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ABSORCIONDE CADMIO

POR BIOMASA
INMOBILIZADA DE
NOSTOC COMMUNE O
NOSTOC
SPHAERICUM
NOSTOC COMMUNE Y NOSTOC SPHAERICUM
“MURMUNTA”
Es una alga color azul – verde o Cyanophyta
de agua dulce que se distribuye en lagos y
lagunas de la Cordillera andina sobre los
3000 m.s.n.m, que se dan en temporadas
lluviosas o muy húmedas; tienen aspecto de
uvas traslúcidas, gelatinosas y esféricas, con
un diámetro que varía de 10 a 25 mm.
Las colonias de Nostoc sp. Generalmente
son gelatinosas y esféricas que se reúnen a
manera de cuentas de rosario, formando
tricomas sencillos, éstos flotan libremente
por el borde de las superficies de las
lagunas, charcos, puquios y diversos
ambientes húmedos altoandinos
BIOACUMULACIÓN
Los metales se unen a la superficie celular a través de mecanismos que influyen interacciones electrostáticas,
fuerzas de van der Waals, uniones covalentes, interacciones redox, precipitación extracelular o la
combinación de estos procesos.

Los grupos cargados negativamente (carboxil, hidroxil, y fosforil) de la pared celular bacteriana absorben los
iones metálicos y estos son retenidos. Cuando los metales se unen a la superficie celular pueden
bioacumularse.

Proceso celular que involucra un sistema de transporte de membrana que internaliza el metal pesado
presente en el entorno celular con gasto de energía, este consumo energético se realiza a través de la H+-
ATPasa; una vez incorporado el metal pesado al citoplasma este es secuestrado por proteínas ricas en grupos
sulfhidrilos llamados metalotioneinas (MT) fitoquelatinas (FQ) y algunos péptidos de unión de metales en
caso de hongos y plantas este es llevado o compartimentado hacia adentro de las vacuolas.
Objetivo:
EVALUAR LA ABSORCIÓN DE CADMIO UTILIZANDO UNA

SOLUCIÓN DE NITRATO DE CADMIO (II), MEDIANTE

MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS, UTILIZANDO

NOSTOC SPHAERICUM INMOVILIZADO EN AGAR-AGAR.


HIPOTESIS:
VERIFICAR EXPERIMENTALMENTE LA CAPACIDAD DE

ABSORCIÓN DEL NOSTOC SPHAERICUM “MURMUNTA” A

TRAVÉS DE SU INMOVILIZACIÓN CON AGAR- AGAR Y

MEDIDA MEDIANTE EL USO DE ESPECTROFOTOMETRÍA.


VARIABLES
INDEPENDIENTES
Ph
La mayoría de los grupos de unión a metales en las microalgas son ácidos (por
ejemplo, -COOH); estos grupos generan una superficie cargada negativamente a
pH ácido, y en conjunto con las interacciones electrostáticas entre especies
catiónicas y la superficie de la célula determinan en gran medida la bioabsorción
del metal.
Una disminución de la absorción de metales por las microalgas se ha observado
con frecuencia a un pH extremadamente ácido (<2) debido a que
probablemente la alta concentración de iones H+ generan la exclusión
competitiva de la unión a los ligandos en la superficie celular.
VARIABLES
INDEPENDIENTES
TEMPERATURA:
Las fluctuaciones de temperatura influyen directamente sobre la fluidez
de la membrana celular, afectando el grado de saturación de los lípidos
y la integración de proteínas transmembranales incrementando la
salida de iones y otros solutos.
De igual forma, las constantes de formación del complejo ligando-metal
están regidas por la temperatura, y al aumentar en sus niveles por
encima del rango óptimo en cultivos de microalgas no sólo se
incrementa la capacidad de biosorción de los iones metálicos, sino
también el número de sitios de unión implicados en la absorción
metálica.
A bajas temperaturas (por debajo de 20°C) las membranas se vuelven
menos “fluidas” y la actividad de ciertas proteínas como las ATPasas se
encuentra inhibida disminuyendo el transporte de solutos dentro y
fuera de la célula .
Procedimiento experimental
Materiales e instrumentos
• Material biológico: nostoc sphareicum • Pro-pipeta
• Reactivos: solución de nitrato de cadmio (II) • Embudo
(Cd(NO3)2), agar-agar • Papel filtro
• Aceite vegetal • Tamiz
• Agua destilada • Vaso precipitado de 100 ml
• Jeringa • Probeta
• Pipeta • Cocinilla
• Mortero y pilón • Agitador mecánico
• balanza
PROTOCOLO
ACONDICIONAMIENTO Y PRE-TRATAMIENTO DE NOSTOC
SPHAERICUM (MURMUNTA)

1. Secado a temperatura constante de 37°C en estufa hasta peso seco constante


2. Utilizando el mortero y el pilón realizar el Molido y el posterior tamizado
3. Pesado de nostoc sphaericum (0.5- 0.7 g )
4. Tratamiento alcalino con hidróxido de sodio 0.1N (10ml/50mg de biomasa)
seguido de lavado de biomasa con agua destilada estéril y decantación.
5. Autoclavado a 121°C durante 20 minutos.

Todos los tratamientos serán realizados con biomasa reducida a finas partículas
de polvo.
ACONDICIONAMIENTO DE LAS SOLUCIONES CONTAMINADAS
1. Se prepararan soluciones acuosas de nitrato de cadmio (10, 30,50 mg/l) para
simular agua contaminada con Cd (II). Estas soluciones de concentración de
100 ppm se mantendrán a un pH igual a 5 y a temperatura ambiente (25°C).
Proceso de Bioabsorción en un sistema por lotes
• Se disolverán 0.5-0.7 g de Nostoc sphareicumm deshidratado en un vaso de precipitación
de 100 mL con (10, 30,50 mg/l) de soluciones preparadas con la solucion nitrato de
cadmio en estudio. Se mantendrán en agitación durante intervalos de tiempo (1, 3 y 5
horas) respectivamente.

Determinación de concentración de cadmio


• Se utilizara la técnica de Espectrofotometría, para analizar la solución después del proceso de
biosorción, para lo cual se elaborara una curva de calibración de absorbancia en función de la
concentración de nitrato de cadmio (Cd (NO3)2).
• Con esta curva se evaluara la remoción de cadmio mediante diferencia de concentraciones por
intervalos de tiempo de (1, 3, 5 horas) respectivamente.
Inmovilización de las cianobacterias:
Mezclar 50 ml de la suspensión de nosctoc y 50 ml de agar-agar y homogenizar.
Tomar con una geringa de 20 ml un volumen de la mezcla y dejar caer gota a gota en la probeta que contiene el aceite
vegetal refrigerado. Repetir el paso anterior hasta agotar la mezcla.
Decantar los pellets y lavarlos tres veces con agua destilada con movimientos rotatorios suaves.
Secar los pellets en papel toalla.
Análisis estadístico de los datos

• Espectrofotometría.
• Su funcionamiento se basa en la ley de Beer-Lambert: la fracción de luz
incidente que es absorbida por una solución es proporcional a la
concentración de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz. La
relación entre luz incidente (Io) y la reflejada (I) dará una idea de la cantidad
de radiación que ha sido absorbida por la muestra. Esto es lo que se
denomina Absorbancia (Abs) ó Densidad Óptica (DO)
La ley de Beer-Lambert se formula como:
Abs (DO) =e x C x 1
Siendo e el coeficiente de extinción molar (específico para cada sustancia a
una longitud de onda y en unas condiciones determinadas (M-1, cm-1), C es la
concentración de la muestra a medir (M), 1 el espesor de la muestra.
MATERIALES Y EQUIPO
Espectrofotómetro, Gradilla, Tubos de ensayo. Vasos de
precipitado. Probetas, Pipetas

Reactivo: nitrato de cadmio.

ESPECTRO DE ABSORCIÓN DEL NITRATO DE CADMIO Y DETERMINACIÓN DE


CONCENTRACIONES
Lo que vamos a hacer consiste en determinación una concentración desconocida del
nitrato de cadmio después de realizar la adsorción por medio del nostoc. Para ello
realizaremos los siguientes experimentos:
• Mediremos el espectro de absorción de una solución de nitrato de Cadmio y localizaremos su
máximo de absorción.
• Nos situaremos en dicho máximo y mediremos la absorbancia de 4 disoluciones de
concentración conocida de colorante preparadas por nosotros. Esto nos proporcionará una recta
de calibrado.
Mediremos la absorbancia de la muestra problema y determinaremos su concentración a partir
de la recta de calibrado.
Procedimiento .
Preparación de 4 soluciones patrón de Nitrato de Cadmio a partir de una disolución concentrada
Se utilizará la disolución concentrada para preparar las siguientes 4 disoluciones más diluidas que serán las
que se midan en el espectrofotómetro: Disolución 1: diluir 1 ml de la disolución concentrada y enrasar con
agua en un matraz aforado de 25 ml.
Disolución 2: idem, 2 ml de disolución concentrada.
Disolución 3: idem, 3 ml de disolución concentrada.
Disolución 4: idem, 5 ml de disolución concentrada.
2. Calcular la molaridad de todas las disoluciones, incluida la concentrada.
3. Medir el espectro de absorción del nitrato de cadmio de 325 a 685 nm sobre la disolución concentrada
4: se introduce una cubeta con la disolución 4 (la más concentrada) y se mide la absorbancia en el intervalo
de longitudes de onda fijado tomando valores cada 20 nm. Se repite la operación de manera más fina en la
región donde se haya observado una mayor absorbancia, esta vez tomando valores cada 10 nm. Establecer,
a partir de esta medida, dónde se encuentra el máximo de absorción del nitrato de cadmio.