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Anticuerpos monoclonales

Es aquel que reconoce específicamente una parte del antígeno, es decir un epítopo
concreto, y que es producto por un clon de linfocitos B. Se aplican de forma extensiva en
investigación biomédica, en el diagnóstico de diferentes patologías y tratamiento de
enfermedades.
Tipos
Según su origen existen 4 tipos:
Anticuerpos murinos : son anticuerpos que provienen de ratones. Debido a esto las
aplicaciones terapéuticas son limitadas por la respuesta inmune producidas en el ser
humano. El sistema inmune humano reconoce estos anticuerpos como extraños y genera
sus propios anticuerpos frente a ellos.
Anticuerpos quiméricos : es aquel en donde las regiones variables proceden de un ratón
y las regiones constantes de los anticuerpos de humanos. Mediante esto, se consiguió
reducir la respuesta inmune que se producía frente a los anticuerpos murinos.
Anticuerpos humanizados: son anticuerpos en donde solamente las regiones CDR de las
partes variables de los anticuerpos proceden de ratón siendo el resto anticuerpos de origen
humano.
Anticuerpos humanos : son anticuerpos estos son los anticuerpos que son en su totalidad
de origen humano, reduciendo así el riesgo de producir una respuesta inmune.
Aplicaciones generales de los Anticuerpos Monoclonales
3.1. Enfermedades autoinmunes
3.1.1. Artritis Reumatoide
Es una enfermedad autoinmune, crónica, que ocasiona inflamación de las articulaciones
y tejidos circundantes, pero también puede afectar a otros órganos. Su tratamiento actual
combina fisioterapia, fármacos antiinflamatorios y antirreumáticos.
El factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa) actúa como mediador de la inflamación en
las articulaciones de los enfermos de artritis reumatoide. Los anticuerpos monoclonales
en el tratamiento de esta enfermedad, actúan inhibiendo el efecto proinflamatorio de TNF-
alfa. Mientras que otros reconocen el antígeno CD20 de linfocitos B.
3.1.4. Esclerosis múltiple
Es una enfermedad autoinmune progresiva, que afecta al sistema nervioso central, es
decir, al cerebro y a la médula espinal y donde la transmisión del impulso nervioso se ve
alterada.
El tratamiento va dirigido para controlar los síntomas dela enfermedad, para lograr
mantener la mejor calidad de vida de las personas que la padecen. Se administran, por
tanto, fármacos antiinflamatorios e inmunodepresores con anticuerpos monoclonales
Natalizumab . lo que hacen es reconocer una subunidad de una molécula de la membrana
de los leucocitos de la sangre denominada integrina, inhibiendo su migración través del
endotelio en el proceso inflamatorio.
3.2. Enfermedades pulmonares
Los anticuerpos monoclonales también se usan en el tratamiento del asma alérgica
persistente y en la profilaxis
El asma alérgica es una enfermedad inflamatoria de las vías aéreas desencadenada por
una excesiva producción de inmunoglobulinas IgE por parte del sistema inmune. Para el
tratamiento de esta enfermedad se utiliza un anticuerpo monoclonal que reconoce la IgE,
disminuyendo sus niveles en la circulación y bloqueando su unión a sus receptores.
Aplicación específica de los ANTICUERPOS MONOCLONALES EN EL
TRATAMIENTO DEL CÁNCER
Los anticuerpos monoclonales pueden usarse para el tratamiento del cáncer en diversas
formas:
 Los anticuerpos monoclonales que reaccionan con tipos específicos de cáncer
 Los anticuerpos monoclonales pueden programarse para que actúen contra los
factores de crecimiento de las células y así dificultar el crecimiento de las células
cancerosas.
 Los anticuerpos monoclonales pueden estar enlazados con fármacos
anticancerosos, radioisótopos, modificadores de la respuesta biológica que
cuando se enganchan a las células cancerosas, ellos entregan estos venenos
directamente al tumor y así ayudan a destruirlo.
Se han desarrollado distintas estrategias en la eliminación de las células tumorales
mediante anticuerpos monoclonales. Los efectos de anticuerpos monoclonales frente a
antígenos tumorales embrionarios, reduce a células normales adultas, amplificándose en
el caso de que algunas de estas células se transformen neoplásicamente. Este es el caso
del CEA, detectado en tumores gastrointestinales.

.
Otra estrategia consiste en no atacar directamente el tumor, sino los factores que
favorecen su crecimiento. El monoclonal bloquea el desarrollo de vasos en el tumor, e
impide su crecimiento. El Vitaxin, un anticuerpo monoclonal en fase II de estudios
clínicos en el tratamiento del melanoma y cáncer de próstata, reconoce la integrina αvβ3
que es expresada en los nuevos vasos, necesarios en el desarrollo de un tumor, y que le
permiten anclarse a los tejidos vecinos. El anticuerpo monoclonal, al unirse a la integrina
αvβ3 expresada por las células endoteliales, induce apoptosis en estas, bloqueando la
angiogénesis, lo que impide el desarrollo del tumor.
16.2.2.1 Producción de anticuerpos monoclonales
Los mAb se producen a partir de un tipo específico de células B. estas se inmortalizan
mediante tecnología de hibridoma. Esta técnica es específica para un solo epítopo.
En esta tecnología, las células tumorales inmortales se fusionaron con células de
mamífero productoras de anticuerpos. Debido a que estas células se producen a partir de
un solo tipo de células, se denominan células monoclonales, y los anticuerpos que se
producen a partir de estas células se llaman mAb
Etapa 1: Inmunización de los ratones
Para la producción de un mAb que es específico contra un antígeno, se inmuniza un
modelo animal experimental con este antígeno mediante inyección. La inmunización
activa las células B y causa la síntesis de linfocitos B en el bazo.
Etapa 2: Preparación de los esplenocitos
El bazo se diseca y los esplenocitos se preparan en el segundo paso. Para poder obtener
una sola célula, la muestra se incuba con tampón de lisis de glóbulos rojos (RBC) y luego
se lava.
Etapa 3: Mezcla de las células
En este paso, los esplenocitos y las células de mieloma se mezclan en una proporción
definida. Se prefiere que la línea celular de mieloma seleccionada no produzca
anticuerpos. La fusión lleva a cabo con el virus sendai, polietilenglicol (PEG), que
disuelve parte de la membrana celular. De esta manera actúa favoreciendo la fusión de
los dos tipos celulares que dará lugar a los hibridomas. Las células fusionadas resultantes
incluirán 4 tipos celulares:
 Células del bazo no fusionadas (HPRT + Ig + CC-)
 Células del mieloma no fusionadas (HPRT + Ig + CC+)
 Hibridomas que no producen anticuerpos monoclonales o no producen los
deseados. Hibridomas que producen los anticuerpos monoclonales deseados.
De las cuales solo se seleccionan estas últimas
Etapa 4: Selección de las células híbridas
Las mezclas de células de hibridoma se cultivan en medios HAT(hipoxantina,
aminopterina y timidina). La aminopterina actúa como un antagonista de folato y bloquea
la biosíntesis de nucleótidos de novo. De este modo, las células de hibridoma
proporcionan síntesis de purina y pirimidina. Las células β mueren debido a su corta vida,
y las células de mieloma no hibridado también mueren debido al bloqueo de su vía de
producción de novo. Las únicas células vivas son aquellas que se hibridizan con células
tumorales.
Etapa 5: Selección clonal
Después de observar hibridomas mixtos, lo más importante es seleccionar células híbridas
óptimas que produzcan el anticuerpo deseado. Para ello, se usa una placa de 96 pocillos,
y se intenta colocar solo una celda en cada pocillo. Después de la incubación, las células
proliferan. Con este número cada vez mayor de células, la producción de anticuerpos
comienza, y se selecciona una célula híbrida específica mediante el examen de
sobrenadantes de cultivo utilizando varios métodos por ejemplo ELISA.
Etapa 6: Expansión clonal
Luego de determinar el clon específico, los clones se expanden por métodos in vivo e in
vitro. En el método in vitro, las células se transportan a placas más grandes. Para luego
ser transportadas a matraces de cultivo tisular. Después de crecer en estas botellas, se
congelan para futuros experimentos.
En el método in vivo, se pueden inyectar clones celulares productores de anticuerpos en
la cavidad peritoneal de los ratones. Estas células muestran un crecimiento similar a un
tumor y los anticuerpos comienzan a producirse a partir de células de hibridoma en la
cavidad peritoneal en un líquido ácido.
Etapa 7: Purificación
Los mAb no siempre se deben purificar después de que se producen.

PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES POR TECNICA DE


HIBRIDOMA
16.2.2.1.2 PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES MEDIANTE LA
TÉCNICA DE PANTALLA DE PÁGINA
16.2.2.1.3 PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS MONOCLONALES UTILIZANDO
ANIMALES TRANSGÉNICOS
16.2.2.1.4 PRODUCCIÓN DE ANTICUERPOS EN PLANTAS TRANSGÉNICAS
(Büyükköroğlu & Şenel, 2018)
Büyükköroğlu, G., & Şenel, B. (2018). Chapter 16 - Engineering Monoclonal

Antibodies: Production and Applications. En D. Barh & V. Azevedo (Eds.),

Omics Technologies and Bio-Engineering (pp. 353-389). Academic Press.

https://doi.org/10.1016/B978-0-12-804659-3.00016-6