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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL


CURSO BIOQUIMICA, CICLO 2018-I

PRÁCTICA 7
DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA.

INTRODUCCIÓN

Proteínas totales: El método se basa en la reacción de Biuret, en la cual los enlaces peptídicos
reaccionan, en medio alcalino, con sulfato de cobre para formar un complejo azul-violeta. La
intensidad del color es proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.
Albúmina: El método se basa en la unión de la albúmina al indicador Verde de bromo cresol.

COMPETENCIAS

COGNITIVA:
- Establece la importancia de los niveles proteínas y su determinación en el suero o plasma.

PROCEDIMENTAL:
- Determina la concentración de proteínas totales y albumina de una muestra problema (suero o
plasma) mediante el método enzimático.

ACTITUDINAL:
- Discute sobre la determinación de los niveles de proteínas y albúmina y su importancia.
- Promueve el trabajo en grupo y la interacción con los profesores.

MATERIALES

- Reactivos Biuret y Verde de Bromocresol, estándar de proteínas totales (6.0 g/dL) y albúmina
(3.1 g/dL), agua destilada, suero o plasma alumnos(as) u otras personas, materiales diversos.
- 01 plumón rotulador (por mesa).

PROCEDIMIENTOS

OBTENCION DE LA MUESTRA PROBLEMA (SUERO o PLASMA)

Extraer 3 mL. de sangre (con sistema al vacío, aguja libre o jeringa) y separar el suero o plasma
previa centrifugación.

PROTOCOLO PARA PROTEINAS TOTALES

Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema (MP):

TUBO B St MP
mL. Suero o plasma puro - - 0.01
mL. Estándar de proteínas 6.0 g/dL - 0.01 -
mL. Reactivo Biuret 1.0 1.0 1.0
Mezclar e Incubar en baño maría a 37°C por 10 minutos. Terminado el tiempo, leer las
absorbancias de los tubos a 540 nm. Encontrar la concentración de proteínas totales (g/dL o g%)
en la muestra problema (suero o plasma), mediante la siguiente fórmula:

[Proteínas g/dL] = [ St ] x A mp - bl x Fd
A st - bl

Comparar con VALORES NORMALES: 6 a 8 g/dL


(La reacción es lineal hasta 15 g/dL)

PROTOCOLO PARA ALBUMINA

Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema (MP):

TUBO B St MP
ml. Suero o plasma puro - - 0.01
ml. Estándar de albúmina 3,1 g/dL - 0.01 -
ml. Reactivo Verde Bromo Cresol 1.0 1.0 1.0

Mezclar y dejar a temperatura ambiente por 3 minutos. Terminado el tiempo, leer las absorbancias
a 620 nm. Encontrar la concentración de albúmina (mg/dL o mg%) en la muestra problema (suero
o plasma), mediante la siguiente fórmula:

[Albúmina g/dL] = [ St ] x A mp - bl x Fd
A st - bl

Comparar con VALORES NORMALES: 3,5 a 5,0 g/dL


(La reacción es lineal hasta 8 g/dL)

Se puede calcular la concentración de globulinas, considerando que:

Globulinas = Proteínas totales – Albúmina

Valores NORMALES Globulinas: 1,5 a 3,0 g/dL

Reforzar:

1. Fundamento de prueba Biuret. Revisar otras pruebas para determinación de proteínas.


2. Importancia de la determinación de proteínas en muestras medioambientales.

Mg. Blgo. Oscar Acosta C.


Responsable
Bioquímica
Ing. Ambiental 2018-I