Universidad de las Fuerza Armadas – Espe

Ciencias de la vida/Biotecnología
Carlos Israel Esparza Andrade
ciesparza1@espe.edu.ec

MICROBIOLOGÍA I; INFORME DE LABORATORIO N°2

NRC:4335

TÍTULO: Comparación de métodos de tinción simple y diferencial de levaduras.

Palabras clave: Saccharomyces cerevisiae, azul de metileno, etanol, asa de siembra

Resumen
Se preparó y comparó los dos métodos de tinción: simple y diferencial para levadura
(Saccharomyces cerevisiae. Debido a que la levadura al igual que otros microorganismos;
presenta diferentes orgánulos, los cuales son difíciles distinguir sin la tinción adecuada.
Con el uso del asa de siembra, mechero bunsen, porta objetos y la muestra se realizó el
frotis, y las tinciones se las realizó con azul de metileno, agua y etanol, obteniendo 3 porta
objetos los cuales presentaron diferentes resultados al ser observados en el microscopio.
Se demostró que el método de tinción diferencial es mas específico con el núcleo de la
levadura que al teñirla con el método de tinción simple.

INTRODUCCIÓN y diferenciar entre dos organelos

Antecedentes
Las tinciones en microbiología se
encuentran dentro de las primeras
herramientas que se utilizaron en el
laboratorio (Lopez, Hernándes, &
Castro, 2014). Al igual que la levadura
Saccharomyces cerevisiae es
denominado como el microorganismo
que más se ha utilizado por el ser
humano a través del tiempo; no obstante
en el inicio el hombre no tenía
conciencia plena sobre este en la
elaboración de diversos alimentos como
el pan o las bebidas alcohólicas (Suárez
& Garrido, 2016).
Justificación
Esta práctica fue realizada con el fin
de obtener información acerca de dos
métodos de tinción básicos, los cuales
nos sirvió para poder teñir a la levadura
importantes de la misma como es el
núcleo y vacuola.
Marco teórico
Un colorante es una sustancia química
capaz de colorar células, fibras, etc.
(Lopez, Hernándes, & Castro, 2014).
Una tinción está basada en el uso de
colorantes ya sean sintéticos o naturales
(Vizcarrondo, 2008).
Al hablar de estudios histológicos se
utiliza los colorantes naturales, no
obstante los sintéticos son más utilizados
para teñir bacterias y estos pueden ser
anilinas y derivados del benceno
(Santambrosio, 2009).
Las tinciones se consideran simples
cuando toda la muestra va a estar teñir
del mismo color se puede usar (azul de
lactofenol) (Sicilia, 2007), y tinción
diferencial que permite visualizar más de
un color en diferentes partes de una
misma célula (Santambrosio, 2009).
La levadura Saccharomyces
cerevisiae es un hongo ascomiceto, no
obstante una gran parte de ellas tienen
forma imperfecta (Universidad nacional
de salta, 2007).
Las que presentan característica
ascomicetas van a formar ascas libres,
con 1 a 8 ascosporas, mientras en las que
presentan hifas las ascas se encuentran
sin saco (Sicilia, 2007).
Una característica importante de las
levaduras es que son organismos
aerobios, no obstante Las levaduras son
organismos aerobios es decir realizan
fermentación principalmente hexosas y
disacáridos (Universidad nacional de
salta, 2007).
El género Saccharomyces es
fermentador de carácter energético bajo
condiciones anaeróbicas (Garay &
Folch, 2004).
Al microscopio, la levadura se denota
de manera esférica o alargada con yemas
o gémulas, no obstante cuando la hijas no
se separan de la célula madre se forma un
pseudomicelio, por el contacto que
presenta con la hija (Santambrosio,
2009).
OBJETIVOS
Objetivo general
 Comparar los métodos de tinción
simple y diferencial de levaduras.
Objetivos específicos
 Realizar un frotis en los
portaobjetos con la muestra de
levadura suministrada.
 Teñir 3 porta objetos con dos
métodos de tinción diferente.
 Observar la diferencia entre cada
método de tinción con el
microscopio óptico a 100x.
Hipótesis
La tinción diferencial permitirá
distinguir entre núcleo y vacuola de la
levadura a diferencia de la tinción
simple.
MATERIALES Y MÉTODOS
La practica se la dividió en 3
ejercicios:
En el primer ejercicio se realizó un
frotis de cultivo de levadura en un porta
objetos, con el asa de siembra y cerca al
mechero bunsen para que no hubiera
contaminación, se fijó la muestra y se
baño en etanol al 40% por un minuto, se
enjuagó cuidadosamente con agua, se
cubrió la muestra con KOH y se lo dejó
por media hora. Se lavó el exceso de
KOH y se colocó azul de metileno por 2
minutos, y se agregó etanol al 10% por 5
segundos, se lo llevó al microscopio y se
observó a 100x (Vizcarrondo, 2008).
En el segundo ejercicio se realizó el
mismo frotis y fijación de la levadura en
el porta objetos, se bañó con etanol al
40% por un minuto, se enjuaga y se
aplicó azul de etileno por 2 minutos. Se
enjuagó y se colocó etanol al 10% por 5
segundos, se procedió a lavar y secar, y
observar a 100x en el microscopio
(Lopez, Hernándes, & Castro, 2014).
En el tercer ejercicio se realizó el
frotis con el asa de siembra junto al
mechero bunsen, se fijó y se colocó azul
de metileno por 2 minutos, se lavó, seco
y se observó a 100x.
RESULTADOS
Macroscópicamente los 3 porta
objetos con las diferentes tinciones
tenían aspectos similares, mientras que
con el uso del microscopio óptico y a un
aumento de 100x con uso de aceite de
inmersión, se observó que en la tinción
diferencial hubo más material teñido que
en las otras dos, además se identificó
núcleo y vacuola Fig.1.
Núcleo
Vacuola
Figura 2 Núcleo y vacuola de levadura
observadas a 100x
Mientras que en las 3 tinciones se
pudo distinguir las pseudohifas. Fig.2
Pseudohifas
s estructura de la levadura.
Figura 3 Levaduras y Pseudohifas
No se observó diferencia significativa
entre la tinción simple con etanol y azul
de metileno y la tinción simple
únicamente con azul de metileno. Fig.3
Figura 1 Izq. Tinción simple con Etanol y azul de
metileno, Der tinción simple con azul de metileno
DISCUSIÓN
Según (Lopez, Hernándes, & Castro,
2014) Si se tiñe una muestra del cultivo
extendida y fijada en un portaobjeto con
el método de tinción simple y las células
adquieren el color del colorante añadido
y podrá observarse la forma, tamaño y el
arreglo de las mismas, podemos afirmar
dicha teoría debido a que se utilizó azul
de metileno y la levadura obtuvo ese
color.
(Andrade, Rodrigo, 2016) afirman
que al observar un microorganismo a
través del microscopio óptico una
dificultad es la falta de contraste que
presenta la célula y su medio, y la
manera mas simple de aumentar ese
contraste es por medio de colorantes, en
la practica se vio la necesidad de utilizar
azul de metileno para poder observar la
Según (Santambrosio, 2009) afirma
que una tinción diferencial utiliza mas de
un colorante, y por aquella circunstancia
se observan diferentes colores fijados en
estructuras específicas, no obstante al
momento de realizar esta tinción, se
utilizó únicamente azul de metileno
como colorante, sin embargo se logró
observar el núcleo debido a que el KOH
digiere parcialmente las proteínas y el
azul de metileno puede entrar a la
levadura y adherirse al núcleo.
CONCLUSIONES Obtenido de
http://www.guia.reviberoammic
 Se logró diferenciar entre los 2 ol.com/Capitulo11.pdf?viewTyp
métodos de tinción, obteniendo que e=Print&viewClass=Print
el método de tinción diferencial
permite observar el núcleo y vacuola Suárez, C., & Garrido, N. (2016).
presentes en la levadura. Levadura Saccharomyces
 Un frotis uniforme con el asa de cerevisiae y la producción de
siembra permitirá que no haya alcohol. Redalyc, 20-28.
acumulación de muestra y dificulte la
Universidad nacional de salta. (2007).
observación de la misma.
Levaduras. Obtenido de
 Las levaduras se reproducen por http://www.unsa.edu.ar/biblio/re
gemación pero también pueden positorio/malim2007/4%20levad
formar pseudohifas. uras.pdf
 El KOH se encarga de digerir
parcialmente las proteínas presentes Vizcarrondo, M. (Noviembre de 2008).
en la membrana plasmática de la UCV. Obtenido de
levadura. http://www.ucv.ve/fileadmin/use
r_upload/facultad_farmacia/cate
draMicro/10_Morfolog%C3%A
Bibliografía Da_y_Tinci%C3%B3n.pdf
Andrade, Rodrigo. (16 de Agosto de
2016). Microbiología e
Inmunología. Obtenido de
http://www.microinmuno.qb.fce
n.uba.ar/SeminarioTinciones.ht
m
Garay, A., & Folch, J. (2004). La
respuesta a estrés en la levadura
Saccharomyces cerevisiae.
Revista latinoamericana de
Microbiología, 12-43.
Lopez, L., Hernándes, M., & Castro, C.
(2014). Las tinciones básicas en
el laboratorio de microbiología.
indvis, 10-18.
Santambrosio, E. (3 de Septiembre de
2009). Universidad Tecnológica
Nacional. Obtenido de
https://www.frro.utn.edu.ar/repo
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Sicilia, M. J. (2007). Revista
Iberoamericana de Micología.