Medios de Cultivo

2010
ROJAS MORALES ALBERTO

Medios de Cultivo

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Laboratorio de Microbiología I
1651
Nombre del medio de cultivo
Eosina Azul de Metileno (EMB),
Agar
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Selectivo y diferencial
Fundamento del medio Utilidad Interpretación
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Por la combinación de estos dos Se emplea como medio Las bacterias lactosa-negativas y
colorantes y los dos hidratos de diferencial para el aislamiento y sacarosa negativas (Salmonella y
carbono se pueden distinguir diferenciación de bacterias Shigella) dan colonias incoloras,
algunos géneros. Por el efecto entéricas mientras que las lactosa y/o
de estos mismos colorantes sacarosa-positivas dan colonias
también queda inhibido el púrpura-violeta negruzco
crecimiento de la microflora con/sin un centro oscuro y
acompañante, sobre todo la quedan rodeadas de una zona
Gram-positiva. También es incolora.
posible la identificación de
Candida albicans.
3
 Microorganismos Tipo de Colonia
Verdosas con brillo metálico y centro 4
Escherichia coli ATCC 25922
negro azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas, rosa púrpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, pequeñas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras
Nombre del medio de cultivo
MacConkey, Agar (Ph. Eur.)
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Selectivo y diferencial
Fundamento del medio
Por la presencia de las sales biliares
y el cristal violeta se inhibe el
crecimiento de las bacterias Gram-
positivas.
Las bacterias lactosa-negativas dan
colonias incoloras.
Utilidad
Medio de cultivo utilizado en la
investigación de organismos
coliformes.
Interpretación
Por la presencia de la lactosa, las
bacterias capaces de fermentarla
acidifican el medio, cambiando el 5
color del rojo neutro y formando
colonias rojas o rosadas, pudiendo
presentar un halo turbio
correspondiente al precipitado biliar.
 6

Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Diminutas, incoloras,
Enterococcus faecalis ATCC 29212
opacas
7
Nombre del medio de cultivo
Endo, Base de Agar
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Ligeramente selectivo y
diferencial
Fundamento del medio
La presencia de Sodio Sulfito y
Pararrosanilina inhibe el
crecimiento de las bacterias
Gram-positivas. Además las
proporciones de ambos son
tales que la Pararrosanilina se
mantiene decolorada, de tal
manera que sólo con el
acetaldehído generado en la
fermentación de la lactosa se
consigue restablecer su color
original
Utilidad
Se emplea para la investigación
y recuento de Coliformes en
aguas, productos lácteos y
alimentos en general.
Interpretación
Así, las bacterias lactosa-
negativas permanecerán
incoloras, mientras que las 8
lactosa-positivas toman un color
rojo intenso que llega a colorear
el medio que las rodea. La
colonia de E. coli, además del
color rojo intenso, puede
presentar un brillo metálico.
9
Nombre del medio de cultivo
Sal y Manitol, Agar (Ph. Eur.)
Sinónimo
Chapman USP Medio.
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Selectivo y diferencial
Fundamento del medio
El efecto inhibidor se debe a la
alta concentración de Sodio
Cloruro del medio.
Utilidad
Se emplea para el aislamiento
selectivo y recuento de
Estafilococos patógenos en
productos lácteos, cárnicos,
marinos y
otros productos alimenticios.
También se emplea con el
mismo fin en productos
farmacéuticos y cosméticos.
Interpretación
Con la fermentación de la D(-)-
Manita se genera ácido que
ocasiona el viraje del rojo de 10
fenol al amarillo, permitiendo así
una mayor claridad en el
momento de establecer el
diagnóstico, ya que la mayoría
de los Estafilococos patógenos
fermentan este azúcar.
11
 Características de las
Microorganismos Crecimiento
colonias
Staphylococcus aureus ATCC
Excelente Amarilla 12
25923
Staphylococcus epidermidis
Bueno Roja
ATCC 14990
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC
Inhibido Inhibido
700603
Nombre del medio de cultivo
Estafilococos nº 110, Medio
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Selectivo y diferencial
Fundamento del medio
El carácter selectivo del medio
se debe a la alta concentración
de Sodio Cloruro que tiene y que
hace que la mayoría de los
microorganismos diferentes de
los Estafilococos queden
inhibidos. El resto de los
componentes asumen las
funciones nutricionales. Para
mejorar la inhibición de
microorganismos del género
Bacillus el medio se puede
suplementar con Azida Sódica a
razón de 65 mg/l de medio.
Utilidad
Se emplea en el aislamiento y
diferenciación de Estafilococos a
partir de alimentos y otros
materiales.
Interpretación
. Es un medio con un alto grado
de diferenciación, basado en:
crecimiento restringido a 13
microorganismos con elevada
tolerancia a la sal común,
capaces de degradar el manitol,
lisar la gelatina y formar
pigmento
 14

Microorganismo Pigmento Fermentación de Hidrólisis de Prueba de la

manitol la gelatina coagulasa
S. aureus ATCC 25923 + + + +
S. aureus ATCC 6538 + + + +
S. epidermidis ATCC - - + -
14990
Nombre del medio de cultivo
Salmonella y Shigella, Agar
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Selectivo y diferencial
Fundamento del medio Utilidad Interpretación
Por la presencia de las sales Se emplea para el aislamiento . Las bacterias que no fermentan
biliares, verde brillante y citrato de Salmonella y Shigella a partir la lactosa dan colonias incoloras,
se consigue la inhibición de las de muestras de productos mientras que las que 15
bacterias Gram-positivas. Por el alimenticios u otros que lafermentan hacen virar el rojo
mismo citrato conjuntamente pudieran neutro por la producción de
con el tiosulfato se frena contener estos gérmenes. Se ácido y quedan claramente
notablemente el desarrollo de trata de un medio altamente diferenciadas. También se
Coliformes y Proteus que selectivo. diferencian los microorganismos
podrían acabar cubriendo todo productores de Hidrógeno
el cultivo. La peptona y el Sulfuro que da un precipitado
extracto de carne son aportes negro de Hierro(II) Sulfuro, que
nutritivos suficientes para estas se observa en el centro de la
especies patógenas, aunque colonia
algunas Shigellas muy exigentes
se desarrollen lentamente.
16
 Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
17
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
Nombre del medio de cultivo
Sangre, Base de Agar
Clasificación de acuerdo a su Fundamento del medio
composición química
Diferencial y Dada la excelente base nutritiva,
permite el crecimiento de
enriquecido prácticamente todos los
microorganismos que pudieran
estar presentes.. Si se calienta se
obtiene el Agar Chocolate,
también muy empleado. Por la
adición de distintos antibióticos
se obtienen medios con
caracteres selectivos.
Utilidad Interpretación
Se emplea, añadiendo sangre o Si se añade sangre se pueden
sangre cocida, para el cultivo y determinar las distintas formas
aislamiento de microorganismos de hemólisis que pudieran tener 18
exigentes, sobre todo patógenos lugar
y para su determinación. Si no se
añade sangre, es adecuado
como base para la preparación
de otros medios
especiales.
 19

Microorganismos Crecimiento Hemólisis

E. coli ATCC 25922 Abundante --
S. aureus ATCC 25923 Abundante Beta
S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta
S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa
S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa
Nombre del medio de cultivo
Nutritivo, Agar
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Medio básico
Fundamento del medio
Se trata de un medio muy simple
que contiene los nutrientes
necesarios para el desarrollo de
la mayor parte de los
microorganismos no exigentes.
Utilidad Interpretación
20
Medio recomendado para el
cultivo de gran variedad de
bacterias y para el recuento de
organismos en aguas, heces y
otros materiales.
 21

Microorganismos Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071
Bueno-excelente
E. coli ATCC 25922 Bueno-excelente
S. aureus ATCC 25923 Bueno-excelente
B. cereus ATCC 10876 Bueno-excelente
E. faecalis ATCC 29212 Bueno-excelente
P. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente
Nombre del medio de cultivo
Cetrimida, Agar (Ph. Eur.)
Sinónimos
Medio N.
Clasificación de acuerdo a su
composición química
Selectivo
Fundamento del medio Utilidad Interpretación
La Cetrimida actúa como elemento inhibidor de una Medio selectivo para el Por la presencia de
amplia variedad de microorganismos, de tal manera que recuento de Magnesio Cloruro y
no inhibiendo el crecimiento de las Pseudomonas Pseudomonas aeruginosa Potasio Sulfato se 22
aeruginosa sí lo hace con otras especies de en diversas muestras favorece la producción de
Pseudomonas. Además su acción tensioactiva produce la biológicas. piocianina que dará al
liberación del fósforo y del nitrógeno a las células medio coloración azul
bacterianas distintas de Pseudomonas aeruginosa. verdoso o marrón.
Algunas especies de Proteus, Klebsiella y Providencia
pueden contaminar el medio. Si se precisa aumentar la
selectividad del medio, puede suplementarse con ácido
nalidíxico 15 μg/ml. También puede reducirse la
temperatura de incubación (20°C de 3 a 5 días) para
evitar las contaminaciones antes mencionadas.
 23

Microorganismos Crecimiento
Pseudomonas aeruginosa ATCC
Bueno - excelente
27853
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido
Nombre del medio de cultivo
Verde Brillante, Agar
Sinónimos:
Medio L
Clasificación de acuerdo a Fundamento del medio Utilidad Interpretación
su composición química
Enriquecido El verde brillante es un potente inhibidor de la Se emplea como medio Las colonias típicas de
flora Grampositiva. Este medio está indicado altamente selectivo para el Salmonella aparecen de color
selectivo y para el desarrollo de las especies de Salmonella a aislamiento de Salmonella, rosado con un halo rojo 24
diferencial excepción de Salmonella typhi. Tampoco es salvo la Salmonella typhi, en alrededor. Los
aconsejable para el crecimiento de especies del gran diversidad de muestras. microorganismos
género Shigella. fermentadores de la lactosa y/o
Para inhibir el halo de Proteus puede adicionarse de la sacarosa forman colonias
el medio con 2,5 g/l de Sodio Desoxicolato. de color amarillo verdoso con
halo verde-amarillento;
presentando un crecimiento
más moderado, a veces
inhibición completa.
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 Microorganismos
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Salmonella typhi
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Shigella flexneri. ATCC 12022
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Características de las
colonias
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Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento
Rosas, blancas o transparentes sobre fondo
rojo
Crecimiento inhibido
Rosas, blancas o transparentes sobre fondo
rojo
Crecimiento inhibido
Crecimiento inhibido
Nombre del medio de Clasificación de Fundamento del medio Utilidad Interpretación
cultivo acuerdo a su
composición química
Mueller-Hinton, Agar Selectivo y En la preparación de este medio es fundamental Se emplea para ensayos de En las técnicas de difusión se
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que las concentraciones de timina, timidina y sensibilidad de los mide el halo de inhibición del
diferencial ácido 4-aminobenzoico, sean lo suficiente bajas microorganismos frente a crecimiento confluente
para no inhibir la actividad antibacteriana de antibióticos y sulfamidas. alrededor del depósito de
antibióticos y sulfamidas. Las dos primeras También en aislamiento antibiótico (discos, torrecillas,
inhiben los antibióticos y el último las primario de Gonococos y etc.). El diámetro del círculo de
sulfamidas. El ensayo de sensibilidad de un Meningococos. inhibición es inversamente
microorganismo frente a un antibiótico se puede proporcional a la concentración
realizar sobre placas de agar Mueller-Hinton por mínima inhibitoria (CMI) del
procedimientos de difusión, por diluciones agente antibacteriano.
seriadas o por técnicas turbidimétricas en el
Caldo Mueller-Hinton.
28
Nombre del medio de
cultivo
Tioglicolato Medio Fluido Sin
Indicador
Tioglicolato, Medio Líquido
Clasificación de Fundamento del medio Utilidad Interpretación
acuerdo a su
composición química
Selectivo El medio de cultivo, tiene por sus componentes Este medio de cultivo fue se observa que las bacterias
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la calidad nutricional del caldo tripteína soya. descripto originalmente por estrictamente aerobias, crecen
Este permite el desarrollo de una amplia Brewer, y es recomendado en la parte superior, mientras
variedad de microorganismos, incluidos los para usar en ensayos de que las anaerobias facultativas
nutricionalmente exigentes. Las sustancias control de esterilidad, en o anaerobias estrictas crecen
reductoras como tioglicolato de sodio y cisteína diversos productos en las profundidades del
proporcionan una anaerobiosis suficiente y biológicos. medio.
debido a los grupos -SH- de estos compuestos, se En microbiología clínica
neutralizan los efectos bacteriostáticos de los también se usa por su
derivados mercuriales, arsenicales y de otros capacidad de favorecer el
metales pesados. La presencia de una baja desarrollo de una gran
cantidad de agar, retarda la dispersión de CO2 y variedad de microorganismos
O2. aerobios y anaerobios.
Las Peptonas y/o Extracto de Levadura son los
aportes nutritivos del medio, mientras que la
Glucosa es el aporte energético. El Sodio
Tioglicolato y la L-Cistina permiten el desarrollo
de gérmenes anaerobios en condiciones
aerobias. La Resazurina indica el estado de
oxidación y el Sodio Cloruro aporta la salinidad
en el medio.
30
 Microorganismos Crecimiento
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno
Clostridium perfringens Bueno 31

S. aureus ATCC 25923 Bueno

Bacteroides fragilis ATCC 25285 Bueno