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De MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II
Q.F.B
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Fac. Cs. Qs. Dpto. De MICROBIOLOGÍA
LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II
Q.F.B
REGLAMENTO DEL LABORATORIO
1. La asistencia al laboratorio deberá ser del 100 %
2. La hora de entrada tiene 10 minutos de tolerancia, después de ese tiempo,
se tomará como retardo, cada retardo equivale a medio punto menos en la
calificación final del laboratorio.
3. En el laboratorio se deberá portar la bata limpia y abotonada.
4. Las mochilas no se deberán colocar sobre la mesa de trabajo.
5. Lavarse las manos antes y después de iniciar la sesión práctica.
6. No comer ni fumar en el laboratorio, ni introducir ningún objeto en la boca.
7. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de trabajar.
8. No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo debe realizarse
sentado.
9. Hablar solo lo necesario con los compañeros.
10. Antes de iniciar la práctica, leer cuidadosamente las instrucciones y si no
entiende pregunte al profesor.
11. Se tendrá que traer algún material necesario para poder llevar a cabo las
prácticas como: asa, guantes, cinta adhesiva, algodón, así como material
para limpieza como jabón y benzal.
12. El asa utilizada para el cultivo de microorganismos, se deberá esterilizarse
en la flama del mechero antes y después de su uso.
13. Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra.
14. Todo el material que se va a incubar o desechar, deberá colocarse en el
sitio indicado por el profesor.
15. Ser cuidadoso con el material y equipo que se le proporcione, el material de
desecho no contaminado depositarlo en los botes de basura, el material
contaminado no lavarlo y depositarlo donde le indique el profesor sin
etiquetas.
16. Etiquetar todo el material que se va a incubar
17. Para tener derecho a la calificación del laboratorio se deberá cumplir con el
100% de asistencia, tener el manual al corriente y aprobar el examen final
que corresponderá al 20% de la calificación final de la teoría.
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LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II
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INDICE
NÚMERO
DE LA TITULO DE LA PRÁCTICA PÁGINA
PRÁCTICA
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN
Practica 1 4
BACTERIOLOGÍA
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
Practica 2 5
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
Practica 3 7
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus
Practica 4 9
Y Brucella
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria Y
Practica 5 10
Moraxella
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: COLIFORMES Y
Practica 6 11
Proteus
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS DE LOS GÉNEROS
Práctica 7 11
Salmonella Y Shigella
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS
Practica 8 12
Campylobacter Y Helicobacter
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS
Practica 9 13
Streptococcus Y ENTEROCOCCUS
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus
Practica 10 15
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: Bacillus Y
Practica 11 16
Gardnerella
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES
Practica 12 17
(BAAR)
CARACTERIZACIÓN DE CLAMYDIAS
Practica 13 18
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS SIN PARED CELULAR
Practica 14
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS
Practica 15
EVALUACIÓN DEL LABORATORIO
Practica 16
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LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA II
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PRACTICA 1
INTRODUCCIÓN AL TRABAJO DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGÍA
OBJETIVO: Valorar los recursos actuales del laboratorio de microbiología para poder
realizar la identificación de bacterias.
DESARROLLO:
Mostrar cada uno de los medios con que cuenta el laboratorio de para la identificación
de las bacterias, explicar su funcionamiento, así como reafirmar el reglamento del
laboratorio para evitar cualquier accidente.
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia de cumplir un reglamento dentro de un laboratorio
práctico?
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PRACTICA 2
APLICACIÓN DE LOS CRITERIOS DE COWAN Y STEEL PARA LA
IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS
OBJETIVO: Realizar tomando como base los criterios establecidos por Cowan y Steel,
las pruebas bioquímicas fundamentales, que permiten la identificación presuntiva de
las bacterias de interés médico.
DESARROLLO:
Tomar una cepa problema a la cual se le realizará lo siguiente:
1.- Tinción de gram
2.- Tinción de Shaeffer-Fulton (sólo en caso de tener BGP)
3.- Tinción de Zielh-Nelssen (sólo en caso de tener BGP)
4.- Inocular por estría cruzada una placa de agar
5.- Inocular por picadura el medio O/F
6.- Inocular por picadura el medio MIO
7.- Inocular por picadura una base de CTA con un carbohidrato
8.- Incubar todos los medios a 37°C por 24 horas
9.- Leer morfología colonial de la placa
10.- Del crecimiento en placa realizar las pruebas de oxidasa y catalasa
11.- Leer bioquímicas
12.- Comparar los resultados en tablas
13.- Identificar familia o género
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia de los criterios de Cowan y Steel?
2.- ¿Cómo se realiza la tinción de Gram y cuál es su fundamento?
3.- ¿Para que sirve la tinción de Zielh-Nelseen y cuál es su fundamento?
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4.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidasa y cómo se realiza en el
laboratorio?
5.- ¿En que medios se puede realizar la prueba de movilidad y cómo se interpreta?
6.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de catalasa?
7.- De cada uno de los criterios de Cowan y Steel efectuados a la cepa de estudio
durante la práctica, realiza dibujos y menciona tus resultados.
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PRACTICA 3
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS NO FERMENTADORAS
V
algunos
Escaso o Requieren complejo
Flavobacterium O presentan +
negativo B
flagelos
perítricos
Escaso o Requiere factores de
Bordetella O V +
negativo crecimiento
Escaso o Cocobacilar, difícil
Moraxella O ó NS - +
negativo de crecer
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+ Requiere factores de
Xanthomonas O un solo V - crecimiento.
flagelo Patógeno de plantas
+
Alcaligenes O ó NS flagelos + - Aerobio estricto
perítricos
DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada los medios en placa, procurando perforar el medio en la
parte del estriado masivo, en el caso del agar sangre carnero.
2.- Sembrar por picadura los medios O/F y MIO
3.- Incubar 24 horas a 37° C
4.- Leer morfología colonial
5.- Realizar a partir de una colonia aislada, las pruebas de catalasa, oxidasa y tinción
de gram
6.- Leer pruebas bioquímicas
CUESTIONARIO:
1.- ¿Por qué es importante identificar a los BGNnF?
2.- ¿Qué géneros conforman el grupo de los BGNnF?
3.- ¿Cuáles son las pruebas claves para sospechar de un BGNnF?
4.- Mencione un esquema diferente al de King-Weaver para identificar a los BGNnF
5.- ¿De los BGNnF que géneros dan la prueba de oxidasa negativa, quiénes movilidad
negativa y quiénes son capaces de crecer en Mac Conkey?
6.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer si la cepa pertenece al grupo de BGNnF
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PRÁCTICA 4
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Haemophilus Y Brucella
CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Haemophilus?
2.- ¿Existe algún agar comercial para el aislamiento de Haemophilus?
3.- Menciona la(s) especies de Haemophilus que requieran el factor V, la(s) que
requiera el factor X y la(s) que requiera ambos factores.
4.- ¿Cuál es la importancia clínica del género Brucella?
5.- ¿Qué especies de Brucilla requieren C02 para crecer, cuales producen H2S y
cuales ureasa?
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PRÁCTICA 5
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Neisseria Y Moraxella
Antes llamada Neisseria catarrhalis ahora conocida como Moraxella catarrhalis, puede
ser responsable de infecciones respiratorias principalmente en niños y ancianos, crece
en agar chocolate y agar nutritivo, no produce ácido a partir de glucosa, maltosa,
fructosa, sacarosa no lactosa.
CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de Neisseria gonorrhoeae?
2.- ¿Que tipo de medio es el Tayer Martin y porque?
3.- Menciona las especies de Neisseria y su comportamiento frente a los diferentes
carbohidrato
4.- ¿Cuál es la importancia clínica de Moraxella catarrhalis?
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PRÁCTICA 6 y 7
CARACTERIZACIÓN DE ENTEROBACTERIAS: COLIFORMES Y Proteus
Tienen como nicho ecológico el tracto intestinal de gran variedad de seres vivos,
incluyendo al hombre, lo cual facilita su presencia prácticamente en todo lugar.
Solamente un número reducido de géneros son considerados patógenos primarios
como es el caso de Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia spp. y algunas cepas de
E. coli. Las demás son parte importante de la microbiota intestinal, comportándose
como patógenos solo en el caso de pacientes inmunocomprometidos (patógenos
oportunistas).
DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada placas de Mac Conkey y SS
2.- Inocular pruebas bioquímicas
3.- Inocular galerías
4.- Incubar
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de gram, catalasa,
oxidasa
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.
CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la importancia de las enterobacterias?
2.- ¿Qué géneros se encuentran en la familia Enteobacteriaceae?
3.- Las enterobacterias se han clasificado en dos grupos: lactosas (+) y lactosas (-),
¿que géneros se encuentran en cada uno de estos grupos?
4.- Menciona a las enterobacterias inmóviles y a las que son capaces de producir H2S?
5.- ¿Cuáles son las pruebas bioquímicas que permiten identificar a las enterobacterias
y menciona el fundamento de cada una de ellas?
6.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Pruebas bioquímicas
e) Establecer género y especie de la cepa problema
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PRÁCTICA 8
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Campylobacter Y
Helicobacter
DESARROLLO:
1.- Sembrar medios selectivos para estos géneros como: Skirrow o Campy-Bap
5.- Leer morfología colonial, pruebas bioquímicas, realizar tinción de gram, catalasa,
oxidasa
6.- Comparar resultados con tablas y establecer género y especie.
CUESTIONARIO
1.- Menciona la importancia clínica de estos dos géneros
2.- Dibuja tus observaciones de la tinción de gram
3.- Indica el resultado de tus pruebas bioquímicas y establece género y especie
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PRÁCTICA 9
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE LOS GÉNEROS Streptococcus Y
Enterococcus
HEMÓLISIS
CAMP +
Hidrólisis del hipurato +: S. agalactiae
S. pneumoniae Grupo D
DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre carnero
2.- Realizar pruebas de CAMP
3.- Realizar pruebas de sensibilidad a bacitracina
4.- Realizar pruebas de sensibilidad a optoquina
5.- Realizar tinción de gram y observar al microscopio
6.-Incubar
7.- Leer morfología colonial
8.- Interpretar resultados
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CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la definición del género Streptococcus?
2.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de CAMP?
3.- ¿Para que se utiliza la prueba de sensibilidad a bacitracina y optoquina?
4.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Streptococcus, de ser
positiva la respuesta, menciona la especie
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PRÁCTICA 10
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DEL GÉNERO Staphylococcus
DESARROLLO:
1.- Sembrar por estría cruzada una placa de agar sangre y una de Sal y manitol
2.- Incubar
3.- Leer morfología colonial y microscópica
4.- Realizar pruebas de identificación de especie
5.- Interpretar resultados
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la definición del género de Staphylococcus?
2.- ¿Qué prueba permite diferenciar entre el género de Streptococcus y
Staphylococcus?
3.- ¿Cuál es el fundamento de la prueba de coagulasa y cómo se realiza en el
laboratorio?
4.- ¿Cuáles son los ingredientes del agar de sal y manitol y por qué es importante
utilizarlo para la identificación de este género y no de otros?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
e) Establecer si la cepa en estudio pertenece al género de Staphylococcus, de ser
positiva la respuesta, menciona la especie.
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PRÁCTICA 11
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS: Bacillus Y Gardnerella
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es el fundamento de la tinción de Shaeffer-Fulton y cómo se realiza en el
laboratorio?
2.- Menciona otras pruebas para diferenciar especies de Bacillus
3.- ¿Cuál es la importancia clínica de Gardnerella vaginalis?
5.- De la cepa problema responde lo siguiente con ayuda de dibujos:
a) Morfología colonial
b) Tinción de Gram
c) Pruebas de catalasa y oxidasa
d) Otras pruebas
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PRÁCTICA 12
CARACTERIZACIÓN DE BACILOS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES (BAAR)
CUESTIONARIO:
1.- ¿Cuál es la importancia clínica de las Mycobacterias?
2.- ¿Cómo han sido clasificadas?
3.- ¿Cómo se realiza y para que sirve la baciloscopia?
3.-Menciona al menos 5 pruebas de laboratorio para diferenciar especies así como su
fundamento.
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PRÁCTICA 13,14 Y 15
CARACTERIZACIÓN DE CLAMYDIAS
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS SIN PARED CELULAR
CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS ANAEROBIAS
CUESTIONARIO:
1.- Menciona las nuevas técnicas para la identificación de las Clamidias
2.- ¿Cuál es la importancia clínica de las bacterias sin pared celular y cómo se
diagnostican en el laboratorio?
3.- ¿Cómo se pueden generar las condiciones de anaerobiosis en el laboratorio?
4.-Menciona algún género anaerobio estricto y su importancia clínica.
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