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Volumen 76, núm.

7, pps 3330-3337, julio de 1979


Biología celular
Endocytosis mediado en el receptor: Perspicacias de la lipoproteína
receptor system*
(lysosomes/coated hoyos y vesículas/colesterol/familiar hypercholesterolemia/hormone
acción)
MICHAEL S. BROWN Y JOSEPH L. GOLDSTEIN
Departamentos de Genética Molecular y Medicina Interna, universidad de Centro de la
Ciencia de la Salud de Texas en Dallas, 5323 Harry Hines Boulevard,
Dallas, Texas 75235
Comunicado por Harry Eagle, el 30 de abril de 1979

ABSTRAIGA El receptor de la lipoproteína de acontecimientos metabólicos. Avances recientes


densidad baja (LDL) en el campo de biología celular
el sistema coordina el metabolismo del han hecho posible estudiar acontecimientos
colesterol, una necesidad mediados en el receptor directamente
componente de la membrana plasma de todas en células mamíferas vivas. Nos hemos dado
las células mamíferas. cuenta ahora esto
Studcy de este sistema ha llevado a un los receptores de la superficie de la célula
entendimiento realzado de funcionan a través de una red de subcelular
la base celular del colesterol homeostasis. organelles. Los receptores en la membrana
También ha traído plasma se comunican
en foco un mecanismo importante de con proteínas en el núcleo, endoplasmic retículo,
regulationthe metabólico lysosomes,
proceso de endocytosis mediado en el receptor. mitochondria y otras estructuras. Cómo es esto
En este artículo, nosotros por toda la célula
primero describa endocytosis mediado en el ¿la comunicación articuló? Cómo hace una
receptor de LDL, una secuencia célula regulan un metabólico
de acontecimientos en cual encuadernación del el camino cuyos componentes activos residen en
receptor e internalization el diferente
se conectan en regiones especializadas de la ¿compartimentos subcelulares?
membrana plasma Las respuestas a algunas de estas preguntas
hoyos cubiertos llamados. En segundo lugar, fundamentales tienen recientemente
remontamos las funciones celulares del hágase disponible a través de estudios del
el colesterol se derivó de LDL interiorizado. En receptor de la lipoproteína
tercer lugar, pruebas genéticas sistema (1, 2). Este sistema regulador por toda la
se presenta para indicar que tanto la célula coordenadas
encuadernación como internalization el metabolismo del colesterol, un componente
de LDL son mediados por una molécula del esencial de
receptor sola la membrana plasma de todas las células
esto contiene dos sitios activos, una mamíferas. Pero encima y
encuadernación mediana y el más allá de su importancia en el colesterol
otro internalization. Finalmente, las homeostasis, la lipoproteína
características del LDL el sistema del receptor se ha hecho reconocido
el sistema del receptor es usado para sugerir como un prototipo para
modelos para sistemas del receptor un mecanismo de regulación metabólica - el
en general. proceso de receptor -
Uno de los problemas centrales en la biología endocytosis mediado.
moderna es el entendimiento Antes de que el sistema del receptor de la
del mecanismo por cual macromoléculas lipoproteína se describa en el
extracelulares nivel celular, unos comentarios preliminares
relaciónese con receptores superficiales para sobre el colesterol
regular intracelular el metabolismo parece apropiado. Todas las
células de animal requieren el colesterol
para su plasma mrmnbranes, aún el cuerpo no superficie. El receptor LDL se descubrió en 1973
puede tolerar a través de
el colesterol excesivo en la sangre porque sterol estudios de piel humana fibroblasts en cultura
insoluble deposita del tejido (4-6). El
en paredes de la arteria, produciendo el fondo para estos estudios está en las
atherosclerosis. Así, animales observaciones de Bailey
han desarrollado un mecanismo para transportar (7) y Rothblat (8), quien en los años 1960 mostró
el colesterol a través de que cultivado
la sangre y entrega de ello a células, mientras al las células de animal no sintetizaron su propio
mismo tiempo colesterol, pero mejor dicho
la evitación de su acumulación excesiva. Para lo tomó de lipoproteínas que estuvieron
este fin, colesterol presentes en el suero de
es envasado en partículas de la lipoproteína en el medio de la cultura.
el hígado e intestino, En 1973 nuestro laboratorio observó esto
y las lipoproteínas solubles se secretan en el aunque humano
plasma el suero contiene una mezcla de lipoproteínas
y llevado a tejidos objetivo. En hombre, el más que llevan el colesterol,
abundante de éstos el fibroblasts podría sacar el colesterol sólo de
las partículas son la lipoproteína de densidad LDL (4, 9).
baja (LDL). Esto era la primera pista que las células podrían
Las dos terceras partes del colesterol en el tener un mecanismo específico
plasma humano se contienen para relacionarse con una lipoproteína
dentro de LDL. El bulto del colesterol reside en específica. Entonces encontramos
un apolar que la precisión del efecto LDL fuera debido a la
el corazón en el cual cada molécula sterol es existencia
esterified con una cadena larga de una célula revisten el receptor para LDL (6,
ácido graso. Este corazón de cholesteryl esters 10).
es rodeado por a Para estudiar el receptor, pusimos etiqueta a
el abrigo polar que contiene phospholipid, las LDL por 125I de modo que el
pequeñas cantidades del unesterified el yodo sólo se ató al componente de la proteína.
el colesterol y una proteína llamaron apoprotein Cuando
B (3). En las monocapas de fibroblasts intacto se incuban
sintetizando sus membranas, las células en 4VC
requieren el colesterol unesterified. con 125I-LDL, la encuadernación ocurre pero
Para usar el colesterol de LDL, las células deben internalization se previene
ser capaces de tomar (6, 10, 11). El 1251-LDL liga a una población
aparte la lipoproteína y hydrolyze el cholesteryl sola de superficie
esters. Esto sitios del receptor. En 370C la encuadernación
es donde la necesidad de organelles subcelular medio máxima se consigue - en un
múltiple entra. Concentración de LDL de aproximadamente 1
La llave al proceso es un receptor de la nM (6, 12). Fibroblasts humano
superficie de la célula que liga LDL produzca un máximo de 20.000-50.000
y facilita su entrada en células. La secuencia de receptores por célula.
reacciones por La encuadernación requiere un divalent cation,
qué células usan el receptor para obtener el calcio o manganeso
colesterol se llama el (13). El receptor es exquisitamente sensible a
Camino del receptor de LDL. proembroma tal como
Endocytosis mediado en el receptor de LDL: Pronase, trypsin, y chymotrypsin, pero son
Encuadernación resistentes a glycosidases
conectado a internalization vía hoyos cubiertos y otras enzimas hydrolytic (10, 13). El receptor
Los pasos bioquímicos en el camino del receptor también es inactivated por reacciones de
LDL se inician modificación de la proteína, tal
por la encuadernación de LDL a un receptor como acetylation y tratamiento glutaraldehyde.
específico en la célula Por lo tanto creemos
que el receptor sea una proteína. El receptor liberación de heparin. El resto de las células se
reconoce el calentó entonces a 370C.
apoprotein B componente de LDL; no reconoce Después de varios tiempos, los platos
apoproteins A-I y A-II, las proteínas encontradas individuales de células se enfriaron a
en la densidad alta 40C para parar el internalization y luego se
Abreviaturas: FH, hypercholesterolemia familiar; expusieron a
LDL, lipoproteína de densidad baja (HDL), la otra heparin. Durante el período del calentamiento, la
lipoproteína principal que lleva el colesterol cantidad de LDL esto
en plasma humano (6, 14, 15). En ciertos estaba en la superficie y posteriormente
animales que son releasable por heparin
las cantidades grandes alimentadas del rehusado rápidamente, y esto fue equilibrado por
colesterol, otra lipoproteína, llamaron un aumento del
HDLC, se acumula en el plasma (16). Aunque LDL que había entrado en la célula y ya no era
HDLC no haga releasable por
contenga apoprotein B, contiene apoprotein heparin. Esto interiorizó 125I-LDL no permaneció
llamado de una proteína en la célula
E que comparte varias propiedades físicas y
químicas con durante un período largo. Después de
apoprotein B. El receptor LDL de fibroblasts
reconoce
apoprotein E y por lo tanto liga HDLC así como
LDL (16,
17).
Una propiedad importante del receptor LDL
consiste en que LDL puede
sea disociado de ello por la exposición a heparin
y otro sulfated
glycosaminoglycans (11). La capacidad de soltar
LDL del
el receptor con heparin ha proveído un
instrumento potente de cual
disecar el camino del receptor. Habiendo ligado
LDL en la célula
la superficie, cómo hace la célula extrae el
cholesteryl esters del
¿corazón de la lipoproteína? La respuesta vino
cuando las células eran
calentado a 370C y la partícula LDL entera se
encontró ser
interiorizado y degradó (10).
Fig. 1 muestra un experimento bioquímico
diseñado para seguir
el internalization de 125I-LDL ligado al receptor.
Antes de tiempo
cero, los fibroblasts se incubaron con 125I-LDL
en 4VC tan aproximadamente 30 minutos el LDL dentro de la
esa encuadernación ocurrió. Las células se célula
lavaron entonces para quitar rehusado. Al mismo tiempo, trichloroacetic ácido
LDL desatado. Un juego de células se expuso y soluble 125Ilabeled
entonces a heparin en el material apareció en el medio de la cultura.
tiempo cero. Como estas células no se habían Éstos
calentado, casi todos los productos ácidos y solubles consistieron casi
de 125I-LDL atado se soltó del receptor por completamente en el mono [125I] -
heparin. Sólo una pequeña cantidad de 125I-LDL iodotyrosine, indicando que el componente de la
era resistente a proteína del interiorizado
LDL se había digerido completamente a para ligar LDL-ferritin en 4VC y se calientan
aminoácidos entonces a 370C,
(10). Se ha mostrado que esta hidrólisis ocurre dentro de 1 minuto el LDL-ferritin se puede ver
dentro de lysosomes en hoyos cubiertos esto
(18, 19). Al mismo tiempo que la proteína de LDL tenga invaginated en la célula y han comenzado
sea hydrolyzed, a formarse cubierto
los cholesteryl esters también son hydrolyzed vesículas de endocytic (Fig. 2). Dentro de 3
(19). El minutos después de recalentamiento, éstos
el colesterol soltado dentro del lysosome entra las vesículas cubiertas separan de la membrana
en el citoplásmico y se pueden ver
el compartimento, donde se hace el regulador el transporte del LDL-ferritin en la célula. Dentro
central del colesterol de 6-8 minutos después
metabolismo (hablado abajo). calentándose, el LDL-ferritin se observa dentro
Un aspecto del experimento del calentamiento de lysosomes donde
en Fig. 1 era asombroso. el LDL se está degradando (24). El curso del
Esto era la eficacia notable del internalization. tiempo de LDL-ferritin
Los casi todos 125I-LDL ligados al receptor se el consumo en el microscopio de electrones es
interiorizaron idéntico al rápido
dentro de 15 minutos (20). Fibroblasts debe el consumo de 125I-LDL observado en los
tener un mecanismo eficiente para el enganche estudios bioquímicos. El
la encuadernación y acontecimientos agruparse de receptores LDL en hoyos cubiertos
internalization. El explica el extraordinario
la llave a este enganche resultó ser una eficacia del LDL internalization proceso. El
estructura intrigante las propiedades de hoyos cubiertos se ponen en
llamado el hoyo cubierto. Hoyos cubiertos en la una lista en la Tabla 1.
superficie de mosquito Al mismo tiempo que nosotros, juntos con
los oocytes fueron descritos en 1964 por Roth y Richard Anderson,
Porter (21), y realizaban estudios funcionales de hoyos
posteriormente estas estructuras se han cubiertos, Barbara
observado en prácticamente Pearse aislaba vesículas cubiertas del cerebro
todas las células de animal (22). Representan del cerdo. Pearse
regiones especializadas del
la superficie de la célula donde la membrana
plasma se sangra y se cubre
en su superficie citoplásmica por un material
rizado. El papel del
el hoyo cubierto en endocytosis mediado en el
receptor se reconoció en
los estudios del consumo LDL que se realizaron
en la colaboración
con Richard Anderson (23, 24).
La visualización de receptores LDL se hizo
posible
a través del uso de LDL que había sido
covalently conectado al
la proteína que contiene el hierro ferritin de modo
que la lipoproteína pudiera
véase en el microscopio de electrones (23). Los
hoyos cubiertos sólo cubren
El 2% de la superficie de la célula de fibroblasts,
aún contienen el 50-80%
de los receptores LDL (23, 25). Cuando
fibroblasts se permiten primero
los cholesteryl esters son hydrolyzed por un ácido
lysosomal lipase.
El colesterol unesterified que resulta cruza el
lysosomal
la membrana y entra en el compartimento
citoplásmico, donde
realiza sus funciones celulares.

Las funciones del colesterol se derivaron del


interiorizado
LDL: papeles reguladores y estructurales
El colesterol sacado de LDL interiorizado es el
mostró que el abrigo rizado se forma central
predominantemente de una proteína de 180,000 reactivo que media un sistema complejo de control
peso molecular que llamó clathrin de la reacción esto
(22, 26, 27). Pareció probable que la misma estabiliza la concentración de colesterol celular. Esta
proteína estuvo presente estabilización
en los hoyos cubiertos de fibroblasts humano. Por es conseguido por las tres reacciones reguladoras
lo tanto, aislamos ilustradas
el clathrin del cerebro bovino cubrió vesículas, en Fig. 3. En primer lugar, el colesterol de entrada
preparó un anticuerpo suprime el microsomal
a ello, y usado este anticuerpo para manchar hoyos enzima 3 hydroxy 3 coenzima methylglutaryl A
cubiertos y vesículas reductase (HMG-CoA reductase), la enzima que
en fibroblasts humano (28). Por immunoperoxidase controla el precio
indirecto en biosíntesis de colesterol, así apagando el
microscopia de electrones, el anticuerpo anti- colesterol
clathrin se observó síntesis en la célula (4, 9). En segundo lugar, el
ligar expresamente a hoyos cubiertos en la colesterol de entrada
superficie de fibroblasts humano activa un colesterol microsomal esterifying enzima
y a vesículas cubiertas dentro de la célula (28). En llamada
más
estudios microscópicos de electrones recientes Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase (ACAT) de
(29), Anderson se ha manifestado
esto LDL-ferritin y clathrin ambos se localiza a
los mismos hoyos cubiertos y vesículas. Estas
conclusiones levantan un crucial
pregunta: Cómo hacen los receptores LDL
encuentran su camino hacia el cubierto
¿hoyos? La respuesta ha sido sugerida por
estudios genéticos que son
hablado más tarde en el artículo.
Fig. 3 muestra una representación esquemática del
secuencial
pasos en el camino del receptor LDL ya que
surgieron del
estudios bioquímicos y ultraestructurales. Los modo que exceso
receptores LDL son el colesterol puede ser reesterified y almacenado
localizado en hoyos cubiertos. La encuadernación como cholesteryl esters
de LDL es seguida de internalization (30, 31). Y, lo más asombroso de todos, las vueltas
dentro de vesículas cubiertas, que rápidamente se de colesterol de entrada
funden con lysosomes. de la síntesis del receptor LDL, previniendo entrada
La proteína de LDL es hydrolyzed a aminoácidos, y adicional
de LDL y células de protección contra una de sangre. Nuestros colegas Basu et al. (13) y
sobreacumulación de Kovanen
colesterol (32). et al. (39) recientemente desarrolló un ensayo
El efecto total de este sistema es coordinar el obligatorio que mide
intracelular La actividad del receptor de LDL en membranas se
y las fuentes extracelulares del colesterol para preparó del tejido fresco
mantener homogenates. Han usado este ensayo para medir
un nivel constante de colesterol unesterified dentro el receptor
de la célula en el actividad en 16 tejidos de la vaca. Como predito de
cara de fluctuaciones en el suministro externo de la célula
lipoproteínas. estudios de la cultura, el número de afinidad alta
Fibroblasts humanos crecen en ausencia de sitios de unión de LDL
lipoproteínas porque era el más alto en las membranas de la corteza
pueden sintetizar el colesterol de acetyl-CoA. En el suprarrenal y el
otro la recopilación ovárica luteum, los dos tejidos que
la mano, cuando LDL está disponible, las células sintetizan el esteroide
preferentemente usa el las hormonas y tienen los requisitos más altos para
receptor para tomar LDL y guardar su propia el colesterol.
síntesis de colesterol En contraste, la medula suprarrenal e interstitium
suprimido. ovárico,
Además de sus papeles reguladores, colesterol que no producen cantidades grandes de esteroides,
LDL-sacado mostró mucho
realiza otros dos papeles en células cultivadas: es menos actividad vinculante LDL. La encuadernación
un componente esencial de afinidad alta también se descubrió
de membranas de la célula (33, 34) y es un en muchos otros tejidos, incluso tejido adiposo,
substrate para el myocardium,
síntesis de hormonas del esteroide (35, 36). La músculo esquelético, etc. Ninguna afinidad alta
tabla 2 pone los tipos en una lista de significativa LDL
las células cultivadas en las cuales el camino del la encuadernación se descubrió en erythrocytes
receptor LDL ha sido maduro (39).
demostrado. Estas células vienen de gente, perros, Los papeles reguladores y estructurales del
cerdos, receptor LDL en
ratones, hámsteres y vacas. En cada tipo de la células cultivadas y su distribución extendida en
célula, LDL-sacado tejidos de animal
el colesterol se usa para la síntesis de la membrana han sugerido un modelo para la función de LDL en
y para la regulación el cuerpo.
del colesterol homeostasis. Células suprarrenales
del ratón
y la vaca tiene sobre todo grandes números de
receptores LDL (35,
36). En estas células suprarrenales, el LDL-
colesterol se transfiere de
el lysosome a todavía otro compartimento - el
mitochondria,
donde la cadena del lado se hiende y el colesterol
se convierte
a hormonas del esteroide.
Como esperado de su acontecimiento extendido en
células cultivadas,
el receptor LDL desempeña un papel en una amplia
variedad de células en el
cuerpo. Ho et al. (37, 38) encontró que el camino
LDL entero El rasgo saliente de este modelo es que LDL lleva el
funciones en lymphocytes humano inmediatamente colesterol
después de su aislamiento
de sus sitios web de síntesis y absorción en el hígado edad de 15. Aunque homozygotes sean raros, su
e intestino fibroblasts
a sus sitios web de utilización en células extrahepatic. análisis genético hecho del receptor LDL posible.
Como entrega Hemos estudiado ahora fibroblasts de un gran número
colesterol a células, la partícula LDL se degrada. Así, de
el pacientes con el diagnóstico clínico de "homozygous"
El receptor de LDL sirve una función dual: permite que FH. En
células obtengan cada caso las células mostró pruebas de una
colesterol y al mismo tiempo quita LDL del plasma anormalidad primaria
(40). en el gene para el receptor LDL (42, 43). Tres clases
de
Disección genética del receptor LDL: Un el mutante alleles se ha identificado. Uno de éstos,
single Rb0, especifica
proteína que media tanto encuadernación
como internalization
Los experimentos bioquímicos y
morfológicos muestran esto
la encuadernación e internalization de LDL
es acontecimientos conectados que son
mediado a través del hoyo cubierto.
un receptor que no tiene actividad vinculante. La
Entendimiento del molecular
segunda clase de alleles,
la base de este enganche ha sido facilitada
Rb-, especifica un receptor que ha reducido, pero
por la existencia
detectable
de mutaciones humanas que ocurren
actividad vinculante. El tercer mutante allele, Rb +,
naturalmente en el gene para el
yo, especifica a
Receptor de LDL. Estas mutaciones se
el receptor fascinante que puede ligar LDL
encuentran entre pacientes quien
normalmente, pero esto
tenga hypercholesterolemia familiar llamado
no puede llevar el LDL en la célula.
de una enfermedad común
La tabla 3 muestra la distribución de estos alleles en
(FH) (41).
fibroblasts
de 50 pacientes con homozygous FH. En cada caso
FH es una enfermedad dominante autosomal que
las células
expone un gene
se encontraron mostrar pruebas para dos mutante
efecto de la dosis. Los individuos afectados muestran
alleles en el
uno de dos clínicos
lugar geométrico del receptor. Veintinueve de los
fenotipos: heterozygotes u homozygotes (41).
sujetos no muestran ninguna encuadernación
Heterozygotes
se supone que la actividad y es homozygous para
ocurra en la población en una frecuencia de cada
Rbo allele (genotipo Rbo/Rbo). Veinte del
500ma persona,
espectáculo de sujetos detectable
la colocación de FH entre las enfermedades
pero actividad vinculante marcadamente reducida.
heredadas más comunes en hombre.
Cada uno de estos sujetos
Heterozygotes tienen un 2-a la elevación de 3 pliegues
se postula tener un Rb-allele y un Rbo allele o
en el nivel plasma
segundo Rb-(genotipo Rb-/Rb0 o Rb-/Rb-). Las
de LDL y a menudo desarrollan el infarto de miocardio
células
como temprano
de un paciente tienen un defecto de internalization.
como 35 a 45 años de edad. Raramente, dos
Sus células retienen
heterozygotes se casan y
la capacidad de ligar LDL pero es incapaz de
produzca un homozygote quien hereda dos dosis del
interiorizar el receptor -
mutante
lipoproteína atada (véase abajo).
gene. Homozygotes se afectan en la infancia con
El fibroblasts de un gran número de FH
hypercholesterolemia severo
heterozygotes
con niveles de LDL plasma de 6 pliegues encima de
también se han estudiado. En cada caso, las células
normal.
muestran pruebas de
Típicamente sufren el infarto de miocardio antes el
un allele normal y uno del tres mutante alleles en el
lugar geométrico del receptor (42, 43). Así, FH, como están en el golpe del contraste. Ninguna
la mayor parte de errores innatos de encuadernación superficial de 125I-LDL
metabolismo, parece ser genéticamente heterogéneo se descubre en las células del mutante. Como
en esto consiguiente, consumo de afinidad alta
varias mutaciones diferentes en un lugar geométrico de LDL no ocurre (6, 11), y el apoprotein y
solo producen un similar cholesteryl
síndrome clínico. los componentes de ester no son hydrolyzed a
Fig. 4 ilustra las consecuencias bioquímicas del LDL precios normales
el defecto del receptor en fibroblasts de uno de los (10, 44). Como no puede entrar en la célula, LDL no
pacientes que es puede suprimir
el homozygous para Rb0 allele y cuyas células síntesis de colesterol (5, 9), y no estimula el
muestran el completo colesterol

encuadernación de defecto. En cada panel, las esterification (30). El mensajero intracelular en el


acciones de LDL se trazan como una función de la camino LDL es el colesterol
concentración de la lipoproteína en sacado de la hidrólisis lysosomal de LDL (1, 19). A
el medio de la cultura. En células normales como la confirme la precisión del LDL que liga el defecto en
concentración de estos FH
1251-LDL en el medio se aumenta, la cantidad de células de homozygote, incubamos las células con
LDL unesterified
ligado a los aumentos del receptor hasta que todos el colesterol se disolvió en el etanol. Este colesterol
los sitios se hagan entra en células por
ocupado. El precio de consumo de LDL es la difusión a través de la membrana sin un requisito
proporcional al para el
encuadernación superficial. En las células normales Receptor de LDL. Cuando el colesterol se añadió
los precios de hidrólisis de en esta forma al
tanto el apoprotein como cIolesteryl esters son FH homozygote células, evitó el defecto del
proporcionales a receptor y
la encuadernación de la superficie y consumo suprimido la síntesis del colesterol y estimulado el
celular de la lipoproteína. En esterification
células normales, el consumo de LDL suprime la del colesterol normalmente (9, 31, 33).
síntesis de colesterol y La conclusión principal de los susodichos
estimula el colesterol esterification. experimentos es esto FH
Los resultados en células de FH negativo por el las células de homozygote tienen un defecto
receptor homozygote primario en el receptor LDL
esto les impide degradar LDL y usar su colesterol. de LDL sólo es ligeramente más bajo que en las
Como consiguiente, el FH homozygote células debe células normales. Sin embargo,
sintetizar su las células J.D. son incapaces de interiorizar LDL
el propio colesterol a fin de crecer. atado. Como a
Los estudios de FH negativo por el receptor el resultado de este defecto del consumo, las
homozygote células células J.D. no hacen hydrolyze el
confirmado que la encuadernación de LDL a proteína y cholesteryl ester componentes de
receptores específicos es esencial receptor-boundLDL. La síntesis de colesterol
para la acción celular de LDL. ¿Pero e permanece alta y colesterol esterification
internalization? no se activa. El fracaso de las células J.D. de
Es cualquier acción separada del receptor requerido interiorizar
o es internalization LDL es muy específico. Estas células muestran
simplemente el destino inevitable de cualquier endocytosis normal
molécula que se haga de moléculas inertes como sacarosa y globulina
¿ligado a la superficie de la célula? Los estudios gamma
iniciales no dieron ningunas pruebas (20), y también tienen una capacidad normal de
para un papel para el receptor además de tomar y degradar
encuadernación. En total normal El factor de crecimiento epidérmico 125I-marcado,
los sujetos, internalization encuadernación una molécula que es ligada
inevitablemente seguida, y en todos los pacientes revestir receptores, interiorizados, y degradó en una
con la encuadernación de defectos internalization manera
se redujeron en similar a LDL (2).
proporción con la disminución en encuadernación El mecanismo para el defecto de internalization se
(42, 45). Pero entonces nosotros reveló
encontrado un tipo de mutación que desafió esto por el microscopio de electrones. Cuando J.D.'s
simple fibroblasts se examinaron
noción. Esta mutación se observó en el fibroblasts por la microscopia de electrones, se observó que
del contenían
paciente único con el defecto de internalization el mismo número de hoyos cubiertos y vesículas
(iniciales J.D.). J.D. como células normales y
es un muchacho de 14 años que tiene una el aspecto de los hoyos cubiertos era normal. Sin
elevación de 6 pliegues en su plasma embargo, en
Nivel de LDL y todos los otros rasgos clínicos de contraste con fibroblasts normal en cual el 50-80%
homozygous del LDL
FH (20). los receptores se localizan en los hoyos cubiertos,
Fig. 5 - compara el metabolismo LDL en el prácticamente ningún LDL-ferritin
fibroblasts de J.D. fue ligado a los hoyos cubiertos de las células J.D.
con aquellos de un sujeto normal como una función (46).
de la concentración LDL En vez de ligar a hoyos cubiertos en las células
en el medio. En las células J.D. la encuadernación J.D., el LDLferritin
superficial liga a receptores LDL que se dispersan a lo largo
del no cubierto receptores. Una de estas poblaciones se localizó
segmentos de membrana (46). Las propiedades en hoyos cubiertos
obligatorias de y la otra población se localizó a lo largo de
estos receptores son lo mismo como aquellos de segmentos no cubiertos
células normales. (20); ellos de membrana (46). Ligadas ambas poblaciones
están simplemente en el lugar equivocado. El de receptores
electrón asombroso microscópico LDL-ferritin, pero cuando las células sólo se
las conclusiones en las células J.D. han sido calentaron el
confirmadas por Carpentier LDL-ferritin que fue ligado a receptores en los
et al. (47), quien usó la técnica de 125I-LDL hoyos cubiertos
cuantitativo entrado la célula. El LDL-ferritin ligado a
autoradiografía microscópica de electrones. Está receptores en el
claro que el J.D. la membrana no cubierta permaneció en la
las células no pueden interiorizar LDL porque sus superficie de la célula.
receptores LDL no pueden El descubrimiento de dos poblaciones de
incorpórese en hoyos cubiertos. receptores en el padre
Una explicación del defecto genético en las las células sugirieron que también tenía un allele
células J.D. ha sido normal y un mutante
avanzado sobre la base de estudios de fibroblasts
de padres de J.D.'s
(2, 43). Ambos padres exponen
hypercholesterolemia y otro
rasgos clínicos típicos de heterozygous FH. Sin
embargo, los dos
los padres exponen mutaciones diferentes en el
lugar geométrico del receptor. Cuando
fibroblasts de la madre se incubaron con 125I-
LDL, ellos
mitad atada de la cantidad normal de lipoproteína
(43). Estudios con
LDL-ferritin mostró que una proporción normal de
sus receptores
estaban en hoyos cubiertos (46). Cuando sus
células se calentaron a 370C,
todos 125I-LDL ligados al receptor entraron en la
célula dentro de 10
minuto (43). Así, las células de la madre eran
bioquímicamente idénticas
a aquellos de heterozygote habitual para el
negativo por el receptor
allele (genotipo +/RbO). allele en el lugar geométrico del receptor. Los
Una situación genética diferente era aparente en receptores producidos por el
células de J.D.'s allele normales se localizaron en hoyos cubiertos
padre (42). Aunque tuviera el fenotipo clínico de y se llevaron su
heterozygous LDL ligado en la célula. Los receptores
FH, sus células ligadas sobre de 1.5 pliegues más especificados por el mutante
125I-LDL que los allele eran capaces de ligar LDL, pero eran
células normales (43). La mitad de 125I-LDL incapaces de hacerse incorporados
ligado al receptor era en hoyos cubiertos. Como consiguiente, el LDL
interiorizado dentro de 10 minutos y el otro a mitad ligado a éstos
permaneció en el los receptores no fueron interiorizados por las
superficie durante más de 30 minutos (43). células. Este allele era
Estudios con LDL-ferritin Rb designado +, j (encuadernación positivo,
confirmado que las células del padre tenían dos internalization negativo),
poblaciones de LDL y el genotipo del padre se designó +/Rb + Io
(43). la especificación del receptor LDL. Otros
El pedigrí de la familia J.D. se muestra en Fig. 6. mecanismos más complejos
Estudio de se podría invocar para explicar las
los descendientes de este matrimonio apoyan la conclusiones en este pedigrí.
noción que el Rb0 Por ejemplo, el receptor LDL podría tener
mutación en la madre y Rb +, mutación del Io en subunidades múltiples
el padre codificado por genes independientes. La madre
son allelic (2, 43). El caso del índice, J.D., tiene podría ser heterozygous
hypercholesterolemia severo para una mutación en el gene para la
y el fenotipo homozygous como hablado subunidad obligatoria y
encima. el padre podría ser heterozygous para una
La hermana de J.D. es clínicamente normal. Su mutación en otro gene
fibroblasts tenía un número normal de la especificación de la subunidad
receptores LDL e interiorizó el atado internalization. En este caso J.D. iba
LDL normalmente. Probablemente heredó esté doble heterozygote; es decir, llevaría al
allele normal de mutante solo
cada padre. El hermano de J.D. tiene un alleles en dos lugares geométricos genéticos.
moderadamente elevado Si cada receptor se formara de
el nivel de colesterol plasma y clínicamente una subunidad obligatoria sola y una subunidad
parece ser un heterozygote. internalization sola,
Su fibroblasts se comportó idénticamente al tan doble heterozygote debería tener un
padre. Ellos número medio normal
ligado un algo más alto que cantidad normal de de sitios de unión, pero mitad de éstos debería
LDL, pero tener que ver con
sólo la mitad de la lipoproteína atada se subunidades internalization normales. Como
interiorizó. Además, por consiguiente, mitad del atado
la microscopia de electrones, sus células, como LDL se debería interiorizar normalmente. Así, el
el padre, tenía sólo la mitad precio total
la cantidad normal de receptores en hoyos de internalization de 125I-LDL en estas células
cubiertos. Así, el hermano debería ser un cuarto
de J.D. pareció haber heredado allele normal esto de normal (encuadernación medio normal
del de X internalization medio normales).
madre y Rb + Io allele del padre (Fig. 6). Sin embargo, las medidas directas muestran a
Como descrito encima, las células de J.D.'s esto 125I-LDL
ligaron ligeramente menos LDL que el internalization en células de J.D.'s es menos
normal. Ninguno de receptores de J.D.'s se del 5% del precio normal
localizó en hoyos cubiertos y (20, 43). Este descubrimiento tiende a excluir la
ninguno de LDL atados se interiorizó. Este posibilidad que el
modelo iba dos mutaciones implican genes para
explíquese si J.D. eran un compuesto genético subunidades diferentes.
(genotipo Una segunda hipótesis alternativa es que el
Rb/1Rb +, Io). De su madre, heredó allele internalization
silencioso, Rbu. el defecto es debido no a un defecto en el
De su padre, heredó allele internalization- propio receptor, pero a un defecto
defectuoso, en una proteína que funciona catalíticamente
Rb +, Io. Todos los receptores que pueden ligar para incorporar LDL
LDL son del receptores en hoyos cubiertos. Por esta
Rb +, 0 tipo y de ahí ninguno de LDL atados se hipótesis, el heterozygous
interioriza el padre tendría la mitad de la cantidad normal
(Fig. 6). de este internalization
El susodicho mecanismo implica que la enzima. Si esto fuera el caso, las células del
mutación obligatoria y padre deberían interiorizar
la mutación internalization es alleles alterno en todos LDL atados, pero el precio de
un lugar geométrico solo internalization
debería ser a mitad normal. Sin embargo, como avión de la membrana y racimo juntos en hoyos
resumido encima, el cubiertos. Nuestro
las células del padre se comportaron de una la hipótesis es que esto agruparse ocurre en el
moda diferente; interiorizaron citoplásmico
mitad de LDL atado a un precio normal y superficie de la membrana a consecuencia de
fallado para interiorizar una interacción específica de
la otra mitad (43). Tal descubrimiento sugiere el sitio internalization del receptor con la
un stoichiometric proteína del abrigo
defecto en el receptor y no una cantidad medio el clathrin o con alguna otra proteína que es
normal de un catalítico ligada a clathrin
proteína. (46). Agruparse de receptores no parece ser
Sobre la base de las susodichas inducido por la encuadernación de LDL. Todos
consideraciones, creemos que el los datos indican esto
la hipótesis de un lugar geométrico genético la secuencia entera de introducción del
solo con dos alleles es el más receptor en el plasma
probablemente. Su prueba requerirá el membrana, que se agrupa en hoyos cubiertos e
aislamiento de la proteína del receptor internalization
de células de J.D.'s y demostración que su los beneficios continously en fibroblasts si LDL
aminoácido primario es
la secuencia se cambia a consecuencia de presente (23, 46). Aunque los receptores LDL
ambas mutaciones. En vista del probablemente sean
pequeño número de receptores por célula, tal interiorizado cuando los hoyos cubiertos
prueba definitiva puede aprietan lejos para formar vesículas cubiertas,
esté lejos. Sin embargo, la hipótesis del lugar parecen evitar la degradación en el lysosome
geométrico solo es (11). Cuando
útil en esto permite que construya un modelo la síntesis de nuevos receptores es bloqueada
verificable para el por cycloheximide, fibroblasts
el mecanismo por el cual los receptores LDL se siga ligando e interiorizar LDL a precios
incorporan en máximos
hoyos cubiertos. durante horas. Este descubrimiento sugiere
Nuestro modelo de trabajo se muestra en Fig. que los receptores se reciclan;
7. Por analogía con otro es decir después de que depositan su LDL en
proteínas de la membrana, el receptor LDL lysosomes los receptores
probablemente se sintetizará. vuelva a la superficie de la célula, donde ellos
en polyribosomes ligado a la membrana y otra vez racimo en el cubierto
glycosylated en el hoyos.
Aparato de Golgi. El receptor al principio se El modelo en Fig. 7 puede tener la importancia
inserta en el por varios motivos.
membrana plasma al azar sitios. Los datos En primer lugar, explica el defecto de
genéticos del internalization en J.D. Como su
el defecto de internalization sugiere que el los receptores anormales carecen de sitios
receptor tiene dos activos internalization funcionales, ellos
sitios. Uno de éstos, el sitio de unión para LDL, no son reconocidos por las proteínas
debe estar en el citoplásmicas esa forma cubierta
superficie externa de la membrana. El segundo hoyos y de ahí permanecen donde al principio
sitio, el internalization se insertaron -
sitio, permite que el receptor se reconozca dispersado al azar en la superficie de la célula.
como un componente En segundo lugar, el
de hoyos cubiertos. Prevemos ese este sitio el modelo puede tener implicaciones para la
internalization estructura y función de
está en la superficie citoplásmica de la otros receptores de la superficie de la célula
membrana. Receptores esto que llevan la proteína ligands en
contenga un sitio internalization funcional células.
emigran lateralmente en el
Estas conclusiones levantan la posibilidad que
algunos receptores hormonales
El *have internalization sitios que permiten que
ellos se hagan incorporados
en hoyos cubiertos para llevar su ligands en
células. El
la pregunta entonces se levanta: lo que es la
relación entre el internalization
y degradación de una hormona y su regulador
¿acción?
Fig. 8 muestra dos modelos que se pueden
avanzar para explicar el
relación entre acción hormonal y degradación
hormonal.
El modelo primero, o secuencial, es
ejemplificado por LDL. Encuadernación
lleva internalization, que por su parte lleva a la
degradación. El
los productos de la degradación median la
acción reguladora. En
el segundo modelo, ligando al receptor es
suficiente para producir
la acción reguladora. Pero en una acción
Los modelos para otra célula revisten
paralela el receptor
sistemas del receptor
también media el internalization y degradación
En organismos multicelulares, las señales se
lysosomal de
transmiten de una célula
la hormona. El segundo modelo se diferencia
al otro en la forma de hormonas de la proteína.
desde el principio en esto
Como LDL y
la degradación no se requiere para la acción
otras proteínas de transporte plasma, las
reguladora del
hormonas de la proteína ligan a receptores
hormona. Sin embargo la degradación sirve un
en la superficie de células objetivo y sacan
fisiológico
respuestas reguladoras.
función destruyendo la hormona de modo que
Un descubrimiento reciente y sorprendente en
cada hormona
investigación del receptor
la molécula puede actuar sólo una vez. En
es esto algunas hormonas de la proteína antes
algunos casos el receptor puede
pensadas actuar
destrúyase también.
sólo en la superficie de objetivo las células de
Para la mayor parte de hormonas de la
hecho se interiorizan y
proteína, todavía no es posible elegir
degradado como las proteínas de transporte
entre estos dos modelos. Hasta ahora, ninguna
son. El más asombroso
acción reguladora de a
los ejemplos incluyen la insulina (48), factor de
se ha mostrado que la hormona de la proteína
crecimiento epidérmico (49),
requiere la degradación hormonal.
y chorionic gonadotropin (50). En cada caso el
Sin embargo, sólo unos estudios se han
consumo y
dirigido expresamente
la degradación de la hormona en las células
este punto. Es posible que una hormona con
objetivo se media por
acciones múltiples
el mismo receptor que media la acción de la
puede actuar a través de ambos de los
hormona. En cada uno
mecanismos mostrados en Fig. 8, unos
la degradación del caso ocurre dentro de
acciones reguladoras que requieren
lysosomes. En caso de epidérmico
degradación hormonal y otros
factor de crecimiento, el consumo ocurre a
ser independiente.
través de hoyos cubiertos
En el sistema del receptor LDL, el primer
esto es lo mismo como aquellos que llevan LDL
modelo en Fig. 8 era
en células (51, 52).
documentado a través del uso de varios son interiorizados por endocytosis mediado en el
instrumentos experimentales. En primer lugar, receptor y
había un sistema, fibroblast humano cultivado, degradado dentro de lysosomes nos devuelve a
en cual el nuestra inicial
"encuadernación del acontecimiento inicial y" la el tema a saber, que la regulación metabólica se
regulación de la enzima del acontecimiento debe considerar ahora
final - un problema en biología celular así como en
se podría estudiar simultáneamente en células bioquímica clásica.
enteras. En segundo lugar, El trabajo resumido aquí no se podía haber
había mutantes con bloques en cada paso en realizado sin
el camino y la ayuda de varios colegas capaces y fieles.
estaba claro que un bloque en cualquiera de Somos sobre todo
estos pasos causó un fracaso agradecido al doctor Richard G. W. Anderson que
de regulación. Aunque sólo la encuadernación ha sido un inestimable
e internalization colaborador en muchos aspectos de estos
estudios. Este trabajo se apoyó
por una investigación conceden de los Institutos
Nacionales de la Salud (HL
20948).

han hablado de mutaciones, también hemos


estudiado fibroblasts
de pacientes que tienen un bloque genético en la
degradación LDL.
Estas células del mutante carecen del ácido
lysosomal lipase y así
no puede responder a LDL aunque puedan ligar e
interiorizar
esto normalmente (19). Finalmente, una vez que
estaba claro esto unesterified
el colesterol era el mensajero intracelular,
exogenous
el colesterol se podría añadir a las células del
mutante para reproducirse el
acciones de LDL y así evitar los bloques
metabólicos, confirmando
su precisión. Todos estos instrumentos todavía no
están disponibles
para cualquier sistema de la hormona de la
proteína solo. Sin embargo, imaginativo
los estudios se están realizando en muchos
laboratorios para ver
si cualquiera de estos modelos se aplica a alguno
del
hormonas de la proteína.
En un sentido más amplio, la observación que
algunas hormonas de la proteína