FIBROSIS QUISTICA MORENO S., Adriana Yiseth; NARVAEZ M., María Alejandra; SALGADO M., Carolina; VIAFARA P, Diego Armando.

Universidad Libre ± Seccional Cali. Facultad de ciencias de la salud. Programa de Medicina. Sexto Semestre. Septiembre 30 de 2010 Dr. Augusto Valderrama

1. ¿Qué es la fibrosis quística? Es una enfermedad que ataca las células epiteliales exocrinas, las personas afectadas producen un moco espeso y viscoso, que provoca una obstrucción de los conductos de los órganos donde se localiza, siendo el páncreas y los pulmones los órganos más comprometidos, aunque se trata de una entidad multisistémica. De hecho, la enfermedad pulmonar y la insuficiencia pancreática determinan de una forma esencial la evolución, gravedad y mortalidad en la FQ. 2. ¿Cuál es la presentación clínica clásica? Existen signos indicativos que, a edad temprana, pueden inducir a pensar que nos encontramos frente a una afectación de fibrosis quística. Estos signos pueden ser:
y y y y y y y y

Problemas respiratorios frecuentes o crónicos. Fácilmente confundidos con bronquitis, neumonías o patologías similares. Tos. Fiebres altas. Cansancio Dolor de vientre. Heces grasas y malolientes. Bajo peso y complexión débil. Casos de muertes tempranas o enfermedades pulmonares en los ascendentes familiares.

La fibrosis quística es una enfermedad multisistémica, es decir, que se manifiesta en diferentes sistemas y aparatos del cuerpo humano. Los efectos más destacables son:
y y y y y y y y y

Sinusitis. Pólipos nasales. Bronquitis. Bronquiolitis. Bronquiectasia. Tos. Malabsorción. Diabetes. Íleo meconial o equivalente.

y en los cuales la mayoría de la población afectada no sobrevive más allá de los diez años de edad 4. pancreatitis. páncreas. ¿Cuál es la explicación fisiológica de las evidencias clínicas en: pulmón. exceptuando los países menos desarrollados. . de acuerdo a los datos compilados por la Fundación de la Fibrosis Quística. En 1959. donde se reportan cifras sensiblemente menores. siendo ésta la primera y principal alteración/disfunción que genera la enfermedad . La proteína CFTR no funciona adecuadamente a nivel de la membrana celular apical. ¿Cuál es la expectativa de vida de los pacientes con esta enfermedad? Por razones que sólo en parte se conocen. la supervivencia media en niños con FQ era de 6 meses. Pero también se puede presentar por complicaciones como: y y y y y y y y y y Problemas intestinales como cálculos biliares. porqué necesitan enzimas pancreáticas cuando presentan insuficiencia pancreática. sudor y vasos deferentes? Defecto básico de la FQ: éste consiste en una alteración de la regulación del canal de cloro activado por AMP cíclico. la esperanza de vida al nacer resulta ser mayor entre los varones afectados que entre las mujeres. y que explica porqué los enfermos con FQ tienen el sudor tan salado. este valor treparía a los 36. Artropatías. ni como regulador de los canales rectificadores exteriores del cloro y de los canales de sodio. Colelitiasis. 3. cirrosis biliar Desnutrición Osteoporosis y artritis Neumonía recurrente Neumotórax Insuficiencia cardíaca derecha (cor pulmonale) 5.8 años. ¿Cuáles son las causas de muerte más frecuentes? La muerte generalmente es causada por complicaciones pulmonares La infección respiratoria crónica es la complicación más común. entre otras complicaciones evolutivas. La tasa de esperanza de vida ha evolucionado en forma análoga para buena parte de Occidente.y y y y y y Prolapso rectal. Para los nacidos en 2006 en los Estados Unidos. ni como canal de cloro. Cirrosis hepática. que se encuentra en la membrana apical de las células epiteliales secretoras. oclusión intestinal y prolapso rectal Expectoración con sangre Insuficiencia respiratoria crónica Diabetes Enfermedad hepática o insuficiencia del hígado. Acropaquia. porqué se infectan crónicamente sus pulmones y porqué pueden desarrollar cirrosis biliar y diabetes mellitus. Pancreatitis.

¿Cómo se establece el diagnóstico de fibrosis quística? El diagnóstico de la FQ se ha basado clásicamente en la determinación de por lo menos 3 determinaciones positivas de electrólitos en sudor.6. por lo que recientemente se ha propuesto que para efectuar el diagnóstico de FQ sea necesario por lo menos uno de los criterios clínicos señalados. La enfermedad esta producida por mutaciones en el gen regulador de la conductancia transmembránica de la FQ (CFTR). · Síndrome de pérdida de sal. 7. Se han descrito aproximadamente 1. junto a la determinación patológica de electrólitos en sudor o bien la constatación de 2 mutaciones en el gen FQ.400 mutaciones en el gen CFTR. Explique el patrón de herencia de la fibrosis quística La Fibrosis Quística sigue un patrón de herencia autosómico recesivo. · Insuficiencia pancreática exocrina. · Enfermedad pulmonar crónica. · Historia familiar de FQ. se han publicado diferentes casos de enfermos de FQ con ciertas mutaciones infrecuentes. que pueden estar asociados a una prueba del sudor normal. Herencia mendeliana autosómica recesiva: dos mutaciones de línea germinal (una de cada uno de los padres) para desarrollar la enfermedad. junto con uno de los siguientes criterios clínicos: · Íleo meconial. · Azoospermia obstructiva. . igualmente transmitida por hombres y mujeres. Pero una vez conocido el gen defectuoso de la FQ y la identificación de sus mutaciones. o expresiones clínicas atípicas de FQ (como agenesia de vasos deferentes. o diferencia de potencial nasal anormal. sin compromiso pancreático ni pulmonar). siendo la más frecuente la deleción de tres pares de bases (CTT) denominada F508 que codifica para el aminoácido fenilalanina.

Sin embargo.950 del cromosoma. ¿Cuál es el defecto molecular en la fibrosis quística? La mutación más común. que posee 250 kb y que incluye 27 exones. la mutación F508. es una deleción ( ) de tres nucleótidos que resulta en una pérdida del aminoácido fenilalanina (F) en la posición quingentésima octava (508) de la proteína. existen más de 1. ¿Donde se localiza en gen de CFTR? El gen CFTR (acrónimo del inglés Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator. Es un gen de gran tamaño. .8. Esta mutación es responsable del setenta por ciento de los casos de FQ a nivel mundial y del noventa por ciento de éstos en los Estados Unidos. F508. Ciertas mutaciones pueden conducir también a una merma en la producción de copias de la proteína CFTR.252 al 117. "regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística") está localizado en el brazo largo del cromosoma 7.907. Son diversos los mecanismos por los cuales estas mutaciones causan problemas en la proteína CFTR.095. 9. En particular.000 mutaciones distintas que pueden producir FQ. a causa de una conclusión anticipada de su producción.2. genera una proteína que no se pliega de manera normal y acaba siendo degradada por la célula. desde el par 116. Dicho gen fue uno de los primeros genes en ser localizado y secuenciado por mapeo genético. en la posición 7q31. Otras mutaciones menos frecuentes originan proteínas que no utilizan la energía como es debido. ocupando 180. Varias mutaciones comunes en la población askenazí dan lugar a la síntesis de proteínas demasiado cortas. o son degradadas a una tasa más rápida que la normal.000 pares de bases: más precisamente. no permiten que el cloruro cruce la membrana apropiadamente.

5 mM de MgCl2. Las mutaciones DF508. se detectan mediante la amplificación por PCR de parte de los exones 10 (DF508). Estos partidores contienen cambios nucleotídicos específicos que crean un sitio de restricción alelo específico. tal como se refleja a continuación19: · Mutaciones de Clase I: No producción de la proteína CFTR (la más común: G542X).300 mutaciones del gen CFTR11. y presentan considerables variaciones según el grupo étnico y/o el área geográfica estudiada. Mutaciones en el gen CFTR.. · Mutaciones de Clase V: Reducción de la síntesis de ARNm.). Los tamaños de los productos de PCR y de los fragmentos obtenidos por análisis de restricción.. · Mutaciones de Clase II: Procesamiento defectuoso de la proteína (DF508.. 11 (G542X) y 21 (N1303K).(R117H. La amplificación por PCR se efectúa en un volumen de 50 µl que contiene 200 ng de DNA. Las mutaciones R553X. y las de clase II no permiten que la proteína alcance la membrana epitelial). utilizando los partidores descritos por Friedman et al. · Mutaciones de Clase IV: Transporte defectuoso de la corriente de Cl. 200 nM de cada desoxinucleótido trifosfato y 1. existen como en este caso mutaciones que por poseer tan . ¿Cómo se clasifican las mutaciones del CFTR según su impacto en la biología molecular del gen? Explique cada una de las clasificaciones. IV y V) presentan una gran variabilidad en su expresión clínica 11. sin embargo por más que en los estudios se utilicen muestras representativas de la población para esquematizar las enfermedades. mientras que las otras tres clases de mutaciones (III. G551D. · Mutaciones de Clase III: Regulación defectuosa del canal de cloro (G551D). Estos fragmentos se resolvieron mediante electroforesis desnaturante en geles de poliacrilamida. Las mutaciones en el gen de la FQ se distribuyen a lo largo de todo el gen.. G542X y N1303K.10. Se han sugerido cinco mecanismos moleculares por los que una mutación produciría una disfunción del canal CFTR: las mutaciones clase I y II suelen asociarse con insuficiencia pancreática (las mutaciones de clase I conducen a una ausencia en la producción de CFTR. 300 ng de los partidores respectivos. La mutación DF508 es la más frecuente.. La identificación del gen y de sus mutaciones ha permitido el estudio de la correlación fenotipo/genotipo mediante el análisis de la relación de las diferentes mutaciones presentes con la expresión clínica de la enfermedad. R334W. ¿Cómo se realiza el diagnóstico molecular de fibrosis quística? El DNA genómico de los pacientes se obtienen desde sangre total usando el método de Miller. G551D. ¿Porque el panel de 25 mutaciones recomendado para el diagnóstico molecular no es igualmente eficiente en detectar la fibrosis quística en las diferentes poblaciones del planeta? La razón se debe a que estas mutaciones pueden ser las más incidentes. aunque se producen con mayor frecuencia en algunas regiones del mismo. se han descrito en la actualidad más de 1. S549N) por PCR con los partidores descritos por Zielenski et al. 12. S549N y el polimorfismo M470V se detectan mediante la amplificación de los exones 10 (polimorfismo M470V) y 11 del gen CFTR (mutaciones R553X. Los productos se obtienen y se digieren con una enzima de restricción. en pares de bases (pb). NN1303K.).

También se demostró que la asociación de varias mutaciones o variantes sobre el mismo alelo producía modificaciones del fenotipo.2%) 15. Otras mutaciones (G542X. Esta hipótesis fue posteriormente confirmada y permitió clasificar las mutaciones en graves y moderadas.5%) P. y son más frecuentemente colonizados por Pseudomonas aeruginosa que los individuos portadores de por lo menos 1 mutación moderada.baja incidencia salen del control y al presentarse no se evidencian en este panel de mutaciones y el cambio de poblaciones es otro factor que interfiere en dicha aplicabilidad.3 %. N1303K) tienen frecuencias menores. 13. y también serviría para realizar un tamizaje poblacional útil en establecer datos epidemiológicos de frecuencia de la enfermedad. La variabilidad de expresión clínica observada entre pacientes que presentan un mismo genotipo RCTFQ dentro de una misma familia. no tendría insuficiencia pancreática. si es portador solamente de una mutación G y de una mutación moderada (M) o de 2 mutaciones M. La correlación entre el genotipo y la gravedad de la afectación pulmonar es más controvertida.S549R (2. ¿Cuál es la utilidad de identificar a los portadores? La utilidad de identificar a los portadores es Primero el poder realizar conserjería genética informando a los portadores la probabilidad de poder tener hijos con la enfermedad. Por lo tanto. R1162X N1303K pertenecen a la clase 1 dentro de la clasificación que está descrita para las mutaciones en el gen CFTR. Por el contrario.1811+1. entre el 1 y 2 % de la población mundial. pudiendo una de ellas modular el efecto de la otra. este último no puede explicar totalmente el grado de enfermedad respiratoria. 16. sugiere que la gravedad de la enfermedad está modulada por otros factores genéticos y medioambientales. ¿Cuáles son las mutaciones más frecuentes del CFTR en el mundo? F508del es responsable del 60% de los enfermos FQ en el mundo. ¿Cuáles son las mutaciones del CFTR más frecuentes en Colombia? Las mutaciones del CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) más frecuentes en Colombia son: C. si bien parece existir relación innegable entre la colonización por P. 14. tienen estadísticamente una enfermedad de aparición más precoz y más grave.6kbA>G (6. hipotetizando que si un niño desarrolla insuficiencia pancreática. Varios investigadores confirmaron que aproximadamente el 100% de los pacientes homocigotas para la mutación D F508 tienen insuficiencia pancreática. aeruginosa.. ¿Cómo se relacionan el genotipo y el fenotipo en esta enfermedad? Correlación entre el genotipo y el fenotipo más evidente concierne a la insuficiencia pancreática. De esta . es portador de 2 mutaciones llamadas graves (G). Las mutaciones G542X. la mutación 3120+1G®A con una frecuencia de 12. aunque de todas maneras se demostró que los pacientes que presentaban 2 mutaciones graves. La dificultad para establecer relaciones estrechas entre el genotipo y el fenotipo podría explicarse en parte por la complejidad inherente al gen RCTFQ. la afectación pulmonar y el genotipo RCTFQ.

Es la presencia o efectuación de 2 PCR secuenciales. ¿En qué consiste la mutación DF508? Una deleción de tres pares de bases (3 pb). Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida.forma. Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN. Las hibridaciones se realizan en condiciones experimentales destinadas a garantizar que la sonda normal sólo se apareará con el ADN normal amplificado y que la sonda mutada sólo lo hará con el ADN mutado amplificado.1 cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular. Se replica un segmento del gen de la fibrosis quística que comprende la zona que codifica para la fenilalanina 508. mientras que el otro es hibridado con una sonda correspondiente al gen mutado. Este tipo de PCR es muy específica. con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo. Los productos de la PCR son inmovilizados por duplicado en forma de manchas en dos filtros de nitrocelulosa (dot blot). en pacientes que presentan aparentemente un mismo genotipo RCTFQ. 18. partiendo de un mínimo. o molde. PCR anidada Técnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificación es utilizado como molde para realizar una segunda amplificación con cebadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. 19. Uno de los filtros es hibridado con una sonda (un oligonucleótido) marcada que se corresponde con el gen normal. su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad virus o bacterias causantes de una enfermedad. Describa de manera exacta y sencilla el fundamento de la metodología de PCR anidada que se explico durante el laboratorio demostrativo. conocida como PCR por sus siglas en inglés (Polymerase Chain Reaction). la cual resulta en la pérdida de un residuo de fenilalanina en la posición 508 de la proteína. 17. la primera con el fin de multiplicar el exón 10 lugar en donde se encuentran las mutaciones puntuales mas incidentes según la tabla de poblaciones y la segunda gracias a poseer una muestra mas grande es posible identificar con mayor precisión mutaciones según los pares de bases de ubicación. los diferentes complejos genotípicos podrían explicar ciertas variaciones fenotípicas. esta mutación cuenta para 70% de los casos de FQ. es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis. . identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original. Explique el fundamento molecular de una PCR anidada La reacción en cadena de la polimerasa.

homocigoto normal. presenta la ventaja de tener un mayor poder de resolución. además la tinción con plata es de dos a cinco veces más sensible que el bromuro de etidio. que se utiliza para el mismo fin. . ¿Cuál es la ventaja de un gel de acrilamida sobre un gel de agarosa para visualizar el ADN? La Acrilamida Frente al gel de Agarosa.20. así mismo la tinción con plata permite teñir precoloreados con bromuro de etidio como sucede en la PCR para exón 10 del gen CFTR sin interferir en el resultado final.001 ng de ADN por banda. heterocigoto. siendo capaz de diferenciar bandas de DNA que difieran únicamente en dos pares de bases. ¿Cuál es la ventaja de teñir con plata el ADN vs teñir con bromuro de etidio? Se prefiere realizar la tinción con plata que con bromuro de etidio puesto que este último es altamente cancerígeno.1 a 0. Represente gráficamente y explique cómo se vería en un gel de acrilamida los siguientes diagnósticos: homocigoto para DF508. 22. pues detecta de 0. 21.

nlm.edu.mobi/es/Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimerasa .univalle.co/revistas/actabiol/PDF's/V6N2/Art8V7N2.scielo.cl/scielo.htm 6. http://www.pdf 7.org/wiki/Fibrosis_qu%C3%ADstica 3.co/Vol38N%B01%20supl/html/v38n1s1a6.htm 4. http://www. http://www.html 2.virtual. http://es.BIBLIOGRAFIA 1.wikipedia. http://wapedia.com/BagoArg/Biblio/pediatweb347.edu. http://www. http://colombiamedica.php?pid=S0034-98872002000800002&script=sci_arttext&tlng=es 5.bago.nih.unal.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000107.

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