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CATEDRA: MICROBIOLOGIA GENERAL ALUMNO: MUÑOZ CISNEROS, Diana SEMESTRE : FILIAL LA MERCED FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
CATEDRA: MICROBIOLOGIA GENERAL ALUMNO: MUÑOZ CISNEROS, Diana SEMESTRE : FILIAL LA MERCED FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
CATEDRA:
MICROBIOLOGIA GENERAL
ALUMNO:
MUÑOZ CISNEROS, Diana
SEMESTRE
:
FILIAL LA MERCED
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
E. F. P. EN ING
ENIERIA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
COLORACIÒN DE LA CAPSULA, GLICOCALIX O
ENVOLTURA GLUCOIDE
Blgo: IBAÑEZ OJEDA, Julio
LA MERCED – CHANCHAMAYO
CATEDRATICO:
“V”

2018

COLORACION DE LA CAPSULA, GLICOCALIX O ENVOLTURA GLUCOIDE

I.

INTRODUCCION:

Generalmente, la capsula se pone de manifiesto mediante una coloración negativa o una modificación de ella debido a que no absorbe los colorantes normales de pared en bacterias.

Un procedimiento útil para el examen de muestras es el estudio microscópico de preparaciones fijas - extensiones o frotis - preparados a partir de ellas y coloreadas por el método adecuado. Esto permite eliminar el movimiento que presentan los microorganismos en las preparaciones en fresco. La retención de colorantes de alquitrán de hulla por las bacterias permite su fácil observación bajo el microscopio.

La forma más común de preparar un frotis es extender un poco de muestra sobre un portaobjetos desengrasado, con el asa bacteriológica, pero también se puede hacer con un hisopo ó presionando el portaobjetos sobre la muestra “impronta”.

Dependiendo del tipo de microorganismo o estructura del mismo que se desee observar es el tipo de tinción que se emplea. P. ej. Tinción Simple, Diferencial de Gram, Negativa, para cápsulas (Método de Anthony), para flagelos, los colorantes son productos químicos sintéticos del tipo de las anilinas capaces de combinarse con una gran variedad de sustancias impartiéndoles color. El color es impartido por su estructura química.

OBJETIVOS:

  • - Ejecutar, algunas de las tinciones especiales para capsula: método de Maneval, Hiss, Anthony-Welch, nigrosina, Tinta China Pelikan Ro Wright, siguiendo los protocolos establecidos, para luego observarlos al microscopio óptico a inmersión.

  • - Reconocer, a través del microscopio óptico la estructura capsular (glicocalix) presente en el género Klebsiella obtenido a partir de muestras biológicas.

II.

MARCO TEORICO:

2.1. Capsulas y Glicocalix

Es una cubierta de grosor vartiable formada habitualmente por unidades de polisacáridos, proteínas o ambos. Si está bien estructurada y se encuentra bien adherida a la célula, se le denomina cápsula; si por el contrario, tiene estructura mal definida y su adhesión es débil, se le conoce como glicocálix. De acuerdo a su estructura química, puede ser flexible o rígida. La rigidez le confiere la característica de una matriz impermeable. Determina la adhesión a superficies (biopelículas), constituye una barrera de protección contra la fagocitosis y los anticuerpos e impide la desecación y la acción de otros agentes. Actúa como barrera de difusión ante algunos antibióticos. Ejemplos de bacterias con cápsula son Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae. Algunas bacterias poseen una capa de material fuera de la pared celular. Cuando una capa está bien organizada y no se elimina fácilmente, se denomina

2.2. Cápsula Como se forman

En muchos casos, los organismos procarióticos secretan en su superficie materiales viscosos y pegajosos. Estos materiales suelen ser polisacáridos, y en algunos casos

proteínas.

FUNCIONES

En laboratorio, muchas bacterias suelen perder la capacidad de formar cápsulas al cabo de varios subcultivos. Así pues, la posesión o no de cápsula es algo que no afecta a la viabilidad de las bacterias. Pero en medios naturales, las cápsulas confieren a las bacterias una serie de propiedades, que dependen del nicho ecológico particular donde viva cada bacteria. Estudiaremos una serie de propiedades o papeles generales, comunes a todas las cápsulas, para concluir con algunos ejemplos de papeles específicos.

2.3.

Glicocalix

El glicocálix es una red de polisacáridos que se extiende desde la superficie de las bacterias y otras células. Este a diferencia de la cápsula es flexible y no se une firmemente a la superficie bacteriana =====.

Cómo se forman

Al igual que las cápsulas cuando organismos procarióticos secretan en su superficie materiales viscosos y pegajosos. Estos materiales suelen ser polisacáridos, y en algunos casos proteínas.

Importancia

El glicocálix desempeña varias funciones en las bacterias. Las capas de polisacárido externo son importantes en la adherencia o fijación de algunos microorganismos patógenos a sus hospedadores. El glicocálix ayuda a las bacterias a fijarse a objetos sólidos en medios acuáticos, o a superficies tisulares en huéspedes vegetales y animales. También pueden actuar como antígenos y estar implicadas en el reconocimiento bacteriano, así como ayudar a la adherencia superficial y a la formación de biopelículas.

  • 2.4. Tinción o coloración de bacterias

Los procedimientos que ponen de manifiesto diferencias entre las células bacterianas o en partes una célula se conoce como técnica de coloración diferencial. Son algo más que elaboradas que la técnica simple en la que las células se someten a una sola solución colorante o reactivo colorante.

Las tinciones se combinan químicamente con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto el proceso termina de hacerlo. El método, por consiguiente, es bastante drástico y puede producir artificios.

Las tinciones más frecuente son sales. Las tinciones básicas consisten en un catión coloreado unido a un anión incoloro, mientras las ácidas constituyen exactamente lo contrario, unido a dos cationes. Las células bacterianas son abundantes en ácidos nucleídos, los cuales portan cargas negativas en formas de fosfatos.

2.5.Tinción acidorresistente

Las bacterias acidorresistentes son las que retiene la carbolficsina, aun cuando intente descolorarlas con un mezcla de alcohol y ácido clorhídrico. Las bacterias acidorresistentes se tiñen de color rojo; el resto adquiere el color del colorante de contraste en este caso el verde o azul.

2.6.Tinción negativa

Este procedimiento consiste en la tinción de fondo con unos colorantes ácidos para

dejar las células incoloras en contraste. Comúnmente se utiliza el colorante negro llamado nigrusína. El método sirve para observar bacterias o estructuras que difícilmente se tiñen con las técnicas directas.

2.7.Tinción de los flagelos

Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo si se tratan con una suspensión coloidal inestable de sales de ácidos tánico para formar un precipitado denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de manifiesto su presencia y disposición en las células. De esta manera el diámetro aparenta que la estructura aumento de tamaño con fucsina básica los hace visibles en el microscopio óptico.

2.8.Tinción de la cápsula

La cápsula se pone de manifiesto mediante una coloración negativa o una modificación de esta. Uno de los métodos de ´´ tinción de la cápsula ´´ incluye el tratamiento de las bacterias con un solución caliente de cristal violeta seguido por un lavado con una solución de sulfato de cobre. El sulfato de cobre también imparte color al fondo y esto resulta en que la célula y el fondo aparezcan teñido en color azul oscuro mientras la cápsula aparece de color azul pálido.

2.9.Tinción del núcleo

1 Los núcleos se pueden teñir por la tinción de Feulgen la cual es específica para el

ADN.

  • 2.10. Tinción de las esporas

Las esporas se observan de la manera más simple como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones de bacterias sin teñir, la parte de las esporas

relativamente impermeable, las esporas comúnmente se tiñen con verde de malaquita y carbolfucsina o carbolfucsina

  • 2.11. Tinción Gram.

Una característica taxonómica importante de las bacteria es su respuesta a la tinción

a de Gram esta característica parece ser fundamental, reacción a la tinción se correlaciona a con muchas otras propiedades morfológicas en maneras relacionadas filogenéticamente. Microorganismo potencialmente gram positivo puede verse como tal cuando concurre un conjunto de particular de condiciones ambientales en un

cultivo joven. El procedimiento para tinción de Gram se inicia con la aplicación de un colorante básico el cristal de violeta. Luego se aplica una solución de yodo en este momento todas las bacterias de tiñen de azul. Continuación las células se tratan con alcohol las células grampósitiva contienen el

cristal violeta−yodo y permanecen de color azul; en cambio las gramnegativa se

descoloran completamente por el alcohol. Por último se aplican un colorante de

contraste safranina, que es un colorante rojo. De esta manera, las células

III.

MATERIALES Y METODOS

 
  • A. MATERIALES:

  • - Muestra: heces

  • - Mechero

 
  • - Laminas porta objeto y cubreobjetos

  • - Cubeta de Tinción

 
  • - Agua destilada

 
  • - Colorante: azul de metileno de Loeffler o safranina

  • - Microscopio óptico

  • B. PROCEDIMIENTO:

1.

Método de Nigrosina o Tinción Negativa Técnica:

 
  • a. Mezclar una gota de suspensión del germen capsulado en una gota de

nigrosina al 10% sobre una lámina portaobjeto durante un minuto.

  • b. Hacer una extensión empleando otra lamina.

  • c. Secar y fijar al calor de una llama de mechero.

  • d. Contra colorear con azul de metileno de Loeffler o safranina.

  • e. Lavar con agua destilada.

  • f. Sacar al calor de una llama de mechero.

  • g. Observar al microscopio óptico con objetivo de inmersión.

IV.

RESULTADOS Y DISCUSION:

  • La capsula aparece transparente bajo un fondo bacterias y el cuerpo bacteriano aparece de color azul rojizo.

- salmonella - Parte periférica
- salmonella
- Parte periférica

V.

CONCLUSIONES:

  • - Se ejecutó algunas de las tinciones especiales para capsula: método de Nigrosina o tinción negativa, siguiendo los protocolos establecidos, para luego observarlos al microscopio óptico a inmersión.

  • - Se reconoció, a través del microscopio óptico la estructura capsular (glicocalix) presente en el género Klebsiella obtenido a partir de muestras biológicas.

VI.

BIBLIOGRAFIA:

VII.

CUESTIONARIO:

  • 1. ¿Qué bacterias son formadoras de capsula?

    • - Bacilos

    • - Estreptococos

    • - Fagocitosis

    • - Estafilococo Aureus

    • - Haemophilus Influenzae

      • 2. ¿Por qué la presencia de capsula en una bacteria aumenta su virulencia? Por qué los factores de virulencia los permite cumplir con cada una de sus etapas los que pueda de estructuras o productos celulares.

      • 3. Como se origina la síntesis de la capsula bacteriana? El glucocalix es un polímero de poli péptidos o de ambos su complejidad química varia ampliamente entre distintos especies bacterianas, el material glucocalix es viscoso y en su mayoría se forma en el interior de la célula.

      • 4. Los micoplasmas (PPLO) son formadoras de capsulas?. Si es así que tipo de polímeros forma? Los micoplasmas (PPLO) son un grupo de bacterias que carecen de pared celular, pueden tener vida libre en el suelo y aguas.

      • 5. En el método de Anthony-Welch ¿Qué función cumple el sulfato de cobre? Este método permite a la tinción de la capsula de la bacteria, se utiliza como tinte primario cristal violeta al 1% o azul de metileno y este lleva la función de teñir todo, tinción de capsula por frotis color oscuro con reactivos.

      • 6. ¿Qué asociación tienen las lectinas con las capsulas bacterianas? Las lactinas son proteínas que se unen azucares con elevada especialmente para cada tipo distinto, no se deben confundir con los glicoproteínas.

      • 7. Dentro de la propiedad de adherencia que tiene las bacterias capsuladas, indique Ud. algunos efectos benéficos que aquellas pueden brindar a los organismos superiores. Fundamente. El derivado de bacillos lactoresporus, es un probiotico muy potente que está en capsula en una espora esta concentración permite que el prebiótico sobreviva en los ácidos.

VIII.

ANEXOS:

  • Pasos para la tinción negativa

VIII. ANEXOS:  Pasos para la tinción negativa
  • Capsula de las bacterias.

 Capsula de las bacterias.