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FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y

MATEMÁTICA

ESCUELA DE BIOLOGÍA

PRÁCTICA 2: PREPARACION DE LÁMINAS DE MERISTEMO APICAL DE
CEBOLLA – DETERMINACION DEL CICLO CELULAR EN CELULAS NO
SINCRONIZADAS
PROFESORA: SAN MARTIN LOPEZ, Maritza

CURSO: Citogenética

INTEGRANTES:

 APAZA YATACO, Luis
 INFANTE FAJARDO, Stefany
 PRINCIPE MORILLO, Fabiola
 RAMOS TORRICCELLI, Diego
 ROSAS CARTOLÍN, Berioska
 SILVA FELIPE, Kathia
 VEGA CHOZO, Karolyn
 VELASQUE CONTRERAS Delfina

HORARIO:

Lunes 4:20 pm – 6:00 pm

2018 - I

que Howard y Pelc definen que el ciclo celular posee dos fases principales. algas filamentosas y segmentación de zigotos de ciertos animales. sugiere que nuevas células aparecen por división binaria de una preexistente. por lo que lo llamó “cromatina”. en el siglo XVIII. INTRODUCCIÓN Desde comienzos del uso del microscopio en 1823. proponiendo diferentes hipótesis. Hartwell y a los británicos R. se le otorgó el Premio Nobel de Fisiología y Medicina al investigador norteamericano Leland H. se considera que la célula es la unidad de origen de todos los seres vivos (Salazar et al. Por esto. Flemming. El desarrollo y la regulación del ciclo celular se han estudiado intensivamente en diferentes organismos y células. Remak en 1852. cada una con su propio complemento de cromatina envuelta en el núcleo. “Toda célula procede de otra célula preexistente por división de ésta” (omnis cellula e cellula). 2009) En el 2001. menciona que la división celular era el método estándar de la formación de nuevas células (Baker. los científicos empiezan a preocuparse por el origen de las células. 1953). estudiadas tradicionalmente en meristemas de raíces (Roca & Mroginski. . la endogenia. hasta 1950. Timothy Hunt y Paul M. se habían observado células en división. con ayuda de tintes. logra encuentra una masa en particular en el núcleo de la célula que no captaba bien el tinte. Posteriormente en 1885. 2013). y hacia mitad del siglo XIX empiezan a proponer la aparición de células nuevas. Nurse por sus descubrimientos de “los reguladores claves del ciclo celular” (Watts. siendo en las plantas superiores. Weismann propuso que la información genética estaba en los cromosomas (Lents & Hesterman. donde las células periódicamente hacen la transición de una etapa de descanso a una etapa de actividad frenética que convierte a un núcleo en dos y después separa la célula creando dos. la interfase y la mitosis (Maillet. no se disponía de ninguna información de lo que sucedía en la célula entre dos mitosis o la interfase. 2001). y Virchow en 1858. Es en 1953. Este proceso fue descrito completamente en su libro Al conocimiento de la célula y su fenómeno de la división en 1878. Es así. Es así que. 2013).. fundamentándose con todos estos estudios. A pesar de la información obtenida. que las nuevas células surgen dentro de otras preexistentes y la división. También. 2002 & Passarge. que el objetivo del presente trabajo ha sido analizar en las células meristemáticas de Allium cepa la presencia de las diferentes etapas de su ciclo celular. 1991). En 1870. pero llevó un tiempo poder darse cuenta de que estas observaciones eran parte de un proceso de formación de nuevas células. logra observar un patrón. Esta última apoyada por la confluencia de estudios sobre observaciones de protozoarios. como: la exogenia. sugiere que las nuevas células surgen fuera de otras preexistentes. Partiendo de la premisa que no existe la generación espontánea y una célula nueva surge otra preexistente.

y la mitosis. en el que se distinguen dos períodos mayores. MARCO TEÓRICO FASES DEL CICLO CELULAR La división de las células eucariotas es parte de un ciclo vital continuo. durante la cual se produce la duplicación del ADN. el ciclo celular. durante la cual se produce el reparto idéntico del material antes duplicado. I. la interfase. La mitosis es una fase relativamente corta en comparación con la duración de la interfase. .

MITOSIS La mitosis ocurre en porciones o áreas específicas dela planta para producir el crecimiento. la célula se encuentra en estado basal de funcionamiento. La limitación de crecimiento de la célula está directamente relacionada con el inicio de la mitosis. el cambium y las zonas intercelulares (base de los entrenudos en plantas monocotiledóneas. La fidelidad de la distribución desigual de estos o modificaciones en la estructura de alguno de los genes. Cuando la célula crece. tres horas para G2 y 1 hora para la división. SIGNIFICADO DEL PROCESO MITÓTICO Al terminar la mitosis. Es la etapa previa a la mitosis donde la célula se prepara para dividirse. Este tiempo depende del tipo de célula que sea (Blow & Tanaka. aparecen los cromosomas los cuales se observan dobles. Las mutaciones son transmitidas a las células modificadas.INTERFASE Durante la interfase. la mitosis es responsable de la transmisión de caracteres de cada célula a célula en organismos pluricelulares y de una generación a otra en organismos unicelulares. el ápice de las raíces. esto se da inmediatamente antes de que comience la división. por lo que la mitosis consistirá en separar esas cadenas y llevarlas a las células hijas. el protoplasma aumenta de volumen muy rápidamente. que es aquel momento de la vida celular en que ésta no se está dividiendo. 2005). El primer proceso clave para que se de la división nuclear es que todas las cadenas de ADN se dupliquen (replicación del ADN). por lo que se altera la relación nucleoplasmica y se modifican las tasas de intercambio entre el núcleo y el citoplasma o entre la célula y su ambiente. En dicha fase se lleva a cabo la replicación del ADN y la duplicación de los orgánulos para tener un duplicado de todo antes de dividirse. ya que por lo general cada tipo de célula alcanza determinado tamaño preestablecido de manera genética. en tanto que el núcleo lo hace con lentitud. la . En este estado. (Cervantes & Hernández . cada núcleo hijo posee un conjunto de cromosomas idéntico a las células madre. De esta manera se mantiene idéntica la constitución genética de células hijas y en consecuencia la misma organización estructural y funcional que el de la célula original con lo cual asegura la existencia de juegos cromosómicos idénticos en generaciones sucesivas. La duración del ciclo celular en una célula típica es de 16 horas: 5 horas para G1. DURACION Y FRECUENCIA DE LA MITOSIS. En otras palabras. en ésta. emplean 95 min en una mitosis total. pero si se eleva a 45°C el proceso completa en 30 min. Para conseguir esto se da otro proceso crucial que es la conversión de la cromatina en cromosomas. 7 horas para S. Las células vegetales son muy sensibles a los cambios de temperatura a 10°c.2015). Tras la replicación tendremos dos juegos de cadenas de ADN. los centriolos y la cromatina se duplican. estas partes sin el ápice de los tallos. en un período del ciclo celular llamado interfase.

Los centrosomas actúan como centros organizadores de unas estructuras fibrosas. Un cinetocoro es una estructura proteica compleja a la que se anclan los microtúbulos (Chan. uno en cada cromátida. mitosis astral o mitosis anfiastral. 1978). los cromosomas. Los hongos y algunos protistas. que al dividirse en profase temprana. que es el proceso por el cual el material genético de una célula madre se distribuye de manera idéntica entre dos células hijas. (Martínez . acrosómico o acromático. Cuando un microtúbulo se ancla a un cinetocoro. La envoltura nuclear se separa y los microtúbulos invaden el espacio nuclear. para formar unas estructuras altamente organizadas. utilizando energía de la hidrólisis del ATP para "ascender" por el microtúbulo .1985) Cariocinesis La cariocinesis (del griego cario = núcleo y cinesis = movimiento). formando el aparato del huso mitótico. Los microtúbulos pueden anclar cromosomas (azul) a través de los cinetocoros (rojo) o interactuar con microtúbulos emanados por el polo opuesto. Prometafase La envoltura nuclear se ha disuelto. Profase Se produce en ella la condensación del material genético (ADN).al. los cromosomas replicados están formados por dos cromátidas. Uno de los hechos más tempranos de la profase en las células animales es la duplicación del centrosoma. los dos centrosomas hijos (cada uno con dos centriolos) migran entonces hacia extremos opuestos de la célula. entre otros componentes. Como el material genético se ha duplicado previamente durante la fase S de la Interfase. controlando su formación mediante la polimerización de tubulina soluble (Mayor et. Cada cromosoma ensambla dos cinetocoros hermanos sobre el centrómero. es la división del núcleo celular. se dirigen hacia los polos opuestos de la célula. Esto se denomina mitosis abierta. Aunque la estructura y la función del cinetocoro no se conocen completamente. en la que el huso se forma dentro del núcleo o sus microtúbulos pueden penetrar a través de la envoltura nuclear intacta (Heywood. 2005).división celular restablece la relación nucleoplasmica y regula los intercambios intra y extracelulares. y los microtúbulos (verde) invaden el espacio nuclear. En la profase tardía desaparece el nucléolo y se desorganiza la envoltura nuclear. 1999). En células animales poseen un organelo no membranoso llamado áster o centro celular. los microtúbulos. contiene varios motores moleculares. unidas a través del centrómero por moléculas de cohesinas. como las algas o las tricomonas. formado por un par de centriolos. realizan una variación denominada mitosis cerrada. Consiste en la primera fase de la mitosis. los motores se activan.

1995). dirigiéndose hacia los centrosomas respectivos. las proteínas que mantenían unidas ambas cromátidas hermanas (las cohesinas). Este alineamiento equilibrado en la línea media del huso se debe a las fuerzas iguales y opuestas que se generan por los cinetocoros hermanos. lo que permite la separación de las cromátidas. La anafase temprana viene definida por la separación de cromátidas hermanas. los cinetocoros que no están anclados generan una señal para evitar la progresión prematura hacia anafase antes de que todos los cromosomas estén correctamente anclados y alineados en la placa metafásica. . Anafase Cuando todos los cromosomas están correctamente anclados a los microtúbulos del huso y alineados en la placa metafásica. porque en ella se realiza la distribución de las dos copias de la información genética original. que ahora son cromosomas hermanos diferentes. Dado que una separación cromosómica correcta requiere que cada cinetocoro esté asociado a un conjunto de microtúbulos (que forman las fibras cinetocóricas). 2000). Metafase A medida que los microtúbulos encuentran y se anclan a los cinetocoros durante la prometafase.al. "contra". 2004).12 La prometafase se considera a veces como parte de la profase. Esta señal activa el checkpoint de mitosis (Burke & Stukenberg. son separados por los microtúbulos anclados a sus cinetocoros al desensamblarse. "atrás" o "re-"). los centrómeros de los cromosomas se congregan en la "placa metafásica" o "plano ecuatorial". 2008). mientras que la tardía por la elongación de los microtúbulos que produce la separación de los centrosomas.hacia el centrosoma de origen. Primero. empujando a los centrosomas (y al conjunto de cromosomas que tienen asociados) hacia los extremos opuestos de la célula. Entonces tienen lugar dos sucesos. proporciona la fuerza de empuje necesaria para separar más adelante las dos cromátidas de los cromosomas (Maiato et. Estos dos estados se denominan a veces anafase temprano (A) y anafase tardía (B). Este movimiento parece estar generado por el rápido ensamblaje de los microtúbulos (Kenneth. la célula ha conseguido separar dos juegos idénticos de material genético en dos grupos definidos. A continuación. sino a otros microtúbulos originados en el centrosoma opuesto para formar el huso mitótico. los microtúbulos no asociados a cinetocoros se alargan. Al final de la anafase. Estas cromátidas hermanas. cada uno alrededor de un centrosoma. una línea imaginaria que es equidistante de los dos centrosomas que se encuentran en los 2 polos del huso (Winey et. Esta actividad motora. Es la fase crucial de la mitosis. acoplada con la polimerización/despolimerización de los microtúbulos. los microtúbulos asociados a cinetocoros empiezan a buscar cinetocoros a los que anclarse. Cuando el huso crece hasta una longitud suficiente. la célula procede a entrar en anafase (del griego ανα que significa "arriba".al. son cortadas. Otros microtúbulos no se asocian a cinetocoros.

La cariocinesis ha terminado. 2005). estrangulando el citoplasma y aislando así los dos nuevos núcleos en dos células hijas (Glotzer. que se inicia simultáneamente a la telofase. En las células animales. mientras que algunas algas utilizan un vector de microtúbulos denominado ficoplasto durante la citocinesis. En plantas esta estructura coalesce en una placa celular en el centro del fragmoplasto y se desarrolla generando una pared celular que separa los dos núcleos. Citocinesis La citocinesis es un proceso independiente. utilizando fragmentos de la envoltura nuclear de la célula original. pero la división celular aún no está completa. El final de la citocinesis marca el final de la fase M (Zhou et. Si a continuación no se produce la citocinesis. El fragmoplasto es una estructura de microtúbulos típica de plantas superiores. que significa "finales") es la reversión de los procesos que tuvieron lugar durante la profase y prometafase. los microtúbulos no unidos a cinetocoros continúan alargándose. estirando aún más la célula. cada célula hija tiene una copia completa del genoma de la célula original.al. .al. Tanto en células animales como en plantas. Al final del proceso. Ambos juegos de cromosomas. se descondensan de nuevo en cromatina. entonces se originará una célula binucleada. La envoltura nuclear se reforma alrededor de ambos grupos cromosómicos. 2005). Técnicamente no es parte de la mitosis. sino un proceso aparte. la división celular está dirigida por vesículas derivadas del aparato de Golgi. 2005). necesario para completar la división celular. se genera un surco de escisión (cleavage furrow) que contiene un anillo contráctil de actina en el lugar donde estuvo la placa metafásica. La polinucleación en los tejidos de muchos organismos.Telofase La telofase (del griego τελος. ahora formando dos nuevos núcleos. Durante la telofase. es un proceso genéticamente programado de citodiferenciación y desarrollo (Lacadena. Los cromosomas hermanos se encuentran cada uno asociado a uno de los polos. que se mueven a lo largo de los microtúbulos hasta la zona ecuatorial de la célula (Albertson et. 1996).

.

luego se sacó la raíz ya calentada sobre una lámina portaobjeto. Ntotal: Número total de células contadas por lamina. .MATERIALES Y METODOLOGIA Materiales  Bisturí  Ácido acético 45%  Solución Carnoy  Lupa  Luna de reloj  Microscopio  Placa Petri  Laminas portaobjeto y cubreobjeto  HCl 50%  Orceina acética Metodología Se cortó las raíces de un tamaño aproximado a 3mm. Se realizó un conteo de todas las células meristemáticas. para el reconociendo las distintas fases de la mitosis. de arriba hacia abajo. Con los datos colectados se usó la siguiente fórmula: 𝑁𝑓𝑎𝑠𝑒 × 720𝑚𝑖𝑛 𝑇𝑓 = 𝑁𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 Dónde: Tf: tiempo que demora la fase f del ciclo. identificando las fases del ciclo (mínimo 100 células por campo). Se comparó los resultados obtenidos por los miembros del grupo de práctica por medio de un análisis estadístico para comprobar si hay diferencias significativas. se le agrego una pequeña gota de Orceina acética y con un cubreobjeto se le hizo un squash presionando con el dedo pulgar sin que la laminilla se rompa. moviendo de izquierda a derecha. Nf: Número de células que se han encontrado en la fase f. Finalmente se observó en el microscopio. Se calentó en el mechero haciendo que ebullicione tres veces como máximo. 720min: Representa el tiempo calculado que se demora el ciclo celular completo de las células meristemáticas de la raíz de cebolla. para luego ponerlo sobre una luna de reloj agregándole a la vez una gota de orceina acética más una gota de HCl 1N.

anafase y telofase .4: Presencia de células en anafase y profase Metafase Anafase Telofase Fig.RESULTADOS: Anafase Profase Fig. 5: Células en metafase.

siendo la primera lectura de 200 células y la segunda lectura de 100 células de diferentes muestras de cebollas. en campos con distribución celular adecuada para el contaje y diferencia de las etapas de interfase y división celular (Fig. en las cuales se encontró para ambas lecturas un índice de 73% en interfase. 6: Células en interfase y etapas de la división celular . total de células 200 Células Número de células % celular INTERFASE 146 73 % PROFASE 18 9% METAFASE 8 4% ANAFASE 7 35% TELOFASE 21 10% TOTAL 200 100 % Fig. 6 y 7). Tabla 1: Conteo celular. Para la primera lectura se observó un mayor índice de división células en anafase (35 %) y en la segunda lectura en profase (33 %) tabla 1 y 2.Se realizaron dos lecturas en microscopio óptico a aumento de 100 x.

7: Células en interfase y etapas de la división celular . total de células 100 Células Número de células % celular INTERFASE 73 73 % PROFASE 33 33 % METAFASE 5 5% ANAFASE 3 3% TELOFASE 6 6% TOTAL 100 100 % Fig. Tabla 2: Conteo celular.

cepa L. con el objetivo de estandarizar técnica de Allium test para observaciones microscópicas de los ápices radicales de Allium cepa. En la investigación realizada por Muñoz-Solarte y Guerrero-Pepinosa. puesto que esta solución hace transparentes los tejidos de las raíces.60%.20% y IT de 28. . precipita las proteínas de las células volviéndola insoluble y permeabiliza su membrana.74 .40%. anafase y telofase son de 1. resultó como una “actividad normal ” en un conteo de 100 células. y una vez obtenida esta longitud se disparan enzimas vegetales .2 horas al periodo de división. Esta investigación fue realizada por que como los meristemos apicales de cebolla muestran fácilmente rango de alteraciones citológicas. así mismo.7 horas.. Metafásicos 14.5 horas corresponden a la interfase y 2. debido a que el 10 al 15 % de células se encuentran en mitosis (Vesna.6%. Los autores Quispe et al (2010) y por Beltrán y Gonzáles (1995). donde se puede deducir. claro está que su conteo empleado fue en un recuento de 1500 celulas meristemáticas. La tinción se realizó con orceina acética. entonces a partir de estos datos se podría inferir el daño en el material genético usando el conteo Alteraciones Cromosómicas y el Intercambio de Cromátidas Hermanas expuestas a toxicidad de ciertas sustancias. La mitosis es el proceso donde las células duplican su información dando lugar a nuevas células y de esa forma aumentar la masa celular para producir un tejido u órgano.DISCUSIÓN: Las células meristemáticas presentes en los ápices radiculares de Allium cepa L. Por ello en esta práctica de laboratorio se utilizó los ápices de raíces de cebolla. a 20ºC. (Cesar. no coinciden con nuestros resultados de índices de fases. lo cual indica que los valores obtenidos en este experimento se aleja de porcentaje ideal. es de 18. constituyen un modelo ideal para el estudio de los fenómenos celulares y moleculares involucrados en los procesos de división celular. un 45% y 42 % para células interface y profase respectivamente. los Índices Mitóticos 84 .(2013). IP de 44. respectivamente (Beltrán RA. 28 minutos. (cebolla). Se sabe que en A. 7 minutos y 35 minutos. que los tiempos de duración de la profase. Si se hubiera tomado la muestra de alguna otra zona de la raíz. De 15. IM de 14. empleando la fórmula ya indicada en los resultados. 2010) Pero es a partir de los resultados del índice mitótico.80% en células meristemáticas de cebolla respectivamente.2 horas. et al 1996). en donde 16. Profásicos 48 . es probable que no se hubiera podido observar el proceso mitótico. metafase. Anafásicos 10  y Telofásicos 26 . ya que presentan meristemos con células totipotentes encargadas de la división mitótico constante. la duración de su ciclo celular. las cuales ordenan a los meristemas dejar de realiza el proceso mitótico. esto se puede deber al desarrollo de la raíz en longitud donde ha logrado absorber agua u otros nutrientes. I Met. tanto en el conteo de las 100 células como en la de 200 que la mitosis realizada en las raíces de esta cebolla no fue de manera constante ni continua. 2010). IA de 9.

ANEXO DISTRIBUCION DE CELULAS EN INTERFASE Y DIVISION CELULAR . cuya actividad es sustituida por los casquetes polares. junto con el calor a acelerar el proceso de división celular. por división subsiguiente. seguida de la anafase en la tabla nº1. la profase es la segunda fase con mayor tiempo de demora en el ciclo celular. descendiente de otra que se divide. El ciclo celular se inicia en el instante en que aparece una nueva célula. los cuales dan origen al huso mitótico. en la tabla nº 2 el tiempo sigue siento mayor en la interfase. pero a diferencia de la primera tabla. esto se debe a que la mayoría de las células vegetal estaban iniciando un proceso mitótico. lo que indica también una edad muy temprana en el organismo o tejido.CONCLUSIONES: A diferencia de la mitosis animal. es por esto que fue utilizado en la práctica aumentando asi las probabilidades de encontrar en cada una de las fases de la mitosis. y termina en el momento en que dicha célula. la mitosis en vegetales carece de centriolos y ásteres. En la práctica realizada el tiempo de demorada es mayor en la interfase. origina dos nuevas células hijas Existe un mayor porcentaje celular en la interfase. Es necesario el uso de un ácido como el HCL N1 para el desarrollo del experimento porque ayuda.

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