INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE SISTEMAS DE CONTROL DE

CALIDAD

GRUPO : 5QM2 SECCIÓN: 2

ALUMNO: Silva Villanueva Martha Celia

PROFESORAS
Hilda Pérez Cervantes
Ana María García Vázquez
Aura Patricia Hernández Olicón
Guadalupe Elizabeth Jiménez Gutiérrez

Práctica
Verificación y efecto de la
temperatura en los resultados

27/04/18
 INTRODUCCIÓN

En las reacciones catalizadas por enzimas cualquier factor ambiental que

distorsiona la estructura proteínica puede alterar su actividad enzimática. Las
enzimas son especialmente sensibles a variaciones de la temperatura y del pH.
La temperatura afecta a todas las reacciones químicas. En general, cuanto mayor
es la temperatura, mayor es la velocidad de reacción; es decir, es mayor el número
de colisiones. La velocidad de reacción crece debido a que hay más moléculas con
energía suficiente para entrar en el estado de transición. Las velocidades de las
reacciones catalizadas por enzimas también aumentan con la temperatura. Sin
embargo, las enzimas son proteínas que se desnaturalizan a temperaturas
elevadas.
La temperatura óptima de una enzima, aquella a la que actúa con su máxima
eficiencia, y se determina en el laboratorio en condiciones específicas de pH, fuerza
iónica y concentraciones de solutos. En los seres vivos no hay una única
temperatura óptima definible para las enzimas.

OBJETIVOS
Evaluar y analizar el efecto que produce el inadecuado control de la temperatura
en una reacción de tipo enzimática y valorar su relación con la confiabilidad de los
resultados mediante la determinación del Q10 y aplicar los conceptos de calidad
aprendidos durante el curso e interpretar los resultados de acuerdo al control de
calidad y establecer un criterio de aceptación y rechazo.

FUNDAMENTO

La velocidad de una reacción enzimática varia al aumentar la temperatura,

presentándose un efecto positivo al aumentar la velocidad de cualquier reacción
química hasta alcanzar la temperatura optima sin embargo, a valores superiores se
presenta un efecto negativo en la actividad enzimática debido a la desnaturalización
de la enzima por efecto de la temperatura dando como consecuencia la inactivación.
 TRATAMIENTO DE LOS DATOS
Tabla 1.Incrementos para cada intervalo de tiempo a 27 ºC.
Min (seg) A 25 ºC(1) ∆𝑨 ∆ A acum A 25ºC(2) ∆𝑨 ∆ A acum
60 0.448 0.098 0.098 0.521 0.145 0.145
120 0.546 0.104 0.202 0.666 0.142 0.287
180 0.650 0.107 0.309 0.808 0.143 0.430
240 0.757 0.093 0.402 0.951 0.142 0.572
300 0.850 - - 1.093 - -
𝑥̅∆ 𝐴𝑏𝑠 - 0.100 - - 0.143 -
⧍ Act. 277 - - 395 - -
Enz.(U.I/L)

Tabla 2.Incrementos para cada intervalo de tiempo a 27 ºC.

Min (seg) A 25ºC(3) ∆𝑨 ∆ A acum A 25ºC(4) ∆𝑨 ∆ A acum
60 0.454 0.003 0.003 0.390 0.077 0.077
120 0.457 0.125 0.128 0.467 0.077 0.154
180 0.332 0.01 0.138 0.544 0.075 0.229
240 0.322 0.003 0.141 0.619 0.078 0.307
300 0.325 - - 0.697 - -
𝑥̅∆ 𝐴𝑏𝑠 - 0.035 - - 0.076 -
⧍ Act. 389 - - 212 - -
Enz. (U.I)

Tabla 3.Incrementos para cada intervalo de tiempo a 37 ºC.

Min (seg) a 37 ºC(a) ∆𝑨 ∆ A acum a 37ºC(b) ∆𝑨 ∆ A acum
60 0.556 0.184 0.184 0.525 0.166 0.166
120 0.740 0.185 0.369 0.691 0.165 0.331
180 0.925 0.183 0.552 0.856 0.164 0.495
240 0.108 0.182 0.734 1.020 0.164 0.659
300 1.290 - - 1.184 - -
𝑥̅∆ 𝐴𝑏𝑠 - 0.183 - - 0.164 -
⧍ Act. 506 - - 455 - -
Enz.(U.I/L)
Tabla 4.Incrementos para cada intervalo de tiempo a 37 ºC.
Min (seg) a 37 ºC(c) ∆𝑨 ∆ A acum a 37ºC(d) ∆𝑨 ∆ A acum
60 0.519 0.128 0.128 0.651 0.139 0.139
120 0.647 0.126 0.254 0.790 0.135 0.274
180 0.773 0.127 0.381 0.925 0.138 0.412
240 0.900 0.126 0.507 1.063 0.137 0.549
300 1.026 - - 1.200 - -
𝑥̅∆ 𝐴𝑏𝑠 - 0.126 - - 0.137 -
⧍ Act.Enz. 350 - - 379 - -
(U/L)

Tabla 5. Valores obtenidos de Q12 de la sección 2 y 4.

Equipos Q12 %E
1a 1.82 6.8
1b 1.7 5.83
K81c 1.3 2.5
1d 1.36 3
2a 1.3 2.5
2b 1.2 1.66
2c 0.88 -1
2d 1.04 0.33
3a 1.3 2.5
3b 1.16 1.3
3c 0.89 -0.91
3d 1.02 0.21
4a 2.38 3.16
4b 2.14 0.05
4c 1.65 5.4
4d 1.78 6.56
BITACORA DE RESULTADOS Fecha:27/04/18
Verificación y efecto de la temperatura en los resultados.
Resultados y observaciones
Incrementos acumulados
Título: Cambios de la absorbancia contra el tiempo en segundos.

Gráfica1.Cambios de la absorbancia contra el tiempo en segundos.

Unidades: nm

E.c de la recta a 25 ºC(4) : 0.0013+0.3136 r2: 1

:
E.c de la recta a 37 ºC(c):0.0021+0.3929 r2: 1
Determinación realizada: Verificación y efecto de la temperatura en la enzima
fosfatasa alcalina.

Temperaturas seleccionadas: 25°C y 37°C

Longitud: seleccionada: 405 nm Factor para la fosfatasa alcalina: 2760 U.I/L

Calculo de la actividad enzimática:

A𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎𝑡𝑖𝑐𝑎. = 𝑥̅ 𝑑𝑒 𝛥 𝑎𝑏𝑠 ∗ 2760

𝐴𝑐𝑡𝑖𝑣𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎𝑡𝑖𝑐𝑎 = (0.137)(2760) = 𝟑𝟕𝟗 𝑈𝐼/𝐿

𝒂𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂𝒕𝒊𝒄𝒂 (𝒕𝒆𝒎𝒑. 𝒎𝒂𝒚𝒐𝒓 )

𝑸𝟏𝟐 =
𝒂𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂𝒕𝒊𝒄𝒂 (𝒕𝒆𝒎𝒑. 𝒎𝒆𝒏𝒐𝒓)

𝟑𝟕𝟗
𝑸𝟏𝟐 𝒅𝒆 𝒆𝒒𝒖𝒊𝒑𝒐 𝒅 = = 𝟏. 𝟑𝟔
𝟐𝟕𝟕

Vi: no aplica

Actividad enzimática 25 ºC(4) :

𝑨𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎á𝒕𝒊𝒄𝒂 𝟐𝟓ᴼ𝑪 = 𝑴𝒆𝒅𝒊𝒂 𝜟𝑨 ∗ 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 = 𝟎. 𝟎𝟕𝟔 ∗ 𝟐𝟕𝟔𝟎 = 𝟐𝟏𝟐 𝑼𝑰/𝑳

Actividad enzimática 37 ºC(d) :

𝑨𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎á𝒕𝒊𝒄𝒂 𝟑𝟕ᴼ𝑪 = 𝑴𝒆𝒅𝒊𝒂 𝜟𝑨 ∗ 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 = 𝟎. 𝟏𝟑𝟕 ∗ 𝟐𝟕𝟔𝟎 = 𝟑𝟕𝟗 𝑼𝑰/𝑳

Calculo del % de error:

𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑜𝑏𝑠𝑒𝑟𝑣𝑎𝑑𝑜 − 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙 𝟑𝟕𝟗 − 𝟑𝟕𝟓
𝑬𝒓𝒓𝒐𝒓 𝒆𝒒𝒖𝒊𝒑𝒐 𝒅 = ∗ 100 = ∗ 𝟏𝟎𝟎 = 𝟏. 𝟎𝟔%
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑎𝑙 𝟑𝟕𝟓

%de Error: 1.06%

Identificación de errores que se pueden cometer si no se mantiene la temperatura

controlada en las mediciones:
Lecturas erróneas ya sean altas o bajas, falsos positivos o falsos negativos en el
diagnóstico de alguna enfermedad.
Acciones correctivas:

 Cuando se abre el frasco para el suero el vacío que tiene el mismo hace que se
salga el producto ocasionando un error, lo ideal para solucionarlo es ponerle el
dedo antes de abrirlo y tener mucho cuidado.
 Disolver bien el sustrato para la determinación.
 Tener cuidado en el uso de las micropipetas evitando contaminar los reactivos,
utilizar una punta diferente.
 Tomar la alícuota correctamente en vertical y a la altura de los ojos.
 No distraerse a la hora de la determinación ya que se necesita contar el tiempo
exactamente.
 Usar guantes todo el tiempo para evitar que el producto se quede en las manos
o afectemos determinaciones por la grasa de los dedos, o el sudor.
 Tener todo el material que se utilizara a la mano, limpio y seco.

Discusión de resultados

De acuerdo con los resultado de la tablas de 1-2 se puede observa que la actividad enzimática de
la primera determinación a 25°C es de 277 , 395, 389,212 U.I/L de acuerdo a los datos el valor que
entra dentro del intervalo de referencia de204-276 U.I/L la determinación de 212 U.I/L es el valor
que entra en el intervalo , mientras que en los otros de la actividad enzimática a 37°C la primera es
de 506 U.I/L y la segunda de 455 U.I/L luego 350 y 379 U.I/L de estos valores, el valor que entra
en la referencia es el de 350 U.I/L ya que la referencia indica que va de un intervalo de 319-431U.l/L,
los otros valores se alejaban mucho de los valores de referencial con porcientos de error muy
elevados aunque las determinaciones a 25°C no lleguen al 10% según CLIA es el porciento de error
permitido, aun así es elevado y en cuanto a las determinaciones de 37°C fueron de 18.4% de error
y 53% los cuales está muy elevados y por lo tanto con estos resultados no se puede dar un
diagnóstico certero, las posibles causas por las cuales este error sea más alto que en las
determinaciones a 25°C podrían ser los errores aleatorios que pueden presentarse, como la
temperatura mantener en esa temperatura la enzima es algo difícil además de que el control estaba
en un baño maría el cual es difícil mantener la temperatura constante en toda el agua, ya que el
termómetro puede marcar una temperatura pero puede que solo este caliente la parte de abajo y
la de arriba no, porque no tenía un sistema para homogenizar el agua, además cuando pasamos el
control al fotómetro se pudo haber enfriado, aunque el fotómetro tiene celdas peltier, no sabemos
si están funcionando correctamente, que en este casi puede que si ya que en las determinaciones a
25°C el porciento de error es menor a 10% lo cual indica que está funcionando bien, además que a
esa temperatura es más fácil de mantener ya que es la temperatura ambiente y por lo tanto se
reduce el error, en la tabla 5 se observan los resultados del cálculo de Q12 en donde la temperatura
es la medida de la tasa de variación del sistemas como consecuencia del incremento de 12 °C de la
temperatura, los cuales se ven reflejados en la gráfica 1 en donde se observa como la absorbancia
va aumentando cada 60 segundos el cual los indica que la enzima está convirtiendo su sustrato en
producto. Y finalmente para dar un diagnóstico correcto también cuenta la precisión y exactitud del
analista, ya que si damos resultados erróneos podríamos ocasionar problemas como el mal
diagnóstico de enfermedad o por el contrario un falso negativo y en este caso que esta enzima se
utiliza para detectar problemas en la medula ósea y si se necesita un diagnóstico rápido como el
caso del cáncer puede que esa mala lectura perjudique al paciente agravando su enfermedad.

CONCLUSIONES

 Se evaluó el efecto que produce la temperatura en una reacción enzimática.

 Se obtuvó una actividad enzimática de 379 UI/L y un error del 1.06% lo cual
indica que el analista tuvo errores de trabajo y no tuvo exactitud .
 Se determinó el Q12 resultando con un valor de 1.6 por lo que se aumenta la
actividad en un 5% por 1ᴼC.

Referencias

 López E. D., Tema 14: enzimas.Consulta 21/04/2018 disponible en:

http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf
 Hernández J. L., Enzimas, UNAM.Consultado 21/04/2018 .Disponible en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/1.4.ENZIMAS_24470.pdf
 Fosfatasa alcalina ,parámetros que se evalúan con la
prueba.Consultado:21/04/2018.Disponible:
https://www.clinicadam.com/salud/5/003470.html
 Pregunta extra

-Parámetro biológico que se evalúa con la fosfatasa alcalina.

La Fosfatasa Alcalina (ALP) es una enzima que se encuentra en casi todos los
tejidos del cuerpo, pero es mayor su presencia en el hígado, las vías biliares y los
huesos.
El análisis mide la cantidad de la enzima fosfatasa alcalina en la sangre.
La fosfatasa alcalina tiene un gran variedad de isoenzimas con leves diferencias en
su estructura, que sugieren diferentes orígenes por cada tejido (FA1 del hígado,
FA2 del hueso). Estas isoenzimas pueden ser cuantificadas por separado si es
necesario.
Una de las mayores fuentes de fosfatasa alcalina es el hueso. Por ello, en los niños
y adolescentes con crecimiento óseo esta enzima está normalmente elevada.
El análisis se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT,
Bilirrubina, GammaGT) y se utiliza para evaluar problemas o alteraciones del
hígado.
Es muy sensible, sobre todo, en problemas de obstrucción de las vías biliares. Es
la enzima más sensible a los problemas hepáticos producidos por tumores
metastásicos.

Suele asociarse a la elevación de la gamaGT, excepto en los problemas óseos en

los que sólo se eleva la fosfatasa alcalina.

En el caso de los problemas hepáticos, la fosfatasa alcalina es especialmente útil

en el diagnóstico de obstrucciones de los conductos biliares y la vesícula biliar.