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Fac. Cs. Qs. Dpto.

De MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II
Q.F.B

BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA


FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
LICENCIATURA: QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

ÁREA ESPECÍFICA DE: MICROBIOLOGÍA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA: LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA I

CÓDIGO: FAR 331L

FECHA DE ELABORACIÓN: MARZO 2001

NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: FORMATIVO

TIPO DE ASIGNATURA: DISCIPLINARIA

PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIÓN:

MSP CARLOS CABRERA MALDONADO


MSP JESÚS LUZURIAGA GALICIA
MC. GLORIA LEÓN TELLO
MSP JUAN MANUEL ALVAREZ LOPEZ
MC CARLOS TÉLLEZ OSORIO
QFB MARÍA SUSANA PÉREZ FERNANDEZ

HORAS DE TEORÍA: 4 HORAS PRÁCTICA: 3 CRÉDITOS: 11

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REGLAMENTO DEL LABORATORIO
1. La asistencia al laboratorio deberá ser del 100 %
2. La hora de entrada tiene 10 minutos de tolerancia, después de ese tiempo,
se tomará como retardo, cada retardo equivale a medio punto menos en la
calificación final del laboratorio.
3. En el laboratorio se deberá portar la bata limpia y abotonada.
4. Las mochilas no se deberán colocar sobre la mesa de trabajo.
5. Lavarse las manos antes y después de iniciar la sesión práctica.
6. No comer ni fumar en el laboratorio, ni introducir ningún objeto en la boca.
7. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de trabajar.
8. No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo debe realizarse
sentado.
9. Hablar solo lo necesario con los compañeros.
10. Antes de iniciar la práctica, leer cuidadosamente las instrucciones y si no
entiende pregunte al profesor.
11. Se tendrá que traer algún material necesario para poder llevar a cabo las
prácticas como: asa, guantes, cinta adhesiva, algodón, así como material
para limpieza como jabón y benzal.
12. El asa utilizada para el cultivo de microorganismos, se deberá esterilizarse
en la flama del mechero antes y después de su uso.
13. Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra.
14. Todo el material que se va a incubar o desechar, deberá colocarse en el
sitio indicado por el profesor.
15. Ser cuidadoso con el material y equipo que se le proporcione, el material de
desecho no contaminado depositarlo en los botes de basura, el material
contaminado no lavarlo y depositarlo donde le indique el profesor sin
etiquetas.
16. Etiquetar todo el material que se va a incubar
17. Para tener derecho a la calificación del laboratorio se deberá cumplir con el
100% de asistencia, tener el manual al corriente y aprobar el examen final
que corresponderá al 20% de la calificación final de la teoría.

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INDICE

NÚMERO
DE LA TITULO DE LA PRÁCTICA PÁGINA
PRÁCTICA
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN
Practica 1 4
BACTERIOLOGÍA
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
Practica 2 5
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Practica 3 7
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus
Practica 4 9
Y Brucella
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria Y
Practica 5 10
Moraxella
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: COLIFORMES Y
Practica 6 11
Proteus
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DE LOS GÉNEROS
Práctica 7 11
Salmonella Y Shigella
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS
Practica 8 12
Campylobacter Y Helicobacter
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS
Practica 9 13
Streptococcus Y ENTEROCOCCUS
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus
Practica 10 15
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: Bacillus Y
Practica 11 16
Gardnerella
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES
Practica 12 17
(BAAR)
CARACTERIZACIÓN DE CLAMYDIAS
Practica 13 18
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS SIN PARED CELULAR
Practica 14
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS
Practica 15
EVALUACIÓN DEL LABORATORIO
Practica 16

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PRACTICA 1
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGÍA

OBJETIVO: Valorar los recursos actuales del laboratorio de microbiología para poder
realizar la identificación de bacterias.

INTRODUCCIÓN: El laboratorio bacteriológico es el espacio físico donde se efectúa


gran diversidad de procedimientos médicos, científicos, técnicos, etc. Que en conjunto
representan un valioso recurso de la clínica al documentar el estado de salud
(medicina preventiva) o de enfermedad (medicina curativa). La razón por la que el
médico envía al paciente al laboratorio es sólo una: necesita información para tomar
decisiones adecuadas. Los estudios microbiológicos tienen la característica de ser
eminentemente etiológicos, lo cual permite brindar al paciente el tratamiento
específico, generando un impacto significativo en la humanidad.

El laboratorio bacteriológico ha tenido una evolución de varios siglos, desde el


surgimiento del microscopio hasta el advenimiento de la biología molecular, la cual se
ha ido ampliando gradualmente.

DESARROLLO:
Mostrar cada uno de los medios con que cuenta el laboratorio de para la identificación
de las bacterias, explicar su funcionamiento, así como reafirmar el reglamento del
laboratorio para evitar cualquier accidente.

CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia de cumplir un reglamento dentro de un laboratorio
práctico?

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PRACTICA 2
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

OBJETIVO: Realizar tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel,
las pruebas bioquímicas fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de
las bacterias de interés médico.

INTRODUCCIÓN: La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según


una clasificación dada y consiste en la determinación de las características fenotípicas
y/o genotípicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones de
la clasificación considerada. Las características a determinar y su número depende
principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación.

Cowan y Steel establecen un grupo de pruebas, denominadas pruebas primarias, con


las cuales se puede determinar el género, grupo de géneros o en algún caso familia a
la que pertenece un aislamiento. Dichas pruebas son:

1.- Tinción de gram


2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP)
3.- Tinción de Zielh-Nelssen (sólo en caso de tener BGP)
4.- Metabolismo (O/F/I)
5.- Producción de catalasa
6.- Producción de oxidasa
7.- Movilidad
8.- Requerimientos de aerobiosis
9.- Requerimientos de anaerobiosis
10.- Producción de ácido a partir de glucosa

También se pueden incluir pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a


especie. Estas dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de
pigmentos, producción de indol a partir de triptofano, producción de coagulasa, de
fenilalanina deaminasa, etc.)

DESARROLLO:
Tomar una cepa problema a la cual se le realizará lo siguiente:
1.- Tinción de gram
2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP)
3.- Tinción de Zielh-Nelssen (sólo en caso de tener BGP)
4.- Inocular por estría cruzada una placa de agar
5.- Inocular por picadura el medio O/F
6.- Inocular por picadura el medio MIO
7.- Inocular por picadura una base de CTA con un carbohidrato
8.- Incubar todos los medios a 37°C por 24 horas
9.- Leer morfología colonial de la placa
10.- Del crecimiento en placa realizar las pruebas de oxidasa y catalasa
11.- Leer bioquímicas
12.- Comparar los resultados en tablas
13.- Identificar familia o género

CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?
2.- ¿Cómo se realiza la tinción de Gram y cuál es su fundamento?
3.- ¿Para que sirve la tinción de Zielh-Nelseen y cuál es su fundamento?

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4.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y cómo se realiza en el
laboratorio?
5.- ¿En que medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se interpreta?
6.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de catalasa?
7.- De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa de estudio
durante la práctica, realiza dibujos y menciona tus resultados.

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PRACTICA 3
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS

OBJETIVO: Comprobar por medio de análisis de laboratorio, el comportamiento


característico de cepas bacterianas no fermentadoras de carbohidratos.

INTRODUCCIÓN: Este grupo abarca microorganismos aerobios, no esporulados, que


no utilizan a los carbohidratos como fuente de energía o los utilizan a través de vías
metabólicas diferentes a la fermentación.

La importancia de estas bacterias radica fundamentalmente en su capacidad para


infectar hospederos inmunocomprometidos, por lo que cobran especial interés a nivel
intrahospitalario, donde además es común la presencia de cepas con marcadas
características de resistencia a los antimicrobianos de uso convencional. Dentro de
este grupo se encuentran los siguientes géneros: Pseudomonas, Acinetobacter,
Moraxella, AlcalígenesFlavobacterium, Agrobacterium, entre otros.

Algunos de los indicios tempranos para detecta al un microorgnismo no fermentador


serían los siguientes:

1.- Falta de evidencias de fermentación de la glucosa


2.- Positiva de la prueba de oxidasa
3.- Carencia de desarrollo en el agar de Mac Conkey

En la rutina bacteriológica es necesario rapidez y bajo costo en la identificación de


este grupo de bacterias, por lo que se sugiere se sigua el esquema de King-Weaver
para su identificación, el cual se basa en 4 pruebas (ver tabla):

1.- Utilización de glucosa (fermentador (F), oxidador (O) o no sacarolítico (NS))


2.- Capacidad de crecer en Mac Conkey
3.- Producción de citocromo oxidasa
4.- Movilidad

Características de algunos géneros gramnegativos no fermentadores


CREC
OTRAS
GÉNERO METABOLISMO MOVILIDAD OXIDASA MAC
CARACTERÍSTICAS
CONKEY
+
flagelos Desnitrifican nitratos
Pseudomonas O + +
polares a N2

Acinetobacter O ó NS - - + Parecen diplococos

V
algunos
Escaso o Requieren complejo
Flavobacterium O presentan +
negativo B
flagelos
perítricos
Escaso o Requiere factores de
Bordetella O V +
negativo crecimiento
Escaso o Cocobacilar, difícil
Moraxella O ó NS - +
negativo de crecer

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+ Requiere factores de
Xanthomonas O un solo V - crecimiento.
flagelo Patógeno de plantas
+
Alcaligenes O ó NS flagelos + - Aerobio estricto
perítricos

DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la
parte del estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero.
2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO
3.- Incubar 24 horas a 37° C
4.- Leer morfología colonial
5.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción
de gram
6.- Leer pruebas bioquímicas

CUESTIONARIO:
1.- ¿Por qué es importante identificar a los BGNnF?
2.- ¿Qué géneros conforman el grupo de los BGNnF?
3.- ¿Cuáles son las pruebas claves para sospechar de un BGNnF?
4.- Mencione un esquema diferente al de King-Weaver para identificar a los BGNnF
5.- ¿De los BGNnF que géneros dan la prueba de oxidasa negativa, quiénes movilidad
negativa y quiénes son capaces de crecer en Mac Conkey?
6.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer si la cepa pertenece al grupo de BGNnF

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PRÁCTICA 4
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus Y Brucella

OBJETIVO: Identificar los géneros Haemophilus y Brucella

INTRODUCCIÓN: Los miembros del género Haemophilus son bacilos gramnegativos


pequeños, inmóviles, que requieren de factores de crecimiento presentes en la sangre
como el factor X, que son un grupo de compuestos tetrapirrólicos termoestables, como
la hemina mientras que el factor V es el dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD).
Estos dos factores están contenidos en los eritrocitos, por lo tanto el agar chocolate es
un buen medio para la recuperación de Haemophilus. Las especies de Haemophilus
humanos, están vinculadas en su mayoría con infecciones del tracto respiratorio
superior a excepción de H. ducreyi que es un patógeno de tracto genital.

El género Brucella abarca un grupo de microorganismos que son cocobacilos


diminutos de tinción débil y desarrollo lento en agar sangre. Son responsables de la
brucelosis, la cual es difícil de diagnosticar, debido al amplio espectro de
manifestaciones clínicas asociadas.

DESARROLLO PARA Haemophilus:


1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar chocolate
2.- Incubar 48-72 horas a 37° C
3.- Leer morfología colonial
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción
de gram
5.- Realizar pruebas de identificación de especie en agar soya tripticasa con
sensidiscos impregnados de los factores V y X

DESARROLLO PARA Brucella


1.- Sembrar en botellas para hemocultivo
2.- Incubar a 35° C durante 4-6 semanas
3.- Hacer subcultivos en agar sangre y chocolate
4.- Identificar especies, mediante pruebas bioquímicas como necesidad de CO2,
producción de ureasa y sensibilidad a los colorantes fucsina básica, tionina y azul de
tionina.

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Haemophilus?
2.- ¿Existe algún agar comercial para el aislamiento de Haemophilus?
3.- Menciona la(s) especies de Haemophilus que requieran el factor V, la(s) que
requiera el factor X y la(s) que requiera ambos factores.
4.- ¿Cuál es la importancia clínica del género Brucella?
5.- ¿Qué especies de Brucilla requieren C02 para crecer, cuales producen H2S y
cuales ureasa?

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PRÁCTICA 5
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria Y Moraxella

OBJETIVO: Identificar los géneros Neisseria y Moraxella

INTRODUCCIÓN: Los miembros del género Neisseria son microorganismos


gramnegativos cocoides o baciliares que pueden encontrarse en pares o en cadenas
cortas. Son inmóviles, no forman esporas y producen ácido a partir de carbohidrato lo
que permite identificar especies.

Antes llamada Neisseria catarrhalis ahora conocida como Moraxella catarrhalis, puede
ser responsable de infecciones respiratorias principalmente en niños y ancianos, crece
en agar chocolate y agar nutritivo, no produce ácido a partir de glucosa, maltosa,
fructosa, sacarosa no lactosa.

DESARROLLO PARA Neisseria:


1.- Sembrar una placa de Tayer Martin en forma de Z y luego estriar
2.- Incubar 24-48 horas a 37° C
3.- Leer morfología colonial
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción
de gram
5.- Realizar pruebas de identificación de especie en bases de CTA con diferentes
carbohidratos

DESARROLLO PARA Moraxella


1.- Sembrar en agar chocolate y agar nutritivo
2.- Incubar 24-48 horas a 37° C
3.- Leer morfología colonial
4.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa, tinción
de gram y DNasa

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Neisseria gonorrhoeae?
2.- ¿Que tipo de medio es el Tayer Martin y porque?
3.- Menciona las especies de Neisseria y su comportamiento frente a los diferentes
carbohidrato
4.- ¿Cuál es la importancia clínica de Moraxella catarrhalis?

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PRÁCTICA 6 y 7
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: COLIFORMES Y Proteus

NOTA: Estas prácticas se realizarán en dos sesiones diferentes.

OBJETIVO: Determinar por medio de ensayos de laboratorio las características


bioquímicas que definen a la familia Enterobacteriaceae

INTRODUCCIÓN: La familia Enterobacteriaceae está conformada por un número


importante de especies, que incluyen bacilos gramnegativos, con metabolismo
fermentador, anaerobios facultativos, catalasa positivos, oxidasa negativos, la mayoría
son móviles, reducen los nitratos a nitritos, y no presentan condiciones nutritivas
exigentes, crecen muy bien en agar Mac Conkey.

Tienen como nicho ecológico el tracto intestinal de gran variedad de seres vivos,
incluyendo al hombre, lo cual facilita su presencia prácticamente en todo lugar.
Solamente un número reducido de géneros son considerados patógenos primarios
como es el caso de Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia spp. y algunas cepas de
E. coli. Las demás son parte importante de la microbiota intestinal, comportándose
como patógenos solo en el caso de pacientes inmunocomprometidos (patógenos
oportunistas).

Con el objeto de facilitar la caracterización de esta familia se ha dividido con base a la


capacidad de fermentar lactosa en dos grupos: lactosa (+), los que la fermentan y los
lactosa (-) los que no poseen el sistema enzimático que les permite llevar a cabo el
proceso. También es necesario el empleo de pruebas bioquímicas y fisiológicas para
establecer el grupo bacteriano.

DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y SS
2.- Inocular pruebas bioquímicas
3.- Inocular galerías
4.- Incubar
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de gram, catalasa,
oxidasa
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la importancia de las enterobacterias?
2.- ¿Qué géneros se encuentran en la familia Enteobacteriaceae?
3.- Las enterobacterias se han clasificado en dos grupos: lactosas (+) y lactosas (-),
¿que géneros se encuentran en cada uno de estos grupos?
4.- Menciona a las enterobacterias inmóviles y a las que son capaces de producir H2S?
5.- ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que permiten identificar a las enterobacterias
y menciona el fundamento de cada una de ellas?
6.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer género y especie de la cepa problema

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PRÁCTICA 8
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Campylobacter Y
Helicobacter

OBJETIVO: Identificar a los microorganismos que pertenecen a los géneros


Campylobacter y Helicobacter

Los microorganismos del género Campylobacter son bacilos curvos gramnegativos,


con metabolismo inerte, catalasa y oxidasa positiva, movilidad positiva por la presencia
de 1 a 2 flagelos en cada polo crecen en condiciones de microaerofilia. Algunas
especies que se conocen de este género son C. jejuni, C. fetos y C. coli. Este género
se relaciona con problemas gastrointestinales.

Helicobacter también es un bacilo curvo gramnegativo, de metabolismo inerte,


catalasa y oxidasa positivas, movilidad positiva por la presencia de 4-8 flagelos
polares. El género lo comprenden más de 24 especies pero Helicobacter pylori es la
especie tipo y se ha aislado de mucosa gástrica intestinal.

DESARROLLO:
1.- Sembrar medios selectivos para estos géneros como: Skirrow o Campy-Bap
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de gram, catalasa,
oxidasa
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.

CUESTIONARIO
1.- Menciona la importancia clínica de estos dos géneros
2.- Dibuja tus observaciones de la tinción de gram
3.- Indica el resultado de tus pruebas bioquímicas y establece género y especie

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PRÁCTICA 9
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Streptococcus Y
Enterococcus

OBJETIVO: Caracterizar bioquímicamente a las especies más importantes del género

INTRODUCCIÓN: Los miembros de este género se caracterizan por ser cocos


grampositivos agrupados en pares o cadenas, generalmente inmóviles, catalasa
negativos en general, no esporulados, aerobios y anaerobios facultativos con
metabolismo fermentativo en el que producen ácido láctico, fórmico, etanol y CO2,
crecen óptimamente a 37° C.

Es el género de mayor interés médico. Algunas especies forman parte de la flora


normal del hombre y otras están relacionadas con cuadros clínicos de amigdalitis,
celulitis, erisipela, faringitis, rinitis, Hypoderma, fiebre escarlatina, sepsis puerperal,
neumonía, endocarditis bacteriana, caries, meningitis, infecciones en vías urinarias y
heridas, fiebre reumática, glomérulo nefritis y conjuntivitis purulenta.

METODOLOGÍA PARA LA IDENTIFICACIÓN DE Streptococcus

HEMÓLISIS

ALFA BETA NO HEMÓLISIS


(GAMA)
Crece en 6.5% NaCl

Soluble en bilis Sensible a bacitracina: S. pyogenes Ennegrece la bilis-esculina


Sensible a optoquina

CAMP +
Hidrólisis del hipurato +: S. agalactiae

S. pneumoniae Grupo D

DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre carnero
2.- Realizar pruebas de CAMP
3.- Realizar pruebas de sensibilidad a bacitracina
4.- Realizar pruebas de sensibilidad a optoquina
5.- Realizar tinción de gram y observar al microscopio
6.-Incubar
7.- Leer morfología colonial
8.- Interpretar resultados

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CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la definición del género Streptococcus?
2.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de CAMP?
3.- ¿Para que se utiliza la prueba de sensibilidad a bacitracina y optoquina?
4.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Streptococcus, de ser
positiva la respuesta, menciona la especie

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PRÁCTICA 10
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus

OBJETIVO: Observar las características más relevantes del género, resaltando


aquellas que permiten su diferenciación con otros cocos grampositivos de cercana
filiación.

INTRODUCCIÓN: Este género está constituido por cocos grampositivos, agrupados


en racimos, catalasa positiva con metabolismo fermentativo. Son responsables
principalmente de infecciones supurativas de la piel y tejidos blandos. Así como de
infecciones oportunistas. Se reconocen 3 especies: Sta. aureus, Sta. epidermidis, Sta.
saprophyticus.

DIFERENCIACION DE LAS ESPECIES DE Staphylococcus

PRUEBAS DE S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus


LABORATORIO
Color de las colonias Amarillo- Blanco Blanco
blanco
Hemólisis en agar sangre + +/- -
Crecimiento anaerobio + + +/-
Coagulasa + - -
Fermentación de la glucosa + + +
Fermentación del manitol + - -
Novobiocina Sensible Sensible Resistente

DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre y una de Sal y manitol
2.- Incubar
3.- Leer morfología colonial y microscópica
4.- Realizar pruebas de identificación de especie
5.- Interpretar resultados

CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la definición del género de Staphylococcus?
2.- ¿Qué prueba permite diferenciar entre el género de Streptococcus y
Staphylococcus?
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de coagulasa y cómo se realiza en el
laboratorio?
4.- ¿Cuáles son los ingredientes del agar de sal y manitol y por qué es importante
utilizarlo para la identificación de este género y no de otros?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Staphylococcus, de ser
positiva la respuesta, menciona la especie.

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PRÁCTICA 11
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: Bacillus Y Gardnerella

OBJETIVO: Identificar por pruebas de laboratorio a los integrantes de estos dos


géneros.

INTRODUCCIÓN: Los microorganismos del género Bacillus son bacilos grampositivos,


formadores de endosporas, catalasa positivos, son móviles excepto B. anthracis y β-
hemolíticos excepto B. anthracis. Este género es ubicuo en la naturaleza ya que posee
endosporas y éstas pueden permanecer en campos contaminados por periodos de 10
hasta 30 años. B. anthracis es el agente causal de ántrax en animales principalmente
vacas y ovejas.

Gardnerella vaginalis es un cocobacilo gram variable, fermentados catalasa, oxidasa y


movilidad negativos, requiere de medios específicos para crecer como medios
enriquecidos, en gelosa sangre humana produce β-hemólisis, fermentar a la glucosa,
almidón y galactosa y es sensible al metronidazol. Esta involucrada con la vaginosis
bacteriana.

DESARROLLO PARA Bacillus e incubar a 37° C


1.- Inocular una placa de agar sangre carnero
2.- Inocular un tubo de caldo nutritivo e incubarlo a 42° C
3.- Inocular un tubo con gelatina e incubarlo a 4° C por 7 días
4.- Leer morfología colonial, buscar hemólisis, hacer tinción de gram y Shaeffer-Fulton
5.- Interpretar resultados

DESARROLLO PARA Gardnerella


1.- Inocular una placa de agar chocolate
2.- Leer morfología colonial, realizar catalasa, oxidasa y tinción de gram
3.- Inocular la colonia sospechosa en agar sangre humana y buscar β-hemólisis
4.- Hacer pruebas de fermentación de carbohidratos
5.- Interpretar resultados

CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Shaeffer-Fulton y cómo se realiza en el
laboratorio?
2.- Menciona otras pruebas para diferenciar especies de Bacillus
3.- ¿Cuál es la importancia clínica de Gardnerella vaginalis?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas

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PRÁCTICA 12
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES (BAAR)

OBJETIVO: Conocer la forma de trabajo de los Bacilos ácido alcohol resistentes en el


laboratorio mediante un seminario debido a no contar con las medidas de seguridad.

INTRODUCCIÓN: Este género incluye parásitos obligados, saprófitos y formas


intermedias que se diferencian por sus requerimientos nutricionales. Las cepas
saprofítas crecen en sus sustratos que son muy simples, otras requieren de medios
complejos o suplementos para su crecimiento; y otras que no han sido cultivadas “in
vitro”

Las especies difieren en su actividad de amidasa, catalasa y otras actividades


enzimáticas; todas son aerobias aunque algunas especies crecen únicamente por
debajo de la superficie del medio de cultivo. El contenido de lípidos de las células es
alto, especialmente en la pared celular, los pigmentos difusibles son raros.

Las micobacterias que más frecuentemente causan tuberculosis en el humano son M.


tuberculosis y M. Boris, además existen otras micobacterias como M. kansasii, M.
marinum, M. scrofulaceum, M. xenopi, M. avium, M. intracellulare y M. fortuitum.

CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de las Mycobacterias?
2.- ¿Cómo han sido clasificadas?
3.- ¿Cómo se realiza y para que sirve la baciloscopia?
3.-Menciona al menos 5 pruebas de laboratorio para diferenciar especies así como su
fundamento.

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PRÁCTICA 13,14 Y 15
CARACTERIZACIÓN DE CLAMYDIAS
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS SIN PARED CELULAR
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS

OBJETIVO: Conocer las pruebas de laboratorio que se realizan para estos


microorganismos mediante un seminario debido a no contar con los medios
necesarios.

CUESTIONARIO:
1.- Menciona las nuevas técnicas para la identificación de las Clamidias
2.- ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias sin pared celular y cómo se
diagnostican en el laboratorio?
3.- ¿Cómo se pueden generar las condiciones de anaerobiosis en el laboratorio?
4.-Menciona algún género anaerobio estricto y su importancia clínica.

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