28 DE MARZO DE 2018

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN EN EL
LABORATORIO
ESTERILIZACIÓN Y MEDIOS DE CULTIVO

DOCENTES:
STELLA, LAURA INES
GARCIA, ROCIO

ALUMNO: NOLTE RAFAEL

COMISIÓN 5
UTN FRRe
1 Biotecnología Métodos de Esterilización en el Laboratorio – Medios de Cultivo UTN FRRe

Objetivos
 Adquirir destrezas en la utilización de equipos para esterilización, como así también de
métodos de esterilización y desinfección.
 Asimilar conocimientos acerca de los distintos medios de cultivo a trabajar, incluyendo su
preparación y su uso, como así también la clase de microorganismo propensa a
desarrollarse en dicho medio.
 Desarrollar las técnicas relevantes para llevar a cabo la inoculación de muestras en los
medios de cultivo preparados.

Introducción
La esterilización tiene por fin la eliminación o destrucción de toda forma de microorganismos vivos
en un ambiente determinado. Según sea el medio por el cual se lleve a cabo esta operación pueden
distinguirse métodos físicos y químicos. Es de gran importancia llevar a cabo una correcta
esterilización tanto del material a emplearse (ansas, placas de Petri, medio de cultivo) como así
también del área de trabajo durante la inoculación microorganismos provenientes de una muestra
en el medio de cultivo.

Los medios de cultivos son mezclas de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y bajo
condiciones físicas apropiadas, proporcionan a los microorganismos de una fuente de energía que
les permite crecer y desarrollarse. Su importancia es tal que han de tenerse los recaudos necesarios
durante su preparación y esterilización, a modo de eliminar la posibilidad de que otros
microorganismos se desarrollen y compitan por los nutrientes que el medio brinda.

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2 Biotecnología Métodos de Esterilización en el Laboratorio – Medios de Cultivo UTN FRRe

Materiales
 Placas de Petri (3 por comisión)
 Erlenmeyer 100ml (1)
 Probeta 100ml (1)
 Pisetas
 Varilla de vidrio (1)
 Espátulas (1)
 Soporte trípode (1)
 Tela de amianto
 Mechero
 Papel de diario
 Algodón
 Rotulador
 Paño limpiador
 Encendedor

Equipos e Instrumentos
 pH-metro
 Balanza granataria
 Autoclave
 Estufa

Reactivos y/o sustancias

 Agua destilada
 Medio de cultivo 1: “Sabouraud Glucosado Agar”.
 Medio de cultivo 2: “Levine E. M. Agar (con Eosina y Azul de Metileno)”.
 Detergente

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3 Biotecnología Métodos de Esterilización en el Laboratorio – Medios de Cultivo UTN FRRe

Desarrollo
La experiencia dio inicio con las tareas de limpieza, desinfección y esterilización del material de
vidrio (placas de Petri), mientras en paralelo parte de la comisión se dedicó a preparar el medio de
cultivo asignado (Sabouraud Glucosado Agar).

En primera instancia, se debe destacar el hecho de que no se realizó la desinfección de las mesadas
con solución de hipoclorito de sodio al 5% como estaba estipulado, debido a un trabajo descuidado
por parte de todas las comisiones. Pese a lo anterior, se continuó con la limpieza de las placas de
Petri: primero con agua corriente y detergente, y luego repetidos enjuagues empleando agua
destilada. Para acelerar el proceso de secado las placas fueron colocadas en estufa durante 30-40
minutos a una temperatura entre 100-105 0C. Desde este punto, las placas fueron preparadas para
su esterilización, lo cual consistió en envolver a las mismas con papel de diario de forma cuidadosa
y llevarlas a la estufa durante una hora a 160 0C aproximadamente.

Mientras parte de la comisión trabajaba con las placas, el resto de los integrantes preparo el medio
de cultivo nº1 (Sabouraud Glucosado Agar) según las indicaciones del fabricante. Para la experiencia
se prepararon 100ml de solución del medio de cultivo para distribuir en tres placas de Petri (de 15
a 20ml por placa), a modo de contemplar cualquier adversidad y poder resolverla teniendo material
sobrante preparado. Por su parte, la otra comisión realizo las mismas tareas con la única diferencia
de preparar el medio de cultivo nº2 (Levine E. M. Agar) según sus indicaciones señaladas en el
envase.

El medio de cultivo en su presentación es un sólido polvoriento deshidratado, de modo que su

preparación consistió en pesar la masa indicada por el fabricante a modo de, tras agregársele agua,
obtener 100ml de solución. La suspensión fue preparada en un Erlenmeyer donde se la dejo reposar
unos minutos. Esto se mezcló y se realizó la medida del pH inicial para verificar que el pH de la
solución preparada se ajuste al indicado en el producto. Durante la preparación del medio de cultivo,
parte de la comisión monto el equipamiento para calentar a baño María la solución del medio de
cultivo, como estaba indicado.

Dispuesto el recipiente con agua sobre la tela de amianto y el trípode, se encendió un mechero
colocándolo debajo para calentar el agua. El Erlenmeyer conteniendo el medio de cultivo se colocó
dentro del recipiente con agua para calentarlo y mezclarlo hasta que el contenido permitió ver la
varilla de vidrio con cual se realizaba el mezclado. Posteriormente se fabricó un tapón de algodón y
se lo coloco en el cuello del Erlenmeyer cuidando que no este flojo, asegurándolo con un capuchón
de papel. A esto se lo rotulo adecuadamente y se lo coloco en autoclave, a 121 0C y 1atm de
sobrepresión para su esterilización.

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4 Biotecnología Métodos de Esterilización en el Laboratorio – Medios de Cultivo UTN FRRe

Cálculos
En las indicaciones del medio de cultivo se señalaba que para preparar una solución de 1 litro se
requerían 65g de sólido, por lo cual para preparar 100ml de solución se utilizaron 6,5g de sólido,
pesados en balanza granataria.
65𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑙𝑡𝑖𝑣𝑜 𝑠𝑜𝑙𝑖𝑑𝑜
∗ 100𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 = 𝟔, 𝟓𝒈 𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐 𝒅𝒆 𝒄𝒖𝒍𝒕𝒊𝒗𝒐 𝒔𝒐𝒍𝒊𝒅𝒐
1000𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛