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Genética Bacteriana

IBETH C. ROMERO CALDERÒN PHD


icristinaromero@unicolmayor.edu.co
Contenido
Estructura y función del material genético
◦ADN y cromosoma
◦Plásmidos
◦Transposones
◦Flujo de la información genética
◦Mutaciones
Transferencia del material genético
◦Conjugación
◦Transformación bacteriana
◦Transducción
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Lecturas propuestas
Microbiology 10th edition TORTORA:
Capítulo 8: Microbial Genetics

Brock Biología de los microorganismos 14ª Edición:


Capítulo 6: Genómica microbiana
Capítulo 10: Genética de bacterias

Jawetz, Melnick & Adelberg Microbiologia Médica 25ª Edición:


Capitulo 7: Genética bacteriana

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Historia de la genética molecular
Gregor • 1865 herencia de caracteres dominantes y
Mendel recesivos.

Friedrich • 1869 Ácidos nucleicos en los glóbulos blancos y en


el esperma del salmón, sustancia a la que llamó
Miescher nucleína

Thomas Hunt • 1910 Teorìa cromosòmica


de la herencia o herencia
Morgan ligada

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¿Cómo se descubrió que el ADN
era la molécula encargada de
guardar la información genética?

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1928-1930 Factor transformante

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Max Delbrück,
• 1940 mecanismos de replicación de los bacteriófagos o fagos y
Alfred Hershey estructura.
y Salvador Luria

Avery, MacLeod • 1944 ADN agente transformante


y McCarty

• 1950 Numero de cada base


Erwin Chargaff nitrogenada y regla de
complementariedad

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ADN agente transformante

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Linud Pauling • 1951 Triple hèlice del AND y estructura secundaria de proteinas

Rosalind
Franklin y • 1952 Acercamiento a la doble hélice de ADN por rayos X
Maurice Wlkins

James Watson y
• 1953 Doble hèlice del ADN
Francis Crick

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F. Jacob, D.
Perrin, C. Sánchez • 1960 Operon de Lac
y J. Monod

Francis Crick y • 1970 Dogma central de la biología molecular


Howard Temin

Frederick Sanger • 1977 Secuenciamiento de genoma


fago

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Kary Mullis • 1986 Reacciòn en cadena a la polimerasa

Kent • 1996 Clonacion del primer mamífero “Dolly”


Cambell

Mario • 2007 Manipulacion genetica,


Campechi celulas madre

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Genoma bacteriano
▪ ADN cromosómico, circular de doble cadena
Dos o más cromosomas en V. cholerae
▪ N° de cromosomas : 1
Cromosoma linear Borrelia burdogferi
▪ Contiene 1000 a 9000 kilobases (Kb)
▪ Es una unidad de replicación. Tiene un origen de replicación, genes
▪ Genes estructurales codificadores (proteínas)
▪ Genes del ARN ribosómico
▪ Genes promotores y operadores: controlan la expresión de otros genes
• Superenrrollado.
• Presente en copia única
Microbiology 10th edition TORTORA, 2010 • ADN extracromosomal (plásmido)

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Otros elementos genèticos
Plásmidos
• Moléculas de ADN extracromosómico circular o lineal
• Llevan una pequeña parte de la información genética
que no es esencial para la vida de la bacteria
• Tienen sus propios orígenes de replicación, se replican
en forma autónoma.
• Le confieren a las bacterias propiedades especiales
que pueden representar una ventaja con respecto a
las bacterias que no lo poseen. Ej. Resistencia a
antibióticos.
• No son capaces de integrarse al cromosoma.

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Elementos Genéticos Transponibles o
transposones
• Segmentos de ADN que pueden transferir ADN de una posición a otra dentro del genoma bacteriano.
• Son elementos cromosómicos móviles que poseen secuencias de inserción en los extremos y pueden transferir ADN
de una posición a otra en la bacteria.

Propiedades
Movimiento al “azar”
No poseen autorreplicación
Transposición mediante recombinación
específica
Transposasa

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Tipos de Elementos Transponibles
Secuencias de Inserción (IS): Elementos que portan sólo los genes de
transposición
ABCDEFG Transposasa GFEDCBA

adhesinas, toxinas y
Transposones (Tn): Elementos que portan otros genes además de los resistencias a
de transposición (IMPORTANTES en R) antibióticos

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Tipos de Elementos Transponibles
Transposones TN A: Sin secuencias de inserciòn. largas secuencias repetidas en
los extremos , transposasa y resolvasa. Tn 3 que codifica resistencia a ampicilina

• Bacteriófago mu y otros fagos lisogénicos: El bacteriófago completo se comporta


como un transposón y su transposición es replicativa.

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Unidad funcional
de la herencia.
Cada gen consta
de cientos de
pares de
nucleótidos.

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Flujo de la información genética

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Flujo de informaciòn genetica bacteriana
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Replicación ADN

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Replicación ADN

http://lib.jiangnan.edu.cn/ASM/348.gif

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Transcripciòn

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CÓDIGO GENÉTICO: tripletes
Síntesis de proteínas o traducción

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Síntesis de proteínas o traducción

http://deniselasluisa.blogspot.com.co/2015_05_01_archive.html

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En las bacterias, la transcripción y la traducción están
acopladas
ARNm policistrónico (procariota) vs
monocistrónico (eucariota)

http://csls-text.c.u-tokyo.ac.jp/images/fig/c_fig04_1.gif
REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN
GÉNICA
• Genes constitutivos: se expresan siempre
• Genes regulados: sólo se transcriben y traducen cuando y donde se
necesitan (hay una influencia ambiental)
– Regulación ¿cuándo?: transcripción, estabilidad del RNA, traducción
– Recordar que también hay regulación a nivel Bioquímico (actividad proteínas)
Factores involucrados
• Secuencias promotoras (factores cis)
Presentes en el DNA – porción reguladora del gene

• Factores proteicos (factores trans)


Reconocen las secuencias promotoras
Factores de transcripción – Codificados en otros
genes
Promotores: Secuencias consenso
Secuencia de ADN que se une a la polimerasa para iniciar transcripción
Los factores proteicos leen el DNA
Varios TF reconocen estos
promotores
En procariotas varios genes se controlan juntos
En eucariotas cada gen posee varios promotores

Secuencia Secuencia Secuencia Secuencia


CAAT GC TATA Inr

3’
Promotor proximal Promotor basal
-50 a -200 pb -30 a -40 pb

Promotores distales
5’
Control de la EL OPERÓN
Un conjunto de genes que se
expresión transcriben y regulan juntos
genética (metabolismo)
Se une la RNApol

Regulación - Regulación +

Represor Activador

REGULADOR

EFECTOR
Corepresor Inductor

AMBIENTE
Control de la expresión genética
Control negativo

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Control de la expresión genética
Control Positivo

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Control de la expresión genética
Atenuación
en lugar de bloquear la iniciación de la
transcripción, la atenuación impide la
terminación de la transcripción.

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Operón lactosa en ausencia de lactosa

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Operón
inducible

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EL PROMOTOR lac ES DÉBIL

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Operon represible-reprimible Triptófano

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Operón triptófano: en presencia de triptófano

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Operón triptófano: en ausencia de
triptófano IBETH CRISTINA ROMERO CALDERÒN PHD.
Variaciones bacterianas
Fenotípica http://bekyta.weebly.com/mutaciones.html

Genotípica
Mutaciones
Recombinación bacteriana
Afecta la información genética por medio
del ADN cromosómico, plasmídico, ADN fágico o
transposones
http://bekyta.weebly.com/mutaciones.html

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Son modificaciones del fenotipo, debidas
generalmente a cambios ambientales sin relación
con el genoma, el cual no es transmitido
hereditariamente.
Cuando se restablecen las
condiciones originales del
cultivo, se produce retorno al
fenotipo inicial.

http://bmeditores.mx/colibacilosis-aviar-una-enfermedad-compleja-parte-i-la-bacteria/

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De tinción:
Morfológicas: Enzimáticas: las Grampositivas de
cambios de Cromógenas: producen bacterias solo un cultivo viejo
forma, tamaño, pigmentos que caracterizan producen estas pierden la
tinción, o perdida sus colonias. Estos enzimas si el capacidad de
de capsula, desaparecen medio en el que retener el
espora o flagelos. temporalmente con se desarrollan, colorante
Cambian con el condiciones ambientales. inducen a su primario durante
pH y temp. producción. la decoloración e
alcohol acetona.

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El genotipo de una célula bacteriana esta determinado
http://www.tokyo-med.ac.jp/genet/inv-e.htm
por la información genética de su cromosoma.

Alteran la información contenida en


el cromosoma bacteriano
Mutación es cualquier alteración permanente en la secuencia de
ADN (cambio genotípico)

Son cambios hereditarios.


No necesariamente son irreversibles, ya que existen mecanismos de
reparación y reversión.
Pueden ser espontáneas o inducidas por agente mutágenos.

http://biologiacampmorvedre.blogspot.com.co/2013/11/blog-post_6899.html
http://www.tokyo-med.ac.jp/genet/inv-e.htm

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Aquellas que surgen normalmente como consecuencia de errores durante el proceso de
replicación del ADN.

Ocurren en condiciones normales de cultivo y existen varias


situaciones que cambian la secuencia de bases Purina-
pirimidina del ADN.

http://biologiadivertida2.blogspot.com.co/

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Sustitución: Inserción o Deleción,
sustituye un adición: supresión o
nucleótido por cuando se perdida:
otro. adicionan una o cuando se pierden
Error en la varias nucleótidos uno o mas
replicación a los ya existentes nucleótidos.
http://biologiadivertida2.blogspot.com.co/

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Sustitución por
Sustitución por transición: trasnversion: cuando se
cuando se sustituye una base sustituye una base purina
purina por otra purina. por una pirimidina o
viceversa.

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Silenciosa: no afecta el fenotipo

De cambio de sentido: cambia secuencia de aa Sin sentido: Un codon de parada

Microbiology 10th edition TORTORA, 2010

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Mutaciones inducidas
Cuando se aplica aun población bacteriana algún tipo de agente
inductor de mutaciones, conocido como agente mutageno o
sustancia mutagénica.
Físicos Químico

Ácido nitroso y agentes


alquilantes

Colorantes de acridina.

http://www.lit-uv.com/es/technology/

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Mutaciones inducidas
UV Ácido nitroso
Es la formación de un nuevo genotipo por redistribución de los genes, después de un
intercambio genético entre dos cromosomas diferentes que poseen genes similares.

http://mnogolok.info/ewrabphoto-biology-animated-gif.htm

http://www.monografias.com/trabajos81/resistencia-
bacteriana/resistencia-bacteriana2.shtml
El mecanismo de apareamiento depende del
contacto célula – célula.

Intercambio de material genético entre una bacteria


donadora y una receptora mediada por un pili sexual

https://anasta.net/video/animation/bacterial-conjugation-hd-animation.html

Microbiology 10th edition TORTORA, 2010

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Fases de la conjugación

Microbiology 10th edition TORTORA, 2010

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Adquisición de nuevo material genético por la
incorporación de ADN exógeno, mediante adsorción.
https://oak.ppws.vt.edu/~sforza/agro/agro.html

Consiste en el paso de un fragmento de ADN


de una bacteria a otra por la adsorción.
ADN se recombina con el cromosoma de la
bacteria que lo recibe, reemplazando un
segmento homologo.
https://giphy.com/gifs/transformation-t48k8OR39alY4

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Consiste en la transferencia de una pieza de ADN de una bacteria a
otra por medio de un bacteriófago

http://faculty.ccbcmd.edu/courses/bio141/lecguide/takehome/genetics/recombination/transduction/spectran.html https://giphy.com/gifs/season-10-the-simpsons-10x22-l2Je66zG6mAAZxgqI

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Virus que infecta bacterias
http://cronodon.com/BioTech/Virus_Tech.html

Ejm: T4 infecta E. coli

http://www.campbellmedicalillustration.com/t4-bacteriophage-and-e-coli/

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Son genomas virales que se integran al genoma
bacteriano. Las bacterias que portan los profagos
se llaman bacterias lisogénicas.

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Ciclo lítico vs lisogénico
Ciclo de vida virulento: ciclo replicativo resulta en la Ciclo de vida temperado: ciclo replicativo conjunto con
destrucción celular o lisis el del hospedero sin destruirlo

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https://co.pinterest.com/pin/128211920621794327/?lp=true
Transducción Generalizada Potencialmente cualquier gen bacteriano
puede ser transferido

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Transducción Especializada Se transfieren genes bacterianos específicos

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Ingeniería genética
La Ingeniería Genética
Conjunto de técnicas, nacidas de la Biología molecular, que permiten manipular el
genoma de un ser vivo, introduciendo genes en un organismo que carece de ellos
Se realiza por
Incluye
Enzimas de restricción Técnicas biotecnológicas
Capaces de cortar el ADN por •Recombinación de ADN
puntos concretos •Secuenciación del ADN
Se obtiene •Reacción en cadena de la
ADN Recombinante polimerasa
Segmento de ADN extraño •Aplicaciones en biotecnologia
intercalado en un ADN receptor

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Enzimas de restricción

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ADN recombinante

Plásmido

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ADN recombinante

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Còmo sabemos que las bacterias adquieren el ADN
recombinante??
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Clonación de animales
TRANSFERENCIA DEL NÚCLEO DE UNA CELULA SOMATICA: CÉLULA DIFERENCIADA
SECUENCIACIÓN DEL ADN: Método Sanger
•Métodos y técnicas para determinar el orden de los nucleótidos de un determinado fragmento de ADN
•Utilidad importante en biología básica y aplicada (forense…)
•Precisa gran cantidad del fragmento a determinar (clonación)
Método Sanger o didesoxi:
•Fragmento de ADN (cantidad)
•Cebador en el extremo 3´ (20 bases)
•ADN polimerasa
•Desoxiribonucleótidos (A,T,C,G)
•Didesoxiribonucleótidos marcados radiactivamente (paran la síntesis)

Cuatro tubos diferentes con:


➢Polimerasa
➢dATP, dCTP, dTTP y dGTP
➢Un solo didesoxi marcado (ddATP)
➢Se forman fragmentos de distinto tamaño
terminados en A
SECUENCIACIÓN DEL ADN
Los fragmentos de ADN obtenidos se separan por tamaños con electroforesis
Cada una de las cuatro muestras se insertan en un carril diferente del gel
Terminada la electroforesis se ponen en contacto con una película fotográfica
SECUENCIACIÓN DEL ADN: Método Automático
Marcaje de ddNTP con fluorescentes distintos pudiéndose leer al mismo tiempo los
ADNs de las cuatro mezclas

Comparativa de los dos métodos


16 de Febrero de 2001
Celera Genomics
Proyecto genoma humano
La secuencia del genoma es un atajo valioso: ayuda a los
científicos a encontrar los genes más fácil y rápidamente
y sienta las bases para averiguar la función de los genes
identificados

Beneficios médicos tras el conocimiento de la


estructura de cada gen humano

1. Diagnóstico en individuos con riesgo de ser


portadores del gen de alguna enfermedad

2. Marco de trabajo para el desarrollo de


nuevas terapias, además de nuevas
estrategias para la terapia génica

15 de Febrero de 2001
Consorcio público internacional
INGENIERÍA GENÉTICA y MEDICINA
APLICACIONES
Obtención de productos farmacéuticos Medicina forense
Insulina Marcadores genéticos
Interferón Huella genética
Factor VIII
Vacunas
Terapia génica
Diagnóstico de enfermedades
Inserción de genes funcionales para
Detección en personas o fetos corregir un defecto genético
enfermedades hereditarias por
técnicas de ADN recombinante En células En células
germinales somáticas
APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGÍA

VERDE – Aplicaciones agrícolas y ganaderas


• Desarrollo de cereales resistentes a plagas
• Desarrollo de animales resistentes a enfermedades
• Desarrollo de plantas que expresen pesticidas

AZUL – Aplicaciones acuáticas y marinas


• Uso de plantas y productos marinos para obtener nuevos fármacos
• Restauración y preservación de especies acuáticas
• Uso de genes de organismos acuáticos para obtener resistencias

BLANCA – Aplicaciones a procesos industriales


• Producción de nuevos compuestos
• Desarrollo de combustibles nuevos
• Uso de bacterias para eliminar vertidos de petróleo
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