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Efecto bactericida de la savia de Musa

acuminata (plátano) utilizada individualmente


y en asociación con kanamicina y etionamida
contra Mycobacterium tuberculosis
multidrogorresistente en modelo animal
Dr. Ortiz Marín Segundo Helmer - Microbiólogo Clínico.

Resumen Abstract
Palabras claves: Savia de Musa acuminata, Myco- Keywords: Musa acuminata sap, Mycobacterium
bacterium tuberculosis MDR tuberculosis MDR

El objetivo del presente trabajo fue determinar el The Bactericidal effect of the Musa acuminata
efecto bactericida de la savia de Musa acumina- sap alone and supplemented with kanamycin and
ta complementado con la kanamicina y etiona- ethionamide against Mycobacterium tuberculosis
mida. Es un trabajo de investigación prospectivo, multidrug resistance in animal model
longitudinal, experimental, aleatorizado, con dos Mg. Segundo Helmer Marín Ortiz. Teacher of
grupos de trabajo y uno control. Se utilizaron 18 Department of Basic Medical Sciences, Faculty
cobayos jóvenes, con 400g de peso corporal, dis- of Medicine of Medicine the National University of
tribuidos en los grupos A, B y C, se los infectó por Trujillo
vía intraperitoneal, con una cepa del Mycobacte- The aim of the present work were to determine
rium tuberculosis MDR, con la concentración de the bacterial effect of the Musa acuminata sap
3x107 en 1ml. Después de 40 días de infección, associated with kanamycin and ethionamide. This
se los observó asténicos y con altos porcentajes is a longitudinal, experimental, prospective and
de monocitos activos, evidenciando un gran pro- random work. It had two working groups and one for
ceso inflamatorio. La savia se extrajo exprimiendo control, 18 young guinea pigs weighing 400gr were
las hojas del pseudotallo y se guardó en frascos distributed in groups A, B an C. The were infected
de vidrio estériles. El Grupo A (6 animales), fueron with a sample of Mycobacterium tuberculosis MDR
tratados con 15ml/día de la savia por vía oral, el with a 3x107 in 1ml, intraperitoneally. After 40
Grupo B (6 animales), fueron tratados con 83.3 mg days of infection, the animals became asthenic, had
de kanamicina/día por vía intramuscular y 63 mg high percentage of active monocytes, evidence of a
de etionamida/día por vía oral, mas 15ml. de savia high inflammatory process. The sap was extracted
por vía oral; el Grupo C (6 animales), sin tratamien- squeezing the leaves of the pseudostem and kept
to. Se observaron directos, cultivos y anatomía pa- in sterilized glass bottles. Group A with six animals
tológica negativos luego de 30 dosis de savia en el was treated individually with sap 15 ml/ day orally

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Grupo A y 16 dosis de savia mas 16 dosis de kana- and group B treated with 83.3 mg of kanamycin
micina-etionamida en el Grupo B. Conclusiones: La intramuscularly and 63 mg of ethionamide orally.
savia de Musa acuminata elimina los Mycobacte- Group C had no treatment at all. Conclusion: The
rium tuberculosis detectables bacteriológicamente Musa acuminata sap eliminates al Mycobacterium
observándose la progresión hacia la curación his- tuberculosis bacteriologically detectable and is
tológica y radiográfica de la tuberculosis pulmonar. observed progression toward healing histologically
and radiologically the tuberculosis.

Introducción cumentados y aislados de diferentes partes del país y


La tuberculosis es una enfermedad infecto contagio- del mundo, sobre el uso de la savia para curar la TBC,
sa, de evolución crónica y recurrente cuyo agente pa- se ha tenido conocimiento por ejemplo que en Pati-
tógeno es el Mycobacterium tuberculosis, que infecta vilca, al norte de Lima, algunos pacientes con tuber-
principalmente los pulmones1,2. La incidencia de tu- culosis usaron la savia del plátano como tratamiento
berculosis multidrogorresistente (MDR) y extremada- con cierta mejoría clínica (comunicación personal, Dr.
mente resistente (XDR) ha aumentado de forma alar- Roberto Achinelli).
mante sobre todo en países del tercer mundo como El incremento de la tasa de enfermedad con cepas
Perú, la pobreza, el uso indiscriminado de drogas anti- multidrogorresistentes, ha sido propósito del presente
tuberculosas, el incumplimiento del tratamiento, entre trabajo de investigación, cuyo objetivo es comprobar
otras, han propiciado la aparición de cepas cada vez la propiedad micobactericida de la savia de Musa
mas resistentes a fármacos antituberculosos conven- acuminata individualmente y asociada con kanamici-
cionales3 En el año 2007 el Comité d e TBMDR, de- na y etionamida.
claró que Perú es el país de América Latina con mayor
número de casos de TBMDR y TBXDR, el 80-90% se
encuentran en Lima y la TBMDR existe en casi todas
Material y métodos
Es un estudio de tipo prospectivo, longitudinal, expe-
las regiones del Perú 4. Entre los pacientes infectados
rimental, realizado en el laboratorio de la Sección de
con el bacilo de Kock resistente a cinco o más drogas,
Microbiología de la Facultad de Medicina, desde el 15
el resultado del tratamiento no fue favorable y su cos-
de abril del 2008 hasta octubre del mismo año.
to con drogas de segunda línea fue de $10,000 por
paciente5. Según un estudio de Bonilla, con un total Cálculo de la muestra: n= (Zα+Zß)² δ²
de 43 pacientes XDR, 37 recibieron ITR, observándo- E²
se la curación en 17. Lima tiene el 91% de los casos de
Zα=1.645
tuberculosis XDR y en la Provincia de Trujillo ya se diag-
α= 0.5%;
nosticaron 5 casos6. Las proyecciones estadísticas
Zß=0.84
de la OMS para el año 2020 son de mil millones de
ß=0.20%
infectados, 1500 millones enfermarán y 36 millones
n=6 (6,175)
de moriran7
La familia Musaceae presenta los siguientes compo-
Se asume que δ=E por no haber estudios anteriores
nentes químicos no alimenticios: fructosanos, ácido
La savia de la Musa acuminata se extrajo de las hojas
fenólico, antocianinas, terpenoides, esteroides alca-
que conforman el pseudotallo, exprimiéndolas y obte-
loides aislados como la amina alcalóidica y alcaloides
niendo la savia, esta se depositó en un frasco estéril
indólicos, además la savia de plátano está constitui-
de boca ancha, conservándose en la parte media del
da por agua en un 85%, en el extracto de la hoja se
refrigerador hasta su uso. Las plantas se encuentran
encontró una mezcla de polihidroxifenoles y taninos8,
en el vivero de la Ciudad Universitaria de la Universi-
además posee propiedades antibióticas, contra el My-
dad Nacional de Trujillo.
cobacterium phlei y Rhodococcus 9.
El uso de la savia ha sido probado desde tiempos re-
motos en México, Colombia y Bolivia para curar la Modelo Experimental
enfermedad pulmonar.10 Existen antecedentes no do- Muestra: Constituida por 18 cobayos, cada grupo ex-

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perimental cuenta con 6 animales. hasta los seis meses. Para autopsiar cada animal se fi-
Los cobayos fueron adquiridos de un criador de cuyes. jaron las extremidades de los cobayos en una base de
cartón grueso, mediante una pinza y tijera quirúrgica
Los criterios de inclusión fueron: se abrieron los tejidos, aplicando las medidas de bio-
Animales de tres meses de edad, con 400g de peso seguridad16, se extrajeron los pulmones, estos se de-
corporal, consumo normal de alfalfa, sin lesiones ni positaron en placas de Petri, para apreciarlos en fres-
parásitos intestinales. co y fotografiarlos. Las muestras de tejido pulmonar se
tomaron mediante un escalpelo para lo cual se realizó
Los criterios de exclusión fueron: dos incisiones profundas en el pulmón y se extrajeron
Animales sin peso normal, asténicos y con parásitos porciones de tejido de ambos lóbulos superior y me-
intestinal y ectoparásitos dio pulmón en forma de triángulo, con estos se rea-
La infección se realizó con una cepa joven del Myco- lizaron frotis para la búsqueda de b.a.a.r mediante la
bacterium tuberculosis MDR resistente a rifampicina coloración del Ziehl Neelsen, otros fragmentos de este
e isoniacida, esta cepa fue obtenida del laboratorio tejido pulmonar fueron triturados con la ayuda de una
del Hospital Regional Docente de Trujillo, cuyo código bagueta dentro de un tubo 13x100mm con 1ml. de
es 1097. SSF. La suspensión de este tejido se cultivó mediante
Se inyectó por vía intraperitoneal en 18 cobayos, 1ml. una pipeta Pasteur, en el medio Lowenstein Jensen y
de la suspensión del cultivo en una concentración se incubaron durante 30 días a 37ºC; así mismo se
de 3 x 107 microorganismos en 1ml mediante una conservaron otros fragmentos de los pulmones en for-
jeringa de 10ml. La dilución se obtuvo mediante el mol al 10%, para el estudio histopatológico, a cargo
Nefelómetro de Mac Farland (tubo N°2). Los cobayos de la Patóloga Dra. Patricia Contreras (Anexos). Este
fueron distribuidos en tres grupos, cada uno de seis mismo procedimiento se realizó con dos cobayos de
animales y ubicados en jaulas de metal en grupos de los Grupos A y B, transcurrido seis meses del trabajo
a dos animales. experimental.
El tamaño muestral se obtuvo usando la fórmula de Se tomaron placas radiográficas de tórax a dos coba-
estimación que se encuentra en el libro de Bioestadís- yos de los grupos A , B y C a los 40 días de infectados y
tica de Steel Torrie Pag 115. sólo a los cobayos de los grupos A y B a los seis meses
de finalizado el experimento el experimento.
Este trabajo de investigación tuvo una duración de
Grupo A: Después de 40 días de infección se inició
180 días.
la administración, diaria de 15ml de savia del plátano
mezclada con alfalfa chancada con una piedra. La ex-
Ética
tracción de la savia, se realizó exprimiendo el pseudo-
Se tuvo en cuenta el cuidado, la utilización apropia-
tallo maduro de la Musa acuminata, guardándose en
da y el trato humanitario de los animales empleados
un frasco estéril y almacenándose en el refrigerador.
en la investigación, además se tuvo en cuenta un am-
biente físico y espacio adecuado de acuerdo a la es-
Grupo B: Con el mismo tiempo de infección, se les in- pecie y tamaño, según los documentos publicados en
yectó diariamente a cada uno de los cobayos 83.3mg la Organización Panamericana de la Salud, respecto al
(0.08ml) de kanamicina/día por vía intramuscular, animal como sujeto de experimentación17.
mediante una jeringa de tuberculina y de 63mg de
etionamida/día, diluido en agua destilada y adminis- Definiciones Operacionales
trado por vía oral y 15ml de la savia mezclada con su Bacilos del Mycobacterium tuberculosis MDR bien co-
alfalfa chancada. loreados y sin alteración celular
Cobayo sano. Activo, ingiere alimento de manera
continua, con recuento de monocitos inactivos de
Grupo C: Este grupo Control, sólo se le administró
2-4%, frecuencia respiratoria entre 90 - 129 resp/
SSF.
min, temperatura entre 37 - 38 °C y pesa entre 400
– 500 g. Radiológicamente los pulmones del cobayo
Diez días después de terminado el tratamiento, 30 do-
sano muestran moderada radiolucidez homogénea en
sis (grupo A) y 16 dosis (grupo B), se procedió a anes-
ambos hemitorax, con escasos patrones intersticiales
tesiar con cloroformo uno a uno, los cobayos de los
parahiliares.
Grupos A y B, dejando dos cobayos de estos Grupos
Cobayo enfermo. Asténico, anoréxico, con dificultad

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respiratoria, con 12-16% de monocitos activos( cito- Foto N°1: Pulmones de Cobayo con múltiples
plasma amplificado, con pseudópodos). Con pulmo- granulomas
nes que mostraron múltiples granulomas y bacilosco-
pía positiva para b.a.a.r.
Cobayo curado. Mayor peso corporal, crecieron, viva-
ces, consumieron toda su alfalfa, con 2-4% de mono-
citos inactivos. Después de seis meses de tratados,
los frotis de tejido pulmonar y cultivo fueron negativos
para B.K.
Análisis Estadístico. Es un trabajo de investigación
principalmente aleatorizado, donde han intervenido
dos grupos de trabajo y un control.

Resultados
Se observó un notable aumento del porcentaje y acti-
vación de monocitos durante el tiempo en que el ani-
mal estuvo enfermo y disminución sucesiva y retorno
a su estado inactivo conforme transcurrieron los días
Foto N°2: Pulmones sin granulomas cobayo
de tratamiento, hasta la progresiva curación de los
del Grupo A
cobayos (esta observación se tendrá que validar con
otro trabajo de investigación); motivo por el cual no
se hicieron más observaciones después de los 16 y
30 días.
El aspecto de los pulmones recién extraídos permitió
observar la ausencia de granulomas superficiales, evi-
denciados mediante las radiografías de tórax de los
animales curados.

Tabla N° 1: Tratamiento de la TB Pulmonar con la


savia de Musa acuminata

Con 16 dosis Con 30 dosis


+ kanamicna - de savia
Foto N°3: Pulmón cobayo del Grupo C en fresco con
etionamida
muchos granulomas
Cobayos Cobayos
enfermos curados
Grupo A 0 6
Grupo B 0 6
Grupo C 6 0

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Foto N°4: Radiografía de tórax de cobayo enfermo Discusión
En presente trabajo de investigación ha comprobado
que la vía peritoneal no desencadenó enfermedad
extrapulmonar o generalizada a pesar de la formación
de gran número de granulomas; para corroborar este
hallazgo se hicieron frotis de todos los órganos y exa-
men baciloscópico de heces y orina, cuyo resultado
fue negativo en todas la muestras. Ha sido muy no-
table la eficaz respuesta del sistema inmune de los
cobayos y sin ningún efecto colateral. Según Basaraba
las diferentes especies de modelos animales para tu-
berculosis humana difieren en la morfología de la le-
sión pulmonar o extrapulmonar, la cual puede influen-
ciar en la respuesta a la terapia10.

Durante la enfermedad y como consecuencia de la


replicación masiva de los bacilos de Koch dentro de
los macrófagos, mediante mecanismos de patogeni-
cidad como la inhibición de la apoptosis celular, por
Foto N°5: Radiografía de tórax de cobayo curado la resistencia intracelular al bloquear la acción de la
bomba de ATPasa, la cual es la responsable de la aci-
dificación del medio intracelular en el fagolisosoma;
la consecuencia de ello es la lisis de los macrófagos,
y las micobacterias invaden otros monocitos. Entre los
componentes de la pared celular el 6,6 dimicolato de
trehalosa estimula la generación de la formación del
granuloma7.

Una prueba de la gravedad de la TBC pulmonar se pre-


senta en la (Foto 1), el pulmón de un cobayo con
múltiples granulomas y en contraste el pulmón de un
cobayo sin granulomas, al que se le administró la sa-
via del plátano (Foto 2).

La muerte bacteriana podría ocurrir por efecto de la sa-


via del plátano que estaría alterando la estructura de
la pared celular permitiendo el ingreso o libre acción
de los antibióticos; se podría aseverar que habría una
acción sinérgica alcanzando una actividad bactericida
altamente letal12,13. La destrucción de los bacilos
dejarían en libertad ciertos neoantígenos, los cuales
serían fagocitados por las células presentadoras de
antígenos (CPA), procesando y generando epítopes
antigénicos inmunodominantes, que serían presenta-
dos a los Linfocitos THO, estos a la vez se activarían
y sumado a la intervención de la IL-12, estimularían
la diferenciación de estos linfocitos al subtipo TH1 y
estos mediante sus mecanismos efectores como la
síntesis del interferón λ que activa a los monocitos,
ocasionando la destrucción intracelular del BK11.

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En un estudio prospectivo controlado con 39 pacien- lógica y radiográfica de la tuberculosis pulmonar con
tes con TB pulmonar MDR, se administró kanamicina, 30 dosis.
etionamida, cycloserina y PAS, observándose en 29 de 2. La savia de Musa acuminata utilizada en asocia-
ellos la conversión del esputo a la negatividad dentro ción con Kanamicina y Etionamida, elimina los Myco-
de los seis meses de tratamiento15. bacterium tuberculosis con 16 dosis.

Los animales que recibieron ambos medicamentos y


conforme disminuyen los antígenos micobacterianos,
empieza a reducirse el proceso inflamatorio y los mo- Dr. Ortiz Marín Segundo Helmer:
nocitos disminuyen en número y entran en estado de oms857@hotmail.com
reposo o inactividad. Paralelamente coincide con la
recuperación de la salud de los cobayos, estos consu-
men más alfalfa y aumentan de peso.

La reducción del tiempo de tratamiento, de poder apli-


carse en el futuro sería un beneficio muy importante
Anexo
para los pacientes, esto nos permite inferir, que los
antibióticos, kanamicina y etionamida, mas la savia de
Musa acuminata causan en tiempo sumamente corto
la muerte del Mycobacterium tuberculosis, como lo
podemos observar en la (tabla 1 ).

El efecto bactericida de la savia de Musa acuminata


contra el Mycobacterium tuberculosis MDR se verifi-
có mediante la autopsia que permitió ver en fresco el
tejido pulmonar, sin granulomas, de color rosado, pre-
servado en formol en los grupos A y B. En cambio los
pulmones del grupo control, presentan gran número
de granulomas, en fresco se observaron con una co-
loración hepática (Foto 3). El cultivo de fragmentos de
los pulmones de los grupos A y B fueron negativos ; en
cambio el cultivo de fragmentos de los pulmones del
grupo C, fueron positivos Las radiografías de tórax de
los grupos A y B permiten observar, según el informe
del radiólogo, una radioluminosidad que denota la au-
sencia de opacidades en el pulmón de los cobayos tra-
tados (Fotos 4 y 5). En el estudio anatomopatológico
de fragmentos de los pulmones enfermos del cobayo
sin tratamiento se observa una neumonitis granulo-
matosa altamente caseificante y en el cobayo curado
la presencia de focos linfoides aislados, así como un
cuadro histopatológicamente compatible con resolu-
ción de TB pulmonar.
Se considera como única limitación la parte económi-
ca ya que todos los gastos del presente trabajo fueron
costeados con recursos propios.

Conclusiones
1. La savia de Musa acuminata elimina los Mycobac-
terium tuberculosis detectables bacteriológicamente,
observándose una progresión hacia la curación histo-

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