You are on page 1of 44

LA VALIDACIÓN

EN LA INDUSTRIA

Curso on line

Beatriz Soledad

Contenido

INTRODUCCIÓN................................................................................................7

MÉTODOS DE VALIDACIÓN.......................................................................11

MÉTODOS ANALÍTICOS....................................................................................11

Exactitud......................................................................................................13

Precisión......................................................................................................14

Especificidad...............................................................................................14

Límite de detección......................................................................................15

Límite de cuantificación..............................................................................15

Linealidad....................................................................................................15

Rango..........................................................................................................15

Robustez......................................................................................................16

Rudeza.........................................................................................................16
Estudios Colaborativos.............................................................................................................16

MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS.........................................................................18

Ensayos Microbiológicos Cualitativos........................................................21
Características de operación..........................................................................................................22

Exactitud...................................................................................................................................22

Recuperación............................................................................................................................22

Curva de Calibración................................................................................................................22

2

Linealidad.................................................................................................................................23

Limites de detección.................................................................................................................23

Limite de cuantificación y detección.........................................................................................23

Precisión...................................................................................................................................23

Ensayos Microbiológicos Cuantitativos......................................................29
Características de rendimiento.......................................................................................................30

Exactitud...................................................................................................................................30

Recuperación............................................................................................................................30

Curva de Calibración................................................................................................................30

Linealidad.................................................................................................................................30

Limite de detección...................................................................................................................31

Limites de cuantificación y determinación................................................................................31

Precisión...................................................................................................................................31

PROCESOS DE FABRICACIÓN............................................................................36

Tipos de validación......................................................................................37
Prospectiva....................................................................................................................................38

Concurrente...................................................................................................................................38

Revalidación.................................................................................................................................39

Retrospectiva.................................................................................................................................39

Planificación de los estudios de validación................................................39
Prioridad de los productos y/o sistemas a validar..........................................................................40

Revalidación................................................................................................40

Elementos básicos para organizar con éxito un programa de validación. .41

3

Implicación de la Dirección...........................................................................................................41

Creación de un Comité de Validación............................................................................................41

Formación de un Equipo de Trabajo Multidisciplinario................................................................41

Etapas en la validación de un producto o un proceso................................41
Plan Maestro de Validación...........................................................................................................42

Calificación del Diseño (DQ)........................................................................................................42

Calificación de la Instalación (IQ).................................................................................................42

Calificación Operacional (OQ)......................................................................................................42

Calificación del Funcionamiento (PQ)..........................................................................................42

Bibliografía.........................................................................................................43

PROLOGO

4

desde cualquier lugar. ni interrumpir su horario. Seguimiento personalizado con respuesta en menos de 48 horas a tus consultas. El e-learning es el aprendizaje asistido por tecnologías de la información y fomenta el uso intensivo de las Tecnologías de Información y Comunicación facilitando la creación. Las ventajas del e-learning son las siguientes: Flexibilidad de estudio de acuerdo a su disponibilidad de tiempo Acceso las 24 horas del día. todos los días. Un estudiante puede ser co-instructor de otros estudiantes a la par de irse perfeccionando en sus conocimientos Este sistema está dirigido a personas que desean ampliar sus destrezas sin necesidad de interrumpir sus actividades o gastar tiempo en largos traslados.comunidaddeaprendizaje@gmail.com. adopción y distribución de contenidos. Human Capital Solutions conceptualiza el e-learning como: ”Es educación disponible a través de tecnología”. Interacción con participantes de todo el mundo 5 . Esto permite que el alumno intercambie opiniones y aportes a través de las TIC. dirigiéndote a: cae. por lo que las personas se pueden capacitar sin desplazarse de su lugar de trabajo. así como la adaptación del ritmo de aprendizaje y la disponibilidad de las herramientas de aprendizaje independientemente de límites horarios o geográficos.

com 6 . puede hacernos una donación cuyo monto queda a su criterio. Si el curso que bajó fue de su agrado y desea colaborar con nosotros para el desarrollo y mantenimiento de esta actividad. Para ello diríjase a nuestra web: http://www.habilidadesyconocimiento. anticipadamente le manifestamos nuestro reconocimiento.

diversas instituciones tales como la Food and Drug Administration (FDA). las Buenas Prácticas de 7 . INTRODUCCIÓN La calidad de los productos de una empresa es de suma importancia tanto para su prestigio como para su desarrollo económico. ISO 9000. Atendiendo a esta necesidad.

el control estadístico de calidad tiene como objetivo monitorizar de forma continua. El proceso de validación exige el tratamiento estadístico para el manejo y análisis de los datos permitiendo juicios con criterio que llevan a una correcta evaluación. y probablemente atribuible a alguna causa específica que se podrá investigar y corregir. En tal sentido. representando la variabilidad de las mediciones para detectar la presencia de un exceso de variabilidad no esperable por puro azar. la estabilidad del proceso. y por medio de los gráficos de control este análisis se efectúa de forma visual. mediante técnicas estadísticas.Manufactura (Good Manufacturing Procedures (GMP´s)) la Food and Agricultura Organization of the United Nation (FAO) y los Buenos Procedimientos de Laboratorio (Good Laboratory Procedures (GLP´s)) han venido formulando diferentes programas y parámetros para lograr el aseguramiento de la calidad de los distintos productos que elaboran las empresas. la define como 8 . un producto con las especificaciones y atributos de calidad predeterminados. es necesario conocer su significado: En 1987. 2001. Para hablar de validación. la FDA la define como: “La evidencia documentada que provee un alto grado de seguridad en que un proceso especifico producirá en forma consistente.” La Agencia Europea para la Evaluación de Productos Medicinales.

además de su calibración y mantenimiento preventivo periódico. los equipos. instrumentos y aparatos que son utilizados tanto en el proceso productivo como en los métodos de análisis. a los cuales es importante evaluar para determinar las variaciones potenciales que pueden ocurrir durante el proceso de manufactura. han sido diseñados y/o seleccionados adecuadamente para el fin propuesto. Es por ello importante verificar que los materiales se encuentran dentro de los límites establecidos. En cuanto a los materiales se consideran tanto las materias primas como los materiales de envase y empaque utilizados en la elaboración. Es necesario validar todos los recursos operacionales involucrados en el proceso de manufactura de un producto. los métodos y desde luego el personal. “Es el acto de demostrar y documentar que el procedimiento opera efectivamente”. 9 . En una primera etapa se evalúan todos los recursos operacionales que pueden introducir variaciones en el proceso productivo como los materiales. Esto asegura que el producto resultante de dicho proceso tecnológico posee los atributos y características con las que fue diseñado y que estas se mantengan de lote a lote a través de la producción. En este punto es necesario comprobar que todos los elementos y operaciones involucradas en el proceso productivo. A través de un sistema de validación se recogen y analizan las evidencias que sustentan la completa eficiencia de un proceso. También se incluyen los equipos.

Finalmente se debe incluir todo el personal involucrado con la ejecución del proceso productivo. información detallada sobre vestimenta. necesarios para la óptima realización del proceso de manufactura de un producto en particular. su adecuado entrenamiento. como los procesos de control de calidad. equipos de seguridad y hábitos higiénicos. Esto es lo que en términos generales se conoce como Validación de un Proceso. Con el propósito fundamental de asegurar que el proceso productivo se encuentra bajo control. 10 . descripción clara de sus actividades. es necesario contar con procedimientos escritos para todas las operaciones que se realizan. Una vez que el proceso productivo se encuentra optimizado. Esto incluye tanto las operaciones de producción. es necesario pasar a una segunda etapa la cual consiste en un sistema documentado que permite constatar la reproducibilidad de un proceso dado.

que el objetivo de la validación de un método analítico es demostrar que el procedimiento. cuando se aplica adecuadamente. 11 . productos químicos para la agricultura y la veterinaria. produce resultados que se ajustan al propósito del método. Métodos de validación En este capítulo se mostrarán diferentes métodos de validación utilizados con propósitos distintos los cuales se describen a continuación: MÉTODOS ANALÍTICOS La validación de un método analítico es el proceso mediante el cual se establece por medio de estudios de laboratorio que las características representativas del método analítico cumplen con las especificaciones para su aplicación. Señala la Australian Pesticidas and Veterinary Medicines authority en su Guía para la validación de métodos analíticos para constituyentes activos. Las características típicas de ejecución que deberían considerarse en la validación de los tipos de métodos descritos se presentan en la Tabla 1.

en un reporte sobre la validación de métodos analíticos para el control de alimentos “Un método validado ideal es aquel que ha progresado completamente a través de un estudio colaborativo.. conducción e interpretación del funcionamiento de los métodos estudiados”. Según la FAO (1997). puede ser necesaria la revalidación en los siguientes casos: una propuesta de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) de un método analítico revisado. Exactitud Precisión Especificidad Límite de detección Límite de cuantificación Linealidad Rango Robustez Rudeza En el caso de métodos compendiados. Tabla 1.Características analíticas típicas usadas en métodos de validación. la participación de 8 laboratorios que 12 . de acuerdo con los protocolos internacionales armonizados para el diseño. o el uso de un método general establecido con un nuevo producto o materia prima. Esto usualmente requiere un estudio en el cual se involucre en el diseño un mínimo de 5 métodos de ensayo.

cambios en la composición del producto o del medicamento y cambios en el procedimiento analítico. cuando el procedimiento se aplica repetitivamente a muestras múltiples o a una muestra homogénea. Precisión Definición: La precisión de un método analítico se refiere al grado de concordancia entre los resultados individuales de la prueba. que son los siguientes: Exactitud. al valor verdadero. 13 . Los documentos ICH recomiendan que la exactitud debe ensayarse usando un mínimo de nueve determinaciones sobre un mínimo de tres niveles de concentración. Definición: es el acercamiento de los resultados experimentales obtenidos. Estas características representativas se expresan en términos de parámetros analíticos. Los documentos ICH (International Conference on Harmonization: Informe de Seguridad de la Conferencia Internacional de Armonización (cuyas siglas son ICH en inglés y CIARM en español)) dan una guía sobre la necesidad de revalidación en las siguientes circunstancias: Cambios en la síntesis de la sustancia o del principio activo.reporten datos válidos y más frecuentemente incluyan réplicas ciegas que aseguren los parámetros de repetibilidad de los ensayos entre laboratorios. Se expresa como el porcentaje de recuperación por el ensayo de cantidades conocidas adicionadas al analito. tres concentraciones y tres réplicas de cada concentración). cubriendo un rango especificado (esto es.

Otras autoridades internacionales (IUPAC. tales como impurezas en muestras activas o productos de degradación en productos terminados. Definición: El documento IHC. Especificidad. AOAC) han preferido el término “selectividad” reservando “especificidad” para aquellos procedimientos que son completamente selectivos. define especificidad como la habilidad para evaluar inequívocamente el analito en presencia de los componentes que se espera que estén presentes. la definición anterior tiene las siguientes implicaciones: Límite de detección Es un parámetro de prueba límite. Límite de cuantificación Es un parámetro para ensayos cuantitativos de bajos niveles de compuestos en matrices de muestras. productos de degradación. bajo las condiciones experimentales establecidas. Es la concentración más baja a la cual puede detectarse el analito. pero no necesariamente cuantificarse. La falta de especificidad de un procedimiento analítico puede ser compensada por otro procedimiento analítico de soporte. así como impurezas. Los documentos IHC recomiendan que la repetibilidad debería ensayarse usando un mínimo de nueve determinaciones cubriendo el rango especificado para el procedimiento (esto es tres concentraciones y tres réplicas de cada concentración o usando un mínimo de seis determinaciones a 100 % de la concentración del análisis). Para los métodos de prueba o ensayo a continuación. y componentes de la matriz. Es la 14 .

calculada de acuerdo a una relación matemática establecida de los resultados obtenidos de la prueba al analizar muestras de concentración variable al analito. precisión y linealidad. Linealidad Es la habilidad del método para obtener resultados en la prueba proporcionales a la concentración del analito en muestras dentro de un rango dado que resultan directamente o mediante una transformación matemática bien definida. Rango Es el intervalo entre el nivel más alto y más bajo del analito en el que se ha demostrado que puede ser determinado con exactitud. Generalmente se expresa en términos alrededor de la pendiente de regresión lineal. 15 . Robustez Definición: es la medida de la capacidad de un método analítico para permanecer inalterado por pequeñas pero deliberadas variaciones en los parámetros del método y proporciona un índice de su confiabilidad durante su uso. Normalmente se expresa en las mismas unidades que los resultados de la prueba en el método analítico. bajo las condiciones experimentales establecidas. tal y como lo indica el método.concentración de muestra en un analito que puede ser determinada con precisión y exactitud aceptables.

La evaluación o no de los parámetros arriba mencionados dependerá del tipo de información que se quiera obtener de dicha validación. procedimientos analíticos regulatorios y un procedimiento analítico alternativo). Rudeza Definición: es el grado de reproducibilidad de los resultados de la prueba obtenidos por el análisis de una misma muestra bajo una variación de las condiciones normales de prueba. lotes de reactivos. es decir del objetivo perseguido. También se utilizan los estudios colaborativos para evaluar la variabilidad entre laboratorios (esto es la reproducibilidad). días). equipos diferentes. tales como diferentes laboratorios. días. se tienen distintas características de validación para varios tipos de ensayos. se debe considerar un procedimiento de operación estándar adecuadamente escrito. Es una medida de la reproducibilidad de los datos de la prueba bajo las condiciones operacionales normalmente esperadas de laboratorio a laboratorio y de analista a analista. en este caso un procedimiento analítico es usado en más de un laboratorio si se compara y evalúa la precisión y exactitud de dos procedimientos analíticos (Ej. analistas. en “Guía para la Industria”. temperaturas. etc. Al planificar un ensayo colaborativo. el número de variables a ser ensayadas y el número de réplicas requeridas (Standard methods for the examination of water and wastewater. Estudios Colaborativos Se realizan estudios colaborativos para evaluar la precisión intermedia (Ej. analistas. Según la Food and Drug Administration (FDA) 2000. 1998) 16 . ensayos.

discutirse y explicar cualquier anormalidad. 17 . deben utilizarse. 2002). En el caso de análisis cualitativos. Cuando se realizan estudios colaborativos. si es posible. Apéndice D. el número mínimo de laboratorios es de 8 y sólo en casos especiales en los cuales se utiliza equipos muy costosos pueden conducirse estudios con un mínimo de 5 laboratorios. muestras homogéneas del mismo lote. Deben analizarse estadísticamente los resultados comparativos. es necesario un mínimo de 10 laboratorios (AOAC INTERNATIONAL.

Los productos medicinales deben ser particularmente seguros porque ellos usualmente son suministrados a personas enfermas. de la calidad del agua. el ensayo de esterilidad toma 14 días. que generalmente tienen el sistema inmune comprometido y no son capaces de responder a una infección severa. tiene su fundamento en que los microorganismos y sus productos. y se hace imprescindible demostrar 18 . por lo general más rápidos. el crecimiento y detección de Mycoplasma. las enzimas y las toxinas. Los ensayos de Gram y los ensayos clásicos de identificación han sido exitosos en los últimos 150 años. toma 35 días y el cultivo de la Mycobacterium toma 56 días. Los métodos encontrados en las farmacopeas consumen generalmente mucho tiempo. Los métodos microbiológicos convencionales están basados en el cultivo y crecimiento sobre un agar. Es por ello que se presenta la necesidad de validar métodos alternativos. MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS La importancia de la microbiología clínica. entre otros. pudiéndose caracterizar a la colonia después de 24 horas de incubación. especialmente los componentes de la pared celular. de productos medicinales. de alimentos. pueden causar infecciones en humanos y animales. débiles y ancianos.

límite de detección. por lo que es preciso plantearse y responder a las siguientes preguntas: ¿Está algo ahí? (Ensayo cualitativo) ¿Cuánto hay ahí? (Ensayo cuantitativo) ¿Qué hay? (Ensayo de identificación) Otra dificultad surge porque en la USP 26. a menudo es la mejor y la única solución disponible. En consecuencia. El laboratorio debe validar los métodos normalizados aplicados a matrices que no se especifiquen en el procedimiento normalizado. No obstante. S. 2005). En G-ENAC-04 (2002). La extensión de la validación necesaria dependerá del método y su aplicación. que con la microbiología. se señala que la validación de los métodos de ensayo debe reflejar las condiciones reales de ensayo. Esto puede conseguirse utilizando productos contaminados naturalmente o productos inoculados con un nivel conocido de microorganismos contaminantes.que el método mida sólo eventos ciertos y no proporcione falsos positivos. El analista debe estar consciente de que la inoculación de una matriz con microorganismos contaminantes imita tan sólo de una manera parcial la presencia de contaminantes naturales. robustez. sin embargo la definición de estos términos se relacionan mas con la química analítica. (2003). (Sutton. en el apartado (1225) relativo a “Validación de Métodos Alternativos” los documentos usan términos familiares como linealidad. 19 . los datos generados algunas veces son difíciles de interpretar.

exactitud relativa. Los resultados deben evaluarse utilizando métodos estadísticos apropiados. los sesgos detectados como resultado de la participación en ensayos de aptitud). Los métodos de ensayo microbiológicos cualitativos. desviación positiva. reproducibilidad y el límite de cuantificación dentro de una variabilidad establecida y. debe considerarse la especificidad. desviación negativa.. cuando sea apropiado. repetibilidad. Los distintos componentes individuales de la incertidumbre deben identificarse y demostrar que están bajo control y evaluar su contribución a la variabilidad de los resultados. deben ser validados estimando. repetibilidad y reproducibilidad En el caso de ensayos microbiológicos cuantitativos. tales como aquellos en los que el resultado se expresa en términos de detectado/no detectado. límite de detección. exactitud relativa. efecto matricial. aunque lo ideal es incluir los sesgos (p. Ej. en caso necesario. Algunos componentes como los efectos del pipeteado. Las diferencias debidas a las matrices deben tenerse en cuenta al analizar diferentes tipos de muestras. y los procedimientos de confirmación e identificación. En general. el pesado y las diluciones. puede ser apropiado basar la estimación de la incertidumbre en datos sobre la repetibilidad y la reproducibilidad exclusivamente. pueden medirse 20 . determinar cuantitativamente estos parámetros. desviación negativa. metrológica y estadísticamente válido de la incertidumbre de medida. su especificidad. Incertidumbre de la medida Los análisis microbiológicos se encuadran en la categoría de los ensayos que no permiten realizar un cálculo riguroso. desviación positiva. sensibilidad.

y posteriormente en una comunicación técnica de Feldine. La AOAC INTERNATIONAL (1999). Sin embargo puede formar las bases para una matriz no alimenticia como productos relacionados con drogas.directamente y evaluarse fácilmente para demostrar que realizan una contribución insignificante a la incertidumbre global. en Qualitative and Quantitative Microbiology Guidelines for Methods Validation. Características de operación Exactitud Se define como muestras conocidas que contienen un analito microbiano que es correctamente identificado por el método ensayado. se ofrece una guía para los siguientes ensayos: Ensayos Microbiológicos Cualitativos En esta sección se presentan ensayos para la presencia-ausencia de los métodos de detección de microorganismos en las matrices de alimentos. Otros componentes. 2002. no pueden medirse directamente y su contribución tampoco puede evaluarse por métodos estadísticos. pero debe considerarse también su importancia en la variabilidad de los resultados. P et al. como la estabilidad y preparación de las muestras. sobre una guía para la validación de métodos de análisis oficiales microbiológicos para alimentos tanto cualitativos como cuantitativos.. 21 . eficacia microbiológica de desinfectantes y equipos de identificación microbiana. preservación cosmética.

22 . La homogeneidad de la muestra es crucial para una adecuada estimación de la recuperación. normalmente un método ilustrativo de la AOAC o con los esperados de varios niveles de inoculación siguiendo la distribución de la ecuación de Poisson. Limites de detección Estos términos no son exactamente aplicables Limite de cuantificación y detección. Linealidad No es aplicable.Pueden utilizarse muestras de referencia inoculadas si están disponibles y son aplicables. Recuperación No puede ser estimada para métodos microbiológicos cualitativos a muy bajos niveles. porque la cuantificación a estos niveles no es precisa. Curva de Calibración En microbiología cualitativa. Por esto se estima comparando la proporción de recuperación positiva con las obtenidas en paralelo con un método convencional reconocido. la respuesta es típicamente no lineal (sigmoidal) La respuesta de Poisson o alternativamente la respuesta en la referencia opcional del método de cultivo puede usarse para la calibración.

y las consideraciones asociadas a positivo o negativo. Si en un estudio preliminar del Protocolo de validación (PVM) se obtiene un status OMA (Método oficial). La interferencia en la microflora de la matriz que es relativamente resistente a los agentes selectivos usados en el medio de enriquecimiento. pero preferiblemente 5) debe ensayarse al menos en pentuplicado y preferiblemente con 10 replicas por nivel. Repetibilidad Intralaboratorio. Cada nivel en el que se agregan cepas ( al menos 3. Debe validarse en un mínimo de dos laboratorios. pero preferiblemente 5) debe ensayarse al menos en pentuplicado y preferiblemente con 10 replicas por nivel La variabilidad de la matriz del lote es importante debido al potencial competitivo de la microflora de lote a lote. Cada nivel en el cual se agregan cepas (al menos 3. alto y sin pinchar) Reproducibilidad Interlaboratorios. Las diferentes matrices y los diferentes analitos son considerados como fuentes primordiales de variación. pueden afectar los valores observados. así como a otros factores. Precisión Es definido en términos de repetibilidad. Este bajo nivel se conoce como el resultado de alrededor de 40 verdaderos negativos. 23 . el número de replicas por nivel debe incrementarse a 20 con tres niveles de inclusión de cepas (bajo. reproducibilidad. preferiblemente con diferentes lotes de cada matriz.

Alternativamente. Especificidad. Sensitividad Para las condiciones de ensayo especificadas. la siguiente tabla está basada en la asignación de la respuesta del método a la presencia o ausencia del analito determinada por inoculación o la metodología de referencia. Para condiciones de ensayo determinadas. Temperatura de incubación). la especificidad es la proporción de las muestras de ensayo que no contienen el analito. Opcionalmente. 24 . la sensitividad representa la proporción de las muestras de ensayo que contiene el analito y responde positivamente al ensayo. es preferible incrementar el alcance de las matrices y/o lotes de cada tipo de matriz que va a ser examinado por el método de ensayo. y responden negativamente al ensayo. Ensayo de Rudeza Se deja a discreción el estudio del efecto de pequeños cambios en el medioambiente sobre un método de ensayo microbiológico (Ej. Comparación con métodos de referencia existentes. Falsos negativos y falso positivos Siguiendo el método oficial de procedimiento de estudio precolaborativo. los resultados del método de estudio pueden compararse con los resultados obtenidos por un método de cultivo convencional usando muestras analíticas de la misma porción .

etc. como en los estudios precolaborativos de métodos oficiales. Microorganismos analitos. Parámetros adicionales para métodos cualitativos microbiológicos. El analista debería investigar previamente las cepas candidatas. Se ha sugerido que una amplia selección de serotipos sea estudiada.) de los microorganismos analitos. Se refiere a los métodos microbiológicos recomendados para alimentos y grupos de alimentos. esto es uno de sus contaminantes naturales. En estudios precolaborativos oficiales. bien empíricamente o bien sobre las bases de los datos de la literatura. vale la pena utilizar el método de comparación. se requieren 20 matrices si la aplicabilidad se atribuye para todos los alimentos y 5 matrices si la aplicabilidad es para una sola categoría de alimento. Debe escogerse matrices donde el microorganismo crezca. Matrices de muestra. Se requiere un número intermedio de matrices si la aplicabilidad es menor a todos los alimentos pero mayor a una categoría de alimentos. 25 . Idealmente deberían ensayarse una variedad de cepas (serotipos. Se requieren una o mas matrices diferentes por categoría de alimentos. En un método oficial de estudio cualitativo precolaborativo. no se recomienda el añadir cepas con mezclas debido a las interacciones potenciales entre cepas. se usan diferentes cepas para diferentes matrices. Generalmente. Cada matriz debería ser ensayada con al menos una cepa aislada de la matriz.Cuando se tiene una matriz particularmente difícil.

en muestras naturalmente contaminadas. La cepa debería cuantificarse al momento de la inoculación por el número mas probable (NMP) o por el conteo de colonias de suspensiones inoculantes de bajo nivel las cuales pueden realizarse con mas exactitud si las replicas son suficientemente altas. según sea lo apropiado. Estado de estrés del microorganismo analito La cepa puede ser usada sin estrés o estresada. tiempo de exposición. y la fracción de sobrevivientes exhibiendo un nivel de injuria operacionalmente definido. Los tratamientos de estrés deberían ser descritos cuantitativamente en términos de parámetros medioambientales. en las muestras almacenadas “a condición” se simula el estrés al cual los microorganismos pueden estar sujetos en una matriz particular. pero el grado de estrés generalmente será desconocido. En estudios precolaborativos de métodos oficiales. En contraste. el conteo de NMP en 3 y 5 tubos tienen un amplio límite de confianza 26 . Pueden utilizarse células del analito. fracción sobreviviente de la población estresada. se debe hacer un recuento paralelo sobre un medio selectivo apropiado para estimar el posible estrés entre la población del inoculo. Niveles de agregado de microorganismos Cada cepa es usada a un mínimo de 3 niveles por muestra analítica (25 g/mL): 1–10 ufc (unidades formadoras de colonias). para alimentos secos se usan inóculos secos y se usan inóculos húmedos para alimentos húmedos. Se recomienda que cuando se cuenta un inóculo sobre un medio no selectivo. por ejemplo 50 – 100 ufc. blanco: sin adición. Pero pueden usarse más niveles al igual que en estudios precolaborativos no oficiales. 10–50 ufc .

Criterios de aceptación. No se recomienda el uso de una mezcla de cepas. tan lejos como las consideraciones puedan ser hechas para cualquier sustancia inhibitoria inducida por el proceso de esterilización. (<2 ufc por tamaño de muestra del analito). A niveles bajos del inóculo. puede ser ensayada con un competidor a un nivel que de justo un efecto adverso medible con el medio de cultivo selectivo convencional. el ensayo de competición debe ser corrido en ausencia de una matriz alimenticia o con una matriz esterilizada. las relaciones de verdadero negativo pueden ir de < 10 a 100 % debido a las falla al inocular o la siembra como se definió en la distribución de Poisson. Así cuando se declara un falso negativo. típicamente con habilidades competitivas no caracterizadas. El analista debería preensayar candidatos competitivos adecuados para escoger un solo competidor competitivo por la microflora. el nivel del inoculo debe también ser declarado para que se hagan las asignaciones para este. Deben establecerse criterios para establecer el punto de partida de una matriz tipo dada. Por 27 . La matriz de microflora natural puede ser de valor en la evaluación competitiva tan lejos como la porción de microflora que es verdaderamente competitiva sea estimada por conteo de placas sobre un medio sólido hecha de un medio selectivo proanalito usado en la metodología del ensayo. Pero esta porción debería representar solamente la población potencial competidora porque esta no toma en cuenta las velocidades de crecimiento de sus constituyentes individuales. Para distinguir los efectos de los competidores a partir de los efectos de la microflora de la matriz incurrida. Microflora Interferente Opcionalmente. la mayor variable lote a lote de la matriz alimenticia.

Esta asignación es hecha automáticamente por el método de 50 % del punto final (con 95 % de limite de confianza). ni los ensayos de toxina.01 – 0. No se incluyen los ensayos microbiológicos de antibióticos.08 ufc/g de muestra de carne podría probablemente no ser aceptada para la carne en estudios precolaborativos.10 ufc/g. sin embargo podría aceptarse bajo esta guía porque ellos están haciendo asignaciones para la falla estadística para fijar este nivel de siembra. En este apartado se describe el estudio de los métodos de conteo de células. ensayos microbiológicos de nutrientes. 28 . calculado según los estudios de los Métodos Oficiales. incluyendo los conteos de UFC y NMP.ejemplo. un método da un valor de 21 % de falso negativo a 0. siguiendo los límites de confianza. que típicamente caen en los rangos de 0. Los resultados por este método pueden compararse con el máximo teórico de 1 ufc por muestra analítica (usualmente 25 g) con un correspondiente punto final de 0. Ensayos Microbiológicos Cuantitativos. podría ser una base para idear un criterio de aceptación de punto de partida. El punto final de 50 %.04 ufc/g. Este rango.

que es medido (recuperado) por el método ensayado. 29 . presente en el analito en la muestra sin fortificar. Recuperación Esta es la fracción del analito microbiano añadido a una muestra de ensayo (fortificado o muestra sembrada) antes del análisis. Curva de Calibración. la recuperación es la fracción del analito microbiano contado por un método estándar. Este puede. en el rango de conteo aplicable. Con el microorganismo incurrido. en teoría ser corregido por cualquier contaminante natural.. Características de rendimiento Exactitud Usualmente se determina comparando el resultado del método del ensayo del conteo con los de un Método Oficial o un método convencional si no existe método oficial.

Algunas veces el tamaño de las partículas de alimentos pueden interferir con la visibilidad de las colonias. Este rango es para dar 20–30 a 200–300 ufc por placa cultivada en un medio de cultivo sólido. Generalmente no es aplicable. los métodos de conteo microbianos conducen a resultados proporcionales a la concentración del analito. Limites de cuantificación y determinación. El contenido más bajo que puede ser medido es 10 . aplica la linealidad del método de NMP.03 ufc/g o menor. El límite de determinación. 30 . En el método de NMP. si las muestras son cuantitativamente diluidas a una concentración en el rango apropiado. dependiendo del número de tubos y el tamaño mayor de la muestra cultivada pero los límites de confianza son amplios en el método de 3 a 5 tubos.01 g de alimento puede ser plaqueado sin dificultad de detección de colonias. Sujeto a unos bordes estadísticos mas amplios del método.100 ufc/g en métodos de placa para matrices de alimentos. Linealidad En general. es de 0. En el método de plaqueo convencional es de 2000 a 3000 ufc/g de alimento porque cerca de 0. debería ser detectado y a la vez identificado. Es la menor cantidad de analito en la muestra que puede ser determinada con adecuada precisión y exactitud. que se define como el más bajo contenido de analito que estando presente. Limite de detección.

Se compara los respectivos valores de DERr (CVr) Falsos positivos y falsos negativos Tiene que tenerse en cuenta la presencia de sustancias interferentes en un alimento para evitar los falsos positivos o los falsos negativos. Sensitividad Es usualmente medida en términos de parámetros previamente definidos tales como recuperación y exactitud.01 ufc/g en la metodología de NMP Precisión Repetibilidad Intralaboratorio Los ensayos deben ser realizados al menos por lotes duplicados de tipos de productos específicos. Especificidad Es la capacidad de un método para medir solo lo que tiene que medir. con un mínimo de 5 replicas por lote por nivel microbiano.es cercano a 100 ufc/g en la metodología del plaqueo y tan bajo como 0. Reproducibilidad Interlaboratorio. Para estudios precolaborativos de Métodos Oficiales. se requieren 4 niveles (control. bajo. Se requiere un mínimo de 2 laboratorios. Las muestras estudiadas por diferentes laboratorios necesitan ser preparadas centralmente o incluso ser del mismo lote. medio y alto). a pesar de que se requieren estadísticas de verdadera reproducibilidad. Se compara el promedio del conteo logarítmico (en base 10) y los valores sr obtenidos por cada laboratorio para cada matriz de lote ensayada. 31 .

Matrices Se requiere una matriz cuantitativa para cada categoría de alimentos. El estudio de cada cambio es dejado a la experticia y discreción del laboratorio primario. se requieren 20 matrices si la aplicabilidad es para todos los alimentos. El ensayo puede ser realizado con una célula inoculada viable y/o con células con un contaminante natural. tales como la temperatura de incubación. Cepas de analito microbiológico. y 5 matrices si la aplicabilidad es para una sola categoría de alimentos. Se ha recomendado que 10 cepas 32 . tales como carnes. Se requiere un número apropiado intermedio de matrices si la aplicabilidad es menor que todos los alimentos pero mayor a una categoría de alimentos. o vegetales. Ensayo de Rudeza La variabilidad inherente del método de conteo de microorganismos generalmente anula el efecto de pequeños cambios en las condiciones de operación y del medioambiente. En un estudio precolaborativo cuantitativo de métodos oficiales. Es obligatoria la comparación con los Métodos Oficiales. productos diarios. Comparación con los métodos de referencia existentes. Parámetros adicionales para métodos microbiológicos cuantitativos.

son necesarias de 20 a 30 matrices diferentes. Pero es preferible que el laboratorio que conduce el estudio tenga cepas apropiadas para las matrices involucradas. Los ensayos estadísticos aplicables son la regresión.diferentes de microorganismos relevantes sean estudiadas como cantidades agregadas o como analitos incurridos. bacterias coliformes o bacterias gram negativas. Sin embargo si solo una cepa particular o serotipo es el analito de interés. Cada nivel (sin agregar. Cuando los segmentos de inclusividad/exclusividad son realizados en los Métodos Oficiales de estudios precolaborativos. Ej. generalmente tienen una microflora natural. Debe usarse el analito en al menos 15 muestras por matriz cubriendo el rango atribuido. Se usan matrices con altos y bajos niveles de 33 . preferiblemente. En estudios precolaborativos cuantitativos de métodos oficiales. que sean pocas para ser estudiadas en profundidad y que. Deben evitarse cepas mezcladas a pesar de que un método de amplia categoría esté involucrado tal como para el conteo de mohos y levaduras. la matriz debe ser removida de la lista de matrices aplicables. 5). Si una microflora natural interfiere con el método. se recomiendan 30 – 40 cepas de analitos y 10 -20 cepas de no analito Niveles. se use solo una cepa por matriz. Se requieren tres o más niveles de agregación de microorganismos en la matriz para representar el rango establecido del método. Microorganismos interferentes Las matrices. la correlación y el ensayo t-apareado. puede ser suficiente una cantidad menor (p. bajo medio y alto) debería analizarse al menos 5 veces por matriz.

y ensayo t-apareado). correlación. 34 . Idealmente la microflora debería exceder los microorganismos indicadores en al menos 2 a 3 logaritmos en las muestras con alto nivel de microflora. Criterios de aceptación. Corrientemente no hay criterios impresos para la aceptación de un método sobre las bases de tipos de datos estadísticos (regresión.microflora. Debe establecerse la concordancia entre ensayos y los métodos convencionales a un nivel de p = 0. que son desarrollados en estudios precolaborativos de los métodos oficiales.05.

estos controles no aseguran la calidad de lote a lote. reúne las características y atributos de calidad con lo que fue diseñado y que la probabilidad de error es mínima.. definen la validación de procesos como: “Conjunto de estudios para comprobar de forma amplia y completa y con bases científicas la efectividad y capacidad de las operaciones unitarias y el proceso para producir en forma continuada y sostenida formas farmacéuticas dosificadas consistentemente uniformes dentro de un lote. y entre lotes. Con el diseño e implementación de los sistemas de validación. y son ampliamente utilizadas en el seguimiento de procesos industriales (Millar. Las Buenas Prácticas de Manufactura: Inspección y Auditoria. J. PROCESOS DE FABRICACIÓN. que satisfacen las especificaciones y sus tolerancias y con productividad óptima” 35 . a través de un proceso validado. J y Millar. El control de calidad se efectúa en distintas etapas del proceso de fabricación sin embargo. 2002). Los métodos de control de calidad son técnicas estadísticas que han sido desarrolladas para demostrar si existen o no tendencias dependientes del tiempo en los resultados. se puede garantizar y asegurar que el producto que se obtiene. 1986. con el consiguiente perjuicio para los usuarios y/o los fabricantes de un producto en particular.

Esta 36 . (2001) define la validación de un proceso como: “La validación de un proceso es el medio de asegurar y proporcionar evidencia documentada de que el proceso (dentro de los parámetros del diseño especificados) es capaz de producir consistentemente un producto terminado de la calidad requerida” Tipos de validación Para validar un proceso. es indispensable disponer de un diseño experimental apropiado. de una metodología adecuada y de un tratamiento estadístico apropiado de los datos obtenidos experimentalmente. La FDA (1983) la define como: “La Validación de procesos es un programa documentado que proporciona un alto grado de seguridad de que un proceso especifico producirá una forma farmacéutica que satisface las especificaciones y atributos de calidad predeterminados” La Agencia Europea para la Evaluación de Productos Medicinales.

hasta el primer lote de fabricación industrial. Se basa en una planificación o Plan Maestro. La validación prospectiva de un proceso. Se realiza cuando un producto se fabrica industrialmente para su salida comercial.metodología debe ser aplicada a cada uno de los factores críticos contemplados dentro del proceso productivo Prospectiva Esta se lleva a cabo durante el proceso de desarrollo y es el resultado de un análisis del riesgo en el proceso de producción. en donde se detallan y estudian todos los pasos a realizar. previamente a asegurar formalmente que ciertas operaciones y procedimientos han sido terminados satisfactoriamente. desde los lotes de producción a escala piloto. 37 . o en el cual se ha introducido alguna variación. conlleva. Concurrente Se define como el establecimiento de un programa documentado que proporciona un alto grado de seguridad de que un proceso específico producirá consistentemente una forma farmacéutica que lleva las especificaciones predeterminadas y los atributos de calidad y que se sustenta en datos o información obtenidos a partir de un proceso que se encuentra en marcha.

productos y sistemas del Área de Fabricación. En la planificación anual del Área de Fabricación debe estar contemplada la aplicación de la validación/revalidación para las mejoras de la calidad y productividad de cada una de las especialidades que se fabrican en la planta industrial El comité de validación hará responsable al equipo de validación a través de su coordinador. cuyo proceso no ha sufrido cambios que obliguen su revalidación y que se efectúa a través del estudio y análisis de datos históricos del producto y del proceso Planificación de los estudios de validación El cumplir las Normas de Correcta Fabricación es un requisito que debe satisfacerse para alcanzar la calidad y productividad deseadas en toda empresa. 38 . Revalidación Se puede dividir en dos categorías: a) Debida a cambios significativos sobre la calidad del producto b) Periódica: se efectúa a intervalos programados de tiempo Retrospectiva Es la que se realiza para un producto que ya se viene fabricando habitualmente. de la planificación anual de validación de los nuevos proyectos de procesos.

Revalidación Se lleva a cabo cuando existen cambios.Productos que presentan a menudo incidencias. Se debe tener en cuenta la complejidad del proceso de fabricación.Productos y/o sistemas validados. Si estas no se cumplen la revalidación ha de ser prioritaria igual que los nuevos productos que han de salir al mercado. piezas críticas del equipo.Productos y/o sistemas que no han sido validados. . . así como la posible toxicidad que pudiera existir en caso de incidencias. Se hará en todos los casos una validación concurrente. instalaciones. Revalidación periódica: Según las normativas de la FDA aquellos productos y/o sistemas validados que no presenten variaciones de sus límites específicos o cambios con el tiempo. la cual en general 39 . por componentes críticos. la cual viene dada por imposición legal. tamaño del lote y desviaciones del lote que no cumplen especificaciones. Prioridad de los productos y/o sistemas a validar Se deben de tener en cuenta ciertos factores tales como: . se han de revalidar.Los nuevos productos que han de salir al mercado. Estos tendrán una prioridad absoluta. . Se hará una validación de tipo prospectiva.

Elementos básicos para organizar con éxito un programa de validación Implicación de la Dirección Creación de un Comité de Validación Formación de un Equipo de Trabajo Multidisciplinario Etapas en la validación de un producto o un proceso Las etapas contempladas dentro de un proceso de validación son las siguientes: 40 .podrá ser más sencilla que una validación prospectiva. La periodicidad de esta revalidación estará determinada por la experiencia de cada proceso o sistema.

en donde. 41 . Finalmente se incluirá en esta última edición del Plan Maestro el informe y el certificado final de aceptación de la validación. se resumen todos los resultados obtenidos a lo largo del Proceso de Validación. Plan Maestro de Validación Calificación del Diseño (DQ) Calificación de la Instalación (IQ) Calificación Operacional (OQ) Calificación del Funcionamiento (PQ) A continuación los resultados del informe de PQ se añadirán a la documentación del Plan Maestro de Validación.

1997. Andrews. et al OPS/ OMS. 2. 1999. Center for drug Evaluation and Research (CDER). Arvelo.. 82. Appendix D. Viena. La capacidad de los procesos industriales. AOAC International Qualitative and Quantitative.. Publicaciones UCAB. 1994. Caracas. C. 1986. Feldsine. Procedures to validate characteristics of a method of analysis. Métodos estadísticos exigidos por la norma ISO 9000. Ileana. PNSP/ 86-57. FAO (Food and Agriculture Organization of The United Nations). Editora. Nº. Santich. Microbiology Guidelines: Journal of AOAC International Vol. P . Abeyta. AOAC INTERNATIONAL. Austria. A. Methods committee guidelines for validation of Qualitative and Quantitative 42 . Buenas Prácticas de Manufactura vigentes: Inspección y Auditoria. Validation of Analytical methods for food control. 1998. W. AOAC International. Microbiology Guidelines for Methods Validation. 2002. Venezuela. Guidelines for collaborative study. Validation of Chromatographic Methods. Bibliografía.

J. Vol 85. agricultural and veterinary chemical products. Australian Pesticides & Veterinary Medicines Authority. Analytical Procedures and Methods Validation. Madrid. and Center for Devices and Radiological Health Guidelines for the validation of analytical methods for active constituent. Center for Drug Evaluation and Research (CDER) Center for Biologics Evaluation and Research (CBER).Validación de Procesos Food and Drug Administration 2000. Switzerland. Center for Drug Evaluation and Research. Department of Health and Human Services. Guidance for Industry. Food and Drug Administration 1983. Chemistry. Estadística y quimiometría para química analítica. J y Miller.Food Microbiological Official Methods of Analysis. pp 1187-1199. 2002.Guideline on general principles of Process Validation. The European Agency for the Evaluation of Medicinal Products. Geneva. Nº 5. Center for Biologics Evaluation and Research. 43 . 2004. Cuarta edición. Food and Drug Administration. Prentice Hall. Journal of AOAC INTERNATIONAL. Australia. Miller. España. 2001.S. and Controls Documentation U.1987. International Conference on Harmonization of Technical Requirents for Registration of Pharmaceuticals for Human Use (ICH) (1996) Guideline on validation of Analytical Procedure-Methodology. Manufacturing. Londres. Note for Guidance on process validation.

J. 15. Spectrometric determination of silicon in food and biological samples: an interlaboratory trial.. Lamberts. Guatemala.. P. Van Dyck. Riondato.pp.. H.. M. L. K.. Arnaud. Verheyen. Ferreira. L. J. 2004. Taylor.. Anal. Soares. H.. Pharmaceutical Technology. Claes.... Robberecht. L. Van Cauwenbergh... At. 20 ava edición. H. M. pp. M. 2005 Validation of Alternative Microbiology Methods for Product Testing Quantitative and Qualitative Assays. R. 1998. Hoenig. 119-122 United States Pharmacopeia (2003). Bastos. M.. Lugowski. Impreso en Canadá.. USA.. G.. Deelstra. INC. Spectrom. J. Knapp.. Válida desde Enero 2003. Validation of Compendial Methods pp 2440-2442. M.. J. United States Pharmacopeial convention. OGA-GEC-016. Centeno. Standard methods for the examination of water and wastewater. R.Política de Selección y Validación de Métodos de Ensayo. M. S. R. y Uytterhoeven. Benijts. 2000.. Moens. Sutton. F. Willemyns. 26th Edition. 735 -741 44 .. D'Haese. Van Grieken..... Oficina Guatemalteca de Acreditación para la Selección y Validación de Métodos de Ensayo. Clement L.