1. http://www.chemicool.com/definition/high_performance_liquid_chromatography_hplc.

ht ml High-performance liquid chromatography (HPLC) is a form of liquid chromatography to separate compounds that are dissolved in solution. HPLC instruments consist of a reservoir of mobile phase, a pump, an injector, a separation column, and a detector. Compounds are separated by injecting a plug of the sample mixture onto the column. The different components in the mixture pass through the column at different rates due to differences in their partitioning behavior between the mobile liquid phase and the stationary phase. Instrumentation Solvents must be degassed to eliminate formation of bubbles. The pumps provide a steady high pressure with no pulsating, and can be programmed to vary the composition of the solvent during the course of the separation. The liquid sample is introduced into a sample loop of an injector with a syringe. When the loop is filled, the injector can be inject the sample into the stream by placing the sample loop in line with the mobile phase tubing. The different types of HPLC columns are described in a separate document. The presence of analytes in the column effluent is recorded by detecting a change in refractive index, UV-VIS absorption at a set wavelength, fluorescence after excitation with a suitable wavelength, or electrochemical response. Mass spectrometers can also be interfaced with liquid chromatography to provide structural information and help identify the separated analytes. Performa tinggi kromatografi cairan (HPLC) adalah suatu bentuk kromatografi cair untuk memisahkan senyawa yang terlarut dalam larutan. instrumen HPLC terdiri dari suatu reservoir fase gerak, pompa, injektor, sebuah kolom pemisahan, dan detektor. Senyawa dipisahkan dengan menyuntikkan sebuah plug campuran sampel ke kolom. Berbagai komponen dalam campuran melalui kolom pada tingkat yang berbeda karena perbedaan perilaku partisi mereka antara fase cair bergerak dan fase diam. Instrumentasi Pelarut harus penghilangan untuk menghilangkan pembentukan gelembung. Pompa memberikan tekanan tinggi mantap dengan berdenyut tidak, dan dapat diprogram untuk memvariasikan komposisi pelarut selama pemisahan. Sampel cair dimasukkan ke dalam sebuah loop sampel sebuah penyuntik dengan jarum suntik. Ketika loop diisi, injector dapat menyuntikkan sampel ke sungai dengan menempatkan loop sampel sejalan dengan tubing fase gerak. Berbagai jenis kolom HPLC dijelaskan dalam dokumen terpisah. Kehadiran analit dalam kolom efluen dicatat dengan mendeteksi perubahan dalam indeks bias, serapan UV-VIS pada panjang gelombang ditetapkan, fluoresensi setelah eksitasi dengan panjang gelombang yang sesuai, atau respon elektrokimia. spektrometer massa juga dapat dihubungkan dengan kromatografi cair untuk memberikan informasi struktural dan membantu mengidentifikasi analit dipisahkan.

This is important because bubbles in a flow cell can interfere with the detection of sample components. equipped with a sample loop of the appropriate size for the analysis being performed. carried through a column packed with specialized materials for component separation. The sample components' presence in the flow cell prompts an electrical response from the detector.2. guard column. the separated components pass through a detector flow cell before they pass into the waste reservoir.idex-hs. a sacrificial guard column is often included just prior to the analytical column to chemically remove components of the sample that would otherwise foul the main column. a back pressure regulator is often installed immediately after the detector. An HPLC system begins with the solvent reservoir. post-pump inline filter. it is important to utilize either a sample filter or a precolumn filter to prevent valve and column damage. Alternatively. Other important elements are an inlet solvent filter.com/support/upchurch/hplc_center. Following the analytical column. The function of each of these components is briefly described below. This valve. injector. which is digitized and sent to a recorder. As a final system enhancement. http://www. quantify.000 psi! The basic components of an HPLC system include a solvent reservoir. This is based on the differential attraction of the sample components for the solvent and the packing material within the column. The next component in the system is the sample injector. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (HPLC) adalah suatu proses analitis . also known as the injection valve. As these seals break down and release particles into the flow path. allows for the reproducible introduction of sample into the flow path. back-pressure regulator and/or solvent sparging system. This device prevents solvent bubble formation until the solvent is completely through the detector. an analytical column allows the primary sample separation to occur. Following the injector. detector. Each of the components described above requires fittings to couple it into a system. analytical column. which contains the solvent used to carry the sample through the system. The solvent should be filtered with an inlet solvent filter to remove any particles that could potentially damage the system's sensitive components. Solvent is propelled through the system by the pump. recorder and waste reservoir. an inline solvent filter prevents any post-pump component damage. pump. Because the sample often contains particulate matter. which slowly break down over time.aspx High Performance Liquid Chromatography (HPLC) is an analytical process utilizing special instruments designed to separate. and component data is obtained through the combination of a detection mechanism coupled with a data recording system. All this occurs under pressures which may reach or exceed 6. precolumn filter. Samples of interest are introduced to a solvent flow path. The recorder helps analyze and interpret the data. and analyze components of a chemical mixture. This often includes internal pump seals. sample filter. an inert gas sparging system may be installed to force dissolved gasses out of the solvent being stored in the solvent reservoir. However.

detektor. kolom analitis. penting untuk memanfaatkan baik sampel filter atau precolumn filter untuk mencegah kerusakan katup dan kolom. dilakukan melalui kolom dikemas dengan bahan khusus untuk pemisahan komponen. dilengkapi dengan sampel loop ukuran yang sesuai untuk analisis yang dilakukan. kolom penjaga. Seperti anjing laut memecah dan melepaskan partikel ke jalur aliran. Namun. yang berisi pelarut yang digunakan untuk membawa sampel melalui sistem. Valve ini. sebuah inline pelarut Saringan mencegah kerusakan komponen pasca-pompa. juga dikenal sebagai katup injeksi. Setelah kolom analitis. Hal ini sering mencakup segel pompa internal. Fungsi dari masing-masing komponen secara singkat dijelaskan di bawah ini. Komponen berikutnya dalam sistem adalah injektor sampel. pasca-pompa inline filter. yang secara perlahan memecah dari waktu ke waktu. Semua ini terjadi di bawah tekanan yang dapat mencapai atau melebihi 6. komponen dipisahkan melewati sebuah sel aliran detektor sebelum mereka masuk ke dalam reservoir limbah.000 psi! Komponen dasar dari suatu sistem HPLC termasuk pelarut reservoir. kolom analitis memungkinkan pemisahan sampel utama terjadi. dan data komponen diperoleh melalui kombinasi mekanisme deteksi digabungkan dengan sistem pencatatan data. Karena sering berisi sampel partikulat. Pelarut didorong melalui sistem oleh pompa. precolumn filter. injektor. pompa. dan menganalisa komponen dari campuran bahan kimia. memungkinkan untuk pengenalan reprodusibilitas sampel ke dalam jalur aliran. Ini didasarkan pada daya tarik diferensial dari komponen sampel untuk pelarut dan bahan kemasan dalam kolom. mengukur. Sistem HPLC diawali dengan reservoir pelarut. sampel filter. Sampel bunga diperkenalkan ke jalur aliran pelarut. Pelarut harus disaring dengan pelarut inlet saringan untuk menghilangkan partikel yang berpotensi dapat merusak komponen-komponen sensitif sistem. Setelah injektor. perekam dan reservoir limbah. Elemen penting lainnya adalah pelarut inlet filter.menggunakan instrumen khusus yang dirancang untuk memisahkan. penjaga kolom kurban sering dimasukkan sesaat sebelum kolom analisis untuk menghapus komponen kimiawi sampel yang akan dinyatakan busuk kolom utama. regulator back-tekanan dan / atau pelarut Sparging sistem. Kehadiran .

Bagian ini menjelaskan bagaimana pelaksanaan dan penggunaan serta prinsip HPLC yang sama dengan kromatografi lapis tipisdan kromatografi kolom. Hal ini memungkinkan pemisahan yang lebih baik dari komponen-komponen dalam campuran. Atau. Meskipun disebut sebagai “normal†. Metode-metode ini sangat otomatis dan sangat peka. http://www. Fase normal HPLC Ini secara esensial sama dengan apa yang sudah anda baca tentang kromatografi lapis tipis atau kromatografi kolom. Perekam membantu menganalisis dan menginterpretasikan data.komponen Sampel 'dalam sel aliran memicu reaksi listrik dari detektor. Perangkat ini mencegah terbentuknya gelembung pelarut pelarut sampai benar-benar melalui detektor. didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Ini membuatnya lebih cepat. Perkembangan yang lebih luas melalui kromatografi kolom mempertimbangkan metode pendeteksian yang dapat digunakan. yang didigitalkan dan dikirim ke recorder.scribd. ada dua perbedaan dalam HPLC. Masing-masing komponen dijelaskan di atas membutuhkan alat kelengkapan untuk pasangan ke dalam sistem. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah grafitasi. Pelaksanaan HPLC Pengantar HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi darikromatografi kolom. Kolom dan pelarut Membingungkan. Hal ini penting karena gelembung dalam sel aliran dapat mengganggu deteksi komponen sampel. Sebagai tambahan sistem final.com/doc/27204824/Kromatografi-Cair-Kinerja-Tinggi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Ditulis oleh Jim Clark pada 06-10-2007 HPLC adalah alat yang sangat bermanfaat dalam analisis. ini bukan  . regulator tekanan balik sering dipasang segera setelah detektor. yang mana tergantung pada polaritas relatif dari pelarut dan fase diam. suatu gas inert Sparging sistem dapat diinstal untuk memaksa gas terlarut dari pelarut disimpan di reservoir pelarut. HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang berukuran sangat kecil untuk material terpadatkan dalam kolom yang mana akan memberi luas permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan molekul-molekul yang melintasinya.

pelarut polar digunakan berupa campuran air dan alkohol seperti metanol. Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan bergerak lebih cepat melalui kolom.6 mm (dan mungkin kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm. tidak sama halnya dengan kromatografi gas (jika anda telah mempelajarinya). Kolom diisi dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya heksan. .Melihat seluruh proses Diagram alir HPLC Injeksi sampel Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan bagaimana mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. senyawa yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati kolom. Oleh karena itu. tetapi silika dimodifikasi menjadi non polar melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada permukaannya secara sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18.merupakan bentuk yang biasa dari HPLC. Fase balik HPLC Dalam kasus ini. Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa digunakan dalam HPLC. ukuran kolom sama. Senyawa-senyawa polar dalam campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada silika yang polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar. akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan molekul polar dalam campuran yang melalui kolom. Dalam kasus ini. Oleh karenanya. Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut karena membutuhkan pemutusan ikatan hydrogen sebagaimana halnya senyawa-senyawa tersebut berada dalam molekul-molekul air atau metanol misalnya. Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan cenderung membentuk atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi gaya van der Waals. Oleh karena itu. molekul-molekul polar dalam campuran akan menghabiskan waktunya untuk bergerak bersama dengan pelarut. Atraksi yang terjadi tidak akan sekuat atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika (fase diam) dan molekulmolekul polar dalam larutan. Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4. Karena proses ini meliputi tekanan. Sebagai contoh. senyawa-senyawa ini akan menghabiskan waktu dalam larutan dan akan bergerak lambat dalam kolom.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful