FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

CURSO:
Laboratorio de Microbiología

TEMA:
MEDIOS DE CULTIVO
LIA (Agar Hierro Lisina)

DOCENTE:
Ing. Quequezana

ALUMNAS:
Noriega Mollo Ivone
Quispe Chacón Estefany

Arequipa-Perú

2018
 MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO L.I.A (Agar Hierro Lisina)

I. INTRODUCCIÓN

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su

crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una
serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno
adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se
licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado
por aquellas que crecen en él.

Clasificación de los medios de cultivo basándose en su composición química

A.- Medios sintéticos o químicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente de
nitrógeno, sales que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca), otros elementos como son estimuladores
del crecimiento (eritritol para Brucella abortus) pero siempre a concentraciones conocidas.
B.- Medios complejos o de composición indefinida. Estos medios llevan ingredientes como
extracto de levadura, peptona, infusión de cerebro, extracto de carne, etc. que contienen
nutrientes en abundancia pero sin saber con exactitud la composición cualitativa ni cuantitativa
de estos nutrientes.
C.- Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con aditivos adicionales
para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos (particularmente heterótrofos
exigentes). Ejemplo: adicción de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.
D.- Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de
un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el
aislamiento de microorganismos a partir de una población microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como
fuente de carbono es selectivo para autótrofos; adicionando cristal violeta se inhibe el
crecimiento de los Gram. (+); utilizando maltosa como única fuente de carbono sólo crecerán los
que usen maltosa.
E.- Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminación de
microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos
medios.
F.- Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento óptimo ya que el
crecimiento rápido y prolífico suele ocasionar la muerte rápida de las células.
 II. MEDIOS DIFERENCIALES
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas propiedades que los
medios selectivos, es decir, tienen componentes que inhiben el crecimiento de
algunas bacterias y, lo que es más característico de este medio, presentan
sustancias que al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho
medio, dan una información suplementaria y específica, es decir, diferencial

LIA (Agar Hierro Lisina)

El Medio de Lisina y hierro (L.I.A.) es un medio de cultivo utilizado para la diferenciación de
microorganismos bacilos Gram negativos entéricos, especialmente miembros del género
Salmonella en base a su capacidad para desaminar o descarboxilar el aminoácido lisina
además la presencia de sales de hierro sirve para detectar la producción de H2S por
algunos microorganismos.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp.,

basado en la descarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido
sulfhídrico.
Este medio también es conocido como LIA Edwards y Fife desarrollaron este medio para
diferenciar a Salmonella arizonae.
Debido a que S. arizonae fermenta la lactosa rápidamente, la producción de H2S es
suprimida en el Agar de Hierro y Triple Azúcar eliminando la lactosa e incorporando la lisina,
Edwards y Fife encontraron que este medio diferencía a los bacilos entéricos en base a su
capacidad para descarboxilar o desaminar la lisina y producir H2S.
Este medio es especialmente recomendado para la identificación de bacilos que fermentan
rápidamente la lactosa. En este medio la peptona provee la fuente de carbono y nitrógeno.
El extracto de levadura provee vitaminas y cofactores para el crecimiento. La dextrosa es la
fuente de energía. El hidrocloruro de L-lisina es el sustrato donde actúan las enzimas
descarboxilasa o desaminasa.
El citrato férrico de amonio y el tiosulfato de sodio actúan como indicadores de la
producción de H2S. El púrpura de bromocresol es un indicador de pH. El agar es adicionado
como agente solidificante.

1. COMPOSICIÓN POR LITRO DE MEDIO EN AGUA PURIFICADA

2. TÉCNICA
Inocular realizando siembra mixta con doble picadura a partir de una colonia del
cultivo del microorganismo en estudio e incubar 24 horas a 37 grados C
 3. DESCRIPCIÓN:
La descarboxilación de la lisina ocurre en ambiente anaeróbico o sea en el fondo
del tubo y se pone de manifiesto por la alcalinización del medio produciendo un
viraje del indicador púrpura de bromocresol. La presencia de glucosa en los
componentes del LIA determina primero una reacción de fermentación, produciendo
acidificación y cambio de color del medio a amarillo y el pH favorable para la
reacción de descarboxilacion que ocurre después, volviendo a su color violeta
original la parte del fondo del tubo.
La desaminación de la lisina que se puede producir por los géneros Proteus y
Providencia tiene lugar en la parte superior del tubo produciendo ácido a ceto
carbónico que al combinarse con la sal de hierro y en presencia de oxígeno forma un
color violeta rojizo. La producción de H2S se evidencia por la presencia de un
precipitado negro por utilización de las sales de hierro.

-Las peptonas y el extracto de levadura aportan aminoácidos y nutrientes esenciales, la

dextrosa constituye una fuente de energía.

-El citrato de amonio férrico y el tiosulfato de sodio actúan como marcadores de la

producción de H2S, en este caso se observa el desarrollo de sulfuro de hierro negro en el
tubo

-Los cambios en el pH se verifican gracias al contenido de púrpura de bromocresol: la

producción de ácido se ve del color amarillo con valores de pH inferiores a 5.2, en tanto
que la alcalinización como cambio del indicador hacia el púrpura con valores de pH sobre
6.8.

-La actividad de la lisina decarboxilasa se observa como un viraje hacia el color púrpura en
todo el medio de cultivo, o bien como medio de cultivo sin cambio (neutro) en la columna de
agar, en tanto que la ausencia de la enzima produce un viraje hacia el color amarillo en la
columna y neutro en la zona inclinada.

-La actividad de la lisina deaminasa de los de algunos microorganismos, como los géneros
Proteus y Providencia, se observa como color rojizo en la zona inclinada, con fondo
amarillo en el tubo.

-También puede observarse producción de gas por efecto de fermentación de la glucosa.

4. LECTURA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

1.- Producción de H2S

Resultado positivo: el desarrollo microbiano produce coloración negra en el medio de
cultivo en todo el tubo.
Resultado negativo: ausencia de coloración negra.
2.- Lisina decarboxilasa:
Resultado positivo: se verifica como alcalinización (K) del medio de cultivo con un
viraje hacia el púrpura en todo el tubo, o como medio de cultivo neutro.
Resultado negativo: se observa acidificación (A) con viraje hacia el amarillo en la
columna del tubo, y alcalinización (color púrpura) en la zona inclinada.
3.- Lisina deaminasa:
Resultado positivo: producción de color rojo granate (R) en la superficie inclinada.
Resultado negativo: ausencia de color rojo granate.

*Observe además la producción de H2S y gas.

A: Reacción ácida. Color amarillo

K: Reacción alcalina. Color violeta

R: Reacción alcalina: color rojo

K/K: Descarboxilación lisina

K/A: Fermentación glucosa. Descarboxilación lisina

R/A: Desaminación lisina. Fermentación glucosa

5. Tubos inoculados con cepas que a continuación se detallan, obteniéndose los

siguientes resultados
 6. CARACTERÍSTICAS y LIMITACIONES DE USO

El Agar Lisina- Hierro (L.I.A.) es un medio de cultivo diferencial, por lo que su uso está
recomendado para la taxonomía bacteriana basada en pruebas bioquímicas.
No se recomienda su uso para aislamiento general o selectivo, ni para manutención de
cepas.
El color del medio es púrpura rojizo.
La Morganella morganii , da reacciones variables en los picos durante las primeras 24 horas
de incubación por lo que requiere una incubación más prolongada.
Los tubos deben incubarse con los tapones aflojados para favorecer la aerobiosis.

7. BIBLIOGRAFÍA

-Gran Farmacéutica, Working at National University of San Marcos-Medios de cultivo y

pruebas bioquímicas-2008
https://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation
-Medio Agar Hierro Lisina-2010
http://fgyrbmesa3.blogspot.pe/2010/05/medio-agar-hierro-lisina.html
-Bioquimica
http://dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#LIA_
-Manual de microdiagnostica
http://www.lablinsan.cl/manual/MANUAL_PARTE_3.pdf
-Francisco Soria Melguizo-FICHA TÉCNICA-2009-Madrid
http://f-
soria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/TUBOS%20DIFCO/FT%20LYSINE%20I
RON%20AGAR.pdf