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Rev. Int. Contam. Ambie. 29 (Sup.

2) 9-15, 2013

LIPASAS INDUCIDAS POR HIDROCARBUROS DEL PETRÓLEO

Elsa CERVANTES-GONZÁLEZ*, Liliana Marlen SALAZAR-QUINTANILLA y
Paola Elizabeth DIAZ-FLORES

Universidad Autónoma de San Luis Potosí, Coordinación Académica Región Altiplano, Carretera a Cedral km
5+600, San José de las Trojes, 78700 Matehuala, San Luis Potosí, México
* Autora responsable: elsa.cervantes@uaslp.mx

(Recibido mayo 2011, aceptado mayo 2012)

Palabras clave: lipasas, queroseno, Pseudomonas

RESUMEN

La inducción de las lipasas se evaluó en tres bacterias hidrocarbonoclastas (Stenotropho-
monas sp., Bacillus sp. y Pseudomonas sp.) mediante el uso de cinco diferentes grupos
de hidrocarburos (alcanos, gasolina, diésel, queroseno y petróleo ligero). El monitoreo
de las lipasas se llevó a cabo durante 21 días en cultivos líquidos, conteniendo 24 000
mg del hidrocarburo/L como única fuente de carbono y energía y el inóculo de la cepa
específica. Los resultados mostraron que Bacillus sp. aunque presentó crecimiento en
cuatro de los cinco tipos de hidrocarburos utilizados, en ningún caso expresó actividad
de lipasa. En tanto, Stenotrophomonas sp. y Pseudomonas sp. expresaron su capacidad
de lipasa en presencia de queroseno y petróleo y adicionalmente Pseudomonas en
presencia de n-alcanos y diésel. La actividad expresada se presentó en diferente grado,
es decir la actividad enzimática fue diferente dependiendo de la fuente de carbono
(queroseno>diésel>petróleo>n-alcanos), la expresión de la enzima fue nula utilizando
gasolina como fuente de carbono, debido a que las cepas no la degradaron ya que ningu-
na de ellas presentó crecimiento. La concentración de la fuente carbono también fue un
factor más para la expresión de esta enzima, mostrando que Pseudomonas sp. presentó
una mayor actividad de lipasa a 90 0000 mg queroseno/L que a 10 000 mg queroseno/L.

Key words: lipases, kerosene, Pseudomonas

ABSTRACT

The induction of lipases was evaluated in three hydrocarbonoclastic bacteria (Steno-
trophomonas sp., Bacillus sp. and Pseudomonas sp.) by means of five different groups
of hydrocarbons (alkenes, gasoline, diesel, kerosene and light petroleum). The lipase
monitoring was carried out during 21 days in liquid cultures, containing 24 000 mg of
the hydrocarbon/L as the only source of carbon and energy. The results showed that
Bacillus sp. presented growth in four of five types of hydrocarbons, but not expressed
lipase. Stenotrophomonas sp. and Pseudomonas sp. expressed its capacity of lipase
in presence of kerosene and petroleum, and additionally Pseudomonas sp. has lipase
activity in presence of n-alkenes and diesel. The enzymatic activity was different de-
pending on the carbon source (kerosene> diesel> petroleum> n-alkenes), the gasoline
was not degraded by strains because any of them presented growth. The hydrocarbon

Se ha reconocido que son enzimas altamente estables jos. en relación con De tal manera. alimentaria biodegradación de hidrocarburos. pH y solventes 3) los que están formados por tres o más tipos de orgánicos. mos y dentro del mismo organismo. Su función biológica es incierta en muchos y queroseno debido a una mutación por radiación casos. Colette et al. Sin interés debido a su potencial biotecnológico. de a las lipasas con hidrocarburos del tipo alcanos. tables frente a diferentes detergentes. aunque parece que están relacionadas con la ultravioleta. llevan a cabo reacciones laterales o gene. Se drofóbicos. 2001). se han estudiado ampliamente debido biológico que son solubles en solventes orgánicos. llus niger expresadas en medio con parafinas. concentration was another factor for the expression of the enzyme. Las lipasas bacterianas son también es- moléculas diferentes.10 E. Sin embargo. por lo que teóricamente Las lipasas bacterianas han sido motivo de gran pueden ser hidrolizados por enzimas lipolíticas. lipasas con los hidrocarburos del petróleo. bicapas o conocen más 70 lipasas que han sido secuenciadas micelas. de las mismas enzimas (Rosenau y Jaeger 2000). no y en la industria dedicada a la producción de deter. 1999). (2001) publican diante la adición de una molécula de agua. regio o estereoespecífica. dentro los procesos de biorremediación de hidrocar- . También han sido aisladas en la degradación capaz de degradar hidrocarburos o si la expresión de hidrocarburos del petróleo (Margesin et al. (1978) son los primeros en relacionar que realizan diferentes reacciones de hidrólisis. requieren cofactores (Gupta et al. que es de sumo interés conocer diferentes procesos como el aprovechamiento de el efecto de diversos tipos de hidrocarburos sobre la fuentes de carbono y la modificación o el reciclaje expresión de la enzima para determinar su función de las membranas celulares (Schmid et al. 2) lípidos comple. únicamente Las lipasas son éster hidrolasas carboxílicas que como biomarcador de la degradación (Margesin et rompen los enlaces éster de los acilglicéridos me. la mayoría de ellas pertenecientes 1) simples. el plegamiento y la secreción lugar a gotas oleosas en el caso de los lípidos hi. capaces de degradar alcanos y fenol. 2004). 2003). y en un amplio rango de temperaturas. al interés biotecnológico. pero no se destaca el papel de las lipasas bioconversión de lípidos entre diferentes organis. que son los que contienen uno o dos a la familia de las α/β hidrolasas (Jaeger et al. farmacéutica. 2003). llevando a la clonación pero que son insolubles o levemente solubles en y caracterización de muchas de estas enzimas. dando el incremento en la producción de lipasas de Aspergi- lugar a ácidos grasos libres y glicerol (Gupta et al. o me. queda claro si la expresión ocurre en toda la biota gentes. estas enzimas) y agentes químicos y. Geraldine-Sandana et al. Incluso se ha evaluado la actividad pesar de que los hidrocarburos están considerados enzimática en bacterias y levaduras extremófilas como lípidos simples. o dando lugar a monocapas. publicando Así mismo. grupo de los lípidos simples. pos- síntesis o de intercambio de grupos. numerosas veces teriormente Margesin et al. las cuales catalizan la hidrólisis de cadenas largas de Los hidrocarburos están clasificados dentro del acilglicéridos (≥C10) (Verger 1997). algunos pueden activar o inhibir la actividad de diante soluciones alcalinas (saponificación). se han elucidado lípidos se clasifican de forma general en tres tipos: ciertas estructuras. Así también. showing that Pseudomonas sp. Por tanto. en general. lo que las hace muy atractivas en ser utilizada como una herramienta indicadora de la las industrias agroquímica. se verifica en la degradación de cualquier tipo de pero no se conocen los mecanismos involucrados a hidrocarburo. así agua. Los lípidos se definen como sustancias de origen Las lipasas. INTRODUCCIÓN así como en la destoxificación de biocidas y agentes contaminantes (Margesin et al. no diante la actividad de las enzimas llamadas lipasas. en ambientes acuosos tienden a como al estudio de los mecanismos moleculares que asociarse mediante fuerzas no covalentes dando controlan la expresión. se cuenta con escasa información al respec- son activas en un amplio intervalo de sustratos en los to. diésel 2004). que la actividad de la lipasa evaluada en suelo puede ran subproductos. los que contienen glúcidos en su estructura. iones (aunque Estos compuestos pueden ser hidrolizados me. 1999). 2003). tipos de moléculas diferentes. presented a best lipase activity at 90 0000 mg kerosene/L that in the solution of 10 000 mg kerosene/L. Los (Jaeger et al. (1999) relacionan a las de forma altamente quimio. en el proceso de degradación. en el caso de los lípidos anfipáticos. pues embargo. Cervantes-González et al. al.

pH 6. de cultivo. de Enzimas Microbianas de la Escuela Nacional de La reacción se detuvo introduciendo el tubo en un Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico Nacio. tando volúmenes con solución reguladora 100 mM dio de cultivo a una concentración de 24 000 mg/L. tomando 0.. baño de hielo durante 10 min. 280 ºC. trofotométricamente a 400 nm. y a 28 ºC y 180 rpm. [100 mM p-nitrofenol butirato (pNPB) diluido en y Pseudomonas sp. diésel. cuenta viable y realizar el análisis de hidrocarburos Se prepararon matraces Erlenmeyer de 125 mL residuales utilizando cromatografía de gases acoplada conteniendo 25 mL de medio mineral adicionados . 240-280 ºC a 7 ºC/min. Los matraces se incubaron 80-240 ºC a 15 ºC/min. 30. KH2PO4/NaOH a pH 7. gasolina o petróleo a una HP 6890/5973 utilizando una columna capilar HP-5 concentración de 24 000 mg/L como única fuente de ms. cada cuatro días. 0. diésel.0 mL petróleo) utilizados como fuente de carbono fueron de solución reguladora de pH conteniendo 100 mM proporcionados por el Instituto Mexicano del Petró. utilizando 25 mL de medio mineral. abiótica.8. pH 7. 10. queroseno. Para la cuantificación MATERIALES Y MÉTODOS de la enzima. Las bacterias hidro. 0. (2002) con algunas modificaciones. pNP se utilizaron concentraciones de 0 (lanco). En promedio 3 min a 280 ºC. o Stenotrophomonas sp. carbonoclastas utilizando una mezcla de n-alcanos. el horno se programó a 80 ºC durante 1 min. 20. (g/L): 1 KNO3. Se utilizó helio como gas acarreador a un flujo carbono y energía y fueron inoculados con 0. 2008). el contenido se identificadas (Cervantes et al. Efecto de la concentración de queroseno en la ex- ma.) fueron previamente aisladas e 2-propanol y almacenado a –20 ºC]. Para evaluar la pérdida evaluar la actividad de lipasa en tres bacterias hidro. 40 y 50 μg pNP/ mL.1 mL de 0. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue a un espectrómetro de masas.9 mL/min.0 mL de extracto libre de células y se colocó Los hidrocarburos (diésel. queroseno. la muestra fue Preparación del inóculo diluida utilizando el regulador.2. gasolina y en un tubo de vidrio al que se le adicionó 1. el tubo se dejó en prein- leo.02 FeCl3. LIPASAS INDUCIDAS POR HIDROCARBUROS DEL PETRÓLEO 11 buros. queroseno.2.. 0.1 mL del cultivo La extracción de los hidrocarburos residuales del y sembrándolo en medio fresco con el objetivo de queroseno se realizó utilizando el total del medio contar con células jóvenes. La temperatura del inyector fue de de cultivo fresco de Bacillus sp. posteriormente la nal y fue utilizada como testigo para confirmar que liberación del p-nitrofenol (pNP) fue medido espec- las cepas utilizadas fueran lipasa positivas. Pseudomonas sp. 25. se incluyeron testigos sin inocular. La evaluación de lipasa se realizó de acuerdo con la técnica reportada por Margesin et al. La cepa Serra.8. el residuo obtenido se de lipasas resuspendió en 5 mL de diclorometano (Burdick y En matraces Erlenmeyer de 125 mL conteniendo Jackson) y 1 L se inyectó en un cromatógrafo de 25 mL de medio mineral líquido. 3 mL del medio de cultivo se centri- fugaron en tubos de polipropileno a 8000 rpm. 35. La fase orgánica se colectó Efecto de la fuente de carbono en la expresión y se evaporó a sequedad.1 CaCl2 y 15. se adicionaron n. gasolina y petróleo como únicas Evaluación de la actividad lipasa fuentes de carbono. durante 21 días. se Sustrato y microorganismos tomó 1. 5. evaluar el crecimiento de la bacteria mediante presión de las lipasas de Pseudomonas sp. dos matraces de cada experimento se retiraron para cuantificar la expresión de la enzi. mediante una extracción líquido-líquido con diclorometano. Stenotrophomonas sp. mezcló perfectamente y el tubo fue incubado en un tia marsecens fue proporcionada por el Laboratorio baño de agua a 37 ºC durante 15 minutos exactos. la mezcla de n-alcanos (C10-C28) es un estándar cubación en un baño de agua durante 10 min a 37 ºC. gases acoplado a un espectrómetro de masas marca alcanos. La actividad de lipasa fue Finalmente el medio de cultivo se inoculó con una expresada como μg pNP/ mL cultivo durante 15 min. Los hidrocarburos previamente partir de una solución patrón de 50 μg pNP/mL ajus- esterilizados por tindalización se adicionaron al me. obtenidas a 1 K2HPO4. Cuando los valores de absorbancia fueron mayores a 1. UST rango diésel (Supelco). KH2PO4/NaOH. asada del microorganismo a evaluar y los cultivos se incubaron a 28 ºC y 180 rpm realizando un pase cada Extracción y análisis de hidrocarburos residuales 24 h durante tres días.2 MgSO4. Posteriormente se adicionaron 20 μL del sustrato carbonoclastas (Bacillus sp. El inóculo se preparó en matraces Erlenmeyer Para la preparación de la curva de calibración de de 125 mL.

28 ºC y 180 rpm durante 120 h de incubación indujeron la expresión de la enzima en esta bacteria. donde se observa la remoción de comenzó a disminuir. pero el sustrato no indujo la expresión de la enzima. provocó una actividad de 3.5 min) fue de 22. La figura 3a corresponde al contenido con las diferentes fuentes de carbono. que también fue lipolítica 6. La fase expo. El crecimiento no presentó hidrocarburos de elevado peso molecular (C20.1 mL de un cultivo fresco de Pseudomonas sp.7 μg pNP/mL a los nueve Pseudomonas sp.C25) diferencia significativa al utilizar queroseno.5 × 105 unidades (UFC formadoras días de incubación). muestra la cinética de crecimiento hidrocarburos. allí se observa que la actividad enzimática de- sp. drocarburos utilizados (queroseno..5 de expresar lipasa fue Bacillus sp. 1a). 2 1 0 RESULTADOS 0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 10 La primera bacteria en la que se probó la capacidad b 9. La actividad de lipasa tercer lugar. 5 Queroseno Actividad (µg pnp/ml) el cual fue preparado como se ya se mencionó. 1. no expresó la actividad de lipasa. Sin embargo. se encontró de colonias)/mL a 1. diésel. al utilizar estos dos hidrocarburos. en segundo lugar. en donde fuentes de carbono se encuentra descrita en la figura puede verificarse el crecimiento de Stenotrophomonas 2b. en .5 Queroseno no mostrados). mientras que la actividad expresada en el medio con diésel (19 al utilizar queroseno. Stenotrophomonas sp. días de incubación. queroseno y petróleo como únicas fuentes de 7. Cervantes-González et al.5 al utilizar la mantequilla. se encontró la expresión en el medio alcanzada durante este período fue de 2. la mezcla de n-alcanos tivamente (Fig. n-alcanos y El perfil cromatográfico del queroseno se muestra petróleo) y además en los cuatro se expresó la lipasa. Curvas de crecimiento y actividad de lipasa de Stenotro- petróleo fueron las únicas dos fuentes de carbono que phomonas sp. de queroseno a diferentes concentraciones (10 000. en petróleo. 70 000 y 90 000 mg/L) e inoculados 6 con 0. Por otro 7 lado. Los resultados se muestran en la figura 1. el crecimiento fue de 3.. El grupo de n-alcanos permitió el Tiempo (h) crecimiento de Stenotrophomonas sp. pendió del tipo de hidrocarburo utilizado. y por ultimo..5 μg conteniendo petróleo (11 μg pNP/mL a los tres días pNP/mL × 15 min para petróleo y queroseno. 50 000.6 × 108 UFC/mL (Fig. y aunque creció utilizando n-alcanos. La mayor nencial se presentó durante las primeras 36 h al utilizar actividad de lipasa se obtuvo al utilizar queroseno ambas fuentes de carbono. de incubación).5 lo que no creció en esos medios y por lo tanto tampoco 5 0 12 24 36 48 60 72 84 96 108 120 indujo a la enzima. el crecimiento como fuente de carbono (60 μg pNP/mL a los nueve se incrementó de 3. entre cada 12 y 24 h se retiraron dos matraces 3 Petróleo para evaluar la actividad enzimática (de lipasa) uti- lizando la técnica antes descrita.5 carbono. cultivada en queroseno y petróleo a 24 000 mg/L . en donde se observa su composición de La figura 2a. que mostró ser Petróleo 9 lipolítica al utilizar mantequilla como sustrato (datos 8.12 E. Los cultivos fueron incubados a 28 ºC y 180 rpm durante 4 276 h. diésel así como de bajo peso molecular (C13-C16). respec. Log(UFC/ml) 8 diésel. 1b). en a 3.30%. en ella puede de hidrocarburos tanto de bajo como de alto peso observarse que en todos los casos el crecimiento molecular presentes antes del tratamiento (C13-C30) exponencial se presentó durante los primeros tres y la figura 3b muestra los hidrocarburos residuales días de incubación y posteriormente la población del queroseno. no presentó capacidad para 6 utilizar diésel o gasolina como fuente de carbono por 5. El queroseno y el Fig.1 × 105 μg pNP/mL a los quince días de incubación). Al se vio considerablemente disminuido.6 y 4. Cabe y petróleo como fuentes de carbono. en la figura 3. 7 a 30 000. creció en cuatro de los cinco hi. mencionar que existió preferencia de degradación el crecimiento con base en la utilización de alcanos de algunos compuestos de mayor peso molecular. respecto.5 × 109 UFC/mL. se obtuvo que el contenido residual de C18 La expresión de lipasa al utilizar las diferentes (tiempo de retención 19.

cultivada en queroseno. B) Des- pués de 21 dias de incubación . n. 2. 8 En la figura 4 se muestran los resultados. pero no requiere a las lipasas para monas sp. Perfiles cromatográficos del queroseno utilizado como fuente de carbono por Pseudomonas sp. y se utilizó a diferentes con- centraciones para evaluar su efecto sobre la enzima. al utilizar la mezcla de n-alcanos. mientras que los hidrocarburos con 12 Petróleo Diesel 19 átomos de carbono (tiempo de retención 20. diesel. indica que la bacteria tiene la maqui- Tiempo (días) naria necesaria para utilizar estos hidrocarburos como Fig. Lo mismo ocurrió con Stenotrophomonas petróleo a 24 000 mg/L . 3. Curvas de crecimiento y actividad de lipasa de Pseudo.alcanos y realizarlo. 28 ºC y 180 rpm durante 120 h de incubación sp. LIPASAS INDUCIDAS POR HIDROCARBUROS DEL PETRÓLEO 13 13 tanto para C17 el porcentaje remanente fue un poco Queroseno a menos del 20%. fuente de carbono. 70 b 60 Actividad (µg pNP/ml) 50 Queroseno DISCUSIÓN 40 Las lipasas son enzimas extracelulares inducibles. a 24 000 mg/L .. A) tiempo inicial. 28 ºC y 180 rpm. Sin embargo.6 min) 11 se encontraron solamente en un 10% en el remanente. que creció en los medios conteniendo 0 n-alcanos petróleo. De tal forma que el caso 10 de Bacillus sp. diésel. Log(UFC/ml) 10 El queroseno fue el mejor inductor de las lipasas n-alcanos 9 de Pseudomonas sp. 20 a 15 Abundancia (×105) 10 5 0 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 2 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 5 b 4 Abundancia (×105) 3 2 1 0 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 2 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Tiempo de retención (min) Fig. 30 es decir que se expresan únicamente cuando el sustra- 20 Diesel to se encuentra presente y la célula las requiere para Petróleo poder utilizar dicho sustrato. el análisis 7 estadístico mostró que hubo diferencia significativa entre la expresión de la enzima y las diferentes con- 6 0 3 6 9 12' 15 18 21 centraciones de queroseno utilizadas con excepción de las concentraciones de 70 000 y 90 000 μg pNP/mL. queroseno y n-alcanos y no expresó 0 3 6 9 12' 15 18 21 actividad lipasa.

2003). y petróleo. expresada con diferentes hidrocarburos. es una fracción que destila requiere a la enzima para hacer uso de la fuente de a los 300 ºC y está constituida por compuestos aro- carbono y crecer. la más alta actividad de la enzima se obtuvo con tigación se observa que la enzima lipasa se expresa los compuestos de alto peso molecular y no lineales inmediatamente al comienzo de la degradación del (queroseno). cultivada a dife. Fig. lo que sugiere el uso de la enzima en la bio- 80 degradación de la fuente de carbono. que. con la mayor actividad se correlacionó directamente El efecto de la concentración de sustrato sobre (P≈0. constituida en un 99% por Tiempo (días) parafinas e isoparafinas de elevado peso molecular. que es una fracción obtenida 0 de la refinación del petróleo a una temperatura 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 aproximada de 200 ºC. con la segunda más de crecimiento (P=0-987). se expresaron con una mayor actividad 10 al utilizar queroseno. Sin embargo. es vidad de la enzima se presentó en el siguiente orden: estable en solventes como n-hexano. Según los resultados la expresión de la El diésel. que fue el hidrocarburo que soportó el enzima ocurre en el momento de la fase exponencial crecimiento de Pseudomonas sp. Al respecto. lo que sugiere que la célula alta actividad de lipasa. queroseno>diésel>petróleo>n-alcanos. se tiene hexadecano en el medio de cultivo a una mas de degradación pueden existir microorganismos concentración del 10%.14 E. que la lipasa de la cepa S5 de Pseudomonas sp. Por otro lado. tolueno y 1-octanol (Baharum et al. 4. desfasada con respecto a la degradación. conjuntamente mantuvieron la fase estacionaria 40 10000 mg queroseno/l de las células. 2b). no se puede hablar de que (2007) reportaron el incremento de hasta 10 veces la la lipasa sea la única herramienta para monitorear la actividad de lipasa de Burkholderia glumae cuando biodegradación de hidrocarburos porque en los siste. La tipo hidrolasas. pues de fueron preferentemente los de mayor peso molecular ser así la actividad enzimática tendría que comenzar (C19. La figura domonas pseudomallei 12Sm es productora de lipasa 2b muestra la actividad de lipasa de Pseudomonas durante su crecimiento en n-hexadecano como única sp. En este caso. Es precipitado sugerir que las lipasas de esta bacteria rentes concentraciones de queroseno a 28 ºC y 180 rpm durante 12 días de incubación tengan afinidad por este tipo de compuestos ya que intervienen un sin número de enzimas adicionales. Lo cual también se encontró que la expresión de la enzima indica alguna relación entre lipasas e hidrocarburos. su alta actividad expresa una gran co- expresó actividad de lipasa en presencia de queroseno rrespondencia con este tipo de compuestos. 30 De acuerdo con los resultados. sugiriendo su actuación en la degradación 50 30000 mg queroseno/l del hidrocarburo y sobre los compuestos liberados. La siguiente fuente de que los productos liberados de la biodegradación de carbono fue el petróleo ligero constituido por com- los hidrocarburos son los sustratos para enzimas del puestos del tipo alifáticos y algunos aromáticos. Margesin et al. liberados. Stenotrophomonas sp. La relación entre lipasas e hidrocarburos no está ta que hubiese en el medio productos de degradación bien definida y la información es escasa. Actividad de lipasa en Pseudomonas sp. al contrario de Bacillus sp. las lipasas de Pseu- 20 domonas sp. donde fuente de carbono (Kanwar y Goswami 2002) o bien puede verse claramente que la magnitud de la acti. en la figura 3 se muestra que sustrato. 70 90000 mg queroseno/l 70000 mg queroseno/l la actividad de la enzima se mantuvo presente hasta Actividad (µg pNP/ml) 50000mg queroseno/l 60 los 21 días. 90 (Fig. Además. que soportó el crecimiento de por lo tanto la actividad de lipasa es una herramienta la bacteria con la más baja actividad de lipasa está útil para monitorear la biodegradación de hidrocar. También el tipo de hidrocarburo utilizado está También se tiene referencia de que la cepa Pseu- relacionado con la actividad de la enzima. ciclohexano. en la presente inves. parafinas y éteres.98) durante los primeros tres días de incubación la actividad de una enzima es uno de los parámetros con la fase exponencial de crecimiento de la bacteria importantes a evaluar debido a la posible inhibición . es decir la enzima participa sobre el sustrato los compuestos degradados del propio queroseno intacto y no únicamente sobre metabolitos.C27). Como puede observarse buros del petróleo. Bouke et al. con otra concentración. constituida por C10 a C28. es decir has. no se conoce como Bacillus sp. que degrada hidrocarburos pero no lo que ocurriría con otro tipo de hidrocarburo o bien expresa la enzima. (2007) mencionan máticos. sí Sin embargo. incluyendo esterasas y lipasas y que mezcla de n-alcanos. Posteriormente. Cervantes-González et al.

diferencia significativa entre las concentraciones de Colette B. 763-781.N. 24. 64. Isolation of a Pseudo- puede llegarse a conclusiones erróneas. Labbe´ D.. 3085-3092.. Rah.. Strain improvement of Aspergillus niger for efecto de inhibición por concentración de sustrato. 82. cual hace que pueda utilizarse a altas concentraciones. (2003). Appl. Microbiol.G. Microbiol. Biochimie. Con ello se puede especular que esta terial growth on alkanes... Oil-removal enhancement in media with kera. Verger R. y Witholt B. la cual using membrane-immobilised lipase. utilizar únicamente la actividad de lipasa como bio.G.. y Jaeger K.B. Environ. 3838-3844.A. 258-268. se monas lipase produced in pure hydrocarbon substrate sugiere que la lipasa tiene una participación directa and its application in the syntesis of isoamyl acetate en la biodegradación de los hidrocarburos. 133. Stegner U. (2007). three-dimensional utilizado.. 1023-1032.4). 47.. Schinner F. Rev.J. (2000). Hauer A. Organic crobial activity and community composition during solvent tolerant lipase by Pseudomonas sp. Hauer B. A colorimetric method for the ciamiento del Fondo de Apoyo a la Investigación determination of lipase activity in soil. Dijkstra B.. Appl. Biotechnol. Feller G. Mi- man M. está siendo estudiada. Bacterial lipases: an overview of production. y Tommassen J. Jaeger K. Cruz.T. Margesin R. . Margesin R.H. Rosenau F. Numbi R. Basri M. Ecol... of hydrocarbon concentration. Kiener M.E. Ann. 75-83. Anke B. 859-863.. Industrial biocatalysis today and Cervantes-González E. J.W. 10 000.A.. Dordick B.. W. La inducción o no inducción de las lipasas de. Shindler D. Bouke K. 15. Strain S5: bioremediation of diésel-oil-contaminated soil: effects stability of enzyme in organic solvent and physical fac. Environ.N. Sijher J.. y Kushner D. Gupta y Rathi O. (1997). Hammerle M. Pseudomonas: regulation of gene expression and Hexadecane and teen 80 stimulate lipase production mechanisms of secretion. tinous or chitinous wastes by hydrocarbon-degrading mática de Pseudomonas sp. mostrando Technol. in Burkholderia glumae by different mechanism..J. (2004). Annu.. 27-33. Además. 13. Wubbolts Environ. 181-186. y Rojas Avelizapa-L. 53. fertilizers. (1999). Microbiol.M. Rojas-Avelizapa N. Breuer M.S. y Rengarajulu P. Microbiol. Appl. 31. Stimulation of lipase production during bac- mg queroseno/L. 259-269. y Tscherko D. Koster Rosenau F. Gupta R. Razak C. 727-735.. Bacterial pendió de la bacteria y del tipo de hidrocarburo biocatalysts: molecular biology. y Rahman R. de tal manera que no es recomendable structures. 73.A. Trends Biotechnol. (1999)..E. lo enhanced lipase production. Characterization of hydrocarbon- degrading microbial populations in contaminated REFERENCIAS and pristine alpine soils. (C08-FAI-04-13. 69. no así entre 70 000 y 90 000 (1978).N. (2001).Z. tuvo una relación directa bacteria isolated from oil-polluted soils... Interfacial activation of lipases: facts (2008). purification and bio- CONCLUSIONES chemical properties. y El presente trabajo fue realizado gracias al finan. Baharum S. con la concentración del queroseno (Fig. Microbiol. Biotechnol. Greer C. Schmid A. Margesin R. enzima es bastante estable y por lo menos hasta una Geraldine-Sandana J. and incuba- tors affecting its production.. Microbiol.. (2002). Gen.K. Zimmerbauer y Schinner F. 29. Camarillo R. 30 0000 y 50 000. Tech. tion time.A.B. Appl. 53. Jaeger K.. 171-182. García-Mena J. y Goswami P. En esta investigación la actividad enzi.. y Reetz M. Technol.. Bacterial lipases from M. and artifacts. tomorrow.. Nature 409. Biotechnol.I. (2002). (2003).S.B. de San Luis Potosí. Microbiol. Soil lipase activity—a useful indicator of oil biodegrada- AGRADECIMIENTOS tion. (2007). 315-351.. marcador de biodegradación de hidrocarburos porque Kanwar L. 53. concentración de 90 000 mg queroseno/L no presenta (2001). and biotechnological applications of lipases. LIPASAS INDUCIDAS POR HIDROCARBUROS DEL PETRÓLEO 15 de la enzima. 32-38.L. y Whyte L. J. Hammerle M. Salleh A.17) de la Universidad Autónoma Lett. Bacteriol. 601-606. Microb.R.N. Margesin R.E. Schinner F. Enz.