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ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE…
CARRERA DE….

GUIA DE LABORATORIO DE…(asignatura)

PRACTICA No. 2 CONTEO DE MICROORGANISMOS

1. DATOS GENERALES:
NOMBRES: CODIGOS:
…………………………….. ……………
…………………………….. ……………
…………………………….. ……………

GRUPO No…….
FECHA DE REALIZACION FECHA DE ENTREGA

aa/mm/dd aa/mm/dd
2. OBJETIVOS:
2.1 GENERAL:
2.2 ESPECÍFICOS
(Describe en forma estructurada el o los objetivos(s) que persigue la práctica que responda
a ¿Qué se hace?; ¿Cómo se hace?; ¿Para qué se hace? Y ¿su grado de calidad?)

3. METODOLOGIA: (Diagrama de flujo del procedimiento a realizar)


 Desinfectar el área de trabajo, con la finalidad de no agregar carga bacteriana
procedente del ambiente o de nosotros mismos, esto reduce el error que se comete al
realizar esta técnica. Así solo contabilizaremos los microrganismos existentes en la
muestra. La desinfección debe hacerse con un mechero y alcohol yodado.
 Preparar una suspensión al 10 % de suelo en 50 ml. de agua destilada. La tierra
debe estar seca y recién recogida.
 Mantener en agitación la suspensión anterior durante 30 a 60 minutos. Puede
utilizarse agitación manual o magnética.
 Preparar diluciones seriadas de 1/10, 1/ 100, 1/ 1.000, 1/ 10.000 y 1/ 100.000 de
la suspensión anterior respetando un volumen final de 5 ml.
 Se rotulan 5 placas (una para cada dilución) sembrar 0.1 ml (con pipeta limpia
en cada una) de cada dilución en una placa de Petri con Agar Nutritivo y con
ayuda de una asa de Digralski extenderlo por toda la placa.
 Incubar a 37 °C durante 2- 3 días en estufa o incubadora. Observar las placas en
busca de efectos de inhibición.
 Realizar el recuento de los microorganismos presentes en la muestra del suelo.
Para realizar el contaje se escogen las placas que muestren entre 30 y 300
colonias. Para visualizar mejor es conveniente ubicar la placa sobre una caja con
tapa de vidrio y luz, dividiendo la superficie total de la placa en sectores
cuadriculados. Dar el resultado en ufc/g (no en bacterias por gramo):
Ufc/g = N° de colonias en placa (entre 30 y 300) x inverso de la dilución x 10

4. MATERIALES, SUSTANCIAS, REACTIVOS Y EQUIPOS:


4.1. MATERIALES:
 6 pipetas 10 ml
 6 tubos de ensayo
 Gradilla de tubos
 Cajas Petri
 Mechero
 Asa de Digralski
 5 pipetas de 1 ml

4.2. SUSTANCIAS:
 Alcohol
4.3. REACTIVOS:
 Agar nutritivo
4.4. EQUIPOS:
 Estufa
5. MARCO TEORICO Y REFERENCIAL:
5.1. Marco Teórico:
5.2. Marco Referencial
6. CÁLCULOS Y RESULTADOS
7. DISCUSION
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
8.1. Conclusiones
8.2. Recomendaciones
9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
9.1. Bibliografia
9.2. Citas
9.3. Webgrafia
10. ANEXOS
11. CUESTIONARIO
 ¿Cuál es el fundamento del método de recuento en placa?
 ¿Por qué, para el recuento de bacterias viables, se escogen las placas que han
desarrollado entre 30 y 300 UFC?
 ¿Por qué se utiliza el término “unidades formadoras de colonias”?
 ¿Qué permite determinar el estudio cuantitativo de bacterias?
 Mencione las limitaciones del método del recuento de colonias en placa.
12. RESUMEN (150 PALABRAS)
13. DESCRIPTORES