Las aplicaciones están determinadas de acuerdo a la

región espectral:

2
Manipulación de la muestra
En la fotometría UV-VIS para conseguir que las
medidas de absorbancia se encuentren dentro del
intervalo óptimo, se ajusta de forma adecuada la
concentración, o el espesor de la cubeta. Esta práctica
no es aplicable, por lo general, en la espectroscopia IR,
debido a que no existen buenos disolventes que sean
transparentes en toda la región espectral de interés.
Como consecuencia, la manipulación de la muestra
generalmente es la parte del análisis espectrométrico
en el infrarrojo más difícil y que requiere más tiemp0

3
Gases
El espectro de un líquido de bajo punto de ebullición o
de un gas se puede obtener permitiendo ala muestra
que se expanda en una cubeta cilíndrica en la que se ha
hecho el vacío, equipada con las ventanas adecuadas.
Para este fin se dispone de una variedad de cubetas
cilíndricas con caminos ópticos que oscilan entre
pocos centímetros y 10 o más metros.

4
CELDA DESMONTABLE PARA GASES

Vidrio
Pyrex

Junta con
rosca

Ventana de
KBr o NaCl

5
Disolventes
Es evidente que no existe un solo disolvente que sea
transparente en toda la región del infrarrojo.

6
Por ejemplo, si es importante observar los
estiramientos de C-H, se escogerá de entre los
solventes transparentes a esa región (CDCl3, CCl4 o
CS2), al que logre la solvatación, si ésta no es posible se
usa un dispersante (nujol).
Otros líquidos muy utilizados son el CHCl3 y el
fluorolube.
Los solventes que forman puentes de hidrógeno
interfieren las vibraciones fundamentales en mayor
medida, mientras mayor sea su capacidad de
asociación. Por lo tanto, se debe evitar el uso de
disolventes que posean grupos O-H, N-H y S-H.

7
El agua y los alcoholes rara vez se utilizan, no sólo porque
absorben intensamente, sino también porque atacan a
los haluros de metales alcalinos, que son los materiales
más habituales utilizados en las ventanas de las cubetas.
Por estas razones también es necesario poner cuidado en
secar los disolventes antes de usarlos.

8
Celdas
Debido a la tendencia de los disolventes a absorber, las
cubetas para el infrarrojo suelen ser mucho más
estrechas (0,1 a 1 mm) que las empleadas en las
regiones ultravioleta y visible. Los caminos ópticos en
el infrarrojo requieren, por lo común concentraciones
de muestra de 0,1 % a 10 %.

9
Con frecuencia, las cubetas son desmontables, con
espaciadores de Teflón que permiten variar la longitud
del camino óptico.

10
 MATERIALES PARA LAS VENTANAS
NaCl Es transparente de 40000-625 cm-1. Es higroscópico, resiste el estrés
mecánico y su costo es bajo.
KBr Es transparente de 40000-385 cm-1. Es más higroscópico que el
NaCl y tiene buena resistencia mecánica a los golpes.
CsI Es transparente de 33000-200 cm-1. Es muy higroscópico, suave y
con facilidad se raya.
CaF2 Es transparente de 50000-1100 cm-1. Es extremadamente duro y
estable. No lo afecta significativamente la humedad.
BaF2 Es transparente de 50000-770 cm-1. Relativamente duro, menos
resistente al agua que el CaF2. No debe usarse con sales de amonio.
KRS-5 El rango de transmisión del bromo-yoduro de talio es de 16600-250
cm-1. Es muy tóxico y ligeramente soluble en agua.
SiO2 El rango de transmisión de la sílice fundida es de 50000-2500 cm-1.
Es insoluble en agua y posee buena resistencia mecánica.

11
Las ventanas de cloruro de sodio son las más utilizadas
y aún teniendo cuidado, finalmente se deslustran
debido a la absorción de humedad. Si se limpian con
un polvo de pulimentación vuelven a su condición
original.

12
 DETERMINACIÓN DEL ESPESOR DE LA CELDA
EN ESPECTROFOTÓMETROS DE RESPUESTA
LINEAL AL NÚMERO DE ONDA
n 1
b (cm) =
2 1 - 2
n es el número de bandas que se producen en la región comprendida entre 1 y
2, cuando se coloca la celda vacía en el haz de radiación.
1 es número de onda mayor de la región estudiada.
2 es número de onda menor de la región estudiada.
Ejemplo: 1 = 1300 cm-1 2 = 1000 cm-1 n = 12 bandas con la celda vacía.

12 1
b= = 0,02 cm
2 1300 – 1000 cm-1

13
Líquidos
Cuando la cantidad de muestra es
pequeña o cuando no se dispone del
disolvente apropiado, es habitual
obtener los espectros del líquido puro.
En este caso, sólo una película muy
delgada tiene un camino óptico lo
suficientemente corto como para
producir espectros satisfactorios. Por
lo común, una gota del líquido puro se
presiona entre dos placas de sal gema
para obtener una placa con un espesor
adecuado.

14
Sólidos
La mayoría de los compuestos orgánicos presentan
numerosos picos de absorción en la región del
infrarrojo medio, y encontrar un disolvente que no de
lugar a solapamientos de picos es, con frecuencia
imposible. Como consecuencia, a menudo, se obtienen
los espectros de dispersiones del sólido en una matriz
líquida o sólida.

15
Pastillas
Una de las técnicas más popular de manipulación de
las muestras sólidas es la formación de pastillas de KBr
(también se han utilizado otros haluros de metales
alcalinos). Las sales de haluros tienen la propiedad de
flujo en frío por lo cual cuando se presiona
suficientemente este material finamente pulverizado
presenta propiedades transparentes o translúcidas
como el vidrio.

16
Se mezclan a fondo un miligramo o menos de la
muestra, finamente pulverizada, con
aproximadamente 100 mg de polvo de KBr desecado.

La mezcla se puede realizar con un mortero y su

pistilo, o mejor, en un pequeño molino de bolas.

Posteriormente se presiona la mezcla en un troquel

especial entre 700 y 1000 kg/cm2 hasta obtener un
disco transparente.

17
 Soporte Tornillo Empaque Porta pastilla Empaque Tornillo

A cada tornillo de la miniprensa se le coloca un empaque de neopreno,

uno de los pernos se atornilla al porta pastilla. En la cavidad formada se
deposita la muestra molida y homogeneizada con el KBr, se tapa con el
otro tornillo, y con ayuda de dos llaves se produce el prensado inicial.
Después de aplicar vacío, se aprieta fuertemente. Una vez transcurrido el
tiempo necesario se retiran los dos pernos, se sitúa el porta pastilla sobre
el soporte en el haz de radiación del espectrofotómetro.

18
 PASTILLADORA Y PRENSA HIDRÁULICA

Algunas sustancias pueden descomponerse o cambiar de forma por la

acción del calor y la presión generada durante la formación de la pastilla.
No obstante, esta técnica permite obtener buenos resultados cualitativos.
Es trascendental, que las superficies de los tornillos o de los cilindros
donde se forma la pastilla tengan acabado de espejo.

19
Suspensiones
Cuando las técnicas anteriores no son aplicables, se
suelen obtener suspensiones del analito en un aceite
mineral o un hidrocarburo fluorado. Las suspensiones
se preparan moliendo de 2 a 5 mg de la muestra
finamente pulverizada en presencia de una o dos gotas
de un aceite hidrocarbonado pesado (Nujol).

Si es probable que interfieran las bandas del

hidrocarburo, se puede sustituir por Fluorolube, un
polímero halogenado. En cualquiera de los casos, la
suspensión resultante se examina luego como una
delgada película entre placas planas de sal.

20
suspensión. Su uso está indicado para preparar muestras sólidas que no
forman películas, o son insolubles en los disolventes usados en IR.

Nujol Mortero Fluorolube

Es necesario pulverizar los sólidos en un mortero de alúmina o de ágata,
para evitar las reflexiones y las refracciones múltiples en las partículas. Al
mezclar el polvo con nujol o fluorolube se obtiene una pasta muy fina.
La pasta o emulsión se transfiere a una celda desmontable sin espaciador,
se presiona con la suficiente intensidad hasta que el espesor de la emulsión
genere bandas que absorban entre el 15 y el 75 % de la radiación IR.

21
 PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
CON RADIACIÓN TRANSMITIDA
Película. Se usa un par de cristales de la misma especie (NaCl, KBr o CsI) para
soportar a la película. Uno de los cristales se coloca horizontalmente y
sobre él se deposita usualmente de 2 a 4 mg del analito puro.
Se ensaya la disolución dejando caer sobre la alícuota sólida algunas gotas de
disolvente.
Se deja evaporar el disolvente para determinar si ocurre la formación de la
película, y enseguida se elimina cualquier vestigio de solvente.
Una vez logrado lo anterior, se cubre la preparación con el otro cristal, y se
corre el espectro de absorción de la muestra.
Generalmente el primer disolvente con el que se intenta esta técnica es con
CHCl3, como segunda opción se prueba con CCl4.

22
PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
CON RADIACIÓN TRANSMITIDA
Película. Si la muestra es de naturaleza líquida, gelatinosa u oleosa, se puede
obtener la película al presionar entre los dos cristales una pequeña
alícuota de ella.
Algunos polímeros poseen partículas grandes y no se solubilizan en los
disolventes usados en la espectroscopia infrarroja. En tal caso, si la
muestra es térmicamente estable, una buena opción puede ser intentar
formar la película por tratamiento térmico.
Por ejemplo, sobre un cristal de NaCl que está colocado horizontalmente
se deposita una alícuota de polietileno, encima se sitúa una plancha y en
forma gradual se incrementa la temperatura hasta ablandar el polímero,
entonces se cubre con el otro cristal, y se presiona suavemente hasta
alcanzar el espesor deseado en la película.

23
 PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA EL
ANÁLISIS CON RADIACIÓN TRANSMITIDA
Pastilla. Es muy importante que el KBr grado espectroscópico que se usa como
excipiente para la formación de la pastilla esté totalmente seco. Para tal efecto,
en un cristalizador de gran superficie se coloca una capa delgada de la sal, y se
calienta en una estufa a 150C, hasta la eliminación de cualquier vestigio de
humedad, usualmente tres días. Para confirmar la deshidratación total, se
prepara una pastilla con el KBr supuestamente seco, es determinante verificar
la ausencia de vibraciones de O-H en su espectro infrarrojo. Para garantizar la
ausencia de humedad en el KBr, es necesario mantenerlo en la estufa a 150C.
Molienda y homogeneización. Este proceso puede realizarse en una pequeña
cápsula de acero inoxidable o de baquelita. La cápsula seca se destapa junto a la
estufa donde se mantiene el KBr a sequedad. Con la punta mayor de una
microespátula seca, se transfieren aproximadamente 100 mg de KBr, con la
punta menor de la microespátula se trasladan de 2 a 4 mg de la muestra seca, se
coloca una munición de baquelita o de acero inoxidable, se tapa rápidamente la
cápsula y se agita dos o tres minutos en un homogeneizador pequeño.

24
 PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
CON RADIACIÓN TRANSMITIDA
Pastilla
Un amalgamador como el que emplean los dentistas funciona muy bien
como homogeneizador.
Los espectros corridos con pastillas o emulsiones muestran mejor
resolución, cuando se emplean muestras sólidas que poseen diámetros de
partículas pequeños y homogéneos.
Formación de la pastilla. La muestra sólida homogeneizada con el KBr, se
deposita en la pastilladora, con el fin de comprimirla durante 5 minutos a una
presión de 5000 Kg/cm2. En tales condiciones el KBr se vuelve muy plástico, y
fluye hasta formar un disco claro y transparente en la región de 4000 a 400 cm-1.
Así las absorciones de la radiación infrarroja sólo pueden atribuirse a los grupos
funcionales de la muestra, y no al excipiente de la pastilla.

25
PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
CON RADIACIÓN TRANSMITIDA

Emulsión

Durante la molienda pueden ocurrir degradación y/o cambio polimórfico

en la muestra.
La emulsión es impropia para observar los estiramientos.
Sólo cuando se trabaja con una solución es posible realizar compensación
por disolvente. Por lo tanto, cuando se obtienen espectros con emulsiones
es improcedente la compensación.
Esta técnica produce resultados rápidos y convenientes para el análisis
cualitativo, pero es difícil lograr la cuantitatividad.

26
 PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
CON RADIACIÓN TRANSMITIDA
Soluciones. Si la muestra es soluble en cloroformo, la solución puede prepararse
con CDCl3, así es posible observar las vibraciones de C-H.

El CCl4 es transparente en la región de 4000-900 cm-1, en tanto que el CS2

no absorbe entre 1300 y 625 cm-1.
Si el es espectrofotómetro es de doble haz, en el haz de referencia se puede
colocar otra celda similar a la de la muestra, que contenga únicamente al
disolvente empleado en la preparación de la solución de la muestra, con el
objetivo de compensar la absorción del disolvente.
La compensación del disolvente origina respuestas poco sensibles, e incluso
en algunos casos la sensibilidad puede ser prácticamente nula.
Los disolventes próticos, que forman puentes de hidrógeno, interfieren las
vibraciones fundamentales en mayor medida, mientras más capacidad de
asociación posean.

27
 CALIBRACIÓN DEL NÚMERO DE ONDA
Las delgadas absorciones producidas por una lámina de poliestireno, son
adecuadas para verificar si los números de onda, que se muestran en las
gráficas generadas en los espectrofotómetros dispersivos, guardan buena
relación con la radiación absorbida. Generalmente se emplea el pico de
1601 cm-1, pero pueden usarse 2850 ó 906 cm-1.
Si se trabaja con un instrumento dispersivo, es recomendable marcar el
pico de 1601 cm-1 sobre el espectro de cualquier espécimen que se analice.

28
ANALISIS CUALITATIVO
La identificación de un compuesto orgánico a partir de
un espectro de este tipo es un proceso que consta de
dos etapas:

1. la determinación de los grupos funcionales que parece

más probable que estén presentes, examinando la
región de frecuencias de grupo, que abarca la radiación
comprendida desde 3600 cm-1 a 1200 cm-1

29
2. comparación detallada del espectro del compuesto desconocido
con los espectros de compuestos puros que contienen todos los
grupos funcionales encontrados. En este caso es particularmente
útil la región de la huella dactilar, comprendida entre 1200 cm-1 y
600 cm-1

30
Frecuencias de grupo
La posición de un banda correspondiente depende del grupos funcional, sin
embargos existirán variaciones debido a las interacciones con el resto de la
molécula.

31
Colecciones de espectros
Las tablas de correlación pocas veces son suficiente
para la identificación positiva de un compuesto
orgánico a partir de su espectro infrarrojo. Sin
embargo, existen diversos catálogos de espectros de
infrarrojo que ayudan en la identificación cualitativa
permitiendo la comparación de los espectros con los
de un gran número de compuestos puros.

32
ANÁLISIS CUANTITATIVO
Con la radiación infrarroja, debido a que las bandas de
absorción son relativamente estrechas, las desviaciones
instrumentales de la ley de Beer son más comunes que
con la radiación ultravioleta y visible. Además los
equipos usan anchos de banda a menudo del mismo
orden picos de absorción.

Lo anterior conduce por lo general a una relación no

lineal entre la absorbancia y la concentración. Por
consiguiente, para el trabajo cuantitativo se requieren
curvas de calibración determinadas empíricamente.

U.A.D.Y. 33
Medición de la absorbancia
Las cubetas poco reproducibles y los solventes que
absorben usados en IR hacen que no se use un
blanco como en las otras técnicas fotométricas, en
contraste se usa como referencia un haz que
atraviesa sin obstáculos.

Para el trabajo cuantitativo, es necesario corregir los

efectos de la radiación dispersada y absorbida por el
disolvente y la cubeta. Se utilizan dos métodos.

34
 Método “cubeta dentro/cubeta fuera”
Se obtienen sucesivamente los espectros del disolvente
puro y de la disolución del analito con respecto al haz de
referencia sin obstáculos, utilizando la misma cubeta para
ambas disoluciones.
Se determina, entonces, la transmitancia de cada
disolución respecto a la del haz de referencia, en un
máximo de absorción del analito. Estas transmitancias se
pueden escribir como:

P0 Donde:
T0  TM 
PM
PR: potencia del haz sin obstáculos
PR PR To y TM: transmitancias del disolvente y
de la disolución

35
Si PR, permanece constante durante las dos medidas,
entonces puede obtenerse la transmitancia de la
muestra frente al disolvente dividiendo ambas
ecuaciones. Es decir,

TM PM
T 
T0 P0

36
 Método “de la línea base”
Se supone que la transmitancia del disolvente es
constante, o al menos cambia linealmente entre los
puntos de mínima absorción que limitan al pico de
absorción.

37
Aplicaciones específicas
Casi todas las especies moleculares orgánicas e
inorgánicasabsorben en la región del infrarrojo; de
esta forma, la espectro fotometría en el infrarrojo
ofrece la posibilidad de determinar un número
extraordinariamente grande de sustancias. Esta
especificidad ha encontrado una particular
aplicación en el análisis de mezclas de compuestos
orgánicos estrechamente relacionados.

38
Análisis de una mezcla de hidrocarburos
aromáticos
Aquí se considera la resolución de los isómeros C8H10,
en una mezcla que incluye o-xileno, m-xileno, p-xileno
y etilbenceno.

A continuación se muestras los espectros individuales

tomados en ciclohexano como solvente.

39
Espectros en ciclohexano 40
la absorbancia de una mezcla a cualquiera de estas
longitudes de onda no se debe sólo a la concentración
de un único componente, como consecuencia del
solapamiento de las bandas de absorción. Por ello, es
necesario determinar las absortividades molares de
cada uno de los compuestos en las cuatro longitudes
de onda.

41
Las absorbancias de las mezclas se leen a cada longitud
de onda experimentalmente.

Las absortividades específicas de cada componente a

cada longitud de onda se pueden obtener a partir de
las soluciones estandar individuales.

Se resuelve el sistema de ecuaciones lineales.

42