OBJETIVOS:

1. Preaparar un frotis, para la correcta fijacion de una muestra y su posterior

analisis.
2. Emplear la tecnica de colorocion de Gram, para determinar si una bacteria es
Gram positiva o Gram negativa.
3. Observar en el microscopio las distintas formas de las bacterias presentes en
la muestra.
4. Contrastar lo observado en el microscopio con la teoria.

MATERIALES:

 Lamina portaobjetos
 Mechero y encendedor
 Haza bacteriologica
 Tubo de ensayo
 Agua destilada

REACTIVOS:

 Violeta de cristal
 Lugol
 Alcohol cetona
 Safranina

EQUIPO:

 Microscopio optico

PROCEDIMIENTO:

1. Frotis:

 Haciendo uso de un haza bacteriologica previamnete esterilizada en el fuego

del mechero, depositar la muestra contenida en un tubo de ensayo esterilizado
y sellado con algodón hacia la lamina portaobjetos.
 Realizar con el haza, un movimiento circular sobre la lamina portaobjetos para
extender la muestra.
 Sometiendo levemente y por periodos cortos de tiempo, la lamina portaobjetos
al fuego del mechero se lograra fijar la muestra, debido a que el agua es
evaporada por accion del calor.
 Finalmente se observa la lamina portaobjetos y se verifica que este
completamente seca.
 2. Coloracion

 Aplicar una gota de violeta de cristal sobre la muestra fijada y esperar durante
un minuto.
 Desechar y lavar con agua destilada.
 En seguida aplicar una gota de lugol, y espere entre uno a dos minutos.
 Desechar y lavar
 Aplique el alcohol cetona y espere durante 15 segundos.
 Desechar y lavar.
 Finalmente aplique la safranina y espere durante treinta segundos.
 Secar la lamina.

3. Observacion

 Haciendo uso del microscopio optico y agrupados de dos en dos se

procede a observar las distintas muestras, que habian sido preparadas
previamente.
 Para regular la nitidez de la imagen debemos mover los tornillos
macrometricos.
 Dibujar lo observado atraves del microscopio optico.

RESUMEN

En la practica ya realizada, se impartio al alumno los conocimientos basicos para la

adecuada preparacion de una muestra, coloracion y observacion de la misma,
haciendo uso del microscopio optico, tambien se pudo evidenciar las distaintas formas
y tamaños de microorganismos como las bacterias.

Para la preparacion de un frotis se emplea un haza batcteriologica, previamente

esterilizada (uso del mechero), se recojen las muestras de bacterias o
microorganismos y se depositan en la lamina portaobjetos, luego se extiende la
muestra haciendo un movimiento circular con el haza bactereologica y finalmente se
procede a fijar la muestra ya sea sometiendola levemente al fuego del mechero o
esperando que el agua evapore de manera natural.

Para una correcta distincion de los microorganismos es necesario el uso de metodos

de coloracion, ya que la principal dificultad para obsrvar microorganismos en el
microscopio optico es la falta de contraste entre la celula y el medio que los rodea.

En este caso el metodo de tincion que se utilizo fue el de la Coloracion de GRAM,

para ello se utilizo violeta de cristal,lugol, alcohol cetona y la safranina

Una vez lista las muestras se procede a observar en el microscopio. Para esta etapa
se utilizaron muestras ya preparadas anteriormente, lo que nos permitio poder
observar microrganismos(bacterias ) de distintas formas(cocos, bacilos,
estreptococos).