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Efecto toxicológico del Cobre sobre un cultivo puro

de Chlorella vulgaris
CARMEN ROCIO YAMBAY

Curso de Ecotoxicológia Acuática, Facultad de Ciencias, Escuela Superior Politécnica de
Chimborazo, Panamericana Sur km 1 1/2, Riobamba, Ecuador. Autor de Correspondencia:
Carmen Yambay Damián: carmen.yambay@yahoo.com. Presentado 10 de julio del 2015.

RESUMEN
Se realizaron ensayos a nivel de laboratorio, para determinar el efecto toxicológico
del Cobre sobre el crecimiento de la microalga Chlorella vulgaris, para ello se
establecieron cuatro concentraciones de Cobre (Sulfato de Cobre pentahidratado) de
0, 1,10 y 15 mg/L, que actuaron sobre la microalga suspendida en un medio de
Nitrofoska foliar a 0,3%, el cultivo fue dispuesto en tubos de ensayo de 10 mL. El
tiempo de exposición fue 52 horas, luz constante 2450 lm, agitación diaria de cada
tratamiento. Se determinó la tasa promedio de crecimiento, la biomasa total y el
porcentaje de inhibición de la biomasa. Los resultados mostraron que el menor
crecimiento celular, se encuentra en el triplete de concentración de 10 mg/L, el cual
alcanzó un porcentaje de inhibición del crecimiento promedio del 37,2%. La tasa de
crecimiento se mantuvo relativamente constante, oscilando entre (0,85 y 1,43) cel/día.

Palabras clave: biomasa, cobre, microalgas, Chlorella vulgaris, toxicidad, crecimiento.
Muchos factores y procesos influyen en la
presencia de Cobre en aguas. Entre los
factores importantes están dureza y
INTRODUCCIÓN alcalinidad del agua, fuerza iónica, pH y
El Cobre puede introducirse en las fuentes potencial redox. (Sancha A. M., 2002).
de aguas, por vía natural y por actividades Entre los procesos que pueden influenciar
antropogénicas. Es el caso de la minería, la el destino del Cobre en el sistema acuático
producción de metales y fertilizantes están: formación de complejos con
fosfatados, a menudo el Cobre es ligandos inorgánicos y orgánicos; sorción
encontrado cerca de minas, asentamientos en óxidos metálicos, arcillas y material
industriales, vertederos y lugares de orgánico particulado; bioacumulación e
residuos (Lillo, 2010), constituyendo una interacción entre sedimento y agua.
fuente de contaminación para los cuerpos En ambientes acuáticos naturales el Cobre
de agua natural. se presentará, principalmente, como Cobre
(II). De esta especie divalente, sólo una

la mayor parte estará investigaciones. 2008). de vida corto facilitando la evaluación de precipitación anual entre 1. 2012). (INHAMI. 2012) vulgaris ha sido identificada como el alga ideal para realizar pruebas de inhibición CULTIVO DE Chlorella vulgaris del crecimiento con bioensayos de La cepa de microalga C. frecuentemente utilizada Superior Politécnica de Chimborazo. todos ellos de común ocurrencia La investigación se llevó a cabo en el en aguas naturales.5 °C y una cambios en su entorno. del complejo NPK a razón de 0. Riobamba. el ecosistema circundante Se preparó 150 mL de una solución madre percibe la falta de esa fuente de alimento de Sulfato de Cobre pentahidratado. según las normas de la obtenida de una casa comercial. cloruros y DEL ÁREA DE ESTUDIO sulfatos. generaciones. vulgaris fue duración de 52 h. ha mostrado los mejores resultados con La finalidad de estos ensayos es someter a respecto al crecimiento poblacional la microalga a diferentes concentraciones (Muñoz et al. como bioindicador debido a su alta ubicada en la Panamericana Sur km 1 1/2. mantuvieron bajo condiciones controladas de laboratorio con iluminación blanca Uno de los factores que sustentan el uso de artificial constante de 2450 lm y agitación algas en los bioensayos es su abundancia diaria. Entre los ligandos de mayor MATERIALES Y MÉTODOS importancia están los hidróxidos y LOCALIZACIÓN Y DESCRIPCIÓN carbonatos. laboratorio de Fisicoquímica perteneciente C. Además. el cual 2011). con laboratorio. ensayo fue hecho a nivel de laboratorio.1 y 103. C. Si estos SOLUCIÓN DE COBRE microorganismos se ven afectados por una sustancia tóxica.5ºC. observar y evaluar su efecto. Se utilizó Organización para la Cooperación un medio de cultivo fertilizante inorgánico Económica y el Desarrollo (OECD.3%. también amonio. Las microalgas se de Cobre. Ecuador. EXPOSICIÓN DE LAS ALGAS AL permitirá recabar datos de suma COBRE . con (Wang y Zheng.. vulgaris. 2004) y a su facilidad de cultivo en el La altura promedio es de 2750 msnm..pequeña fracción se presentará como importancia para posteriores “libre” (Cu++).9 mm y los efectos tóxicos sobre varias humedad relativa del 73 %. presenta un ciclo temperatura mínima promedio de 8. en los ecosistemas acuáticos. Chlorella vulgaris es un alga a la Facultad de Ciencias de la Escuela verde unicelular. Sumado a esto. aun cuando el una concentración de 100 mg/L. es muy sensible a los una temperatura máxima de 21. adsorbida en partículas suspendidas o formando complejos con diversos ligandos. sensibilidad a sustancias tóxicas (Ma et al.

se colocaron 0-0. El pH óptimo para el crecimiento de la microalga debe ser de 7.1. (Moronta. de tal forma para los tubos destinados para una Donde: concentración de 0. & Morales. 15 mg de Cu /L. cloruro de mercurio) y otro de vidrio. con crecimiento. la absorbancia posterior a ello se aplicó la fórmula: La biomasa total. Se calculó teniendo en cuenta ayuda de un pH metro que consiste en usar la tasa específica de crecimiento así: un par de electrodos. proveniente de la tasa de mediante método electroquímico. en el que se obtuvo crecimiento en el tratamiento. respectivamente. µC =promedio de la tasa especifica de crecimiento (µ) en el grupo control Esta fue determinada mediante un µT =promedio de la tasa especifica de espectrofotómetro UV. Las Abs = Absorbancia Microalgas (en un volumen de 60 mL para cada tratamiento) fueron expuestas a las Tasa promedio de crecimiento diario siguientes concentraciones de Cobre: de 1. Este parámetro. .6-6-9 mL de la solución µi-j = promedio de la tasa de crecimiento de Sulfato de Cobre. sumergidos en la disolución de la que queremos medir el pH. uno de calomel (mercurio. 10. considerando la Es el incremento logarítmico de la concentración de 0 % como el tratamiento biomasa durante la duración del ensayo. para lo cual se empleó la siguiente Los ensayos de exposición se realizaron ecuación: una sola vez y por triplicado. Mora. Las condiciones Donde: de cultivo se mantuvieron constantes DC= densidad celular durante todo el periodo de exposición. control.6 Abs + 9. y 15 mg/L. 10.4. especifico desde el tiempo i hasta j El tiempo de exposición fue de 52 h según Xi = biomasa en el tiempo i lo recomendado por la OECD (2011) Xf = biomasa en el tiempo f PH Porcentaje de inhibición Se midió en cada uno de los tratamientos. se dispuso de tres tubos de ensayo con Nitrofosa conjuntamente con la microalga Chlorella vulgaris. Para cada concentración.5748 precipitación de 100 mL.Los ensayos se llevaron a cabo en vasos de DC = 1823. 2006) %IT =porcentaje de inhibición del promedio de la tasa especifica de VARIABLES EVALUADAS crecimiento Densidad algal.

La CE fue reducción significativa del crecimiento calculada por el método de probit.0. Porcentaje de inhibición de la biomasa % Iy.0 La homogeneidad de varianza y la 50. Los con respecto al control a las 52 horas de datos fueron analizados con explosión.6 x104 cel/mL. menos la biomasa inicial de densidades con valores de 175. así: 150. 151. seguido de la prueba de de 10 mg/L Cu fue el que presento una concentración celular menor con 55. USA).0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10111213141516 prueba de Kolmogorov Smirnov. inhibición se realizó un análisis de varianza de una vía (ANOVA) seguido del En la figura 2 se muestra una progresiva test de comparación múltiple Tukey.0 normalidad de los datos fueron analizadas por medio de la prueba de Bartlett y la 0. Dunnett. vulgaris expuesta a tratamientos de Cobre. 15 mg/l Cu Windows (2002-2008 por SAS Institute presentaron una tasa de crecimiento significativamente menor con respecto al Inc. En las variables de % ITC y % de 57. Fue calculado teniendo en cuenta la 200. control. 10. valor de p <0.2 para algas expuestas a 1. Después de este tiempo. y 15 mg Cu/L.2. las el software SAS versión 9. densidad.Se calculó teniendo en cuenta la biomasa densidad celular significativamente menor al final del periodo de ensayo (tres días) que el grupo control. Densidad celular de C. seguido de las BT=Bf–Bi concentraciones 1.5. la biomasa total fueron sometidas a un análisis de varianza de una Por otro lado el triplete de concentración vía (ANOVA).8 y cada uno. Las criterio para considerar diferencias algas expuestas al cobre presentaron una estadísticas significativas. las variables de diferentes concentraciones de cobre durante 52 horas.0 (x10^4 cel/mL) ANÁLISIS ESTADÍSTICO 100. RESULTADOS En la figura 1 se presenta el efecto del cobre sobre la densidad celular después de 52 horas de exposición. Después de este tiempo todos los tripletes de concentraciones de cobre presentaron una . Para comparar las diferencias entre el grupo control y los Figura 1.05 fue utilizado como vulgaris en todos los tratamientos. 60. CONCENTRACIÓN mg/L Cu respectivamente. NC. Cary.9 X104 cel/mL en la repetición A. Un disminución en el crecimiento de C. B y C respectivamente. El triplete del tanto del grupo control como de los tratamiento control presentó las mayores tratamientos.0 Concentraciónde células biomasa húmeda total. 160.

74 de crecimiento e inhibición algal de C. expuestas.87 37.1 1.9 1. Tasa de crecimiento medio de las células en las 1 A 0.60 cultivo de C. vulgaris concentrados alimenticios para según las concentraciones de cobre a las que fueron animales.85 38.029 62.6 0. /día) ensayo. vulgaris expuesta a distintas 0.2 0. un metal de transición.6 0.20 Tratamiento rep.45 15 C 0.8 0. Resultados obtenidos de la exposición de un 0. la 75 biomasa y la tasa de crecimiento. DISCUSIÓN 125 El estudio demostró que el cobre. genera un efecto tóxico en C.00 distintas concentraciones de cobre.6 0.35 concentraciones de cobre.46 En la figura 3 se muestran los resultados 10 A 0.90 35. 10 y 15 mg/L Cu en comparación al triplete del grupo control.8 1. %) 0 A 0. 1 B 0. 3. 10 B 0.20 cultivo algal (C.29 con concentraciones de cobre de 1. crecimiento 0 5 10 15 20 cel/ml) /día) (IC.40 1 C 0.43 0 C 0.89 36. 2011) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415 El cobre en el formato de sulfato de cobre -25 Concentración Cu (mg/L) pentahidratado tiene numerosas aplicaciones en la fabricación de Fig.90 35. pigmentos.091 175. IC (%) 50 Los efectos tóxicos del cobre sobre el fitoplancton son generalmente 25 determinados comparando las tasas de crecimiento y los porcentajes de inhibición 0 (OECD.80 Tabla 1. Abs Conc.09 22. En la tabla 1 se presenta una tabla que 1.36 2.043 88.60 plasma todos resultados obtenidos de este Tasa crecimiento medio (TC. aquí se puede observar claramente 1.048 97.00 concentraciones distintas de cobre.00 nm) (x10^4 medio (TC. industria del cuero. 0.078 151.34 Fig. 100 vulgaris durante exposiciones agudas con alteraciones en la densidad celular. vulgaris) a tres 1.028 60.027 58. 0.028 60. 2.40 concentraciones de cobre durante 52 horas.98 29.083 160.35 inhibición fue mayor en aquellos cultivos 15 B 0. baterías eléctricas.40 el efecto que surge de la explosión de una 1.14 18.39 0.026 57. pesticidas.43 -2. Tasa Tasa (mg/L Cu) (750 celulas crecimiento inibición 0.034 71.0 0.92 34. abonos. mordientes textiles. Tasa de inhibición del crecimiento de C.5 1.58 vulgaris expuestas a distintas 10 C 0. El porcentaje de 15 A 0.5 0.77 Tratamiento (mg/L Cu) 0 B 0. .0 1.025 55.

se cobre. para establecer pruebas de incrementa. universalmente utilizadas. 10 y 15 mg/L la misma práctica. esenciales. controles medidos durante ciertos periodos de tiempo y localizar el momento preciso REFERENCIAS BIBLIORÁFICAS en que el crecimiento en las dos concentraciones con semejantes o en qué momento cesa el crecimiento de un cultico .4 considerados podría probar mejor si se contara con adecuados. Sin embargo.85 y 1. vulgaris ante razones pero en base a estudios se puede el cobre mostrada en el presente estudio. esta afirmación se un rango de 7. 1994). como alguicida. como producto de la bioacumulación del El pH de crecimiento para la microalga metal a través de procesos antitóxicos Chlorella vulgaris. lo que algas. CONCLUSIONES ya que el bioensayo se implantó con cultivos en una fase logarítmica avanzada. La tasa de crecimiento se mantuvo Otra respuesta es que posiblemente se relativamente constante. Así mg/L. no se habla de un efecto letal. viéndolo de manera global podría demuestra que el al hablar del efecto de afectar a un ecosistema acuático en caso de cromo. el cual permite fácilmente realizar mg/L. para así demostrar que el Cabe señalar que no ha existido un cromo (como elemento principal de este eliminación radical del crecimiento algal compuesto) interviene en el crecimiento de en ninguno de los tratamientos. algo interesante toxicidad como a través del volumen ocurre entre las concentraciones de 10 y 15 celular. oscilando entre deba a las adaptaciones de las células (0. la tasa de crecimiento monitoreos con cámaras de recuento es ligeramente mayor que en la de 10 celular. oscila en (Rereiz et al. menos dentro de las concentraciones Los resultados del presente estudio trabajadas en el ensayo. El porcentaje de inhibición fue mayor en Lo mismo se pudo observar en los ensayos aquellos cultivos con concentraciones de de los otros tres grupos que llevaron a cabo cobre de 1. siendo mayor el efecto negativo a puede usar esta técnica. esto puede suceder por varias también la sensibilidad de C. al que su presencia no fuera controlada. debido a que existe estimar efectos tóxicos por xenobióticos limitaciones de algunos micronutrientes en ambientes acuáticos. En la última. se reatifica.sin embargo la aplicación que con la o a su vez acelera el crecimiento de los práctica se buscó probar en su propiedad ensayos en cuestión.1 y 7. decir que se debe a que las algas usan al permiten recomendarla como una especie cobre como micronutriete (Rodríguez y modelo para la utilización en pruebas para Rivera 1995). relativamente medida que la concentración de cobre rápida. situación que probablemente fue establecida en los cultivos ensayados. mostraron una disminución en la biomasa Debido al carácter amplio del cobre en la y la tasa de crecimiento en las algas utilización de actividades de cultivo y expuestas a las tres concentraciones de gracias a sus características deseables.43) cel/día.

Toxic effects of fluoranthene and copper on marine diatom phaeodactylum tricornutum.). Presencia de cobre en aguas de consumo humano. Respuesta de la microalga Chlorella sorokiniana al. 27-41. (2006). Zheng B. 3). sancha. R. 3). . Wang L. guidelines for the testing of chemicals. Differential sensitivity of two green algae. Muñoz M. En J. Fac. en a. Ma J. Mora. Lillo. (2002). (2012). Anuario Meteorológico 2010. Agron. a. OECD. freshwater alga and cyanobacteria growth inhibition test. presencia de cobre en aguas de consumo humano (pág. Ecotoxicol Environ Saf. (s. Lin F. Efecto del medio de cultivo sobre el crecimiento y el contenido proteico de Chlorella Vulgaris. santiago. & Morales. en a.25(3):438-449.58(1):61-67. Sancha. R. sancha. Zhang R. 201. p. 2011.20(11):1363-1372. rev col cienc pec. 2004. m.INHAMI.. Scenedesmus quadricauda and Chlorella vulgaris to 14 pesticides adjuvants. Yu W. presencia de cobre en aguas de consumo humano: (pág. 2008.f.. (LUZ). a. Ramírez. Rev. Impactos de la mineroa en el medio natual. (2010). j environ sci. Lillo. Presencia de cobre en aguas de consumo humano. Moronta. 2012. J. Sancha. Organization for Economic Cooperation and Development. Quito.. Lu N. m. E.