2 (O-E)2/E
Ámbar 3/4 103 96 7 49 0.51
Oscura 1/4 25 32 -7 49 1.53
Total X2= 2.04

O= Número de individuos observados


E= Número individuos esperados

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Cuadro 1.4 Prueba de ji cuadrada en cruza Monohíbrida Recíproca
Fenotipos Prop. O E O-E (0-E)2 (O-E)2/E
Ámbar 3/4 127 119.25 7.75 60.06 0.50
Oscura 1/4 32 39.75 -7.75 60.06 1.51
Total 159 X2= 2.01

O= Número de individuos observados


E= Número individuos esperados

En nuestro experimento, de la cruza Monohíbrida, analizando con la prueba de ji


cuadrada, obtuvimos un valor de:
Directa = 2.04
Reciproca = 2.01
Grado de libertad = 1
Alfa = 0.05
Valor tabulado =3.841
“Si x2 (valor calculado) > x2 (tabla 0.05) = Hay diferencia significativa”
“Si x2 (valor calculado) < x2 (tabla 0.05) = No hay diferencia significativa”

Por lo tanto:

Si comparamos los resultados obtenidos con los de la tabla podemos observar que
es menor al tabulado así que podemos decir que se acepta la hipótesis en ambas
cruzas (directa y reciproca).

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CONCLUSIONES

En un experimento, Mendel cruzó variedades altas y variedades enanas de


chicharos. Toda la descendencia de la primera generación, es decir F1 (Primera
generación filial) consistió en plantas altas.
En nuestro experimento con Drosophila melanogaster obtuvimos en la primera
generación, moscas 100% color ámbar. Confirmando el principio de dominancia y
con ello aceptando nuestra hipótesis referente a este.

Hablando de los experimentos de Mendel, cuando las plantas altas hibridas se


autofecundaron y se clasificó la descendencia (segunda generación filial: F2),
algunas plantas fueron altas y otras enanas. La clasificación cuidadosa de las
plantas mostró que cuando se consideraron grandes números, cerca de ¾ eran
altas y ¼ eran enanas. Para ser exactos, una F2 de 1064 consistió en 787 plantas
altas y 277 plantas enanas, una proporción casi perfecta de 3:1.

Un hecho importante de los resultados de Mendel fue que todas las plantas de la
descendencia F1 exhibieron todos los caracteres expresados en una de las plantas
parentales, el carácter expresado en la otra planta parental no apareció en la F1,
pero reaparecía en la F2. En genética se le denomina carácter dominante al que
aparece en la primera generación, y carácter recesivo al que permanece oculto.

En base a nuestros resultados presentados anteriormente, en ambas cruzas


(directa y recíproca) no hay diferencia significativa, y se acepta nuestra segunda
hipótesis (el carácter oculto -en este caso color negro- reaparece o vuelve a
manifestarse, presentándose una característica en una proporción de ¾ color ámbar
y ¼ color oscuro) puesto que el valor que obtuvimos es menor al presentado en la
tabla. Y la proporción es en un 99% de exactitud de ¾ a ¼.

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BIBLIOGRAFÍAS

 Gardner, E. J. 1980. Principios de Genética. Quinta edición, editorial Limusa,


México.

 Demerec, M, and B.P. Kaufman 1962. Introducción a la genética citología de


Drosophila Melanogaster. Comisión nacional de energía nuclear.
Mexico.p.44.

 https://es.wikipedia.org/wiki/Drosophila_melanogaster

 https://ciencia.nasa.gov/science-at-nasa/2004/03feb_fruitfly

 http://www.efn.uncor.edu/departamentos/divbioeco/anatocom/Biologia/Gene
tica/sexo.htm

 https://www.medwave.cl/link.cgi/Medwave/Series/MBE04/5266

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